Name: 생성, 증폭 및 재조합 호흡 Syncytial 바이러스의 적정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 48 s
Description: 학습하세요 BSR-T7/5 세포를 이용한 재조합 호흡 Syncytial 바이러스 생성 및 증폭 방법과 최적화된 플라크 분석법을 통해 바이러스 복제를 정량화하고 실시간으로 바이러스 내포체를 분석하는 기술을 익히세요.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 AZD4316 마약을 제공 하는 아 스 트 라 R & D, 석사, 미국 보스톤, 박사 진 유 감사 합니다. 저자는 Cymages 플랫폼 ScanR 올림푸스 현미경에 대 한 액세스에 대 한 감사는 의해 지원 되었다 지역 Ile-de-France (희미 한 상태)에서 부여 합니다. 저자는 INSERM과 베 르 사 이유 Saint-Quentin 대학에서 지원을 인정 한다.

<ol><li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015%3A+a+systematic+review+and+modelling+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> The Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li>
<li>Falsey, A. R., Hennessey, P. A., Formica, M. A., Cox, C., Walsh, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+Syncytial+Virus+Infection+in+Elderly+and+High-Risk+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Respiratory Syncytial Virus Infection in Elderly and High-Risk Adults.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (17), 1749-1759 (2005).</li>
<li>DeVincenzo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+Oral+ALS-008176+in+a+Respiratory+Syncytial+Virus+Challenge+Study%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Activity of Oral ALS-008176 in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (21), 2048-2058 (2015).</li>
<li>DeVincenzo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+GS-5806+Activity+in+a+Respiratory+Syncytial+Virus+Challenge+Study%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oral GS-5806 Activity in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (8), 711-722 (2014).</li>
<li>Afonso, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taxonomy+of+the+order+Mononegavirales%3A+update+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Taxonomy of the order Mononegavirales: update 2016.</a> Archives of Virology. 161 (8), 2351-2360 (2016).</li>
<li>Collins, P. L., Hill, M. G., Cristina, J., Grosfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+elongation+factor+of+respiratory+syncytial+virus%2C+a+nonsegmented+negative-strand+RNA+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transcription elongation factor of respiratory syncytial virus, a nonsegmented negative-strand RNA virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (1), 81-85 (1996).</li>
<li>Hoenen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+bodies+are+a+site+of+ebolavirus+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Inclusion bodies are a site of ebolavirus replication.</a> Journal of Virology. 86 (21), 11779-11788 (2012).</li>
<li>Heinrich, B. S., Cureton, D. K., Rahmeh, A. A., Whelan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+expression+redirects+vesicular+stomatitis+virus+RNA+synthesis+to+cytoplasmic+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Protein expression redirects vesicular stomatitis virus RNA synthesis to cytoplasmic inclusions.</a> PLoS Pathogens. 6 (6), e1000958(2010).</li>
<li>Lahaye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Characterization+of+Negri+Bodies+%28NBs%29+in+Rabies+Virus-Infected+Cells%3A+Evidence+that+NBs+Are+Sites+of+Viral+Transcription+and+Replication%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Functional Characterization of Negri Bodies (NBs) in Rabies Virus-Infected Cells: Evidence that NBs Are Sites of Viral Transcription and Replication.</a> Journal of Virology. 83 (16), 7948-7958 (2009).</li>
<li>Kolesnikova, L., Mühlberger, E., Ryabchikova, E., Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+organization+of+recombinant+Marburg+virus+nucleoprotein%3A+comparison+with+Marburg+virus+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural organization of recombinant Marburg virus nucleoprotein: comparison with Marburg virus inclusions.</a> Journal of Virology. 74 (8), 3899-3904 (2000).</li>
<li>Dolnik, O., Stevermann, L., Kolesnikova, L., Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marburg+virus+inclusions%3A+A+virus-induced+microcompartment+and+interface+to+multivesicular+bodies+and+the+late+endosomal+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Marburg virus inclusions: A virus-induced microcompartment and interface to multivesicular bodies and the late endosomal compartment.</a> European Journal of Cell Biology. 94 (7-9), 323-331 (2015).</li>
<li>Rincheval, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+organization+of+cytoplasmic+inclusion+bodies+in+cells+infected+by+respiratory+syncytial+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Functional organization of cytoplasmic inclusion bodies in cells infected by respiratory syncytial virus.</a> Nature Communications. 8 (1), 563(2017).</li>
