Name: 자유롭게 행동 하는 쥐에 장기 감각 충돌 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 학습하세요 자유롭게 행동하는 쥐에서 지속적인 시각-전정 감각 충돌을 유도하여 장기 학습을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 생체 내외 실험을 결합하여 감각 학습의 신경 메커니즘을 규명합니다.

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우리 감사 파트리스 Jegouzo 머리 장치 및 headpost 개발 및 생산. 우리 또한 이전 버전의 장치 및 VVM 프로토콜의 개발에 그들의 도움에 대 한 피 Calvo, A. Mialot, 및 E. Idoux을 감사합니다.
이 작품은 센터 국가 des와 Spatiales, CNRS, 대학교 파리 데카르트에 의해 투자 되었다. J. C. 그리고 M. B. 프랑스 ANR-13-CESA-0005-02에서 지원을 받을 수 있습니다. F. F. B., M. B는 프랑스 ANR-15-CE32-0007에서 지원을 받을 수 있습니다.

모든 동물 절차 파리 데카르트 대학 동물 규정에 따 랐 다.
1. 장치 어셈블리
참고:이 프로토콜에 사용 되는 장치를 이식된 headpost에 의하여 쥐 두개골에 고정 헬멧 모양의 구조 이다.
<ol><li>3D 프린터와 백색 불투명 한 폴 리 (젖 산) (PLA)를 사용 하 여 플라스틱, 인쇄 여기 제공 하는 디자인 및 사양 파일을 사용 하 여 (참조 테이블의 재료) 장치 및 headpost. 참고: 소자의 치수는 그림 1 과 그림 2에 표시 된 headpost의 크기에 표시 됩니다.</li>
	<li>줄무늬 뿐만 아니라 가짜 장치는 시험된 (그림 2A11) 이다. 검은 매니큐어를 사용 하 여 스트라이프 모델을 얻기 위해 디바이스의 외부 표면에 3mm 큰 수직 줄무늬를 그립니다. 가짜 조건 인쇄 장치에 어떤 수정이 필요 하지 않습니다.</li>
</ol>2. Headpost 이식 수술
이 프로토콜에 사용 된 모든 물질 보충 정보 자료 목록에 자세히 나와 있습니다. 2.7-2.9 사용 생체 주입에 제공 된 단계 키트 ( 재료의 표참조). 살 균 계기의 사용을 확인 하 고 수술 및 다른 지역에서 복구. 일단 마스터, 이식 절차는 약 30 분을 지속 한다.
<ol><li>진통, 수술의 시작 하기 전에 30 분 피하 주사 buprenorphine (0.05 mg/kg)이 고 홈 장에 동물을 다시 넣어. 참고: Buprenorphine의 진통 효과 절차의 끝 후에 오랫동안 약 12 h, 마지막. 우리의 경험에서는, 쥐가이 개입에 관련 된 고통의 어떤 표시 든 지 보여주지 않는다 그러나 0.05 mg/kg buprenorphine의 연속적인 복용량은 수술 후 24 h 좋습니다.</li>
	<li>2.5%-3 %isoflurane 가스 실에서 동물 anesthetize 3 분을 기다릴 고 마우스 제대로 호흡 및 챔버 내부에 이동의 부족을 관찰 하 여 취 경우 확인 합니다. 코 콘 난방 패드 수술 테이블에 마우스를 통과 하 고, 인터 곤란 하 여 거기 없다 철수 반사 이며 낮은 1.5 %isoflurane 확인 합니다.</li>
	<li>전기 면도기를 사용 하 여 마우스의 머리를 면도. 메 마른 환경을 얻으려면 문질러 요오드 솔루션 면도 지역 후 70% 알코올로. 이 절차를 두 번 더 반복 합니다.</li>
	<li>국 소 마 취에 대 한 머리의 피부 아래 lidocaine 염 산 염 (2%, 2 mg/kg)을 주사 하십시오 고 시작 효과 대 일 분 기다립니다. 건조로 인 한 눈 손상을 방지 하려면 마우스의 눈 연 고 국 소 안과 수 의사와 커버.</li>
	<li>무딘 집게의 쌍, 잡아 머리, 뒤 및 무딘가 위 (또는 메스)의 쌍으로 피부 노출 두개골 약 1.5 ㎝의 세로 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>메스의 도움으로는 스크래치. 수로 headpost의 고정은 두개골에 약간 피가 시작 되 면 손상 될 수 있습니다, 너무 열심히 스크래치 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>두개골의 중간에 녹색 활성기의 방울을 적용 합니다. 이 증가 뼈 침투성에 의해 시멘트의 고정을 향상 됩니다.</li>
	<li>시멘트를 준비: 단위체의 5 방울과 촉매의 한 방울 폴리머 (이식 키트에 제공 된) 한 숟가락을 혼합. 브러시의 도움으로 람다와 bregma 두개골 랜드마크; 사이 시멘트 혼합의 관대 한 금액을 적용</li>
	<li>신속 하 게 강타해 bregma 람다에서 것으로 시멘트에는 headpost를 놓습니다. headpost 배치 된 후 더 많은 시멘트는 headpost 제대로 두개골에 붙어 있도록 열 등 한 부분을 다시 적용 합니다. 적절 한 고정을 보장 하기 위해 시멘트를 풍부 하 게 적용 하 고 다음 단계를 계속 하기 전에 건조 있는지 확인 합니다. 참고:이 고정 절차는 headpost 하지와 서 장기, 반복 테스트;에 대 한 허용 우리의 손에서 headpost 제거는 < 10%.</li>
	<li>혼합물의 부드러운 일관성 있도록 분말 액체 비율을 적용 하 여 수 지 혼합을 준비 합니다. 시멘트 적용 된 곳으로 주위에 그것의 표면을 보호 하기 위해 headpost 수 지를 적용 합니다.</li>
	<li>수 지 건조 하 고 닫습니다 monofilament 봉합으로 귀 뒤쪽 피부에 대 일 분을 기다립니다. 면봉, 적용 희석된 (10%-20%) 운영된 지역에 요오드 솔루션입니다. 참고: 피부 수 지에 붙어 있지 않는 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>마 취를 끄고 저체온증을 피하기 위해 빨간색 따뜻한 빛 아래에서 동물을 배치. 음식과 히드로 습 하는 장소 또는 감 금 소의 바닥에 젤에 본사를 둔 다른 물 소스. 두지 마십시오 마우스 무인 의식 회복 될 때까지. 최대한 빨리 동물 절차 (일반적으로, 후 1 시간 30 분)에서 완벽 하 게 복구, 사회적 상호 작용을 자극 하는 3 또는 4의 그룹에 놓습니다.</li>
</ol>3. 장치 고정
<ol><li>수술, 48 h는 headpost에 사용자 머리 장치 보안.<ol>
<li>1.2 m m 나사와 드라이버 (1.3 m m 16 진수)의 쌍을 사용 하는 headpost에 있는 구멍에 줄무늬 장치 구멍, 나사 놓고 그들을 보호. 가짜 상태를 해결 하려면 장치를 뒤집어서 하 고 rostral 방향 장치의 뒤쪽 부분 (그림 1A), 정렬 하는 장치에는 headpost에서 구멍의 구멍. 참고:이 단계는 headpost에 장치를 확보 하는 다른 한 손으로 마우스 구속으로 마우스를 잡고 한 두 연산자에 의해 할 수 하는 것이 좋습니다. 단일 연산자에 의해 고정 한다면 마우스 가스 마 취는 하는 동안 장치를 배치할 수 있습니다.</li>
