Name: Bemisia tabaci Cytogenetic 기술을 사용 하 여 계란 수정 속도 결정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 24 s
Description: 배우세요 DAPI 염색을 활용한 Bemisia tabaci 수정률 측정 방법을 통해 하등배수 곤충의 생식 생태를 연구하세요. 이 기술은 3시간 내 완료되어 해충 관리 전략 수립에 활용됩니다.

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이 연구는 M.S.H.를 NSF 그랜트 M.S.H. (뎁 1020460)와 USDA AFRI 그랜트 (2010-03752)에 의해 투자 되었다 저자는 브 레 넌 Zehr 많은 기술과 선 whitefly 계란 얼룩 하지 감사. 저자는 마이크 Riehle 이미징에 대 한 그의 형광 현미경의 사용을 허용 하지 감사. 저자 수잔 켈리와 마르코 Gebiola 그 이미지에 대 한 감사. 저자 수잔 켈리와 지미 콘웨이 실험 중 중요 한 순간에 도움을 주셔서 감사.

참고: 통풍이 잘되는 지역에서 나는 연기 후드 실 온에서 모든 작업 수행 됩니다 확인 합니다. 이 프로토콜에서 모든 '방울' 운영자의 취향에 따라 5-20 µ L로 정의 됩니다.
1. 초기 설정
<ol><li>깨끗 한 잎에 oviposit를 여성 whiteflies를 허용 합니다. 산란 경기장에 대 한 예로 클립 감 금 소 또는 잎에 한 천 배양 접시에서 잘라 있습니다. 클립 케이지 또는 삽입 및 제거는 성인 배양 접시 덮개에 coverable 구멍을 확인 합니다. 또는, 신속 하 게 수집 된 성인 배 얼음에 넣고, 다음, 잎에 그들을 입금. 계란에 아버지 pronucleus 정자 전환의 관찰을 위해 산란 및 계란 고정 더 이상 60 분 사이의 시간을 제한 합니다. 참고: 계란 잎에서 제거 되지 않습니다 성인 섹스 비율을 기록 하는 성인을 기르는 수 있습니다.</li>
	<li>전 또는 whitefly 산란 중, 잘, 그리고 다음 파라핀 필름 조각의 한쪽 끝, 파라핀 필름 표면 휴식 하지 않습니다 확인 하 고 (그림 1)을 통해 스트레칭 비누와 물, 건조 그것을 청소 하 여 현미경 슬라이드 준비. 참고: 파라핀 영화 소수는 고 세미 불투명, 삭제 하 고 더 쉽게 볼 수 계란 액체 형태를 허용.</li>
</ol>2입니다. Dechorionation
<ol><li>유리 파스퇴르와 함께 플라스틱, 파라핀 영화 표 백제 솔루션 (0.83% 염소)의 방울을 추가 합니다. 참고: 그것은 경우에 각 드롭에 2-3 달걀은 달걀의 추적을 쉽게입니다. 또는, 큰 계란의 수를 관리 하기 위해 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) x 1 방울에 계란을 수집 합니다. 주의: 표 백제가 부식; 처리 표 백제 및 흡입 하지 할 때 장갑을 착용 한다.</li>
	<li>잎에서 성인 whiteflies를 제거 합니다.</li>
	<li>계란을 명확 하 게 볼을 단독으로 달걀을 수집 현미경 그리고 신중 하 게 얇은 프로브 잎을 놓습니다. 탐사선을 45 ° 또는 녹은 피 펫 팁 (그림 2)으로 편안한 작업 각도에서 분 nadel 핀을 삽입 합니다.</li>
	<li>표 백제 또는 1 x PBS 계란을 전송 합니다. 1 x PBS를 사용 하 여 1 x 유리 파스퇴르와 함께 PBS 한 번 계란 수집 하 고, 다음, 계란에 표 백제를 추가 모든 플라스틱을 제거 합니다. 참고: 계란을 수집 하는 때 천천히는 pedicel 잎에서 제거 될 때까지 그것의 기초에서 계란을 들어올립니다. pedicel 스티커, 그리고 표 백제에 담근는 때까지 계란 일반적으로 프로브 팁에 충실 합니다. 참고: 모든 시 약에 대 한 별도 유리 파스퇴르 펫을 사용 하는 것이 좋습니다 하 고는 펫 팁 좁은 고 실수로 whitefly 계란 발음의 위험을 줄이기 위해 열을 수정할 수 있습니다. 잔여물 및 오염 방지, 모든 사용 후 이온된 수와 펫을 청소.</li>
	<li>10 분을 기다립니다. 계란 1 시간 보다 오래 된 embryogenesis에 관심 있다면, 최대 15 분 동안 표 백제에 계란을 둡니다. 참고: 계란을 1 시간까지 10 분은 충분 합니다.</li>