<li>Santangelo, P. J., Bao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+filamentous+viral+RNPs+prior+to+egress%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Dynamics of filamentous viral RNPs prior to egress.</a> Nucleic Acids Research. 35 (11), 3602-3611 (2007).</li>
<li>Lifland, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Respiratory+Syncytial+Virus+Nucleoprotein+and+Inclusion+Bodies+Antagonize+the+Innate+Immune+Response+Mediated+by+MDA5+and+MAVS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Human Respiratory Syncytial Virus Nucleoprotein and Inclusion Bodies Antagonize the Innate Immune Response Mediated by MDA5 and MAVS.</a> Journal of Virology. 86 (15), 8245-8258 (2012).</li>
<li>Garcia, J., Garcia-Barreno, B., Vivo, A., Melero, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+inclusions+of+respiratory+syncytial+virus-infected+cells%3A+formation+of+inclusion+bodies+in+transfected+cells+that+coexpress+the+nucleoprotein%2C+the+phosphoprotein%2C+and+the+22K+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic inclusions of respiratory syncytial virus-infected cells: formation of inclusion bodies in transfected cells that coexpress the nucleoprotein, the phosphoprotein, and the 22K protein.</a> Virology. 195 (1), 243-247 (1993).</li>
<li>Brown, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+association+between+heat+shock+protein+70+and+the+respiratory+syncytial+virus+polymerase+complex+within+lipid-raft+membranes+during+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Evidence for an association between heat shock protein 70 and the respiratory syncytial virus polymerase complex within lipid-raft membranes during virus infection.</a> Virology. 338 (1), 69-80 (2005).</li>
<li>Radhakrishnan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+analysis+of+purified+respiratory+syncytial+virus+particles+reveals+an+important+role+for+heat+shock+protein+90+in+virus+particle+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Protein analysis of purified respiratory syncytial virus particles reveals an important role for heat shock protein 90 in virus particle assembly.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 9 (9), 1829-1848 (2010).</li>
<li>Racaniello, V. R., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloned+poliovirus+complementary+DNA+is+infectious+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cloned poliovirus complementary DNA is infectious in mammalian cells.</a> Science. 214 (4523), 916-919 (1981).</li>
<li>Schnell, M. J., Mebatsion, T., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+rabies+viruses+from+cloned+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Infectious rabies viruses from cloned cDNA.</a> The EMBO Journal. 13 (18), 4195-4203 (1994).</li>
<li>Collins, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+infectious+human+respiratory+syncytial+virus+from+cloned+cDNA+confirms+an+essential+role+for+the+transcription+elongation+factor+from+the+5%27+proximal+open+reading+frame+of+the+M2+mRNA+in+gene+expression+and+provides+a+capability+for+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Production of infectious human respiratory syncytial virus from cloned cDNA confirms an essential role for the transcription elongation factor from the 5' proximal open reading frame of the M2 mRNA in gene expression and provides a capability for vaccine.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (25), 11563-11567 (1995).</li>
<li>Rameix-Welti, M. -A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+replication+of+respiratory+syncytial+virus+in+cells+and+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Visualizing the replication of respiratory syncytial virus in cells and in living mice.</a> Nature Communications. 5, 5104(2014).</li>
<li>Buchholz, U. J., Finke, S., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+bovine+respiratory+syncytial+virus+%28BRSV%29+from+cDNA%3A+BRSV+NS2+is+not+essential+for+virus+replication+in+tissue+culture%2C+and+the+human+RSV+leader+region+acts+as+a+functional+BRSV+genome+promoter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Generation of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) from cDNA: BRSV NS2 is not essential for virus replication in tissue culture, and the human RSV leader region acts as a functional BRSV genome promoter.</a> Journal of Virology. 73 (1), 251-259 (1999).</li>
<li>Cianci, C., Meanwell, N., Krystal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+activity+and+molecular+mechanism+of+an+orally+active+respiratory+syncytial+virus+fusion+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antiviral activity and molecular mechanism of an orally active respiratory syncytial virus fusion inhibitor.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 55 (3), 289-292 (2005).</li>