		<li>확인 하 고 장치 마우스의 코, 잠재적으로 통증, 호흡, 어려움을 일으킬 수 또는 상해를 피부에 직접 압력을 적용 되지 않습니다 장치 보안이 이며 동물에 의해 제거할 수 없습니다. 참고: 그것은 또한 확인 장치는 대칭으로 마우스 얼굴에 눈은 완전히 머리 장치에 의해 보호 되도록 하는 것이 중요. 동물의 비정상적인 통증이 나 고통을 어떤 표시 든 지 보여주지 않는 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>14 일에 대 한 마우스 장치를 둡니다.</li>
</ol>4. 동물 보호 및 감시
<ol><li>일단 그들의 감 금 소에 다시 마우스 동작에 특정 이상이 전시할 것 이다. 처음에는 동물 prostrated 체재 하 고 그것의 forepaws를 사용 하 여 장치를 제거 하려고 수 있습니다 하지만이 첫 번째 시간 후에 중단 한다. 다음 다음 시간 동안 동물 일반적으로 안에 자체 동쪽으로 향하게 하 고 음식과 물에 대 한 도달 어려움을 표시 합니다. 따라서, 이식 다음 48 h 동안 쥐 모니터링 하 고 쉽게 액세스할 수 물과 음식, 예를 들면 모두 감 금 소 바닥에 직접 배치 하 여 키를 누릅니다.</li>
	<li>추적할 마우스의 무게는 프로토콜의 기간 동안. 이식 후 바로 마우스 무게 그리고 다시 특별 한 주의 모든 24 h. 입고 줄무늬 장치, 그들은 일반적으로 첫 번째 48 h 동안 몸 무게 손실 (1-2 g)을 경험 하는 동물에 주어져야 한다 하지만 정상적인 속도로 다시 무게를 얻고 시작 다음 초기 기간 ( 그림 2B11참조).</li>
	<li>2 일 후 그들의 정규 학부로 돌아가려면 마우스 예상 된다. 동물 시설에 사용 되는 시스템에 따라 장치 수 수 방지 액세스 음식과 물에. 확인 동물에서 먹고 마시는 동안 또는 분배 시스템을 적절 하 게 적응. 참고: 머리 움직임에 장치와 함께 몇 일 후에 동물에 의해 생산의 범위는 장치에 의해 수정 되지 않습니다 ( 그림 211참조) (즉,., 머리 움직임의 범위 제작 남아 자연 머리 움직임에 유사한).</li>
	<li>더 쥐의 복지를 보장 하기 위해, 매일 감시를 확인 하 고 프로토콜의 기간에 걸쳐 복지의 질적 규모 (표 1)을 적용 합니다.</li>
	<li>다음 조건 중 하나 이상이 적용 하는 경우 지속적인 프로토콜에서 마우스를 제거:<ol>
<li>총 쥐 실험에서 즉시 상기 질적 규모에 4 포인트를 제외 해야 하는 보다 높은 점수 ( 표 1참조). 점수에 마우스 6 일 후, 그것의 초기 체중을 회복 하지 않는 경우 프로시저 중지 되어야 합니다.</li>
		<li>경우, 예를 들어,는 headpost 쉐이크 만질 때 또는 내려와 시작 하는 일부 장치는 headpost 제대로 고정 하지 됩니다. 이 마우스의 머리 내려와 headpost 원인과 결과적으로 매일 surveillances 필요한 이유는 설명 학습을 중단 합니다.</li>
		<li>때 마우스는 그것의 headpost 찢 어 프로토콜의 일부. 때문에 두개골 출혈이 초연에 관련 된, reimplantation 수술 낮은 성공률을가지고 고 시도 가치가 되지 않습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5입니다. 제거 장치
<ol><li>학습 기간 (에이 프로토콜 14 일) 후의 고정 (섹션 3)에 관해서는 같은 지침에 따라 장치를 제거 합니다. 장치 제거 되 자 마자 비디오 oculography 테스트, 같은 실험 또는, 예를 들어, 앞에서 설명한11 생체 외에서 생리학 마우스를 테스트 합니다. 참고: 장치는 이륙 하자마자 마우스 표준, 시각적으로 가리지 환경으로 노출 됩니다. 따라서, 제거 후 직접이 소자의 학습 효과 테스트 하는 것을 목표로 실험을 수행 합니다.</li>
</ol>6. 비디오-oculography 세션
참고: 비디오 oculography 실험 동물 (vestibulo 눈 반사, 포) 어둠 속에서 회전 되는 또는 회전 하 여 동물의 주변 동물은 여전히 (optokinetic 반사, OKR) 하는 동안 생성 된 안구의 움직임을 기록 하기 위해 수행 됩니다. 각 마우스 적응 프로토콜 전후 모두 이러한 반사에 대 한 테스트 되었습니다. 비디오-oculography 설정에 대 한 자세한 내용은 이전 게시 된 보고서12,13를 참조 하십시오. 절제 된 녹음을 쥐를 길 들 위해 조건, 녹음의 시작 전에 하루 장소 동물 10 분 대 한 턴테이블의 중심에 튜브에 어떤 테스트를 수행 하지 않고.
<ol><li>머리-그것을 고정 나사는 headpost에 삽입의 도움으로 여 턴테이블에 마우스를 보안 합니다. 동물을 둘러싼 스크린 돔 놓고 optokinetic 프로젝터를 제외 하 고 방에 모든 조명을 해제 합니다. 참고: 비디오 oculography 녹음 여전히 고는 눈을 뜨고 동물이 필요 합니다. 녹음 세션 및 동물 마우스 않습니다 하지 자발적으로 눈을 뜨고는, 경우에 그것의 감 금에 다시 중단 또는 눈의 모양을 기록 세션 동안 악화 하는 경우. 또 다른 시도 휴식의 기간 뒤에 적어도 12 h 할 수 있다.</li>
	<li>OKR 전체 필드 자극 (백색 점 패턴 투영)와 여러 가지 다른 속도 기록 시계 방향 및 카운터 시계 방향으로 시작 합니다. 최대한 빨리 녹음 끝났다, 돔을 제거 합니다.</li>
	<li>피치 어두운에 기록 하는 포 수, 2 %pilocarpine 방울 눈14에 적용 됩니다. 행동 하 고 조심 스럽게 면봉으로 제거 그것을 위해 적어도 5 분 기다립니다. pilocarpine 어둠 속에서 운동의 적절 한 정량화를 허용 측정을 통해 일정 크기 막혀서 학생을 유지할 것 이다.</li>
	<li>방에 있는 모든 조명을 끄고 어두운 피치에 동물 유지를 턴테이블 위에 상자 추가. 서로 다른 주파수 또는 다른 속도 수직 축을 정현파 각도 회전을 사용 하 여 수평 포를 시작 합니다.</li>
	<li>녹음 세션이 완료 되 면 제대로 적외선 램프로 조명 케이지를 마우스를 반환 합니다. 열은 마우스의 시체에서 pilocarpine의 보조 vasodilator 효과로 인 한 저체온증을 방지 합니다. 참고: 때문에 제 지 되 고 동물 세션을 녹음 수 없습니다 마지막 90 분 이상. 추가 테스트 세션 필요 하 때, 세션 사이 24 h에 대 한 동물 나머지.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 관심 없음 충돌 선언합니다.