</ol>3입니다. 고정
참고: 이 단계는 Hymenopteran 프로토콜17에서 가져옵니다.
<ol><li>유리 파스퇴르 피 펫 (chorion 파편을 포함 하는) 표 백제를 제거 하 고 그것을 폐기. 유리 파스퇴르와 빙 초 산의 방울 플라스틱 기다려 3 분 추가 합니다. 주의: 증기 두건 아래이 단계를 진행 합니다. 빙하 아세트산은 부식; 착용 장갑 때 빙 초 산을 처리 하 고, 잔여 표 백제와 함께에 특히 흡입 하지 마십시오.</li>
	<li>유리 피 펫 파스퇴르와 빙 초 산을 제거 하 고 클라크의 솔루션의 방울을 추가 (3: 1의 절대 에탄올: 빙 초 산) 플라스틱 유리 파스퇴르. 대기 솔루션의 대부분은 증발 때까지 (또는 10 분 최대).</li>
	<li>유리 파스퇴르 피 펫 및 대기는 에탄올의 대부분은 증발 때까지 (또는 10 분 최대) 계란을 70% 에탄올의 방울을 추가 합니다.</li>
</ol>4. 얼룩
<ol><li>유리 피 펫 파스퇴르와 모든 잔여 에탄올을 제거 하 고 유리 파스퇴르 피 펫 7.0에 가까운 pH를 계란에 1 x PBS의 방울을 추가. 건조, 예를 들어 (그림 3) 내부는 젖은 종이 타월로 빈 피 펫 팁 상자에서 방지 하기 위해 습도 챔버에 현미경 슬라이드를 설정 합니다. 적어도 30 분을 기다립니다. 참고: 이것은 최고의 포인트 일시 필요한 경우로 습기 건조를 방지할 수 있습니다.</li>
	<li>유리 파스퇴르 피 펫, 1 x PBS를 제거 하 고 0.1 μ g/mL DAPI, DNA 형광 얼룩의 방울을 추가, 플라스틱 유리 파스퇴르. 어둠의 습도 챔버에 현미경 슬라이드를 설정 하 고 15 분 이상 기다립니다. 주의: DAPI 자극, 그래서 장갑 처리.</li>
</ol>5입니다. 세척
<ol><li>유리 피 펫 파스퇴르 DAPI를 제거 합니다.</li>
	<li>1 방울을 추가 x TBST (5 배 솔루션 트리 스의 30 g, NaCl의 43.8 g, 폴 20의 5 mL 및 1.0 g 앤3 [pH 7.5]의 만든 및 PCR 학년 물 1 L에 가져온) 플라스틱 유리 파스퇴르와 함께 계란. 1을 제거 하기 전에 5 분 기다립니다 유리 파스퇴르 피 펫 x TBST. 2 번이이 단계를 반복 합니다.</li>
</ol>6입니다. 장착
<ol><li>최종 세척 후 신중 하 게 현미경 슬라이드의 깨끗 한 부분에 파라핀 영화에서 모든 계란 플라스틱. 초과 1 제거 x TBST; 그런 다음 미디어를 장착의 20 µ L를 추가 (80% 글리세롤과 20 %1 2 %n-틸-gallate와 x TBST) 계란 위에 깨끗 한 커버 슬라이드를 놓습니다.</li>
	<li>장기 저장을 위한 투명 매니큐어와 커버 슬라이드를 봉인, 다음, 2 ° C에서 어둠 속에서 슬라이드를 저장 하거나 즉시 형광 현미경 아래 그것을 볼 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCharnov%2C+EL+%22The+Theory+of+Sex+Allocation%22">The Theory of Sex Allocation</a>. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜 수정 속도 또는 B. tabaci의 1 차 섹스 률을 캡처 처음 이다. 이 프로토콜의 도전은 그것 whitefly 계란을 신속 하 게 처리 하는 방법은 연구자 1 h는 고정 될 때까지 계란 oviposited 했다 이후 통과 했다 보다 더 보장 요구 이다. 예비 실험, 동안 3 h 또는 더 postoviposition에서 수정 된 계란 너무 오래 수정, syngamy 발생 했다 고 mitotic 사단 진행 했다 관찰 했다. 1 ~ 3 h, 사이 pronuclei 라운드 모양에 했다. 두 핵의 초기 존재 이면 수정 된 계란, 조금 나중에, syngamycan에 대 한 준비에 두 핵의 apposition 표시 한 핵, 그리고 나중에 다시, 첫번째 mitotic 사단의 두 제품 모두 남성과 여성의 계란에서 찾을 수 있습니다. 따라서, 남녀 간의 구별이 분명이 나중 시간 지점에서 그리고 산란에서 보수적인 측정으로 1 시간에 고정 간격을 제한 하는 것이 좋습니다. 또한 각 전송 액체의 계란과 부드러운 될 실수...