<li>Derscheid, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+respiratory+syncytial+virus+memphis+37+grown+in+HEp-2+cells+causes+more+severe+disease+in+lambs+than+virus+grown+in+vero+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Human respiratory syncytial virus memphis 37 grown in HEp-2 cells causes more severe disease in lambs than virus grown in vero cells.</a> Viruses. 5 (11), 2881-2897 (2013).</li>
<li>McKimm-Breschkin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+plaque+assay+for+respiratory+syncytial+virus+-+direct+visualization+of+plaques+without+immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">A simplified plaque assay for respiratory syncytial virus - direct visualization of plaques without immunostaining.</a> Journal of Virological Methods. 120, 113-117 (2004).</li>
<li>Matrosovich, M., Matrosovich, T., Garten, W., Klenk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+low-viscosity+overlay+medium+for+viral+plaque+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+Journal%22%5BJournal%5D)">New low-viscosity overlay medium for viral plaque assays.</a> Virology Journal. 7, 1-7 (2006).</li>
<li>Novina, C. D., Sharp, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNAi+revolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The RNAi revolution.</a> Nature. 430 (6996), 161-164 (2004).</li>
<li>Sintchak, M. D., Nimmesgern, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+inosine+5%27-monophosphate+dehydrogenase+and+the+design+of+novel+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">The structure of inosine 5'-monophosphate dehydrogenase and the design of novel inhibitors.</a> Immunopharmacology. 47 (2-3), 163-184 (2000).</li>
<li>Beaucourt, S., Vignuzzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribavirin%3A+A+drug+active+against+many+viruses+with+multiple+effects+on+virus+replication+and+propagation.+Molecular+basis+of+ribavirin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Virology%22%5BJournal%5D)">Ribavirin: A drug active against many viruses with multiple effects on virus replication and propagation. Molecular basis of ribavirin resistance.</a> Current Opinion in Virology. 8, 10-15 (2014).</li>
<li>Hruska, J. F., Bernstein, J. M., Douglas, R. G., Hall, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ribavirin+on+Respiratory+Syncytial+Virus+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Effects of Ribavirin on Respiratory Syncytial Virus in vitro.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 17 (5), 770-775 (1980).</li>
<li>Simões, E. A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Past%2C+Present+and+Future+Approaches+to+the+Prevention+and+Treatment+of+Respiratory+Syncytial+Virus+Infection+in+Children%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Diseases+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Past, Present and Future Approaches to the Prevention and Treatment of Respiratory Syncytial Virus Infection in Children.</a> Infectious Diseases and Therapy. 7 (1), 87-120 (2018).</li>
<li>Alvarez, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference-mediated+silencing+of+the+respiratory+syncytial+virus+nucleocapsid+defines+a+potent+antiviral+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">RNA interference-mediated silencing of the respiratory syncytial virus nucleocapsid defines a potent antiviral strategy.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3952-3962 (2009).</li>
<li>DeVincenzo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-comtrolled+study+of+an+RNAi-based+therapy+directed+against+respiratory+syncytial+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A randomized, double-blind, placebo-comtrolled study of an RNAi-based therapy directed against respiratory syncytial virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (19), 8800-8805 (2010).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+of+a+CRISPR%2FCas9+library+for+functional+genomics+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening of a CRISPR/Cas9 library for functional genomics in human cells.</a> Nature. 509 (7501), 487-491 (2014).</li>
<li>Nikolic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negri+bodies+are+viral+factories+with+properties+of+liquid+organelles%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Negri bodies are viral factories with properties of liquid organelles.</a> Nature Communications. 8 (1), 58(2017).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

여기 선물이 5 플라스 미드에서 재조합 RSVs의 구조 하는 방법 및 그들의 증폭. 바이러스의 게놈을 조작 하는 기능 돌연변이 테스트 하 고 추가 유전자 또는 태그 바이러스 성 단백질을 표현 하는 바이러스학 연구를 혁명을 했다. RSV 우리 설명 하 고이 문서에서는 예를 들어 바이러스 취재 원 유전자, RSV-GFP (미 발표)와 M2-1 단백질 GFP 태그12에 융합 하는 표현으로 사용. RSV 구조 도전 이며 실천을 요구 한다. Transfection 효율은 transfection 시 약의 현명한 선택과 transfection 프로토콜의 이전 최적화에 따라 중요 합니다. 바이러스 성 cDNA는 다운스트림 T7 pol 발기인에에서 배치 역 유전자 벡터의 대부분 때문에 살 균 소 T7 폴을 표현 하는 셀의 사용은 필수. 대신은 vaccinia 바이러스 도우미에서에서 T7 폴을 표현 하는 것입니다. 그러나, T7 유류를 안정적으로 표현 하는 셀의 사용 두 바이러스 분리의 필요성을 방지 하...

