Name: 인간의 DNA 시퀀스에 바인딩 전사 요소를 식별 하기 위해 향상 된 효 모 한 하이브리드 화면 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: 배우세요 향상된 효모 원하이브리드 스크리닝을 통해 특정 DNA 서열에 결합하는 전사인자를 식별하는 방법입니다. 이 기술은 한 번의 실험에서 1,000개 이상의 전사인자를 고처리량으로 분석할 수 있습니다.

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이 작품은 건강의 국가 학회 [R35-GM128625 J.I.F.B.]에 의해 지원 되었다.

1입니다. 준비
<ol><li>
Sc −U −H 플레이트 (150 mm 페 트리 접시) 참고: 이 접시는 성장 DNA 미끼 효 모 종자에 대 한 사용 됩니다.<ol>
<li>드롭 아웃 믹스, 효 모 질소 기지 (YNB), 아데닌 hemisulfate와 물, 그리고 pH 5 M NaOH (약 미디어의 리터 당 1 mL, 구성에 대 한 표 2 참조)와 5.9의 920 mL에 황산 암모늄을 디졸브. 2 L 플라스 크에 부 어와 볶음 바 추가.</li>
		<li>두 번째 2 L 플라스 크에 950 mL의 물에는 agar 추가 (추가 하지 않으면 저 어 바는 압력솥에 끓여 한 천 발생할 것입니다).</li>
		<li>고압 액체 사이클에 15 psi에서 40 분.</li>
		<li>즉시 플라스 크를 포함 한 천으로 저 어 바를 포함 하 여 첫 번째 플라스 크의 내용을 붓는 다. 포도 당, 추가 잘 저 어 접시에 섞어 고 물 욕조에 55 ° C에 냉각.</li>
		<li>언론에는 신 고는 트립토판을 추가 합니다. 잘 저 어 접시에 혼합 하 고 150 m m 멸 균 페 트리 접시 (접시 당 ~ 80 mL)에 부 어. 실 온에서 3-5 일 동안 건조, 비닐 봉투에서 포장 하 고 최대 6 개월 동안 상 온에서 저장.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
YAPD 직사각형 플레이트 참고: 이 접시는 DNA 미끼 스트레인 및 TF 배열 컬렉션 짝짓기 잔디 성장에 대 한 사용 됩니다.<ol>
<li>분말 (구성 표 3 참조), 한 천, 제외 2 L 플라스 크에 물 950 mL에 녹이 고 저 어 바 추가.</li>
		<li>두 번째 2 L 플라스 크에 950 mL의 물에는 agar 추가 (추가 하지 않으면 저 어 바는 압력솥에 끓여 한 천 발생할 것입니다).</li>
		<li>고압 액체 사이클에 15 psi에서 40 분.</li>
		<li>즉시 플라스 크를 포함 한 천으로 저 어 바를 포함 하 여 첫 번째 플라스 크의 내용을 붓는 다.</li>
		<li>포도 당, 추가 믹스 잘 저 어 접시와 멋진 55 ° c 직사각형 접시에 미디어를 붓고 ( 재료의 표를참조; 접시 당 ~ 70 mL) 연동 펌프 (5 mL/sec)와 6 mm 튜브를 사용 하 여. 실 온에서 1 일 건조 비닐 봉지에 포장 하 고 최대 6 개월까지 콜드 룸에 있는 저장. 참고: 비록 제안 된 미디어 볼륨은 접시 당 70 mL, 접시 당 50-80 mL 사용할 수 있습니다. 고려 때 붓는 접시 1에 3 개의 중요 한 문제) 그들은 한 미디어는 접시에 걸쳐 동일한 두께 파괴는 (격판덮개 쏟아져 대 한 수준별된 테이블 또는 표면 사용 하 고 이상 7 접시의 부 어 하지 않습니다) 2)는 agar에 거품의 부재를 보장 하기 위해 미디어 (거품 해야 될 팝 무 균 바늘을 사용 하 여), 및 3)만 하루 동안 접시를 건조 하 고 번호판을 고정 하는 효 모에 실패를 피하기 위해 비닐 봉지에 포장.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sc −Trp 및 Sc −U −Trp 직사각형 플레이트 참고: 이 접시는 TF 배열 컬렉션 (Sc −Trp) 성장 (Sc −U −Trp) 짝짓기 후 2 중 누 룩을 선택 하 고 사용 됩니다.<ol>
<li>드롭 아웃 믹스, YNB, 아데닌 hemisulfate, 그리고 물, 그리고 5.9 NaOH 5 M (미디어의 리터 당 약 1 mL)와 pH의 920 mL에 황산 암모늄 분해 (구성 표 4 참조). 2 L 플라스 크에 부 어와 볶음 바 추가.</li>
		<li>두 번째 2 L 플라스 크에 950 mL의 물에는 agar 추가 (추가 하지 않으면 저 어 바는 압력솥에 끓여 한 천 발생할 것입니다).</li>
		<li>고압 액체 사이클에 15 psi에서 40 분.</li>
		<li>즉시 플라스 크를 포함 한 천으로 저 어 바를 포함 하 여 첫 번째 플라스 크의 내용을 붓는 다. 포도 당, 추가 잘 저 어 접시에, 혼합 하 고 55 ° c에 냉각</li>
		<li>추가 신, 히스티딘, uracil (Sc −U −Trp 격판덮개 uracil 생략).</li>
		<li>잘 저 어 접시에 혼합 및 직사각형 플레이트 (접시 당 ~ 70 mL)에 부 어 연동 펌프 (5 mL/sec)와 6 m m 튜브를 사용 하 여. 건조 한 실내 온도에 1 일, 비닐 봉투, 접시 포장 및 최대 3 개월까지 콜드 룸에 있는 저장.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sc −U −H −Trp + 3AT + X gal 직사각형 플레이트 참고: 이 번호판 eY1H 분석 실험에 대 한 판독 판으로 사용 됩니다.<ol>
<li>드롭 아웃 믹스, YNB, 아데닌 hemisulfate, 및 물의 850 mL에 황산 암모늄 분해 (구성 표 5 참조). 전화 하지 마십시오. 2 L 플라스 크에 부 어와 볶음 바 추가.</li>
		<li>두 번째 2 L 플라스 크에 850 mL의 물에는 agar 추가 (추가 하지 않으면 저 어 바는 압력솥에 끓여 한 천 발생할 것입니다).</li>
		<li>고압 액체 사이클에 15 psi에서 40 분.</li>
		<li>물 900 mL, 나2HPO4∙7H2O, 70 g, NaH2포4∙H2볶음 막대를 사용 하 여 분말을 녹이 고 5 M NaOH를 사용 하 여 7.0에 pH를 조정 하는 오 믹스의 34.5 g 결합 하 여 배 부 소금 (1 리터)를 준비 합니다. 물을 1 리터와 오토 클레이 브를 추가 합니다.</li>
		<li>포함 하는 디 메 틸 formamide의 42.5 mL 50 mL 플라스틱 튜브에 X-여자 분말의 3.5 g를 추가 하 여 gal X 솔루션을 준비 합니다. 더 쉽게 분해 하 디 메 틸 formamide X 여자 분말 추가 (이 분 소요). (사용 불투명 50 ml 튜브 또는 호 일에 커버) 어둠 속에서 재고 솔루션을 유지. -20 ° c.에 게</li>
		<li>즉시 플라스 크를 포함 한 천으로 저 어 바를 포함 하 여 첫 번째 플라스 크의 내용을 붓는 다. 포도 당 추가 10 부 소금 (조성 표 5 참조), 배 잘 저 어 접시에, 혼합 그리고 55 ° c에 냉각</li>
		<li>신, 3AT, 및 X-여자 (구성에 대 한 표 5 를 참조)를 추가 합니다.</li>
		<li>잘 저 어 접시에 혼합 및 직사각형 플레이트 (접시 당 ~ 70 mL)에 부 어 연동 펌프 (5 mL/sec)와 6 mm 튜브를 사용 하 여. 실 온에서 1 일 건조, 비닐 봉투에서 포장 및 알루미늄 호 일에 덮여 추운 방에 저장 (3AT 및 X-여자는 빛에 민감한) 최대 1 개월.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 안보 TF 배열
<ol><li>
TF-먹이 배열 녹고
	<ol>
<li>얼음에 TF 먹이 배열 효 모 글리세롤 주식 접시 녹여 참고: 이전에 게시10,12,,1318TF 먹이 어레이 생성할 수 있습니다.</li>
		<li>다음 단계는 전에 1-3 분 이내 12 채널 피 펫을 사용 하 여 효 모 resuspend</li>
	</ol>
</li>
	<li>
직사각형 플레이트 Sc −Trp에 누 룩을 보 이나
	<ol>
<li>HDA 로봇에서 소스, 대상, 그리고 96 긴 핀 패드 96 한 천 배지 ( 재료의 표참조) 선택 다 잘 96 접시. 참고: 핀 패드는 재사용 하지 않으며 무시 해야 합니다.</li>