섹스 할당의 연구 또는 남성과 여성의 자손에 상대적인 투자 행동 생태학1,2,3의 초석입니다. 뿐만 아니라 그것의 행동의 적응 모델을 테스트 하기 위해 기체의 섹스 할당 전략을 알고 하는 것은 그것의 인구 역동성의 모델 높일 수 있습니다. 많은 종에서 섹스 할당 어머니에 의해 제어 됩니다. 섹스 할당을 확인 하려면 그것은 계란 증 착의 시간에 주 성 비율 또는 암컷의 비율을 결정 하는 것이 중요. 성인 출현에 섹스 률 섹스 할당에 단서를 제공할 수 있습니다, 하지만 남성과 여성 청소년 사이의 차동 발달 사망률 수 있습니다 일반적으로 왜곡 성인 섹스 률 크게. Hymenoptera, 포함 개미, 꿀벌, 말 벌, 곤충의 순서의 일부 수 종에 1 차 섹스 률 cytogenetic 분석 실험, 유전자 DNA를 보려면 배아 얼룩으로 결정 되었습니다. Hymenopterans haplodiploid 이기 때문에, 초기 남성 계란 단일 이며 초기 여성 계란 2 중이 고 둘 다 남성과 여성 pronuclei (2n)를 포함 하는 동안만 여성 pronucleus (n)를 포함 합니다. Aleyrodidae, true 버그 (Hemiptera) whiteflies로 알려진의 sap 먹이 가족 haplodiploid도 있지만, 거기 되지 않았습니다 이러한 곤충에 주 성 비율을 찾을 수 설립된 분석 결과. 이것은 아마도 놀라운 주어진이 가족에 몇 가지 국제적인 심각한 해충의 연구와 whiteflies4,,56,7의 경쟁적인 상호 작용에서 섹스 비율의 중요성의 강도 ,8,,910 인구 역학에 일반적으로. Haplodiploid 곤충에도, 섹스 비율 섹스 결정 시스템, 선택적 수정 및 환경2와 다 정한 섹스 비율의 가능성을 수 있도록 두지 않도록 됩니다. 여기에 우리가 whiteflies sweetpotato whitefly로 알려진 종 복합 기본 섹스 비율을 결정 하는 기법을 제시 B. tabaci. 이 한 종 이상 28 종 전세계11를 포함 이름과 파괴적인 글로벌 침입 해충12,13의 일부를 포함 합니다. B. tabaci 및 다른 Aleyrodidae 섹스 할당 패턴을 결정 하기 위해이 기술의 응용 프로그램 변수, 온도, 기 주 식물, endosymbiotic 박테리아, 또는 식물/whitefly 포함의 더 엄격한 조사를 허용할 것 이다 병원 체, whitefly 기본 섹스 비율 및 whitefly 인구 역학에 영향을 미칠 수 있습니다.
우리는 어떤 유사한 계란 얼룩 기법 B. tabaci에 대 한 인식입니다. 프로토콜은 하룻밤 정착 단계를 생략 하 고, 따라서 3 h 이내 완료 될 수 있다 다른 곤충 계란14 사용 되는 착 색 방법에 비해 편리 합니다. 으로 응용 프로그램, endosymbiotic 박테리아, 리케차 sp. nr의 한 예입니다. bellii, B. tabaci 중동 아시아 부 1 (MEAM1)15,16의 우리의 실험실 라인에 여성 바이어스와 연결 됩니다. 우리가 테스트 한 B. tabaci MEAM1 실험실 줄 ("MAC1," Maricopa 농업 센터에서 수집), 여부 리케차-감염된 (R+) 여성 감염된 (R-) 여성 보다 더 많은 계란을 기름 지 게.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x TBST</td><td>30g</td><td></td><td>Tris, 43.8g NaCl, 5mL Tween-20 및 1.0g NaN3 pH 7.5로 만든 5x 용액 PCR 등급 물로 1L로 가져옴</td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Clorox</td><td></td><td>모든 가정용 표백제는 0.83%로 희석할 수 있는 한 작동합니다. 차아염소산나트륨</td></tr><tr><td>투명 매니큐어</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPI dilactate</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc300415</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td></td><td></td><td>70% EtOH로 희석</td></tr> 형<tr><td>광 현미경</td><td>Nikon</td><td></td><td>Nikon Eclipse 50i가 이 실험에 사용되었지만 340/380nm 여기 필터와 최소 4-10배 배율이 있는 모든 형광 현미경을 사용할 수 있습니다</td></tr>. 빙하 <tr><td>아세트산</td><td>Mallinckrodt</td><td>UN2789</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Wild</td><td></td><td>이 실험에는 Wild M5A 현미경이 사용되었지만 작업자가 흰 파리 알을 명확하게 볼 수 있는 모든 현미경을 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드 커버</td><td>모든</td><td></td><td>방법은 18mm x 18mm 크기의 슬라이드 커버입니다. 더 큰 슬라이드 커버를 위해 더 많은 장착 매체를 추가해야 합니다.</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Minuten nadel pins</td><td>BioQuip</td><td>1208SA</td><td>Minuten nadel pin은 피펫 팁이 있는 프로브로 만들기 위한 선택 사항입니다</td></tr>. <tr><td>NaCl</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>n-propyl-gallate</td><td>Sigma/Santa Cruz Biotechnology</td><td>P3130/sc-250794</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피</td>펫 <td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td>Fisherbrand 일회용 붕규산 유리 파스퇴르 피펫 5.75 in. 작업자가 피펫을 늘리고 좁히고 싶은 경우 분젠 버너가 필요할 수도 있습니다.</td></tr><tr><td>PCR 등급 물</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td>모든</td><td></td><td>피펫 팁은 미세한 나델 핀이 있는 프로브로 만들기 위해 선택 사항입니다.</td></tr><tr><td>작은 스포이드 전구</td><td>파</td><td></td><td>스퇴르 피펫</td></tr><tr><td>트리스에</td> 맞아야 합니다. <td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bemisia tabaci cytogenetic 기술을 사용 하 여 계란 수정 속도 결정