인간의 RSV 유아 전세계1급성 호흡기 감염에 대 한 입원의 주요 원인입니다. 또한, RSV 성인 입원 및 사망 부담 노인2의 대부분과 인플루엔자에 비해 상당한 질병 부담으로 연결 됩니다. 있습니다 없습니다 백신 또는 특정 antivirals RSV에 대 한 약속 하지만 아직 신약 개발3,4에 있습니다. 복잡성과 RSV 곱셈의 정량화 기법의 무 거 움 antivirals 또는 현재 상당한 노력에도 불구 하 고 백신에 대 한 검색을 방해. 생체 외에서 RSV 곱셈의 정량화 분석 실험, 양적 현미경 검사 법, immunostaining, 플 라크 감소 cytopathic 효과의 분석에서 주로 구성 되어 힘 드는 시간과 비싼 방법에 따라 일반적으로 역전사 (qRT)-연쇄 반응 (PCR), 및 효소 연결 된 immunosorbent 분석 테스트. 수정 된 유전자와 같은 기자 유전자 표현 바이러스는 GFP 코딩, 같은 검 진을 위해 더 적당 한. 자동된 판 독자를 사용 하 여 결합, 기자 재조합 바이러스 유전자를 운반 할 수 있습니다 이러한 분석 표준화 및 높은 처리량을 위해 더 적당 한.
RSV는 엔벌로프된, nonsegmented 부정적인 감 RNA 바이러스 Pneumoviridae 가족, 순서 Mononegavirales5 Orthopneumovirus 속에 속하는입니다. RSV 게놈의 약 15, 지도자 및 트레일러와 인코딩 11 단백질의 transcriptional 단위 10 개 3'와 5' 말단에 noncoding 지역 포함 된 단일 스트랜드, 부정 감지 RNA 이다. 유전자는 다음과 같이 정렬 됩니다: 3'-NS1, NS2, N, P, M, SH, G, F, m 2 (m 2-1과 m 2-2 단백질에 대 한 인코딩) 및 L-5'. 게놈 RNA는 밀접 하 게 포장 하 여 nucleoprotein 서식 파일로 사용 하는 북 아 일 하 encapsidated 게놈 RNA, 바이러스 성 RNA 의존 RNA 중 합 효소 (RdRp) 전사 및 바이러스 성 RNA의 복제를 보장 합니다. 바이러스 성 RdRp 큰 단백질 L 당 뉴클레오티드 중 합 효소 활동을 운반의 구성, 그것의 필수 공동 인자 phosphoprotein P와 바이러스 성 녹음 방송으로 하는 M2-1 단백질 요소6. 감염 된 세포에서 RSV 세포질 포함 이라고 포함 시체 (IBs)의 형성을 유도 합니다. 형태학 상으로 비슷한 세포질 포함 여러 Mononegavirales7,8,,910관찰 되었습니다. RSV 바이러스 성 RNA 합성 따라서 바이러스 성 공장8,,911, 로 간주 될 수 있는 IBs에서 발생 하는 것을 보여주었다, 에볼라 바이러스, vesicular 구내 염 바이러스 (VSV), 광견병 바이러스에 대 한 최근 연구 12. 바이러스 공장 RNA 그리고 바이러스 성 RNA 합성에 필요한 바이러스 성 단백질을 집중 하 고 또한 포함 하는 세포질 단백질13,,1415,16, 17. IBs 전시 IB 관련 된과 립 (IBAGs), 집중 하 라는 기능 subcompartment는 새로 synthetized M2-1 단백질 함께 초기 바이러스 성 mRNA. 게놈 RNA와 L, P, 그리고 N IBAGs에서 검색 되지 않습니다. IBAGs는 액체 세포12의 속성을 전시 하는 IBs 안에 작은 동적 구형 구조. IBs 중앙 역할 바이러스 곱셈에 불구 하 고 아주 작은 자연, 내부 구조, 형성, 및이 바이러스 성 공장 운영에 대 한 알려져 있다.
한 cDNA에서 소아마비의 게놈의 식 198118첫 번째 전염 성 바이러스 성 복제의 생산을 사용할 수 있습니다. 단일 가닥 부정적인 RNA 바이러스, 그것 아니었다 1994 년까지 셀19 에 플라스 미드의 transfection를 다음 첫 번째 광견병 바이러스의 생산 장소를 했다. 첫 번째 플라스 미드 역 유전 위한 기반 시스템 RSV 199520에 출판 되었음. 역 유전학 바이러스학의 분야에서 큰 발전을이 끌고있다. 바이러스 성 게놈에 특정 수정 소개의 가능성 복제 및 RNA 바이러스의 병 인에 중요 한 통찰력을 제공 하고있다. 이 기술은 수정 대상된 시리즈를 통해 특정 감쇄 함으로써 백신의 개발을 촉진 또한 크게 있다. 크게 바이러스 곱셈의 급속 한 정량화를 허용 하는 게놈 수정 개선 항 바이러스 검사 및 행동의 그들의 모드의 연구.