		<li>96 잘 접시 당 두 개의 복사본을 만들기 위해 많은 복제 프로그램을 선택 합니다. 사용 하는 재활용 하거나 냉동 주식 다시 오염을 방지 하는 옵션을 다시 마십시오.</li>
		<li>누 룩을 섞어 소스에 아래로 소용돌이를 옵션을 선택 합니다.</li>
		<li>가방 발견된 배열 하 고 2-3 일 동안 30 ° C에서 최대 천-사이드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
사우스 캐롤라이나 −Trp 직사각형 접시에 384 식민지 배열 생성
	<ol>
<li>로봇에서 소스, 대상, 384 천 배지 및 96 짧은 핀 패드 96 한 천 배지를 선택 합니다.</li>
		<li>1:4 배열 프로그램을 선택 합니다. 이 방법에서는, 4 96 식민지 접시 (각 포함 하는 다른 TF) 한 384 식민지 접시로 통합 됩니다. 재활용을 사용 하 여 또는 다른 판 사이의 오염을 방지 하는 옵션을 다시 방문 하지.</li>
		<li>판 가방 하 고 2 일 동안 30 ° C에서 최대 발견된 384-식민지 배열 한 사이드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
사우스 캐롤라이나 −Trp 직사각형 플레이트에서 1,536 식민지 배열 생성 참고: 이 각 TF 먹이 대 한 4 개의 식민지를 포함 하는 배열 발생 합니다.<ol>
<li>로봇에서 소스, 대상,으로 1,536 한 천 배지 및 384 짧은 핀 패드 384 한 천 배지를 선택 합니다.</li>
		<li>1:4 분석 결과 단일 소스 프로그램을 선택 합니다. 목표는 quadruplicates를 4 개의 식민지 각 식민지를 복사 하는 것입니다. 재활용을 사용 하 고 그것은 복사 4 번 각 식민지 수반으로 옵션을 다시.</li>
		<li>판 가방 하 고 3 일 동안 30 ° C에서 최대 발견된 1536-식민지 배열 한 사이드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
사우스 캐롤라이나 −Trp 직사각형 접시에 1,536 식민지 배열 증폭
	<ol>
<li>로봇에서 소스, 대상,으로 1,536 한 천 배지 및 1,536 짧은 핀 패드 1,536 한 천 배지를 선택 합니다.</li>
		<li>3-4 부 복제 복제 많은 프로그램을 선택 합니다. 재활용을 사용 하 여 옵션을 다시 하지만 교차 오염을 피하기 위하여 배열의 다른 접시에 전환할 때 패드에 밖으로 던져.</li>
		<li>판 가방 하 고 짝짓기 단계 (아래 참조) 사용 하 여 3 일 동안 30 ° C에서 최대 발견된 1536-식민지 배열 한 측을 품 어. 그 후, 심사의 새로운 라운드에 대 한 일 후에 다시 사용 실내 온도 복사에서 번호판을 유지.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. eY1H 화면
<ol><li>
DNA-미끼 스트레인 잔디 짝짓기에 대 한 준비
	<ol>
<li>효 모 DNA 미끼 긴장 Sc −U −H 접시에 고 30 ° c.에 3 일 동안 성장</li>
		<li>각 접시 12-16 다른 긴장에 맞도록 15 cm 살 균 이쑤시개를 사용 하 여 Sc −U −H 플레이트에 누 룩을 행진. 1 일 30 ° c.에 품 어</li>
		<li>각 접시에 맞도록 4 가지 변종이 Sc −U −H 플레이트 메 마른이 쑤 시 게를 사용 하 여 15 cm에 누 룩을 행진. 30 ° c.에 1 일 동안 품 어</li>
		<li>효 모 살 균 이쑤시개, 어떤 agar를 긁 고 살 균 물의 500 µ L 1.5 튜브에 추가 하지 않도록 만들기를 사용 하 여 다쳤어요.</li>
		<li>10-15 불 임 유리 구슬 YAPD 사각형 접시에 추가 합니다. 접시에 효 모 현 탁 액을 추가 하 고 누 룩 모든 격판덮개를 통해 서 전염 됩니다 보장 하기 위해 1 분에 대 한 모든 방향에서 철저 하 게 흔들어.</li>
		<li>접시를 즉시 반전 하 고 뚜껑에 비즈가 되도록 누릅니다. 제거 하 고 구슬을 재활용.</li>
		<li>판 가방 및 30 ° c.에 1-2 일 동안 아래로 천 쪽을 품 어 다음 짝짓기 단계를 진행 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
효 모 DNA 미끼 및 TF 배열 긴장의 짝짓기
	<ol>
<li>로봇으로 TF 배열 YAPD 직사각형 접시에 전송. 소스 및 대상 및 1,536 짧은 핀 패드 1,536 한 천 배지를 선택 합니다. 많은 복제 프로그램을 선택 합니다. 각 TF 배열 판 (배열에 있는 접시의 수)에 따라 3-4 YAPD 번호판을 사용할 수 있습니다. 짝짓기에 사용 되는 TF 배열 접시 2-3 일 하지만 짝짓기로 더 효율적일 수 있습니다.</li>
		<li>이미 로봇 TF 배열을 포함 하는 YAPD 번호판 DNA 미끼 스트레인의 잔디를 전송 합니다. 소스 및 대상 및 1,536 짧은 핀 패드 1,536 한 천 배지를 선택 합니다. 많은 복제 프로그램을 선택 합니다. ~0.6 밀리미터의 반경으로 소스에서 임의 오프셋을 사용 하 여 같은 자리에서 효를 복용 하지 않도록 하 고 효 모 종자 사이 접촉을 촉진 하기 위하여 목표에 혼합. DNA 미끼 긴장 (3.1 단원)를 포함 하는 소스로, 잔디를 사용 하 고 TF 배열을 포함 하는 YAPD 접시 단계 대상으로 3.2.1에서에서 발견.</li>
		<li>판 가방 하 고 1 일 30 ° C에서 최대 천-사이드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
선택 2 중 효
	<ol>
<li>로봇으로 YAPD 격판덮개에서 Sc −U −Trp 플레이트 성관계 누 룩을 전송. 소스 및 대상 및 1,536 짧은 핀 패드 1,536 한 천 배지를 선택 합니다. 복제 프로그램을 선택 합니다. 대상 및 소스에 섞는다.</li>
		<li>판 가방 하 고 (더 이상 외피 리드 높은 배경 기자 활동) 2-3 일 동안 30 ° C에서 최대 천-사이드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
판독 판 전송
	<ol>
<li>전송 2 중 효 모 Sc −U −Trp 판에서 판독 직사각형 접시 Sc −U −H −Trp + 5mm 3AT + 0.4 m m X-여자 로봇을 사용 하 여. 소스 및 대상 및 1,536 짧은 핀 패드 1,536 한 천 배지를 선택 합니다. 복제 프로그램을 선택 합니다.</li>
		<li>판 가방 하 고 최대 7 일 동안 30 ° C에서 최대 천-사이드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
판독 판 영상
	<ol>
<li>DNA-미끼 긴장 높은 배경 기자 활동, 2, 3, 4 일에 사진을 걸릴. 그렇지 않으면, 4 및 7 일에서 사진을 찍을. 긍정적인 상호 작용 효 모 식민지의 성장 및 파랑 색으로 식별 하 고 수동으로 결정 될 수 있다, 또는 이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 확인할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Brady, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stele-enriched+gene+regulatory+network+in+the+Arabidopsis+root%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Systems+Biology%22%5BJournal%5D)">A stele-enriched gene regulatory network in the Arabidopsis root.</a> Molecular Systems Biology. 7, 459(2011).</li>
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</ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