자유롭게 행동 쥐에서 생산 visuo vestibular 불일치 여기에 설명 된 장기 감각 섭 동에 의하여 이루어져 있다. 14 일 동안 착용 하는 마우스 장치를 이식 하는 상용 수술 키트를 사용 하 여 간단 하 고 짧은 수술 수행 됩니다. 마우스가 headpost 주입 절차에서 1 시간 미만에서 복구 하 고 그것은 조 난의 관련된 흔적을 보여. 그 후,이 프로토콜의 응용 프로그램의 특정된 예제에서 포와 OKR는 측정 비디오 oculography 기술을 사용 하 여. 그럼에도 불구 하 고,이 장치 유도 장기 학습 프로토콜 실험 생리학1 생체 외에서 신경 영상, 다양 한 행동 분석 등의 다양 한에서 사용 될 수 있습니다. 이 기술 개발에 뒤에 근거는 인간과 원숭이에 사용 되는 프리즘 기반 방법론에 의해 영감을 했다. 그러나이 기술은,, 그것 손상 보다는 비전을 수정 하기 때문에 다릅니다. 따라서, 그것은 (그것의 현재 모양에서) visuo vestibular 불일치의 극단적인 경우를 구성합니다. 저자 제공된 기술 정보 또는 특정 기능 제한 장치16개발 장치의 프리즘 같은 버전을 디자인 하는 데 유용 수 있습니다 믿습니다.
빛 (0.9 g) 폴 리 (젖 산)의 플라스틱, 머리 장치 젊은 성인 마우스, 주 둥이의 보호 및 동물 신랑을 옆으로 충분 한 공간을 떠나 머리에 맞게 설계 되었습니다. 이 소자의 앞 부분 수 유 하 고 손질 하는 행동을 주 둥이의 끝을 노출 합니다. 장치는 약간 불투명 동물 주변의 정확한 비전의 박탈 하지만 여전히 광도 자극을 받습니다. 줄무늬와 가짜 implantations 측정된 효과 때문에 주로 줄무늬 장치의 자가 생성 시 고대비 영상 신호에 의해 그리고 고유에 의해 발생 하는 visuo vestibular 불일치 되도록 테스트 수정 (즉,, mouse´s 머리와 목에 적용 하는 소자의 무게).
실험적으로, 줄무늬 장치 보여준 중요 한 포를 입고 쥐 학습 기간; 후 50%의 감소를 얻을 하지만, 절대 이득 값 간 개별 다양성 있을 수 있습니다. 가짜 쥐 아무 중요 한 포 얻을 변경, 따라서 포 감소 모터 장애 및 감각 충돌에 의해 발생 했다고 설명 했다. 또한, 젊은 쥐 (< P26) 포와 OKR 이득 이전 동물17보다 낮은 값을 보였다. 그 이유로, 동물 나이 실험을 계획 하는 동안 고려 되어야 했다. 마지막으로, 상기 마우스 제외 기준 (4.5 절)는 복지를 보장 하 고 신뢰할 수 있는 결과 확립 따라야 할 중요 한 단계입니다.
이 프로토콜의 장점 중 하나는 학습 기간 동안 포/OKR 적응 프로토콜의 다른 유형에 비해 경험 저장 시간입니다. 지금까지 마우스에 VOR 적응 머리 고정 하 고 회전 턴테이블6,8,18,19, 동물을 많이 해야 하는 경우에 특히 시간이 걸리는, 즉에 동물을 훈련 하 여 공부 하고있다 훈련. 제시 프로토콜 수 있습니다 한 번에 여러 동물 들의 훈련 하 고 시간을 저장 합니다. 또한, 이러한 고전적인 실험에서 교육 학습/버리는 다른 역학20의 반복된 교대 하 적응 시키는 putative 버리는 오랜 기간을 두고 하루, 1 시간에 일반적으로 제한 됩니다. 여기, 머리 고정 장치 중단된 학습 할 수 있습니다. 또 다른 장점은 자유롭게 동작 머리 없는 상황에서 생성 되는 학습 기간 이후 마우스 적극적으로 생성 되는 자연 머리 움직임의 범위를 통해 배울 수 있습니다. 클래식 프로토콜에서 동물이 이다 머리 고정 학습 머리 움직임의 자연적인 범위를 반영 하지 않는 결정된 자극 (주파수, 한 속도)21 에서 발생 하는 턴테이블에 수 동적으로 회전 하는 동안. 그것은 중요 한 vestibular 시스템 인코딩 다르게 움직임 참고 때 적극적으로 생성는 주제에 의해 또는 때 외부 적용10; 따라서, 두 상황에서 발생 하는 세포 메커니즘 또한 달라질 수 있습니다.
전반적으로, 설명된 하는 방법론은 시각적 충돌 또는 자유롭게 행동 하는 쥐에 visuo vestibular 불일치 후 발생 하는 장기 감각 적응에 결합 된/vivo 에서/생체 외에서 연구에 적합 합니다. 감각 충돌은 최근 쥐22,23의 사용을 끌고있다 필드 멀의 인식된 원인입니다. 그것은 최근 쥐15도발적인 자극 노출 되 면 이득 적응이이 소자의 사용으로 인 한 멀 미에 대 한 보호를 제공 한다는 것을 시연 했다. 따라서,이 프로토콜 개발 방지 모션 병 치료로 감각 충돌 뿐만 아니라에 적응을 기본 셀룰러 메커니즘을 식별 하기 위해 사용 될 수 있습니다.