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

몇 종의 수액 빠는 whiteflies 그들은 입혀 작물 손상 및 식물 바이러스 벡터 그들이 전세계 가장 파괴적인 지상파 해충 있습니다. 서로 다른 환경에서 이러한 종의 생물학의 수많은 연구에도 불구 하 고 주요 생활 역사 매개 변수, 자손 성 비율, 작은 관심을 받고 있다, 아직 예측 인구 역학에 대 한 중요 한. Bemisia tabaci 의 기본 성 비율 (산란에서 성 비율) 적 보고 하지만이 haplodiploid 곤충의 달걀 수정 속도 결정 하 여 찾을 수 있습니다. 기술은 포함 표 백제, 일련의 고정 단계와 일반적인 DNA 형광 얼룩, DAPI (4, 6-diamidino-2-phenylindole, DNA 바인딩 형광 염료), 여성 및 남성 pronuclei에 바인딩할 응용 프로그램 계란의 dechorionation. 여기, 우리 기술, 그리고 여부는 endosymbiotic 박테리아, 리케차 sp. nr 테스트 하는 응용 프로그램의 예 제시. bellii, B. tabaci의 기본 성 비율에 영향을 받습니다. 이 방법은 whiteflies의 인구 연구 또는 섹스 할당 특정 환경 자극으로 존재 하는 경우 결정 하는 데 도움이 수 있습니다.

리케차 B. tabaci MEAM1 여성에 대 한 수정 속도 영향을 미치는 여부를 테스트 하려면 우리 reared 리케차-감염 (R+) 또는 (R-)를 감염 되지 않은 B. tabaci 에서 cowpea 식물 (Vigna unguiculata)에 27 ° C, 상대 습도 70%, 그리고 빛/8 h 16 h 어두운 photoperiod 케이지를 분리 합니다. R+ 및 R- 4 탈피 whiteflies 신중 하 게 잎에서 제거 하 고 200 µ L 스트립 튜브에서 고립 되었다. 성인 등장, 그들은 50% 여성의 그룹에 수집 하 고 접시에 깨끗 한 잎을 전송 (n = ~50-100/leaf) 짝짓기의 4 일 동안. 약 20 명의 여성 및 여러 남성 그룹 다음 35 mm 접시 1 %agar 휴식에 (R<s...

우리 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 수정 속도 결정 하 고 Bemisia tabacihaplodiploid 침입 해충의 기본 성 비율을 사용 하 여 간단한 cytogenetic 기법 제시.