로봇 eY1H 짝짓기 심사 방법은 크게 여기에 설명 된 이전 라이브러리 심사에 비해 관심의 기준점과 심사 방식 변화에 따라 DNA 영역에 바인딩되는 TFs의 집합을 식별 하려면 처리량을 증가 시킵니다. 또한, TF DNA 상호 작용 상호 작용의 90%가 감지 당 TF, 모든 4 개의 식민지에 대 한 긍정적인 테스트 및 상호 작용의 90%는 동일한 DNA 미끼 효 모 스트레인10 의 독립적인 화면에서 다시 테스트 분석 실험은 높은 재현 eY1H에 의해 감지 , 12 , 19. 더 중요 한 것은, eY1H에 의해 감지 TF DNA 상호 작용 인간 기자 분석12,20, 기본 인간 세포 (게시 되지 않은 결과), 그리고 선 충 C. 녹아웃 동물 테스트...

생물 의학 분야에서 주요 문제는 각 인간의 유전자는 규제 메커니즘을 결정 하 고. 전사 유전자 식 수준을 제어 하는 첫 번째 단계 이며 고유한 각 유전자 녹음 방송 요인 (TFs)의 세트에 의해 통제 된다. 그 인 간에 대 한 인코딩 > 1500 TFs1,2, 각 유전자의 표현을 제어 하는 TFs의 완전 한 세트를 식별 오픈 도전 남아 있다.
두 가지 유형의 방법 TF DNA 상호 작용 지도를 사용할 수 있습니다: TF를 중심으로 하 고 DNA를 중심으로 방법3 (그림 1A). TF를 중심으로 방법에 관심의 TF genomic DNA 영역 또는 그것의 DNA 의무적인 특이성을 결정 하는 바인딩에 대 한 조사입니다. 이 방법은 높은 처리량 시퀀싱, 단백질 바인딩 microarrays 그리고 SELEX4,,56다음 chromatin immunoprecipitation (칩)를 포함 합니다. DNA 중심 방법에 관심사의 DNA 순서 DNA 시퀀스에 바인딩할 TFs의 세트를 결정 하기 위해 시험 되 다. 이러한 방법 중 가장 널리 적용 되는 효 모 한 하이브리드 (Y1H) 분석 실험, TFs와 DNA 사이 어떤 상호 작용 지역 리포터 유전자7,,89를 사용 하 여 효 모 핵의 환경에서 테스트.
두 가지 구성 요소를 포함 하는 Y1H 분석 실험:는 ' DNA-미끼 ' (예를 들면, 발기인, 증강, 달 았 죠, 등)와 ' TF-먹이,' 취재 원 유전자 활성화9,10 (그림 1B)에 상영 될 수 있는. DNA-미끼를 업스트림 복제 두 기자의 유전자 (LacZ HIS3)와 두 DNA bait::reporter 구조는 chromatinized 'DNA-미끼 긴장'을 생성 하는 효 모 게놈으로 통합 TF-먹이, TF Gal4 TF, 효 모의 활성화 도메인 (AD) 융합을 표현 하는 플라스 미드에 인코딩된 TF DNA 상호 작용에 대 한 물고기 미끼 DNA 스트레인에 소개 된다. TF-먹이 미끼 DNA 시퀀스에 바인딩하는 경우 TF 먹이 광고 두 리포터 유전자의 활성화로 끌 것입니다. 결과적으로 긍정적인 상호 작용으로 세포 성장 판 히스티딘, 부족으로 극복 하 고 경쟁력 있는 억제제, 3-아미노-1,2,4-triazole (3-AT)에 대해 선택 하 고 X-여자의 블루 식민지로 시각 수 수 있습니다. 때문에 강력한 효 모 Gal4 광고 사용, Y1H 분석 transcriptional 활성 제 뿐만 아니라 repressors를 포함 하는 상호 작용을 검색할 수 있습니다. 더하여, TF 먹이 강한 효 모 발기인 (ADH1)에서 표현, 그 상호 작용 수치가 낮은 생 식, 도전 칩11,12로 감지 하는 TFs에도 감지할 수 있습니다.
Y1H 분석 실험을 수행 하기 위한 가장 게시 프로토콜 다음 선택, 식민지, 및 상호 작용 TF를 식별 하는 시퀀스 또는 풀링된 TF 먹이 라이브러리를 변환 하 여 효 모 DNA 미끼 종자에 TF-먹이 도입 기반 개별 변형 복제8,9. 이들은 시간이 걸리는 프로토콜, 연구원 당 테스트할 수 있는 DNA 시퀀스의 수를 제한 합니다. Y1H 분석 실험, 이라는의 최근 개선 향상 Y1H (eY1H), 극적으로 각각 표현 하는 다른 효 모 종자의 컬렉션으로 효 모 DNA 미끼 종자 짝 고밀도 배열 (HDA) 로봇 플랫폼을 사용 하 여 심사 처리량을 증가 했다 TF-먹이10,13 (그림 1C). 이 화면만 세 접시를 사용 하 여 quadruplicate에서 가장 인간의 TFs를 테스트 수 있도록 1,536 식민지 형식을 사용 합니다. 또한, TF DNA 상호 작용 없음을 방식 테스트는이 이렇게 상호 작용 (예: 2 개의 noncoding 단일 뉴클레오티드 이체) DNA 미끼 및 다른 TFs 비교에 대 한 허용 또는 TF 변종11,12 ,14.
EY1H 분석 실험을 사용 하 여, 우리는 구분 된 큰 인간, 꼬마 선 충 DNA를 중심으로 TF-DNA 상호 작용 네트워크 최신. 특히, 우리는 246 인간의 발달 강화 및 283 TFs12사이의 2230 상호 작용을 확인 했습니다. 또한, 우리 eY1H 분석 실험 변경된 TF 바인딩을 109 단일 뉴클레오티드 noncoding 변종 발달 기형, 암, 신경 질환 등 유전 질병와 관련 된 폭로를 고용 했다. 더 최근에, 사용 eY1H을 2576 C. 선 충 유전자 발기인 및 366 TFs11사이 21,714 상호 작용으로 구성 된 네트워크를 나타냅니다. 이 네트워크는 수십 선 충 C. TFs의 기능 역할을 밝히기 위해 쓸모 있었다.
DNA-미끼 얼룩을 생성 하 고 배경 기자 활동의 수준을 평가 프로토콜 되었습니다 다른15,,1617보고. 여기는 1,086 인간의 TFs의 배열에 대 한 모든 인간 게놈 DNA 영역을 화면에 사용할 수 있는 eY1H 파이프라인에 설명 합니다. 효 모 DNA 미끼 변형 생성 되 고 TF 먹이 배열의 해당 접시에 발견, 일단 전체 프로토콜 2 주 (표 1)에서 수행할 수 있습니다. 더 중요 한 것은, 프로토콜 단일 연구원 60 DNA 미끼 시퀀스를 동시에 화면 수 있도록 병렬화 할 수 있습니다. 프로토콜을 설명 하기 위해 우리는 CCL15와 IL17F 두 cytokine 유전자의 발기인 상영. 