Name: 급진적 인 전립선 절제술에 따른 발기 부전의 치료를위한 지방 유래 재생 세포의 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: 배우세요 지방 유래 재생 세포(ADRC) 분리 방법을 급진적 전립선 절제술 후 발기 부전 치료에 적용하는 기술입니다. 이 프로토콜은 지방 흡입, 효소 소화, 원심 분리를 포함하며 재생 의학 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 Odense University Hospital (11/31936), Danish Center for Regenerative Medicine (14/50427) 및 Danish Cancer Society에 의해 설립되었습니다.

프로토콜에 설명 된 모든 방법은 덴마크 국가 윤리위원회 (No. 37054), 덴마크 보건 의약품 당국 (EUDRA-CT 번호 2013-004220-11) 및 덴마크 데이터 보호국 (2008-58-0035)의 승인을 받았습니다. 이 연구는 ClinicalTrials.gov (NCT02240823)에 등록되었습니다. 이 연구는 Odense University Hospital의 GCP (Good Clinical Practice) 부서에서 모니터링 한 헬싱키 선언에 따라 수행되었습니다. ADRC 제제는 오덴세 대학 병원 (덴마크 건강 및 의약품 당국, 허가 번호 29035)에서 인간 조직 및 세포의 취급을위한 공인 조직 설립에서 수행되었다.
1. 환자/참가자 모집
<ol><li>임상시험에 참여하려면 다음과 같은 포함 기준을 충족하는 환자를 모집합니다.<ol>
<li>18세 이상이고, RP 전에 성적으로 활동적이며, 인간 면역 결핍 바이러스 감염, 매독 또는 간염과 같은 성병에 감염되지 않은 환자를 모집합니다.</li>
		<li>전립선 암으로 인해 수행 된 RP 후 발기 부전으로 고통 받고 있는지 확인하십시오. 참고 :이 연구에서 환자는 RP 후 5-18 개월 후에 연구에 등록되었으며 수술 방법에 관계없이 포함되었습니다 : 개방 / 로봇 보조 또는 신경 절약 / 비 신경 절약.</li>
		<li>전립선 특이 항원 (PSA)의 값이 RP 후 임상 후속 조치에서 검출 할 수 없도록하십시오.</li>
		<li>환자가 RP 전에 성적으로 활동적이었는지 확인하고, RP 후에도 성적으로 활동적이기를 바란다는 소망을 표현하십시오. 포스포디에스테라제 타입 5 억제제 (PDE5 억제제) 또는 프로스타글란딘 E1 (PGE1)의 합성 유사체에 대한 약리학적 개입이 참여하기 전에 시도되었고 불충분하다고 간주되었는지 확인하십시오.</li>
		<li>또한 환자가 복부 또는 허벅지에 충분한 피하 지방이 있는지 확인하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>RP 중 마취하에 심각한 사건이 발생했거나 항응고제로 치료 한 경우 임상시험에서 환자를 제외하십시오.</li>
</ol>2. 지방 흡입
참고: 지방 흡입은 피하 부위에서 지방이나 지방세포를 제거하는 수술입니다. 프로토콜의이 부분은 표준 지방 흡입술로 수행되며 절차는 수술실에서 멸균 조건에서 수행됩니다. 시술에 사용되는 모든 기구는 멸균되어야 하며 외과의는 스크럽, 멸균 수술 가운, 멸균 장갑, 수술용 마스크 및 모자를 착용해야 합니다.
<ol><li>환자를 마취하십시오.<ol>
<li>환자가 절차 중에 전신 마취 중인지 확인하고이 부분은 마취 전문의가 수행합니다.</li>
		<li>클로르헥시딘 0.5 % (클로르헥시딘 정신, 96 % 에탄올 약용 클로르헥시딘 디글루코 네이트 77 % W / W = 83 % v / v)로 복부와 음낭의 피부를 소독하십시오. 복부 상의 부위를 그리기 위해 수술 마커를 사용하여 지방 흡입이 수행될 것이다. 이 영역은 일반적으로 대칭과 umbilicus 사이의 영역입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>메스로 복부 피부에 두 개의 6mm 너비의 절개를 만듭니다 (숫자 11). 지방 흡입의 위로 그려진 영역에서 대칭 및 측면으로 절개를 놓습니다.<ol>
<li>절개에 이러한 석유 젤리와 같은 윤활제를 약간 넣어 지방 흡입 중에 침윤 캐뉼라가 절개 안팎으로 쉽게 미끄러 지도록하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>피부의 절개를 통해 크기 14G 침윤 캐뉼라를 도입하십시오. 변형된 Kleins 용액을 피부 표면과 평행한 표시된 부위에 피하 주사하십시오. 용액을 너무 많이 주입하여 표적 조직이 부어 오르고 단단해지거나 종양이 생깁니다. 참고: 변형된 Kleins 용액은 1,000mL 링거 락테이트와 1mg의 아드레날린(에피네프린(1:1,000,000))의 용액으로 구성됩니다. ADRC에 부정적인 영향을 줄 수 있으므로 국소 마취를 용액으로 엉덩이로 만들지 마십시오.<ol>