시각적인 것 들과 같은 감각 충돌에에서 있는 일상 생활, 예를 들어, 하나는 안경 착용 하는 때 또는 전체 수명 (발달 성장, 감각 예민, 등등에서 변화.) 동안. 잘 설명된 회로 해부학, 쉽게 제어 감각 입력, 정량 모터 출력 및 정확한 정량화 방법1, 시선으로 인해 안정화 반사 모터 많은 종에서 학습의 모델로 사용 되었습니다. 인간, 원숭이 vestibulo 눈 반사 (VOR) 적응 주제 몇 일2,3,,45착용 프리즘을 사용 하 여 공부 된다. 설치류 모델 행동 및 세포 실험의 조합을 수 있습니다, 이후 우리 헬멧 모양의 장치와 마우스를 자유롭게 행동에 장기 감각 충돌을 만드는 새로운 방법을 개발. 인간과 원숭이에 사용 된 방법론에 의해 영감, 프로토콜 vestibular 및 시각적 입력 (즉, visuo vestibular 불일치, VVM) 포 이득 감소에 이르게 사이 불일치를 생성 합니다.
클래식 프로토콜 트리거링 설치류에 포 이득 다운 적응 단계에서 시야를 회전 하면서 회전 하는 턴테이블에 머리 고정 동물 이루어져 있다. 이 패러다임 visuo vestibular 충돌, 카운터는 포 하 게 만듭니다. 몇 일 연속6,,78의 과정을 통해이 절차의 반복 장기 적응 프로토콜에 의하여 이루어져 있었다. 결과적으로, 동물의 큰 그룹 테스트 하는 경우 클래식 방법론에 시간의 큰 금액을 필요 합니다. 또한, 동물 머리 고정 이므로 학습 주로 개별 주파수/속도 제한 이며 가변 기간6의 intertrial 간격에 의해 중단 하는 불연속 교육의 구성. 마지막으로, 고전적인 프로토콜 사용 수동 학습 vestibular 자극에 적극적으로 동물의 자발적 움직임, 크게 vestibular 처리9,10를 형성 하는 상황에 의해 생성 되지 않습니다.
상기 실험 제약은 혁신적인 방법론을 제시 하 여 능가 했다. 필요한 외과 접근은 간단 합니다, 그리고 사용 되는 재료는 상업적으로 쉽게 사용할 수 있습니다. 더 비싼 물자에 의존 하는 유일한 부분이 이다; 동작의 정량화 그럼에도 불구 하 고, 프로토콜의 기본은 체 외에서 조사에서 다른 행동 연구를 학습의 어떤 실험을 위해 사용할 수 있습니다. 전반적으로, 몇 일 동안 일시적 시각 장애 및 visuo vestibular 충돌을 생성 하 여이 방법은 수 있습니다 쉽게 될 조 변경 모든 연구 감각 섭 동 또는 모터 학습에 관심된을.