또한, 우리는 종류의 eY1H 분석 실험 및 그들을 해결 하는 방법을 수행할 때 발생할 수 있는 문제를 설명 하기 위해 실패 한 화면에서 결과 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>3-Amino-1,2,4-triazole (3AT) ~95 % TLC</td><td>Sigma</td><td>A8056-100G</td><td>HIS3 유전자 제품에 대한 경쟁력 있는 억제제</td></tr><tr><td>아데닌 설페이트(헤미설페이트), 이수화물</td><td>US Biologicals</td><td>A0865</td><td>적절한 효모 성장에 필요</td></tr><tr><td>한천 높은 젤 강도 - 세균학 등급</td><td>American International Chemical</td><td>AGHGUP</td><td>효모 성장을 위한 영양 매체</td></tr><tr><td>황산 암모늄</td><td>US Biologicals</td><td>A1450</td><td>합성 효모 매체의 질소</td></tr>원 <tr><td>D+ 포도당 무수</td><td>US Biologicals</td><td>G3050</td><td>효모 성장에 필요</td></tr><tr><td>Drop-Out Mix 마이너스 His, Leu, Tryp 및 Uracil, 효모 질소 염기가 없는 아데닌 풍부</td>US <td>Biologicals</td><td>D9540-02</td><td>효모 성장 가장자리에 필요한 합성 완전</td></tr><tr><td>배지 다성분 pH 측정기</td><td>Hanna Instruments</td><td>HI2020-01</td><td>선택적 매체의 pH를 측정하려면</td></tr><tr><td>편평한 이쑤시개 750 ct</td><td>다이아몬드</td><td></td><td>페트리디쉬에 효모를 줄무늬</td></tr><tr><td>유리 구슬 Walter</td><td>Stern</td><td>100C</td> 잔디밭을 <td>만들 때 효모를 빨아들이기 위해</td></tr><tr><td>글리세롤 &ge; 99%</td><td>Millipore Sigma</td><td>G9012-1L</td><td>냉동 효모 스톡을 만드는 데 필요</td></tr><tr><td>L-히스티딘</td><td>US Biologicals</td><td>H5100</td><td>선택적 배지에서 효모 성장 선택용</td></tr><tr><td>L-Leucine</td><td>US Biologicals</td><td>L2020-05</td><td>선택적 배지에서 효모 성장 선택용</td></tr><tr><td>L-트립토판</td><td>Sigma</td><td>T-0254</td><td>선택적 배지 N에서 효모 성장 선택용</td></tr><tr><td>, N-Dimethylformamide</td><td>Sigma</td><td>319937-1L</td><td>X-gal 용액을 만들기 위해</td></tr><tr><td>Omnipense Elite</td><td>Wheaton</td><td>W375030-A</td><td>Singer 플레이트에 정확한 양의 매체를 분배하기 위해</td></tr><tr><td>펩톤, 효</td><td>모 성장에 필요한</td>세균학 <td>American International Chemical</td><td>PEBAUP</td> 단백질 소스</tr><tr><td>페트리 접시, 150 mm x15 mm</td><td>VWR</td><td>10753-950</td><td>성장 효모 미끼 스크리닝</td></tr><tr><td>PlusPlates</td><td>Singer Instruments</td><td>PLU-003</td><td>Singer Robot</td></tr><tr><td>Precision Low Temperature BOD 냉장 인큐베이터</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PR205745R</td><td>일정한 온도에서 효모 플레이트를 배양하려면</td></tr><tr><td>RePads 1,536 짧은</td><td>Singer Instruments</td><td>REP-005</td><td>TF-먹이 어레이를 옮기고, 효모를 짝짓고, 효모를 이배체 선택 및 판독 플레이트로 옮기기 위해</td></tr><tr><td>RePads 384 짧은</td><td>Singer Instruments</td><td>REP-004</td><td>TF-먹이 배열을 384에서 1,536 콜로니 형식으로 옮기려면</td></tr><tr><td>RePads 96 긴</td><td>Singer Instruments</td><td>REP-001</td><td>TF-먹이 어레이를 글리세롤 스톡에서 한천 플레이트로 옮기려면</td></tr><tr><td>RePads 96 짧은</td><td>Singer Instruments</td><td>REP-002</td><td>TF-먹이 배열을 96에서 384 콜로니 형식으로 전송하기 위해</td></tr><tr><td>Singer HDA RoToR 로봇</td><td>Singer Instruments</td><td></td><td>고처리량 방식으로 효모를 전송하는 데 사용됩니다</td></tr>. <tr><td>수산화나트륨 (펠릿/인증된 ACS)</td><td>Fisher</td><td>s318-1</td><td>선택적 매체의 pH를 조정하기 위해</td></tr><tr><td>인산나트륨 이염기성 헵타하이드레이트</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-203402C</td><td>X-gal에서 LacZ 리포터 활동에 필요합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodium Phosphate monobasic monohydrate</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-202342B</td><td>X-gal의 LacZ 리포터 활동에 필요&nbsp;</td></tr><tr><td>Uracil</td><td>Sigma</td><td>U0750-100G</td><td>선택적 매체에서 효모 성장 선택용</td></tr><tr><td>X-gal (5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-Dgalactopyranoside)</td><td>Gold Biotechnology</td><td>X4281C100</td><td>&beta;-galactosidase는 단백질-DNA 상호 작용을 감지하기 위해 무색 X-gal 파란색으로 변합니다</td></tr>. 효<tr><td>모 추출물</td><td>US Biologicals</td><td>Y2010</td><td>효모</td></tr><tr><td>의 성장 및 번식을 위한 영양 배지효모 질소 베이스 (분말) AA, 탄수화물 및 AS 없음&nbsp;</td><td>US Biologicals</td><td>Y2030</td><td>활발한 효모 성장에 필요</td></tr></tbody></table>