<li>지방 조직에 대한 비율 1:1에 해당하는 변형된 Kleins 용액의 부피를 주입한다.</li>
		<li>아드레날린의 효과를 극대화하고 수확 된 지방 조직에서 혈액의 양을 줄이기 위해 10 분 동안 기다리십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>제트 주입 지방 흡입을 사용하여 표준 지방 흡입을 수행하여 200-300 mL의 지방 조직을 수확하십시오. 주입 튜브와 노즐이 통합 된 빈 무딘 캐뉼라를 사용하십시오. 캐뉼라를 지방 흡입을위한 흡입 장치에 부착하십시오. 참고 : 연속 팬 모양의 물 주입은 지방 조직을 캐뉼라의 개구부를 통해 쉽게 흡입 될 수있는 파편으로 느슨하게합니다.<ol>
<li>복부의 절개를 통해 무딘 팁이있는 3mm 주사기를 소개하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>지방 조직을 리포 콜렉터에 수집하여 멸균 환경에서 리포흡염수를 보존한다. 지방 흡인물은 물 단계에서 분리되기 시작할 것입니다.</li>
	<li>50 mL 멸균 주사기를 사용하여 리포 수집기에서 지방 흡인물을 빨아 들입니다.<ol>
<li>주사기에서 빨려 들어가는 물의 양을 최소화하고 주사기 끝의 플러그를 조여서 지방 조직을 멸균 상태로 유지하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>팁이 있는 주사기를 멸균 비닐 봉지에 아래쪽으로 두어 물 단계에서 지방 흡인물을 분리하기 시작합니다. 분리를 계속하기 위해 팁이 아래쪽을 향하도록 멸균 용기에 가방을 넣으십시오.<ol>
<li>운송 중 멸균 환경을 확보하기 위해 멸균 드레이프로 컨테이너를 덮으십시오. 참고 : 격리에 사용 된 기계의 사용 설명서에 따르면 지방 흡인물은 ADRC를 분리하기 전에 최대 4 시간 동안 저장할 수 있지만 항상 즉시 처리합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>외과 의사가 선호하는 봉합사 재료로 피부 절개를 닫습니다. 수술 후 부종을 줄이기 위해 복부 주위에 압축 의류, 복부 바인더를 놓습니다.</li>
	<li>5 μg의 아드레날린이 들어있는 20 mL 부피바카인 5 mg / mL를 주입하여 음경 블록을 만드십시오.<ol>
<li>20 mL 주사기를 사용하고 1 1/4 인치 길이의 23G 바늘로 바릅니다.</li>
		<li>5 mL의 부피바카인을 서브 큐티스의 각 사분면에 바르십시오.</li>
		<li>bupivacaine을 두 부위에 주사하고, 하나는 심실로 다른 부위를 dorsally로 놓습니다. 바늘을 옆으로 오른쪽으로 향하게하는 피하 조직에 바늘 전체 길이를 도입하고 바늘이 수축 될 때 마취를 주입하십시오. 바늘을 왼쪽으로 향하게하는 주사를 반복하십시오. 참고 : 환자는 이제 마취 전문의에 의해 전신 마취에서 깨어날 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. ADRC의 격리
참고: ADRC의 분리 프로세스는 장치 다음 사용 설명서에 자세히 설명된 대로 수행됩니다( 자료 표 참조). ADRC를 정제하는 동안 지방 흡인물이 오염 물질에 노출되지 않도록 멸균 조건 하에서 절차를 수행하는 것이 중요합니다. ADRCs의 분리에 걸리는 시간은 지방 흡인물의 부피에 따라 다르지만, 전체 절차는 여기에 설명 된대로 반자동 장치를 사용하여 약 2.5 시간이 소요됩니다.
<ol><li>모든 소모품과 효소를 멸균 일회용 수술 타월로 덮인 테이블 위에 무균 적으로 놓습니다. 참고: 절차 키트에는 한 환자로부터 ADRC를 분리하는 데 필요한 모든 필수 소모품과 효소가 들어 있습니다. 이 외에도 37-39 °C, 젖산 링거의 한 리터 주입 가방 세 개는 소독을 위해 멸균 된 의복, 장갑 및 수건 및 에탄올과 함께 사용할 수 있어야합니다. 모든 소모품과 효소의 많은 숫자와 시스템에 연결되었을 때 젖 분비 링거의 온도를 기록하십시오.<ol>
<li>에탄올로 장치를 닦아내고 제조업체의 지침에 따라 닦으십시오.</li>
		<li>소모품 세트를 장치에 로드하고 젖 분비 링거 봉지를 시스템에 연결합니다.</li>
		<li>지방 흡인물을 추가하기 전에 일련의 반자동 테스트 (시스템 검사 및 누출 테스트)를 수행하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3.1의 단계가 수행되는 동안 지방 흡인물을 50 mL 튜브에 방치하십시오. 이렇게하면 지방이 액상으로부터 분리 될 수 있습니다. 지방 조직의 총량(mL 단위)을 기록하고 로드된 지방의 양이 장치 용량의 범위에 속하는지 확인하기 위해 이것을 사용하십시오.</li>