<table><tbody><tr><td>3D 프린터</td><td>Ulimaker, 미국</td><td>S5</td><td></td></tr><tr><td>무딘 가위</td><td>FST</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Catalyst V</td><td>Sun Medical, 일본</td><td>LX22</td><td>Parkell 바이오 재료, 키트 n&deg; S380</td></tr><tr><td>Dentalon Plus</td><td>Heraeus</td><td>37041</td><td></td></tr><tr><td>Eyetracking 시스템 및 소프트웨어</td><td>Iscan</td><td>ETN200</td><td></td></tr><tr><td>Green activator</td><td>Sun Medical, 일본</td><td>VE-1</td><td>Parkell 바이오 재료, Kit n&deg; S380</td></tr><tr><td>Monomer</td><td>Sun Medical, 일본</td><td>MF-1</td><td>Parkell 생체 재료, Kit n&deg; S380</td></tr><tr><td>Ocrygel</td><td>TvmLab</td><td>10779</td><td>안과 수의사 연고</td></tr><tr><td>폴리머 L형 투명 (시멘트)</td><td>Sun Medical, 일본</td><td>TT12F</td><td>Parkell 생체 재료, 키트 n&deg; S380</td></tr><tr><td>Sketchup</td><td>Trimble</td><td></td><td>3D 모델링 소프트웨어 장치의 바로 인쇄 가능한 디자인 파일에 사용됨</td></tr><tr><td>턴테이블</td><td></td><td></td><td>상업적으로 이용 불가</td></tr></tbody></table>