인간의 dna 시퀀스에 바인딩 전사 요소를 식별 하기 위해 향상 된 효 모 한 하이브리드 화면

Enhanced Yeast One-hybrid Screens To Identify Transcription Factor Binding To Human DNA Sequences

각 인간의 유전자를 조절 하는 전사 인자 (TFs)의 집합을 확인 하는 것은 수많은 실험과 전산 접근을 통합 발굴 작업입니다. 하나 이러한 방법은 효 모 한 하이브리드 (Y1H) 분석 결과, TFs와 DNA 사이 어떤 상호 작용 지역 리포터 유전자를 사용 하 여 효 모 핵의 환경에서 테스트 합니다. 두 가지 구성 요소를 포함 하는 Y1H 분석 실험:는 ' DNA-미끼 ' (예., 발기인, 증강, 달 았 죠, 등)와 ' TF-먹이,' 취재 원 유전자 활성화에 대 한 상영 될 수 있는. Y1H 스크린을 수행 하기 위한 가장 게시 프로토콜 DNA 미끼 효 모 종자로 TF 먹이 라이브러리 또는 배열 변환 기반으로 합니다. 여기, 우리는 파이프라인 기술, 향상 된 Y1H 이라고 (eY1H) 분석 실험, TF DNA 상호 작용 고밀도 어레이 사용 하 여 TF 먹이 긴장의 기준점과 컬렉션으로 DNA 미끼 긴장 짝짓기에 의해 심문 하는 1536에서 심사를 허용 (HDA) 로봇 플랫폼 식민지 형식입니다. 이로써 처리량의 극적인 증가 (60 DNA 미끼 시퀀스에 대 한 > 1000 TFs 연구원 당 2 주 소요) 및 재현성. 우리는 스크린 및 그들을 해결 하는 방법 하는 동안 발생할 수 있는 문제의 예제로 서 1,086 인간의 TFs의 배열에 대 한 인간의 발기인 시퀀스를 테스트 하 여 예상된 결과의 종류를 설명 합니다.