	<li>장치에서 메시지를 표시할 때 조직을 로드합니다. 기계는 이제 과도한 액체를 배출하고 수유 링거로 씻기 전에로드 된 지방 조직의 양을 측정합니다.<ol>
<li>조직이 세척되고 다시 배수되면 기계가 요청할 때 새 주입 백을 37-39 °C 젖 분비 링거와 연결하십시오.</li>
		<li>5 mL Lactated Ringers에서 콜라게나제 및 프로테아제 블렌드를 함유하는 시판되는 효소를 재구성한다 (효소의 한 바이알은 최대 270 mL의 지방량에 충분하다).</li>
		<li>장치가 지방 조직과 함께 용기에 주입하는 효소의 양 (조직 중량 기준)을 표시하는지 확인하십시오. 일단 주입되면, 교반하에 수행되는 효소 소화는 약 20 분 동안 지속됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>조직 소화 후, 교반기를 멈추고 함량이 두 단계로 분리되었는지 확인하십시오 : 상부 지질 함유, 황색 상 및 ADRC가 포함 된 하부 분홍색 층. 후자의 층이 소모품 세트의 세포 처리 챔버 (즉, 장치 내장 원심분리기로 들어가는)로 배수되도록하고, 지질 층을 뒤에 남겨 두십시오.</li>
	<li>ADRCs를 원심분리의 다중 라운드 동안 세포 처리 챔버에서 농축시킨다. 이제 수유 링거에 재구성 된 10mL의 인트라 바스 (최종 ADRC 현탁액에서 덩어리를 피하는 데 도움이되는 DNase 포함)를 추가하십시오. 효소 반응은 ADRC를 세척 한 후 10 분 동안 지속됩니다. 참고: 이 단계는 완전히 자동이며 프로세스가 완료되면 기계가 알려줍니다.</li>
	<li>ADRCs의 단리가 완료되면, 세포를 5 mL의 링거 락테이트에 재현탁시킨다. 용액을 5 mL 주사기에 넣고 흡인한다.</li>
	<li>ADRCs를 함유하는 5 mL 주사기 상에 3-웨이 스토콕 여성 루어락을 장착하고, ADRCs 4 mL를 또 다른 5 mL 멸균 주사기 내로 흡인시킨다.</li>
	<li>마지막 1 mL를 1 mL 주사기로 옮깁니다. ADRC 특성화, 예를 들어, 세포 수, 세포 생존력, 유세포 분석기 및 ADRC 분화 능력에 의한 표면 마커의 분석을 위해 이 1 mL를 사용한다.</li>
	<li>멸균 드레이프에 포장되기 전에 4 mL의 ADRC가 들어있는 5 mL 주사기 위에 25 G 바늘을 올려 놓으십시오. ADRC를 사용하여 수신자에게 주입하십시오. 이 경우 ADRC의 용액은 평균 8.4-32.7 백만 개의 세포를 포함합니다.</li>
</ol>4. ADRC를 코포라 캐버노섬에 이식
참고: 이것은 멸균 절차입니다. 모든 장비는 멸균되어야하며, 줄기 세포가 들어있는 용액을 코포라 캐버노섬에 주입하는 사람은 멸균 장갑을 착용해야합니다. 환자는이 절차 중에 깨어 있으며 자신의 줄기 세포를 받게됩니다. ADRCs는 주사 전에 세포를 세지 않고 주입된다.
<ol><li>ADRCs의 용액이 코포라 캐버노섬에 주입될 때까지 주사기를 부드럽게 기울여 균질하게 유지하십시오.</li>
	<li>조리개 드레이프를 음경 위에 놓습니다. 실리콘 용기 루프를 사용하여 음경의 뿌리에 지혈대를 놓습니다. 루프를 조이고 구부러진 완두콩 포셉으로 고정하십시오. 지혈대를 음경에서 혈류를 막을 수있을만큼 단단히 만드십시오.</li>
	<li>두 개의 방부제 스왑을 사용하여 주사 부위 (코포라 캐버노섬의 측면 부위)에서 음경 피부를 소독하십시오. ADRCs를 함유 한 용액 1 mL를 두 개의 다른 장소에서 오른쪽의 코포라 cavernosum에 직접 각도로 주입하고 나중에 왼쪽 코포라 캐버노섬에서이 단계를 반복하십시오. 주입된 ADRCs의 총 부피는 4 mL이다.</li>
	<li>30 분 동안 기다린 다음 지혈대를 제거하십시오.</li>
	<li>ADRCs의 주사 후 관찰 2시간 후에 환자를 배출하여, 마취 후 환자가 잘 회복되도록 한다.</li>
</ol>5. 수술 후 관리
<ol><li>혈종의 발달을 막기 위해 첫 주 이내에 혈압을 올릴 수있는 신체 수행을하지 말 것을 환자에게 권고합니다.</li>
	<li>환자에게 수술 후 처음 14 일 동안 24 시간 동안 복부 바인더를 착용하고 낮에는 14 일 동안 착용하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>경구 아세트 아미노펜 (예 : 파라세타몰; 1,000mg, 하루 4 회) 및 경구 항염증제 (예 : 이부프로펜; 400mg을 하루 3 회)로 수술 후 통증을 치료하십시오.</li>
</ol>