자유롭게 행동 하는 쥐에 장기 감각 충돌

Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice

장기 감각 충돌 프로토콜은 모터 학습을 공부 하는 귀중 한 수단입니다. 제시 프로토콜 실험 쥐에서 장기 학습 공부 목적에 대 한 영구적인 감각 충돌을 생성 합니다. 영구적으로 그들의 머리에 고정 장치를 입고, 쥐 집 연습장에서 자유롭게 이동 하면서 시각과 vestibular 입력 사이 감각 불일치에 지속적으로 노출 됩니다. 따라서,이 프로토콜 비주얼 시스템 및 낯익은 상호 작용의 연구를 쉽게 것입니다 액세스할 수 없습니다 달리 확장된 기간 동안 있습니다. 자연스럽 게 행동 하는 쥐에 장기 감각 학습의 실험 비용을 절감할 뿐만 아니라이 이렇게 수용 vivo에서 그리고 생체 외에서 실험의 조합. 보고 예제 비디오 oculography 전과 학습 후 vestibulo 눈 반사 (VOR) 및 optokinetic 반사 (OKR) 척도를 수행 됩니다. 마우스가 장기 감각 상충 강한 포 이득 감소를 제시 하는 시각과 vestibular 입력에 노출 하지만 몇 가지 OKR 변화를 전시. 자세한 장치 어셈블리, 동물 보호의 단계 및 반사 측정 보고 본인.

다음 그림 스트라이프 또는 가짜 장치를 수술 2 주 적응 프로토콜 중 하나를 착용 하는 마우스와 함께 얻은 결과 보여 줍니다. 그림 3 세션을 녹음 하는 동안 본 원시 추적의 예가 나와 있습니다. 흔적을 비교 하 여 같이 포 응답 VVM 프로토콜 후 감소 (그림 3A, 전에 대 후 줄무늬). 가짜 쥐의 VOR 적응 후 변경 되지 않은 남아 있었다 (그림 3A, 전에 대 가짜 후). 줄무늬 장치 (그림 3B)를 착용 하는 마우스의 OKR은 쥐 사기를 VVM 프로토콜 이전 기간에 비해. 그림 4 는 평균 포 이익의 정량화 예 0.5 Hz의 고정된 주파수에서와 초당 40도에서 VVM 프로토콜의 줄무늬와 가짜 장치에 대 한 전후. 마우스 입고 줄무늬 장치 동안 가짜 쥐 상당한 이득 변화 하지 않은 후 강력한 이득 감소가입니다. 서로 다른 속도/주파수에서 시험 포 감소의 효과 Carcaud 외.11 Idoux 외.15에 의해 보고 되었습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59135/59135fig1.jpg"> 그림 1 : 헤드 장치 크기, 밀리미터 단위로 표시. 조회: (A) 뒤로 (B) 측면, (C) 바닥을 (D) 공중. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59135/59135fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59135/59135fig2.jpg"> 그림 2 : 밀리미터에서 크기와 묘사 Headpost. 이식 수술,이 빛 (0.2 g)에서 해결 된 폴 리 (젖 산) 플라스틱 headpost 마우스 및 비디오 oculography 세션 동안 턴테이블에 동물의 머리 고정에 적응 장치 잠금 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59135/59135fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59135/59135fig3v2.jpg"> 그림 3 : 포와 OKR stimulations 동안 눈 움직임의 예 원시 흔적. (A, 왼쪽) 왼쪽: VOR 0.5 Hz에서에서 수행 40 ° /s 및 (B, 오른쪽) optokinetic 자극 일정 속도에서 10 ° /s (검은 선), (녹색 라인) 전에 시계 방향 (노란색) 스트라이프 또는 가짜 (보라색) 장치를 착용 후. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59135/59135fig3v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59135/59135fig4v2.jpg"> 그림 4 : 예 포 및 OKR 스트라이프 또는 가짜 장치에 적응 후 값을 얻을 의미. 상승에 따라 표시 했다는 줄무늬에 대 한 기간 (일) (n = 10)와 가짜 (n = 6) 포 (왼쪽)에 대 한 40 ° /s 및 0.5 Hz의 stimulations에 장치와 10 ° /s 시계 방향 (오른쪽) OKR에 대 한. "전에" 하루 적응 직전 일을 나타냅니다 날짜 표시줄에 및 "일 0" 장치를 제거 하는 때 일을 나타냅니다. 오차 막대를 나타내는 표준 편차 * * * p &lt; 0.001, 중요 하지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59135/59135fig4v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>포인트</td>
			<td>몸 무게 변경</td>
			<td>외모</td>
			<td>동작</td>
		</tr>
<tr>
<td>0</td>
			<td>없음 또는 체중 증가</td>
			<td>표준</td>
			<td>조 난 및 정상적인 운동의 흔적</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>체중 감소 &lt; 10%</td>
			<td>아니 몸 손질</td>
			<td>장애인된 운동 또는 케이지 방향</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>체중 10%-20% 사이</td>
			<td>탈수</td>
			<td>--</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>체중 감소 &gt; 20%</td>
			<td>상처</td>
			<td>긴장 틱 (예: 긁 적, 무)</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 복지 평가 대 한 질적 규모. 같습니다 질적 매개 변수는 프로토콜의 기간 동안 평가 되어야 합니다. 합계 무게 변경, 외모와 행동 점수 해서는 안됩니다 4 포인트 보다 큰.
보충 파일 1. Device.stl. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59135/Device.stl" target="_blank">이 파일을 다운로드 하려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
보조 파일 2. Headpost.stl. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59135/Headpost.stl" target="_blank">이 파일을 다운로드 하려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