때 eY1H 분석 실험에서 결과 분석 세 가지 주요 요소를 고려 한다: DNA-미끼 긴장의 배경 기자 활동, TF DNA 상호 작용, 및 긍정적인 식민지의 수에 해당 하는 기자 활동의 강도. DNA-미끼 긴장의 배경 기자 활동 (즉, autoactivity) 전반적인 성장 및 판독 접시 TF 먹이의 부재에도 효 모 식민지의 색상을 말합니다. 이상적으로, 비 autoactive 긴장 표시 배경 흰색 또는 밝은 갈색 색상, 긍정적인 상호 작용에 대 한 식민지 되는 크고 푸른. Autoactive DNA-미끼 종자 미디어 히스티딘과 DNA 미끼8효 모 transcriptional 활성의 바인딩 관련 가능성이 있는 접시에 있는 모든 식민지에 대 한 X-여자의 파란색에에서 효 모 성장을 보여줍니다. 기자 활동 감지 TF DNA 상호 작용에 해당 (즉, 식민지의 크기) 및 파란색의 강도 강도 선호도, 효 모에 TF 식 수준, 바인딩 사이트 및 거리의 수 많은 매개 변수에 따라 달라 집니다. 효 모...

여기, 우리는 향상 된 효 모 프로토콜 식별 관심 인간의 DNA 영역을 바인딩할 수 있는 녹음 방송 요인 (TFs)을 심사 한 하이브리드 제시. 이 메서드 사용 하 여 높은 처리량 검열 파이프라인의 바인딩 심문 수입니다 > 1000 TFs 단일 실험에서.

인간의 DNA 시퀀스에 바인딩 전사 요소를 식별 하기 위해 향상 된 효 모 한 하이브리드 화면

Identifying the sets of transcription factors (TFs) that regulate each human gene is a daunting task that requires integrating numerous experimental and ...