Bemisia tabaci Cytogenetic 기술을 사용 하 여 계란 수정 속도 결정

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

Liz가 개발한 프로토콜을 통해 백색 비행 수정 속도를 결정할 수 있습니다. 이 기술을 적용하면 흰파리의 행동과 생태에 대한 이해가 향상됩니다. 백색파리는 하플로디플로이드이므로 수정속도는 배란시 성비와 동일합니다.이 프로토콜은 백색 파리, 지식에 대해 처음 설명되었으며 3 시간 이내에 완료 할 수 있습니다. 먼저 페트리 접시 커버에 뚜껑을 덮을 수 있는 구멍을 만들어 성인 흰파리를 삽입하고 제거합니다. 편안한 작업 각도에서 얇은 핀을 녹인 파이펫 팁에 삽입하여 얇은 프로브를 만들어 습도 챔버를 설정하고 프로브를 패션화합니다.선택적으로, 백색 도면 알의 쉽게 취급을 위해 열과 젤론 유리 파이펫 팁. 그런 다음, 여성 흰파리가 페트리 접시에 있는 한천에 맞게 잘라 깨끗한 잎에 배란을 허용합니다. 백색 플라이 배란 동안 비누와 물로 현미경 슬라이드를 청소하십시오.잘 건조하고 액체가 방울을 형성하고 계란을 더 쉽게 볼 수 있도록 한쪽 끝에 파라핀 필름의 조각을 스트레칭. 계란을 비초하려면 유리 파스퇴르 파이펫을 사용하여 성인 제거 및 계란 수집 직전에 파라핀 필름에 83 %의 hypochlorite 표백제 용액을 추가하십시오. 표백제와 빙하 아세트산은 모두 부식성입니다.그들은 후드 또는 잘 통풍 지역에서 장갑으로 처리해야합니다. DAPI는 또한 자극제이며 장갑으로 처리해야합니다. 그런 다음, 잎에서 성인 흰파리를 제거하고 현미경 아래에 잎을 놓습니다.페디셀이 잎에서 제거 될 때까지 조심스럽게 기지에서 각 계란을 들어 올립니다. 이 프로토콜을 수행하기 전에 많은 계란에서 연습하십시오. 계란을 기지에서 천천히 들어 올리고 잎에서 계란 페디셀이 제거되는 것을 볼 수 있게되면 잎에서 완전히 들어 올립니다.표백제 한 방울에 2~3개의 달걀을 옮기고 10분 동안 그대로 둡니다. 계란을 고치려면 유리 파이펫을 사용하여 표백제를 폐기하십시오. 그런 다음 빙하 아세트산을 넣고 3분간 기다립니다.다음으로 빙하 아세트산을 제거하고 클라크의 용액 방울을 추가합니다. 그런 다음 대부분의 솔루션이 증발할 때까지 10분 간 기다립니다. 70%에탄올 방울을 넣고 10분 동안 다시 기다립니다.계란을 염색하려면 먼저 잔류 에탄올을 제거하십시오. 그런 다음, 7에 가까운 pH를 얻기 위해 계란에 1xPBS의 방울을 추가합니다. 