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</ol>

저자 Søren P. Sheikh는 덴마크 코펜하겐의 Blue Cell Therapeutics의 CEO입니다.

ADRCs를 단리하기 위한 제시된 절차는 ED 요법에만 사용되는 것으로 제한되지 않고, 다수의 다른 형태의 치료 및 실험에 사용될 수 있다. 우리의 시험은 자가 및 갓 분리 된 ADRC가 사용하기에 안전하며 12 개월의 후속 조치로 치료가 잘 견딜 수 있음을 보여주었습니다.
절차를 사용하기 전에 몇 가지 고려 사항이 있습니다. 이 절차의 단점은 환자가 지방 흡입 중에 전신 마취를 받아야한다는 것입니다. 지방 흡입은 국소 마취하에 수행 할 수 있지만, 이전 시험에서는 국소 마취제와 아드레날린의 조합이 섬유 아세포20의 세포 성장에 부정적인 영향을 미칠 수 있음을 보여주었습니다. 전신 마취를받을 위험은 일반적으로 낮지 만 부정적인 결과는 여전히 나타납니다. 이 위험은 환자가 치료를 위해 선택 될 때 명심해야합니다. 지방 흡입은 외과 적 절차이므로 항상 합병증의 위험이 있습니다. 다른 모든 수술 절차와 마찬가지로 수술 후 출혈로 인해 혈종이 형성되고 감염의 위험이 있습니다. 우리 환자 중 일부는 복부 피부의 일시적인 감도 감소를보고했습니다. 지방 흡입에 대한 즉각적인 합병증은 출혈입니다. 환자는 다량의 조직이 제거 될 때 전신 합병증을 일으킬 위험이 있다고 알려져 있습니다. 이 절차에서 지방 흡입은 상대적으로 작았 기 때문에 위험 요소로 간주되지 않았습니다.
세포 주사에 대한 합병증은 일시적인 발적, 압통 및 혈종으로보고됩니다.
ADRC의 분리에 사용되는 장치는 시스템이 CE 승인을 받았기 때문에 선택되었습니다. 덴마크에서는 ADRC가 인간에게 주사에 사용될 때 당국이 줄기 세포 치료를 약물 시험 시험으로 분류하기 때문에 CE 승인 장비를 사용해야합니다.
이 장치는 고도로 분류 된 실험실을 필요로하지 않고 폐쇄 된 멸균 환경에서 표준화되고 수행되는 것과 같은 장점을 가지고 있습니다. 따라서 오염의 위험이 줄어 듭니다. 이렇게하면 절차가 균일하고 재현 가능하며 최종 제품의 품질이 항상 매번 동일하다는 것을 보장합니다 (그러나 입력 조직의 품질에 따라 다릅니다). 장치에서 격리를 수행하는 것은 쉽고 특별히 교육받은 작업자가 필요하지 않습니다.
장치의 한 가지 한계는 기계로의 최소 투입량이 100g 배수 된 지방 흡인물이라는 것입니다. 우리의 경험에서 세포 처리가 시작되기 전에 (그리고 우리의 경우, OR이 아닌 다른 위치에서) 지방 흡입이 완전히 완료되기 때문에 50 mL 주사기의 대략적인 측정을 사용하여 지방 흡인물의 양은 적어도 125 mL가되어야합니다. 그렇지 않으면 기계가 진행하기에 충분한 재료가 없을 위험이 있습니다. 또한 상한 한계 (최대 입력량은 425mL)를 사용하면 매우 긴 분리 절차가 수행됩니다.
지방조직과 골수 모두에서 나오는 성체줄기세포는 배아줄기세포처럼 자기재생과 분화능력을 가지고 있는 것으로 보인다. 혈전성 줄기 세포에 비해 ADRCs의 장점 중 하나는 골수 21,22에 비해 조직 부피 당 100-500 배 높은 수율이며, 따라서 ADRCs는 배양 될 필요가 없다. 더욱이, 혈전성 줄기 세포는 지방 조직보다 환자로부터 수확하기가 더 어렵고 더 고통 스럽다. 많은 상황에서 지방 조직은 수술 후 폐기물 일뿐입니다. 혈관신생에 적합한 더 높은 수율을 제공하기 위해 줄기 세포를 배양하는 것이 가능하지만, 새로 분리된 ADRC는 배양23보다 더 높은 혈관신생 잠재력을 가질 수 있다.

줄기 세포는 다른 세포 유형으로 분화 할 수있는 능력을 가지고 있으며, 손상된 조직에서 치유 과정을 촉진시키는 것으로 생각되는 파라크린 인자를 분비합니다 1,2,3,4. 따라서 그들은 가능한 치료 적 치료를 나타낼 수 있기 때문에 재생 의학 분야에서 매력적입니다.
급진적 인 전립선 절제술 (RP)은 저위험 / 중급 위험 국소 전립선 암 환자를위한 황금 치료 치료법이며 10 년 이>의 평균 수명입니다. 수술의 목적은 암을 근절하는 것이지만 몇 가지 부작용이 있습니다. 전립선 절제술 후 요실금의 유병률은 2-60 %이며 발기 부전 (ED)은 환자의 20-90 %가 경험합니다5. 신경 절약 기술은 일부 환자에서 옵션입니다 (글리슨 점수 < 7, 피막 외 질환의 위험 낮음)5. 이 기술은 발기를 담당하는 신경을 절약하지만, 이것이 가능하더라도 많은 환자들이 여전히 수술 후 ED를보고합니다.
RP 후 음경 재활을위한 치료 옵션은 주로 PDE-5 억제제 치료, 주사 또는 점안 요법 및 진공 펌프로 구성됩니다. 음경 재활에 사용되는 약제는 약리학적으로 다르지만 작용 메커니즘에는 코퍼스 해면체의 평활근 세포 이완이 포함됩니다. 그러나 많은 환자들이 치료 실패를 경험하고 성교를 가능하게하는 약의 효과를 결코 얻지못합니다 6.
RP 이후에 발생하는 ED는 구조적으로 돌이킬 수 없는 변화로 인한 것으로 생각된다7. 이러한 변화는 해면성 조직에서 발생하며 평활근 및 내피 세포 및 섬유증의 아폽토시스를 포함한다. 발기의 중심 부분을 담당하는 정맥 폐쇄 메커니즘은 변화에 의해 손상되어 음경의 충전과 경도가 떨어집니다7.
많은 환자들은 그들이 경험하는 ED가 삶의 질에 부정적인 영향을 미친다고보고합니다8. 그들은 수술 후 성행위를 포기할 준비가되어 있지 않으므로 음경 재활을위한 다른 치료법이 실패 할 때 ED에 대한 치료 요법이 매력적입니다.
 동물과 인간에 대한 소규모 1상 임상시험을 포함한 이전 임상시험에서 줄기세포는 ED 2,9,10,11,12에 대한 대체 치료제로서 유망한 결과를 보여주었습니다. 결과는 ADRCs를 사용하는 것이 안전하다는 것을 보여주고, 코포라 cavernosum 2,9,10,11,12에 단 한 번 주사 한 후에 발기 기능이 상당히 향상된다는 것을 보여줍니다. 지방 유래 재생 세포 (ADRCs)는 다중 호르몬, 신경영양- 및 기타 성장 인자, 사이토카인 및 가능하게는, 마이크로RNAs13의 해방을 통해 파라크린 기작에 의한 조직 재생을 지원하는 것으로 생각된다. 또한, ADRCs는 내피 및 혈관 근육 세포, 연골 세포, 골세포 및 뉴런14,15를 포함한 여러 성숙한 세포 유형으로 분화 할 수 있습니다. 이러한 특성은 줄기 세포를 ED에 대한 영구적 인 새로운 치료법을 개발하는 데 흥미롭게 만듭니다.
줄기 세포는 여러 그룹으로 나뉘며, 기본적으로 초기 배아 (배아 줄기 세포)와 성체 조직 (성체 줄기 세포)에서 유래 한 그룹입니다. 성체 줄기 세포는 다능하고 골수, 지방 조직, 제대혈, 태반 및 치과 펄프17에서 발견될 수 있는 중간엽 줄기 세포 (MSC)를 포함한다.
지방조직의 줄기세포는 골수에서 유래한 줄기세포와 달리 접근하기 쉽다. 골수에서 줄기 세포를 수확하는 것은 지방 흡입술에 비해 위험하고 고통스러운 절차입니다. 골수에서 수확 할 수있는 세포의 수는 제한 될 것이며, 지방 조직의 환자 저장소만이 수확 할 수있는 세포의 수에 대한 제한을 설정합니다. 따라서, 후속적인 세포 배양 없이도 지방 조직으로부터 다량의 줄기 세포를 분리하여 만족스러운 양을 얻을 수 있다. 지방유래 재생세포는 종종 기질혈관분획(SFV)이라고도 하며, 중간엽 줄기세포, 내피세포, 혈관주위세포, 면역세포 및 전구세포를 포함하는 많은 세포 유형으로 구성된다(18). 이들은 모두 재생 과정에서 중요한 역할을 할 수 있습니다.
본 연구의 목적은 코포라 캐버노섬에 주사한 후 갓 수확한 지방조직으로부터 분리된 4 mL의 자가 ADRCs를 사용하여 RP 후 ED에 대한 줄기 세포의 효과를 조사하는 것이다.