향상된 효모 1 하이브리드 소의 목표는 관심의 DNA 순서에 결합하는 전사 요인의 집합을 확인하는 것입니다. 이 기술의 장점은 향상된 효모 원 하이브리드 아사약이 단일 실험에서 1000개 이상의 전사 인자를 평가할 수 있다는 것입니다. 반대로, 크로마틴 면역 침전은 한 번에 하나의 전사 인자를 평가합니다.이 방법은 기능적 유전체학이 유전자 프로모터 및 강화제에 결합하는 전사 인자의 레퍼토리를 식별하고 비코딩 이체에 결합하는 변경된 전사 인자를 식별하는 핵심 도구를 구성합니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 Xing Liu 포스트 독이 될 것입니다. 얼음에 TF 먹이 배열로 효모 글리세롤 스톡 플레이트를 해동.12 채널 파이펫을 사용하여 효모를 다시 중단하고 1~ 3분 이내에 다음 단계로 진행합니다. Sc 마이너스 트립토판 직사각형 플레이트로 효모를 발견하려면 고밀도 어레이 로봇을 사용하여 멀티웰 96 플레이트를 소스로, 96개의 한천판을 대상으로, 96개의 긴 핀 패드를 선택합니다. 핀 패드는 재사용이 가능하지 않으며 폐기해야 합니다.스팟 많은 프로그램을 선택하여 96웰 플레이트당 두 개의 복사본을 만듭니다. 냉동 주식의 백 오염을 피하기 위해 재활용 또는 재방문 옵션을 사용하지 마십시오. 또한, 효모를 혼합하는 소스에서 위아래로 소용돌이 옵션을 선택합니다.플레이트를 어디에 배치하고 로봇이 트립토판 직사각형 플레이트를 뺀 Sc로 효모를 발견할 수 있도록 하는 장소와 장소에 대한 지침을 따르십시오. 점박이 배열을 가방에 넣고 2~3일 동안 섭씨 30도에서 한천 쪽을 배양합니다. Sc 마이너스 트립토판 직사각형 플레이트에서 384개의 콜로니 어레이를 생성하려면 96개의 한천판을 소스로, 384개의 한마판과 96개의 짧은 핀 패드를 선택한다.그런 다음 1:4 배열 단일 소스 프로그램을 선택합니다. 이런 식으로, 4 개의 96 식민지 플레이트는 하나의 384 식민지 판으로 통합됩니다. 다른 플레이트 간의 오염을 피하기 위해 재활용 또는 재방문 옵션을 사용하지 마십시오.플레이트를 가방에 넣고 2 일 동안 30섭씨30도에서 발견 된 384 콜로니 어레이 천을 배양하십시오. Sc 마이너스 트립토판 직사각형 플레이트에서 1536개의 콜로니 어레이를 생성하려면 384개의 한천판을 소스로, 1536개의 한천판을 대상으로, 384개의 짧은 핀 패드를 선택한다. 그런 다음 1:4 분석 단일 소스 프로그램을 선택합니다.목표는 각 식민지를 네 개의 식민지로 복사하여 네 배의 식민지를 얻는 것입니다. 각 식민지를 4번 복사하는 것과 관련이 있기 때문에 재활용 및 재방문 옵션을 사용합니다. 로봇의 지시에 따라 로봇이 3일 동안 섭씨 30도에서 발견된 1536콜로니 어레이 천을 배양하고 배양하기 전에 효모를 접시에 집어 넣을 수 있도록 하십시오.Sc 마이너스 트립토판 직사각형 플레이트의 1536 콜로니 어레이를 증폭하려면 1536개의 한천 판을 소스로, 1536개의 한천판을 대상으로, 1536개의 짧은 핀 패드를 선택한다. 복제 많은 프로그램을 선택하여 3~4개의 복사본을 복제합니다. 재활용 및 재방문 옵션을 사용하지만 교차 오염을 방지하기 위해 어레이의 다른 플레이트로 전환 할 때 패드를 던져.로봇이 트립토판 직사각형 플레이트를 뺀 Sc의 1536 콜로니 어레이를 증폭할 수 있도록 합니다. 마지막으로, 접시를 가방에 넣고 3 일 동안 30섭씨에서 발견 된 1536 콜로니 어레이 화창 측을 배양하여 짝짓기 단계에 사용합니다. 짝짓기를위한 DNA 미끼 변형 잔디를 준비하려면 Sc 마이너스 우라실과 히스티딘 플레이트에 DNA 효모 미끼 균주를 발견하고 섭씨 30도에서 3 일 동안 성장하십시오.효모를 15센티미터 Sc로 줄이면 멸균 이쑤시개를 사용하여 우라실과 히스티딘 플레이트를 사용하여 각 플레이트가 12~16가지 균주에 맞도록 합니다. 어느 날 섭씨 30도에서 접시를 배양하십시오. 다음 날, 효모를 15센티미터 Sc로 줄이며, 각 플레이트가 4가지 균주에 맞을 수 있도록 멸균 이쑤시개를 사용하여 우라실과 히스티딘 플레이트를 빼고 있습니다.섭씨 30도에서 하루 동안 접시를 배양하십시오. 인큐베이션후 멸균 이쑤시개를 사용하여 효모를 긁어 내고 한천을 긁지 않도록하십시오. 효모를 멸균 수분 500마이크로리터가 있는 1.5 밀리리터 튜브에 넣습니다.이제 10~15개의 멸균 유리 구슬과 효모 서스펜션을 YAPD 직사각형 플레이트에 넣습니다. 효모가 접시 전체에 퍼지도록 1 분 동안 모든 방향으로 완전히 흔들어줍니다. 접시를 즉시 반전시키고 비드가 뚜껑으로 이동하도록 누릅니다.구슬을 제거하고 재활용합니다. 접시를 가방에 넣고 섭씨 30도에서 1~2일 동안 한천 쪽을 배양합니다. 그런 다음 짝짓기 단계로 진행합니다.효모 DNA 미끼 및 TF 어레이 균주를 결합하려면 TF 어레이를 로봇과 YAPD 직사각형 플레이트로 옮기습니다. 1536 개의 한천판을 소스와 대상으로 선택하고 1536 개의 짧은 핀 패드를 선택합니다. 많은 복제 프로그램을 선택합니다.4개의 소스 플레이트와 재활용 및 재방문 옵션을 선택합니다. 각 TF 어레이 플레이트는 3 ~4 개의 YAPD 플레이트를 전송하는 데 사용할 수 있습니다. 짝짓기에 사용되는 TF 어레이 플레이트는 2~3일 이어야 하지만 짝짓기가 비효율적이기 때문에 더 이상 그렇지 않습니다.DNA 미끼 균주의 잔디를 이미 TF 어레이가 들어 있는 YAPD 플레이트로 옮기려면 1536개의 한마판을 소스와 표적및 1536개의 짧은 핀 패드로 선택한다. 많은 복제 프로그램을 선택합니다. 반경이 약 0.6밀리미터인 소스에서 임의 오프셋을 사용하여 동일한 지점에서 효모를 복용하지 않도록 하고 대상에 혼합을 선택하여 효모 균주 간의 접촉을 용이하게 합니다.DNA 미끼 균주를 포함하는 잔디를 소스로 사용하고, 접시를 포장하고 하루 동안 30섭씨에서 그들을 식기 측을 배양하기 전에 대상으로 발견 된 TF 배열을 포함하는 YAPD 플레이트. 디플로이드 효모의 선택을 위해, 1536 개의 한마판을 소스와 대상으로 선택하고 1536 개의 짧은 핀 패드를 선택합니다. 복제 프로그램을 선택합니다.소스와 대상에서 믹스를 선택합니다. 로봇이 TAPD 플레이트에서 Sc 마이너스 우라실 및 트립토판 플레이트로 메이트 효모를 전송한 후 접시를 포장하고 2~3일 동안 섭씨 30도에서 식기 쪽을 배양할 수 있도록 합니다. 이제 1536개의 한고판을 소스와 대상 및 1536 개의 짧은 핀 패드로 선택합니다.복제 프로그램을 선택합니다. Sc 마이너스 우라실및 트립토판 플레이트에서 디플로이드 효모를 로봇을 사용하여 플레이트를 포함하는 레딩 아웃 직사각형 3-AT 및 X-gal으로 옮깁니다. 접시를 가방에 넣고 최대 7일 동안 섭씨 30도까지 한천 쪽을 배양합니다.배경 기자 활동이 높은 DNA 미끼 균주의 경우 2 일, 3 및 4 일에 사진을 찍습니다. 그렇지 않으면 4 일과 7 일에 사진을 찍습니다. TF 어레이 플레이트를 실온에서 유지하고 7일 후에 다시 복사하여 새로운 스크리닝을 할 수 있습니다.향상된 효모 원 하이브리드 분석서를 사용하여 얻을 수 있는 결과의 유형을 설명하기 위해 CCL15 및 IL17F 유전자의 발기인 영역은 1086개의 인간 TFs배열에 대해 선별되었다. CCL15 프로모터는 상호 작용, 심지어 약한 것들조차 쉽게 검출될 수 있는 비 자동 활성 DNA 미끼의 예입니다. IL17F 프로모터는 일부 상호 작용을 감지할 수 있는 고르지 않은 배경 리포터 활동을 가진 자동 활성 DNA 미끼의 예이며, 여러 TF의 경우 리포터 활동이 배경보다 높은지 확실하지 않습니다.향상된 효모 한 하이브리드 어필을 수행할 때 발생할 수 있는 몇 가지 문제가 있습니다. 이 경우 식민지가 너무 작고 양도하지 못했습니다. 일반적으로 TF 먹이 식민지의 약 95%가 정상적인 성장을 나타낸다.이 예에서는, 플레이트의 일부에 효모 성장이 없다. 이 문제는 일반적으로 1536 핀 패드가 DNA 미끼 변형 잔디, TF 어레이 또는 짝짓기 플레이트에서 효모와 접촉하지 못하는 경우 짝짓기 단계에서의 실패와 관련이 있다. 이 두 예제에서는 상호 작용이 검색되지 않습니다.이 문제는 종종 리포터 유전자, 특히 LacZ, 또는 상호 작용을 마스크 너무 높은 자동 활성에 의도하지 않은 돌연변이를 활성화하는 것과 관련이 있습니다. 이 경우 플레이트는 세균 오염과 관련된 무작위 파란색 반점을 제공합니다. 고려해야 할 가장 중요한 것은 적절한 플레이트 준비입니다.모든 후속 단계가 이에 따라 달라지기 때문에 모든 구성 요소가 추가되고 한천 높이가 균일하게 되는지 확인합니다. 대부분의 시약은 위험하지 않지만 샘플과 플레이트의 오염을 피하기 위해 항상 장갑을 착용하는 것이 중요합니다. 임의의 DNA 결합 분석과 마찬가지로, 기자 분석, 전사 인자 녹다운 또는 녹아웃과 같은 기능적 분석을 사용하여 확인된 상호 작용을 검증한 다음 표적 유전자의 발현을 측정하는 것이 중요하다.이 방법은 비코딩 질병 관련 이체에 대체 결합을 가진 전사 인자뿐만 아니라 특정 생물학적 과정에 관련된 유전자를 조절하는 전사 인자의 식별을 허용했습니다.