건조를 방지하기 위해 습도 챔버에 현미경 슬라이드를 넣어.30분 후 1xPBS를 제거하고 밀리리터 DAPI당 1마이크로그램의 방울을 추가합니다. 현미경 슬라이드를 어두운 습도 챔버에 넣고 적어도 15 분 기다립니다. 계란을 세척하려면 먼저 DAPI 용액을 제거하십시오.그런 다음 계란에 1xTBST 방울을 추가합니다. 5분 후 1xTBST를 제거합니다. 총 세정제에 대해 이 세척을 두 번 더 반복합니다.마지막 세척 후, 조심스럽게 현미경 슬라이드의 깨끗한 부분에 파라 필름에서 모든 계란을 피펫. 과도한 TBST를 제거하고 20 마이크로리터의 장착 미디어를 추가합니다. 마지막으로, 계란 위에 깨끗한 커버 슬라이드를 놓고, 장기간 보관을 위해 명확한 매니큐어로 커버 슬라이드를 밀봉하고 형광 현미경을 사용하여 이미징을 진행합니다.DAPI 핵 염색에 선행된 계란 비초는 형광 현미경으로 관찰될 때 수정과 배아 성의 할당을 허용했습니다. 암컷 프로뉴클레우스는 수정된 암컷 계란과 수정되지 않은 수컷 계란의 중심 근처에 있으며, 정자는 여성 계란의 정점 근처에서 밝은 줄무늬로 보입니다. 이 기술의 한 응용 프로그램은 세균성 내시비바이오엔트가 흰파리의 1차 성비에 영향을 미치는지 여부를 결정하는 것입니다.예를 들면, Rickettsia 감염되고 감염되지 않은 B.tabici 백색가에 의해 낳은 계란의 1 차적인 성비율은 2개의 처리에 있는 성비 사이 유의한 차이를 보여주지 않았습니다. 성인기에 양육 된 계란에 관해서는, Rickettsia 감염 및 감염되지 않은 성인에 대 한 유사한 결과 보였다, 증거를 제공, 적어도이 연구에서, Rickettsia 감염 된 여성에 의해 더 큰 수정 속도 대 한. 이 프로토콜을 사용 하 여, 하나는 간 특이 한 정자 계란을 수정할 수 있는지 여부를 확인할 수 있습니다.수정이 관찰되지 않으면, 하나는 다시 여성의 정자를 보고 짝짓기 하는 동안 정자가 전송 되는지 보고 볼 수 있습니다. 수정이 발생하는 경우, 하나는 하이브리드 자손 발달의 생존가능성을 결정하기 위해 수정 속도와 성인의 성비율을 비교할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

정자 경쟁의 능력에 대한 평가의 차이<em&gt; 초파리</em

여기, 우리는 해부 및 여과를 통해 흰 반점 Bemisia tabaci 에서 endosymbionts를 분리하는 프로토콜을 제시한다. 증폭 후, DNA 샘플은 endosymbionts와 whitefly 사이의 mutualism의 후속 시퀀싱 및 연구에 적합합니다.