제시 프로토콜 장기 학습을 공부 하기 위한 실험에 대 한 영구적인 감각 충돌을 생성 합니다. 영구적으로 그들의 머리에 고정된 장치를 입고, 쥐 집 연습장에서 자유롭게 이동 하면서 시각과 vestibular 입력 사이 감각 불일치에 지속적으로 노출 됩니다.

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 자유롭게 행동하는 마우스에 있는 장기 학습의 연구 결과를 위한 지속적인 감각 충돌을 생성하는 것입니다. 감각 학습의 실험 비용과 시간을 낮추는이 방법은 생체 내 및 체외 실험의 조합을 수용합니다. 진정 된 마우스에 발가락 핀치에 대 한 응답의 부족을 확인 한 후, 무딘 집게 한 쌍을 사용 하 여 머리의 뒷면에 피부를 잡고 두개골을 노출 하는 하나 반 cm 세로 절개를 만들기 위해 가위를 사용 하 여.메스로 골막막을 부드럽게 긁어내고 두개골 중앙에 녹색 활성제 한 방울을 발라 뼈 투과성을 증가시면 됩니다. 다음으로 이식 키트에서 폴리머 한 스푼을 5방울의 단조량과 촉매 1방울을 혼합하고 람다와 브레그마 두개골 랜드마크 사이에 넉넉한 양의 시멘트 믹스를 브러시합니다. 람다에서 브레그마로 스 와이프 모션을 사용하여 신속하게 헤드 포스트를 시멘트에 배치하고 헤드 포스트가 두개골에 단단히 붙어 있는지 확인하기 위해 포스트의 열등한 부분 주위에 추가 시멘트를 다시 적용합니다.시멘트가 건조되는 동안 수지 분말을 수지 액과 혼합하여 매끄러운 일관성을 이루고 말린 시멘트 및 헤드포스트 주변에 그 결과로 생긴 수지 혼합물을 적용합니다. 수지가 3분 동안 건조하도록 허용한 후, 비릴 4-0 봉합사를 사용하여 귀 뒤쪽의 피부를 닫고 면봉을 사용하여 절개에 10~20% 요오드 용액을 적용합니다. 그런 다음 동물이 완전히 회복 될 때까지 모니터링하여 빨간 불빛 아래에 놓습니다.수술 후 48시간 후에 줄무늬 장치의 구멍을 헤드포스트의 구멍과 정렬하고 1.3mm 육석 드라이버와 2개의 1.2mm 나사를 사용하여 헤드포스트에 장치를 고정시합니다. 헤드포스트를 찢어내거나 드라이버로 동물을 다치게 할 위험을 피하기 위해 두 번째 작업자의 도움으로 헤드 포스트에 장치를 고정하는 것이 좋습니다. 가짜 상태를 수정하려면 장치를 거꾸로 뒤집고 장밋빛 방향을 향한 장치의 뒷면 부분으로 장치의 구멍을 헤드 포스트의 구멍과 정렬합니다.장치가 잘 고정되어 있고 동물이 제거 할 수 없으며 장치가 코에 직접 압력을 가하지 않아 통증, 호흡 곤란 또는 피부 손상을 일으킬 수 있음을 확인하십시오. 마우스는 장치를 착용하는 첫번째 48 시간 도중 몇몇 행동 이상을 전시할 수 있기 때문에, 이 시간 도중 동물을 밀접하게 감시하고 동물이 적응될 때까지 음식과 물에 쉽게 접근을 제공합니다. 이식 직후, 그리고 실험이 끝날 때까지 24시간마다 다시 마우스를 계량하여 줄무늬 장치를 착용한 마우스에게 특별한 주의를 기울입니다.장치 적응 동물의 감각 반응을 기록하려면 헤드 포스트에 나사를 삽입하여 첫 번째 마우스를 턴테이블에 고정하고 동물 주위에 스크린 돔을 배치합니다. 광키네틱 프로젝터를 제외한 모든 조명을 끄고 시계 방향과 반시계 방향 모두에서 여러 가지 속도로 광동 반사 전체 필드 자극 레코딩 을 시작합니다. 녹음이 지나자마자 돔을 제거하고 조명을 켭니다.피치 어두운 에 현관 안구 반사를 기록하려면, 동물의 눈에 2 %의 필로카르핀 한 방울을 적용하고 부드럽게 면봉연연을 제거하기 전에 적어도 5 분을 기다립니다. 모든 조명을 다시 끄고 턴테이블 위에 상자를 놓아 동물을 어둡게 유지합니다. 수평 현관-안구 반사 테스트를 시작하기 전에 다른 주파수 및/또는 다른 속도로 수직 축 주위의 부비동 각 회전을 사용 하 여.두 번째 레코딩 세션이 끝나면 필로카르핀의 이차 혈관 확장제 효과에서 동물이 완전히 회복될 때까지 모니터링을 통해 마우스를 적외선 램프 아래 케이지로 되돌리세요. 2주 동안 샴 또는 줄무늬 장치를 착용한 후, 샴 마우스의 현관-안구 반사 반응은 적응 후 변경되지 않은 상태로 유지되며, 줄무늬 장치 적응 동물은 크게 손상된 반사 반응을 보여줍니다. 평균 전정-안구 반사의 정량화는 0.5 헤르츠의 고정 주파수에서 초당 40도에서 눈부조 부전 프로토콜을 통해 줄무늬 장치를 착용한 마우스의 강한 이득 감소를 나타내며, 가짜 마우스는 상당한 이득 변화를 나타내지 않았다.그러나, 줄무늬 장치를 착용하는 마우스의 광키네틱 반사는 시각 전정 프로토콜 이전에 관찰된 기간 동안 관찰된 것과 필적하며, 이는 가짜 동물에 의해 입증된다. 매일 마우스를 모니터링하고 장치가 마우스에 올바르게 배치되고 루틴을 방해하지 않는지 확인해야합니다. 다른 반사 출력을 공부하기 위한 셀라 적응 메커니즘 또는 행동 해석을 식별하기 위한 체외 전기 생리학 또는 신경 이미징에서 이 절차에 따라 수행될 수 있다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