enhanced-yeast-one-hybrid-screens-to-identify-transcription-factor

Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

여기에 플라스미드 overexpression 화면...

높은 처리량 효모 플라스미드 Overexpression 화면

우리는 기존의 누룩 두 하이브리드 심사, 단백질 상호 작용을 식별하는 효과적인 유전자 도구를 수정했습니다. 이 수정은 현저하게, 과정을 단축 부하를 감소하고, 가장 중요한, 잘못된 반응의 수를 줄일 수 있습니다. 또한,이 방법은 재현성과 신뢰성이다.

성장 팩터 Progranulin와 상호 작용하는 단백질을 식별하기 위해 수정된 효모 - 2 하이브리드 시스템

이 비디오에서는 표적 DNA와 상호 작용하는 여러 단백질을 검출하는 변형된 효모 단일 하이브리드 분석을 시연합니다. 형질전환된 효모 세포는 리포터 유전자의 상류에 있는 표적 DNA 염기서열을 포함합니다. 또한, 그들은 전사 인자 단백질을 발현합니다. 단백질이 복합체를 형성하고 표적 DNA에 결합할 때 리포터 유전자가 발현되고 효소로 검출될 수 있습니다.

이질체 단백질 복합체-DNA 상호작용을 검출하기 위한 Modified Yeast-One 하이브리드 분석

이 프로토콜은 동족 GFP 기자 및 유동 세포 계측법을 통해 GFP 발현을 자극하는 ATFs 능력의 정량화 인공 전사 인자 (ATFs)의 신속한 건설을위한 실험 절차를 설명합니다.

빠른 합성 및 GFP 기반 기자들과 화학적으로 활성화 된 전사 인자의 상영

세균 이펙터 단백질 성공적인 감염의 확립에 중요하다. 이 프로토콜은 천연 식물 호스트에 세균 이펙터 단백질의 단백질 결합 파트너의 실험 식별을 설명합니다. 효모 두 하이브리드 화면을 통해 이러한 이펙터 상호 작용을 확인하는 분자 병원성 전략을 탈피하는 중요한 도구가되었습니다.

효모 두 하이브리드 화면을 사용하여 비 경작 식물 병원체로부터 세균 이펙터의 기능을 해결했습니다

Saccharomyces cerevisiae의 내인성 위치에서 히스톤 유전자의 돌연변이를 생성하는 전략이 제시됩니다.

대상<em&gt; 현장에서</em신진 효모에서&gt; 돌연변이 유발 히스톤의 유전자

우리는 micrococcal nuclease (MNase) 융합 단백질로 게놈 전체 단백질 바인딩 사이트를 매핑하기위한 염색질 immunoprecipitation (ChIP) - 직교 방식 높은 처리량 시퀀싱 (ChEC - seq)와 결합 염색질 내생 절단을 설명합니다.

ChEC-seq와의 단백질 - DNA 상호 작용의 게놈 전체 매핑<em&gt; 사카로 마이 세스 세레 비시 애</em

여기에 설명 된 수정 된 효모 하나 - 하이브리드 분석은 기능적 유전체학 연구를위한 이종 시스템에서 헤테로 머 단백질 복합체 - DNA 상호 작용을 연구하고 검증하기위한 고전적인 효모 1- 하이브리드 (Y1H) 분석법의 확장이다.

이성질체 단백질 복합체 -DNA 상호 작용 연구를위한 수정 된 효모 원 하이브리드 시스템

효 모 2 잡종 스크린의 일괄 처리 먹이 융해 단백질의 매우 복잡 한 세트로 여러 미끼 단백질의 상호 작용 프로필의 직접 비교 가능합니다. 여기, 우리는 새로운 시 약, 세련 된 방법과 같은 화면에 대 한 그들의 사용을 구현 하는 방법을 설명 합니다.

단백질 상호 작용을 비교 하는 배치에 효 모 2 잡종 스크린

효 모 인구 잠재적으로 긍정적인 효 모 2 잡종 상호 작용에 대 한 선택의 깊은 시퀀싱 풍부한 파트너 단백질 상호 작용에 대 한 정보를 생성 합니다. 여기, 우리가 특정 생물 정보학 도구와 같은 화면에서 시퀀스 데이터 분석 사용자 지정 된 업데이트 소프트웨어의 동작을 설명 합니다.

일괄 처리 효 모 2 잡종 스크린에서 시퀀스 데이터의 informatic 분석

여기에 제시된 효모 Saccharomyces 세레비시아에 종족을 건설하고 악용하는 네 가지 프로토콜은 인간 P53 의 일시 활성화 잠재력, 다양한 암 관련 돌연변이의 영향, 공동 발현 된 상호 작용 단백질, 및 특정 작은 분자의 효과.

인간 P53을 연구하기 위한 기능성 어세이 개발을 위한 섀시로 효모

배우세요 향상된 효모 원하이브리드 스크리닝을 통해 특정 DNA 서열에 결합하는 전사인자를 식별하는 방법입니다. 이 기술은 한 번의 실험에서 1,000개 이상의 전사인자를 고처리량으로 분석할 수 있습니다.

인간의 DNA 시퀀스에 바인딩 전사 요소를 식별 하기 위해 향상 된 효 모 한 하이브리드 화면

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