Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca<sup>2+</sup>-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Anders Rehfeld; Dorte Louise Egeberg Palme; Kristian Almstrup; Anders Juul; Niels Erik Skakkebaek

doi:10.3791/59212

매체-처리량에 캘리포니아2 +효과의 평가 대 한 분석 실험을 심사-신호 및 인간의 정자에서 ...

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Biology

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Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca²⁺-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

매체-처리량에 캘리포니아2 +효과의 평가 대 한 분석 실험을 심사-신호 및 인간의 정자에서 Acrosome 반응

Full Text

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05:44 min

March 1, 2019

DOI: 10.3791/59212-v

Anders Rehfeld^1,2, Dorte Louise Egeberg Palme^1,2, Kristian Almstrup^1,2, Anders Juul^1,2, Niels Erik Skakkebaek^1,2

¹Department of Growth and Reproduction,Copenhagen University Hospital, ²International Center for Research and Research Training in Endocrine Disruption of Male Reproduction and Child Health (EDMaRC),University of Copenhagen

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study introduces two medium-throughput assays designed to evaluate the impact of various compounds on calcium signaling and the acrosome reaction in human sperm cells. These assays facilitate rapid screening of large numbers of compounds, providing insights into sperm cell function.

Key Study Components

Research Area

Reproductive biology
Cell signaling
Assay development

Background

Calcium signaling plays a vital role in sperm function.
The acrosome reaction is crucial for sperm-egg interaction.
Efficient screening methods are needed to identify influencing compounds.

Methods Used

Medium-throughput calcium signaling assay
Human sperm cells
Fluorophore-stained assays and image cytometry

Main Results

Demonstrated effects of compounds on intracellular calcium concentration.
Showed dose-response relationships with positive and negative controls.
Established assay reproducibility for screening various compounds.

Conclusions

The assays provide a valuable platform for assessing sperm function.
These methods are applicable to broader biological questions in reproductive research.

Frequently Asked Questions

What is the significance of calcium signaling in sperm function?

Calcium signaling is critical for processes such as sperm motility and the acrosome reaction, which facilitates fertilization.

How can these assays be used in other studies?

The assays can be modified by changing fluorophores to answer different scientific questions related to sperm functionality.

What types of compounds can be screened using these methods?

Various compounds, including pharmacological agents and natural substances, can be tested for their effects on sperm cell functions.

Are these assays suitable for high-throughput screening?

Yes, the medium-throughput nature allows for screening a large number of samples efficiently.

What controls are recommended for these assays?

Positive and negative controls, such as specific hormones or buffers, should be included to validate findings.

Can these methods be applied to other cell types?

While optimized for human sperm, similar methodologies can potentially be adapted to study other cell types in cell signaling assays.

여기, 캘리포니아^{2 +}에 효과의 평가 대 한 두 개의 중간 처리량 분석-인간의 정자에서 신호 및 acrosome 반응 같습니다. 이 분석 실험은 신속 하 고 쉽게 화면에 캘리포니아^{2 +}효과 대 한 화합물의 큰 금액을 사용할 수 있습니다-인간의 정자에서 신호 및 acrosome 반응.

우리의 assays는 인간 적인 정자 세포 기능에 그들의 효과 대 한 화합물을 테스트 하는 데 사용할 수 있습니다. 특히, 이러한 방법은 인간 정자 세포에서 칼슘 신호 및 곡예 반응에 미치는 영향에 대한 많은 화합물을 빠르고 쉽게 선별하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 시각적 데모를 사용하면 다른 사용자가 자신의 실험실에서 유사한 실험을 쉽게 설정할 수 있습니다.

먼저 원시 정액 샘플 1밀리리터당 50밀리리터 튜브를 45도 각도로 튜브 랙에 넣고 각 튜브에 섭씨 37도의 인간 투비액 또는 HTF 양성 배지의 4밀리리터를 추가하는 것으로 시작합니다. 다음으로, 각 튜브의 바닥에 액화 정액 샘플 1 밀리리터를 조심스럽게 피펫하고 튜브를 섭씨 37도에서 1시간 동안 배치합니다. 인큐베이션의 끝에서, 45도 각도로 유지되는 수정된 파이펫 팁을 사용하여 HTF 양성 배지를 함유하는 운동성 정자 세포의 상부 부분을 새로운 15 밀리리터 플라스틱 튜브로 부드럽게 전달합니다.

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