<table><tbody><tr><td>Liposuction</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Abdominal Binder</td><td>Dale</td><td></td><td>환자 전용</td></tr><tr><td>Adhessive OP-towel</td><td>M&ouml; lnlycke 건강 관리</td><td>906677</td><td>90x75 cm</td></tr><tr><td>아드레날린 1 mg/ml</td><td>Amgros I/s</td><td>74 44 23</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>기본 OP 용품</td><td>M&ouml; lnlycke 건강 관리</td><td>97010873-07</td><td></td></tr><tr><td>탄소강 블레이드 11</td><td>Swann-Morton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorhixidine Ethanol</td><td>Faarborg Pharma</td><td>5 % 컬러</td><td></td></tr><tr><td>일회용 세트 Lipocollector 3</td><td>Human Med</td><td>670200</td><td></td></tr><tr><td>확장 호스</td><td>Extrudan</td><td></td><td>5.8 / 8.3 mm, Ch 25, 3,5 M 길이</td></tr><tr><td>시선 넝마</td><td>배리어</td><td>175201</td><td>30x45cm</td></tr><tr><td>Jelonet</td><td>Smith and Nephew Medical Ltd</td><td>90509225</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram</td><td>Astra Zeneca</td><td></td><td>20 mL</td></tr><tr><td>Mesorb Bandage</td><td>M&ouml; lnlycke 헬스케어</td><td>677001</td><td>10x13 cm</td></tr><tr><td>Microlance</td><td>Becton Dickinson 304622</td><td></td><td>18 G + 23 G</td></tr><tr><td>Monocryl 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td></td><td>04:00</td></tr><tr><td>Ringer-lactat</td><td>Fresinus Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 장갑</td><td>Gammex</td><td>330052065</td><td></td></tr><tr><td>수술 가운</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>690103-01</td><td></td></tr><tr><td>수술 마커</td><td>Richard-Allan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술 마스크</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>주사기</td><td>Codan Medical</td><td>6,28,402</td><td>50/60 ml 카테터 팁</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Becton Dickinson</td><td>700016181</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>WAL- 캐뉼라 용 어플리케이터 25/30 cm</td><td>Human Med</td><td>REF 500001</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ADRC's</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>Becton Dickinson</td><td>REF 303172</td><td></td></tr><tr><td>3방향 스톱콕</td><td>One Med</td><td>REF 10554-01</td><td></td></tr><tr><td>접착제 OP-towel</td><td>M&ouml의 격리; lnlycke 건강 관리 AB</td><td>REF 906677</td><td>90x75 cm</td></tr><tr><td>Cytori Celution 800IV 장치</td><td>Cytori</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Desinfection 스왑</td><td>Mediq Danmark</td><td>3340010</td><td></td></tr><tr><td>Microlance</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td>25G (0,5*25 mm)</td></tr> <tr><td>니트릴 장갑</td><td>Abena</td><td></td><td>파우더 무료</td></tr><tr><td>또는 드레이프 시트, 2 레이어</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>REF 33005</td><td></td></tr><tr><td>Ringers Lactate</td><td>Fresinus Kabi</td><td>06756 (DK)</td><td></td></tr><tr><td>멸균 장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 가운</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytori Celution 800IV devise</td><td>Cytori</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termometer</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td>추적 가능한</td></tr> <tr><td></td><td></td><td></td><td>추가 키트</td></tr><tr><td>< ADRC의 > < / 강력 ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>조리개 드레이프</td><td>주입 One Med</td><td>REF1565-01</td><td>75 * 90 cm</td></tr><tr><td>소독 스왑</td><td>Mediq Danmark</td><td>3340010</td><td></td></tr><tr><td>Pean</td><td>Leibinger</td><td>32-01257</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 용기 루프</td><td>보라색 외과</td><td>REF PS3203</td><td></td></tr><tr><td>멸균 장갑</td><td>Sempermed</td><td></td><td>또는 좋아하는 것을 사용하십시오.</td></tr></tbody></table>