Whitefly에서 Endosymbionts의 추출을위한 방법<em&gt; 베미 시아 타바시</em

생활 테이블 곤충 인구에 있는 근원의 정량화 및 사망률의 속도 허용 하 고 이해, 예측 하 고 agroecosystems의 인구 역학을. 실시 하 고 무 미 숙 생활 단계와 곤충에 대 한 필드에서 코 호트 기반 생활 테이블 분석 방법 제시 됩니다.

필드 사용 하 여 Whitefly, Bemisia tabaci를 모델 시스템으로 면에 고착 곤충의 생활 테이블 개발 방법론

이 문서는 Bemisia tabaci 루프 중재 등온 증폭 (램프) 기술 기반에 대 한 빠른 식별 분석 결과 대 한 프로토콜을 보고 합니다. 프로토콜은 최소한의 실험실 훈련이 필요 하 고 따라서, 항구, 공항 등 식물 수입에 대 한 항목의 지점에서 현장 구현 될 수 있습니다.

루프-중재 등온 증폭 (램프) 분석 결과 Bemisia tabaci 의 빠른 식별

이 프로토콜에서 근 친 십자가 실시 하 고 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 메서드가 개미 Vollenhovia emeryi에 대 한 설명 합니다. 이러한 프로토콜은 실험 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 유전 기초를 이해 하기 위한 중요 합니다.

유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

설명된 것은 계란을 계산하고 24개의 잘 조직 배양 판을 사용하여 개별 모기의 해치 비율을 결정하는 시간과 공간 절약 방법이며, 이는 실질적으로 fecundity 및 불임 검사의 규모와 속도를 증가시킬 수 있습니다.

24 잘 조직 배양 플레이트를 사용하여 Aedes aegypti에 대한 개선 된 Fecundity 및 불임 분석 (EAgaL 플레이트)

여기서는 형광염을 마커로 사용하여 남성 Aedes aegypti의 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 여성 모기는 교화를 위해 표시되고 표시되지 않은 수컷 모두에 노출됩니다. 후 짝짓기, 그들의 정자는 그들의 짝짓기 파트너를 결정하기 위하여 형광 현미경의 밑에 검토됩니다.

형광염염을 사용하여 로다민 B, 남성 Aedes aegypti 모기에서 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위해

본 프로토콜은 실험실에서 tortricid 해충 곤충의 사육 방법을 설명합니다. 곤충의 성별을 구별하고 높은 처리량의 시퀀싱을 위해 핵산을 추출하는 절차는 두 개의 tortricid 해충을 사용하여 확립됩니다.

Tortricidae 해충 곤충의 대량 사육 및 분자 연구

여기에서 우리는 모델 유기체 C. elegans를 사용하여 배아 생존력과 생산된 배아(새끼)의 총 수를 결정하는 일반적인 방법을 제시합니다.

Caenorhabditis elegans의 배아 생존력 및 무리 크기 측정

본 프로토콜은 Aedes aegypti 모기의 생식력, 날개 크기, 생식력, 성비, 생존 능력, 발달 시간, 수컷 기여도 및 성체 수명을 포함한 일반적인 생명 매개 변수 데이터를 측정하는 방법을 설명합니다. 이러한 측정은 유전자 변형 모기의 적합성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

형질전환 Aedes aegypti 모기의 피트니스 비용 정량화

이 프로토콜은 예쁜꼬마선충(C. elegans)에서 RNAi 유도 침묵 및 관련 염색질 변형의 후성유전학적 유전을 연구하기 위한 RNA 간섭 및 ChIP 분석을 설명합니다.

형광 리포터 및 ChIP(Chromatin Immunoprecipitation)를 사용한 예쁜꼬마선충(C. elegans )의 세대 간 후성유전학적 유전 분석

배우세요 DAPI 염색을 활용한 Bemisia tabaci 수정률 측정 방법을 통해 하등배수 곤충의 생식 생태를 연구하세요. 이 기술은 3시간 내 완료되어 해충 관리 전략 수립에 활용됩니다.

Bemisia tabaci Cytogenetic 기술을 사용 하 여 계란 수정 속도 결정

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