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T-미로 강제 교대 및 근무와 마우스의 레퍼런스 메모리를 평가하기위한 왼쪽 오른쪽 차별 작업

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여기에서 우리는 마우스에 있는 optogenetics를 사용하여 장소 환경 설정 패러다임에 대한 2개의 따르기 쉬운 단계별 프로토콜을 제시합니다. 이러한 두 가지 설정을 사용하여, 선호도 및 회피 거동은 높은 공간 및 시간 선택성을 가진 동일한 장치 내에서, 그리고 간단한 방식으로 단단히 평가될 수 있다.

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Y-미로 장벽 작업은 보상을 위한 노력을 소비하는 동기를 검사하는 행동 테스트입니다. 여기에서는 만성 코르티코스테론과 사회적 패배 스트레스를 비롯한 여러 가지 잘 검증된 만성 스트레스와 여성에게 효과적인 새로운 만성 비차별적 사회적 패배 스트레스(CNSDS)를 테스트하는 데 대해 논의합니다.

만성 스트레스는 마우스의 Y-미로 장벽 작업에서 노력과 관련된 선택 행동을 변화시합니다.

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마우스에서 가벼운 혐오감을 이용한 편두통과 같은 행동 조사

이 문서에서는 새로운 마우스 판단 편향 프로토콜에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 정서적 상태에 대한이 후각 파기 작업의 민감성에 대한 증거도 입증되고 다양한 연구 분야에서 그 유용성이 논의됩니다.

후각 파기 작업을 통한 마우스 판단 편향 평가

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

설치류에 대한 대부분의 행동 실험은 원래 쥐를 위해 고안되었습니다. 쥐와 생쥐의 행동 차이로 인해 때때로 생쥐에 대한 수정이 필요합니다. 우리는 생쥐의 공간 작업 기억을 테스트하여 작업 기억 작업 중 스트레스를 최소화하는 방법을 제시합니다.

반자동 8팔 방사형 미로에서 마우스를 위한 식욕을 유발하는 공간 작업 기억 작업, 미로에서 두려운 기억 연관성 감소

본 연구는 매일 4가지 사회적 스트레스 요인을 통합함으로써 암컷 C57BL/6J 마우스의 정신 장애에 대한 다중 통합 사회적 스트레스(MISS) 모델을 설명합니다. 10일 동안 MISS 노출을 반복한 후, 생쥐는 우울증과 불안과 같은 표현형을 개발하여 여성 피험자의 정신 장애를 연구하기 위한 자연스러운 병인학 기반 동물 모델을 제공했습니다.

암컷 C57BL/6J 마우스의 정신 장애에 대한 다중 통합 사회적 스트레스 모델

관찰적 공포 패러다임은 설치류의 대리 동결을 정서적 공감의 모델로 평가합니다. 이 절차는 관찰자 설치류를 특정 시연자에 노출시켜 혐오스러운 발 충격을 받아 공감적 동결 반응을 이끌어내는 것을 수반합니다. 관찰 공포 분석을 사용함으로써 연구자들은 정서적 공감의 기저에 있는 신경 메커니즘을 조사할 수 있습니다.

생쥐의 정서적 공감 모델로서의 관찰 두려움

학습하세요 자유롭게 행동하는 쥐에서 지속적인 시각-전정 감각 충돌을 유도하여 장기 학습을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 생체 내외 실험을 결합하여 감각 학습의 신경 메커니즘을 규명합니다.

자유롭게 행동 하는 쥐에 장기 감각 충돌

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