급진적 인 전립선 절제술에 따른 발기 부전의 치료를위한 지방 유래 재생 세포의 분리

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

줄기 세포는 부분적으로 재생 의학 내의 많은 연구 분야에서 사용되는데, 그 이유는 이러한 치료법이 증상보다는 치유적 일 수 있기 때문입니다. 줄기 세포는 상이한 조직으로부터 수득될 수 있고 단리를 위한 몇몇 방법들이 기술되었다. 지방 유래 재생 세포 (ADRCs)의 단리를 위한 제시된 방법은 그 방법이 일반적인 절차이고, 따라서 발기 부전 (ED) 요법에 한정되지 않기 때문에 많은 치료 영역 내에서 사용될 수 있다. ED는 ED가 종종 전통적인 치료법으로 잘 치료되지 않기 때문에 급진적 인 전립선 절제술 (RP)에 대한 일반적이고 심각한 부작용입니다. ED에 대한 치료로서 ADRC를 사용하는 것은 코포라 캐버노섬에 세포를 단일 주사 한 후 초기 양성 결과로 인해 큰 관심을 끌었다. ADRC의 분리에 사용되는 방법은 재현 가능하고 균일 한 제품을 보장하는 간단하고 자동화 된 프로세스입니다. 또한, 격리 된 제품의 멸균성은 전체 프로세스가 폐쇄 된 시스템에서 발생하기 때문에 보장됩니다. 줄기 세포가 인간에게 주사에 사용되기 때문에 오염 및 감염의 위험을 최소화하는 것이 중요합니다. 전체 절차는 2.5-3.5 시간 이내에 수행 할 수 있으며 조직을 오프 사이트로 운송 할 필요가없는 분류 된 실험실이 필요하지 않습니다. 그러나, 이 절차는 기능하는 격리 장치에 대한 배출된 지방흡인물의 최소량이 100 g이기 때문에 몇 가지 한계가 있다.

제시된 절차는 21 명의 환자19를 포함하는 오픈 라벨 1 상 임상 시험에 사용되었습니다. 임상시험의 주요 종점은 인간에서 ADRC의 사용의 안전성이었고, 이차 종말점은 ADRC가 발기 기능에 미치는 영향이었다.
스물 한 명의 남성이 전립선 암으로 인해 RP 전에 평균 연령 60 세 (범위 46-69)와 정상적인 발기 및 활동적인 성생활로 임상시험에 포함되었습니다. 그들은 모두 RP 이후 ED로 고통 받았으며 음경 재활에 사용할 수있는 약에서 회복의 흔적이 없었습니다. 여섯 명의 남성이 RP의 부작용으로 요실금으로 고통 받았다. 모든 남성은 제시된 방법으로 분리 된 ADRC의 단일 동굴 내 주사를 받았다.
모든 21 명의 남성은 주사 후 1,3,6 개월과 12 개월 후에 외래 진료소에서 4 번 방문했습니다. 성적 기능은 검증 된 설문지 - 발기 기능 -5 (IIEF-5)의 국제 지수 및 발기 경도 점수 (EHS) (부록으로 첨부)로 평가되었습니다.
관찰 기간 동안 심각한 사건은 발생하지 않았습니다. 여덟 명의 남성이 주사 부위에서 일시적인 발적과 붓기를보고했으며, 세 명은 음경 부위에서 반응을보고했습니다. 지방 흡입술과 관련된 여덟 가지 가역적 경미한 사건이 가벼운 복부 불편 함 및 경미한 복부 혈종과 같은보고되었습니다. 1 개월 추적 관찰에서 불편 함을보고한 환자는 없습니다. 대륙 그룹의 열다섯 명 중 여덟 명 (53 %)은 발기 기능이 12 개월에 성교하기에 충분하다고 보고했다. 6 명의 대륙 남성의 그룹은 발기 기능의 개선을 보이지 않았습니다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>대륙</td>
			<td>대륙 내</td>
		</tr>
<tr>
<td>포함된 환자</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>중요한 효과</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 이 표는 대륙과 대륙 환자 간의 치료의 유의한 효과의 차이를 보여준다.

방법과 프로토콜의 정확한 공개는 줄기 세포 요법의 대규모 흡수에 중요합니다. 여기에서, 우리는 라디칼 전립선 절제술 (RP)에 이어 발기 부전 (ED)의 치료로서 단일 동굴 내 주사에 사용되는 지방 유래 재생 세포를 분리하는 프로토콜을 제시한다.

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

이 분리 기술은 지방 줄기 세포가 급진적 인 전립선 절제술 후 환자가 발기 기능을 재생하는 데 도움이 될 수 있는지 여부를 탐구하는 데 사용될 수 있습니다. 이 방법은 특정 질병에 대해 제한되지 않는다. 그것은 지방 줄기 세포 연구의 모든 영역에서 사용될 수 있습니다.분리 된 줄기 세포는 발기 부전 치료에 사용되지만 분리 기술은 일반적인 절차이며 줄기 세포는 줄기 세포 연구 내의 다른 분야에서 유용 할 수 있습니다. 복부와 음낭의 피부를 0.5 % 클로르헥시딘으로 소독하여 시작하십시오. 외과 마커를 사용하여 지방 흡입이 수행 될 복부의 영역, 일반적으로 합성과 탯줄 사이의 영역을 작성하십시오.숫자 11 메스로 복부의 피부에 두 개의 여섯 밀리미터 너비의 절개를 만드십시오. 절개를 지방 흡입술의 위쪽으로 그려진 영역에서 대칭 및 측면으로 놓습니다. 절개에 약간의 윤활유를 올려 지방 흡입 중에 침윤 캐뉼라가 절개 안팎으로 쉽게 미끄러 지도록하십시오.그런 다음 피부의 절개를 통해 크기 14 게이지 침윤 캐뉼라를 도입하십시오. 변형된 Klein 용액을 표적 조직이 부어 오르고 단단해지거나 종양이 될 때까지 피부 표면과 평행한 표시된 부위에 피하 주사하십시오. 지방 조직에 일대일 비율로 변형된 Klein 용액의 부피를 주입한다.아드레날린의 효과를 극대화하고 수확 된 지방 조직에서 혈액의 양을 줄이기 위해 10 분 동안 기다리십시오. 표준 제트 주입 지방 흡입을 수행하여 200 ~ 300 밀리미터의 지방 조직을 수확하십시오. 통합 주입 튜브와 노즐이있는 중공 인 무딘 캐뉼라를 사용하십시오.캐뉼라를 지방 흡입을위한 흡입 장치에 부착하십시오. 복부의 절개를 통해 무딘 팁이있는 세 밀리미터 주사기를 도입하고 리포 컬렉터에서 지방 조직을 수집하여 멸균 된 환경에서 지방 흡인물을 보존하십시오. 지방 흡인물은 물 단계에서 분리되기 시작할 것입니다.50 밀리리터 멸균 주사기를 사용하여 LipoCollector에서 지방 흡인물을 빨아 들여 주사기에서 빨아들이는 물의 양을 최소화하십시오. 주사기 끝에 플러그를 조여 지방 조직을 멸균 상태로 유지하십시오. 팁이 있는 주사기를 멸균 비닐 봉지에 아래쪽으로 두어 수분 단계에서 지방 흡인물을 분리하기 시작합니다.그런 다음 가방을 멸균 용기에 넣으십시오. 운송 중 멸균 환경을 확보하기 위해 멸균 드레이프로 컨테이너를 덮으십시오. 외과 의사가 선호하는 봉합사로 피부 절개를 닫으십시오.수술 후 부종을 줄이기 위해 복부 주위에 압축 의복을 두십시오. 음경 블록을 만들려면 bupivacaine을 두 부위에 주사하십시오.이 부위는 심실로, 다른 하나는 등쪽에 놓습니다. 전체 바늘을 피하 조직에 넣고 오른쪽으로 옆으로 향하게하고 바늘이 수축 될 때 마취를 주입하십시오.주사를 반복하고 바늘을 왼쪽으로 향하게하십시오. 모든 소모품과 효소를 멸균 일회용 수술 타월로 덮인 테이블 위에 무균 적으로 놓습니다. 에탄올로 장치를 닦아내고 소모품 세트를로드하십시오.그런 다음 수유중인 링거 봉지를 시스템에 연결하십시오. 지방 흡인물을 추가하기 전에 일련의 반자동 테스트를 수행하십시오. 장치가 준비되는 동안 지방 흡인물을 50 밀리리터 튜브에 넣어 지방이 액상에서 분리 될 수 있도록하십시오.지방 조직의 총량을 기록하고 이것을 사용하여로드 된 지방의 총량이 장치 용량의 범위에 있는지 확인하십시오. 장치에서 메시지를 표시할 때 조직을 로드합니다. 기계는 과도한 유체를 배출합니다.지방 조직의 양을 계량하고 수유중인 링거로 씻으십시오. 조직을 씻고 배수하면 새로운 주입 백을 섭씨 37 ~ 39 도의 젖 분비 링거와 연결하십시오. 콜라게나제 및 프로테아제 블렌드를 다섯 밀리리터의 젖산 고리에 함유하는 시판되는 효소를 재구성한다.장치가 지방 조직과 함께 용기에 주입 할 효소의 양을 표시하는지 확인하십시오. 일단 주입되면 효소 소화는 약 20 분 동안 지속됩니다. 조직 소화 후, 함량이 황색 상을 함유하는 상부 지질과 지방 유래 재생 세포 또는 ADRCs를 포함하는 하부 분홍색 층으로 분리되는지 확인한다.분홍색 층이 소모품 세트의 세포 처리 챔버로 배수되도록하여 지질 층을 남겨 둡니다. ADRCs가 원심분리의 다중 라운드 동안 세포 처리 챔버에서 농축되도록 허용한다. 그런 다음 수유중인 링거에 재구성 된 10 밀리리터의 인트라베이스를 추가하십시오.효소 반응은 10 분 동안 지속되며 ADRC는 나중에 세척됩니다. ADRCs의 분리가 완료되면, 링거 젖산의 다섯 밀리리터에 세포를 재현탁하고 용액을 다섯 밀리리터 주사기로 흡인하십시오. 주사기에 세 방향 스톱콕 여성 루어 잠금 장치를 장착하고 네 밀리리터의 ADRC를 다른 다섯 밀리리터 멸균 주사기로 흡인합니다.ADRC의 마지막 한 밀리리터를 하나의 밀리리터 주사기로 옮깁니다. 이 분취량을 세포 수, 세포 생존력, 유세포 분석기에 의한 표면 마커 분석 및 ADRC 분화 능력과 같은 ADRC 특성화 분석에 사용하십시오. 네 밀리리터의 ADRC가 들어있는 5 밀리리터 주사기에 25 게이지 바늘을 놓습니다.그런 다음 멸균 커튼에 포장하십시오. ADRCs의이 용액은 수용자에게 주입 될 것이며 평균적으로 8.4 ~ 32.7 백만 개의 세포를 포함해야합니다. ADRC의 용액이 코포라 캐버노섬에 주입 될 때까지 주사기를 부드럽게 기울여 균질하게 유지되는지 확인하십시오.조리개 드레이프를 음경 위에 놓습니다. 및 실리콘 용기 루프가있는 음경의 뿌리에 지혈대를 포함한다. 루프를 조이고 포셉으로 고정시켜 지혈대를 음경에서 혈류를 막을 수있을만큼 단단히 고정시킵니다.두 개의 소독 면봉을 사용하여 주사 부위의 음경 피부를 소독하십시오. 그런 다음 ADRC 용액 한 밀리리터를 두 개의 다른 장소의 오른쪽에있는 코포라 캐버노섬에 직접 각도로 주입하십시오. 왼쪽 코포라 캐버노섬에서이 단계를 반복하여 총 네 밀리리터의 부피를 주입하십시오.이 방법은 급진적 인 전립선 절제술 전에 평균 연령이 60 세이고 정상적인 발기 및 활동적인 성생활을 가진 21 명의 남성에 대한 공개 라벨 단계 1 임상 시험에서 테스트되었습니다. 여섯 명의 남자들도 요실금으로 고통 받았다. 모든 남성은 격리 된 ADRCs의 단일 동굴 간 주사를 받았으며 주사 후 1, 3, 6 및 12 개월에 외래 진료소에서 4 회 방문했습니다.관찰 기간 동안 심각한 사건은 발생하지 않았습니다. 여덟 명의 남성이 주사 부위에서 일시적인 발적과 붓기를보고했으며 세 명은 음경 부위에서 반응을보고했습니다. 여덟 명의 남성은 가벼운 복부 불편 함과 경미한 복부 혈종과 같은 지방 흡입과 관련된 가역적 인 사소한 사건을 경험했습니다.한 달 동안의 후속 조치에서 불편 함을보고한 환자는 없습니다. 그들의 성적 기능은 발기 기능 다섯 국제 지수와 발기 경도 점수로 평가되었습니다. 대륙 그룹의 15 명 중 여덟 명은 발기 기능이 12 개월에 성교하기에 충분하다고보고했습니다.여섯 명의 대륙 남성의 그룹은이 프로토콜을 시도 할 때 발기 기능의 개선을 보이지 않았으며, 격리 과정에서 사용되는 효소는 절차가 시작되기 두 시간 전에 냉동실이나 냉장고에서 꺼내야한다는 것을 명심하십시오. 이 기술의 결과는 지방 줄기 세포의 효과가 더 큰 규모로 탐구되는 RCT의 길을 열었습니다.

isolation-adipose-derived-regenerative-cells-for-treatment-erectile

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 쥐 대동맥 주위 지방 조직에서 형광 표지된 신경능선 유래 지방 유래 줄기세포(ADSC)를 분리 및 배양하는 기술을 보여줍니다. 분리 후 NCADSC를 검출하고 형광 활성화 세포 분류를 사용하여 분류한 후 플레이트에서 배양하여 세포 증식을 촉진합니다.

쥐 대동맥 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 분리

2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.

인간 Lipoaspirates에서 지방 유래 줄기 세포를 수동으로 분리

인간 지방 유래 기질 세포 내의 전사 이질성은 세포 표면 마커와 골 형성 유전자를 사용하여 단일 세포 수준에서 정의할 수 있습니다.  우리는 골형성 잠재력이 증가된 세포 하위 집단의 분리를 위해 유세포 분석을 활용하는 프로토콜에 대해 설명하며, 이는 두개안면 골격 재건을 향상시키는 데 사용될 수 있습니다.

분리 및 인간의 농축 향상된 골 연장술에 대한 기질 세포를 지방이 유래

준비와 쥐 모델에서 부족 하 게 봉합 대 장 anastomoses에 지방 조직 유래 줄기 세포 (ASC) 시트의 이식 제공 됩니다. 이 새로운 응용 프로그램은 ASC 시트 대 장 문 합 누출을 줄일 수 있습니다 보여줍니다.

쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

이 프로토콜은 형광 활성화 세포 분류 또는 면역자기 비드 분리를 통해 쥐 복강 내 백색 지방 조직(WAT) 저장소에서 지방 형성 및 섬유 염증성 기질 세포 하위 집단을 분리하는 기술적 접근 방식을 설명합니다.

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

본 프로토콜은 ADSC 단리를 위한 개선된 방법론을 기술하여 문헌에 비해 시간 이득과 함께 엄청난 세포 수율을 초래한다. 이 연구는 또한 장기 동결보존 후 비교적 많은 수의 생존 가능한 세포를 얻기 위한 간단한 방법을 제공합니다.

지방 조직에서 중간엽 줄기세포를 얻는 기술 및 장기 냉동 보존에서 기질 혈관 분획 특성 분석

우리는 세포 생존력, 증식 및 탄력성 측정 측면에서 배달 후 조사의 후유증과 결합 된 바늘이없는 워터젯 기술을 통한 세포 주입 방법을 제시합니다.

워터젯 기술을 통한 돼지 지방 조직 유래 스트로마 세포 주입

세포 치료제 준비/조작 단계에 도입된 이종(화학적 또는 동물 유래) 제품은 숙주 환자에서 면역 반응성 및 병원성 전파의 위험 증가와 관련이 있습니다. 여기서, 인간 지방유래 줄기세포의 분리 및 시험관내 확장을 위한 완전한 이종발생학적 무함유 방법이 기재되어 있다.

인간 지방 유래 줄기 세포의 분리 및 배양 (Isolation and culture of human adipose-derived stem cells with an innovative Xenogeneic-free method for human therapy)

이 프로토콜은 Sprague Dawley 쥐에서 지방 조직 유래 중간엽 줄기 세포(MSC)를 분리하고 식별하는 방법론을 설명합니다.

Sprague Dawley 쥐의 지방 조직에서 유래한 중간엽 줄기 세포의 분리 및 식별

여기서는 처리 시간이 &gt;90% 감소하고, 세포 생존율이 높으며, 광범위한 호환성을 특징으로 지방유래 줄기세포와 지방세포를 효율적으로 분리하는 표준 방법을 제시합니다.

돼지 지방 조직에서 지방 유래 줄기세포와 지방세포의 효율적인 분리

배우세요 지방 유래 재생 세포(ADRC) 분리 방법을 급진적 전립선 절제술 후 발기 부전 치료에 적용하는 기술입니다. 이 프로토콜은 지방 흡입, 효소 소화, 원심 분리를 포함하며 재생 의학 연구에 활용됩니다.

급진적 인 전립선 절제술에 따른 발기 부전의 치료를위한 지방 유래 재생 세포의 분리

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