앞서 설명한 유전자 변형된 RSVs 취득 남아 있다 섬세 한. 여기, 우리는 프로토콜 각각 RSV GFP 또는 RSV-M2-1-GFP를 표현 하는 재조합 HRSV 두 가지 유형의 만들을 선발. 이 프로토콜에서 우리는 새로운 재조합 형 바이러스로 바이러스 주식 높은 titer, 재현성 실험에 적합을 얻기 위해 그들의 증폭을 구출 하는 데 필요한 transfection 조건 설명 합니다. 반전 유전학 벡터의 건설 라기보다 여기 설명 되지 않은입니다. 우리 할 최적의 수확 및 바이러스 성 주식의 동결에 대 한 방법을 설명 합니다. 바이러스 성 전염 성 입자를 계량 하는 가장 정확한 방법은 패 분석 실험에 남아 있다. 셀 직렬 희석 분석 된 서 스 펜 션의 감염 되며는 상쾌한에 무료 바이러스 성 입자의 유포를 금지 하는 오버레이 함께 알을 품을. 이러한 조건에서 바이러스는 각 초기 전염 성 입자에 대 한 "패"를 형성 하는 인접 셀만 감염 됩니다. 기존 RSV 적정 분석 결과, 플 라크는 immunostaining에 의해 공개 하 고 현미경 관찰에서 계산. 이 메서드는 비싸고 시간이 많이 소요. 여기 우리는 육안으로 보이는 플 라크의 형성을 가능 하 게 미정 질 셀 루 로스 오버레이 사용 하 여 RSV 패 분석 결과 대 한 매우 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 우리가 측정 RSV 복제 하 고, 따라서, RSV GFP를 사용할 수 있습니다 어떻게 보여 antivirals의 영향을 계량화. 역 유전학 및 라이브 이미징 기술을 결합, RSV-M2-1-GFP 과학자 M2-라이브 셀에 1을 시각화 하 고 세포내 바이러스 구조, IBs 등의 역학 관계에 따라 있도록 하는 방법을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>35 mm &micro; 라이브 셀 이미징용 접시</td><td>Ibidi</td><td>81156</td><td></td></tr><tr><td>A549</td><td>ATCC</td><td>ATCC CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Avicel RC-591</td><td>FMC BioPolymer</td><td>Avicel RC-591 Avicels</td><td>에 대한 기술 및 기타 정보는 http://www.fmcbiopolymer.com 에서 확인할 수 있습니다. 실온에서 보관하십시오. 4단계의 프로토콜은 이 시약에 최적화되어 있습니다.</td></tr><tr><td>BSRT7/5</td><td></td><td>상용화되지 않음</td><td>참조 22를 참조하십시오. Buchholz et al. 1999</td></tr><tr><td>크리스탈 바이올렛 용액</td><td>시그마</td><td>HT90132</td><td></td></tr><tr><td>관측용 형광 현미경</td><td>Olympus</td><td>IX73 올림푸스 현미경</td><td></td></tr><tr><td>비디오 현미경</td> 현미경 <td>ScanR</td><td>올림푸스 현미경</td><td></td></tr><tr><td>HEp-2</td><td>ATCC</td><td>ATCC CCL-23</td><td></td></tr><tr><td>HEPES &ge; 99.5%</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민(200m)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25030024</td><td></td></tr><tr><td>리포펙타민 2000 시약</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>프로토콜 2.3.이 이 시약에 최적화되어 있습니다.</td></tr><tr><td>MEM (10x), 글루타민 없음</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>MEM, GlutaMAX 보충제</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41090-028</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 ReagentPlus, &ge; 99.5%</td><td>Sigma</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I 환원 혈청 매체</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>51985-026</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드 수용액, 32%, EM 등급</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15714</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>플라스미드는</td><td></td><td>상업적으로 이용 가능</td><td>하지 않습니다.참조 21를 참조하십시오. Rameix-Welti et al. 2014</td></tr><tr><td>See Saw Rocker</td><td>VWR</td><td>444-0341</td><td></td></tr><tr><td>Si RNA GAPDH</td><td>Dharmacon</td><td>ON-TARGETplus siRNA D-001810-10-05</td><td>SMARTpool 및 Dharmacon에서 설계한 4개의 개별 siRNA 중 3개.</td></tr><tr><td>Si RNA IMPDH2</td><td>Dharmacon</td><td>ON-TARGETplus siRNA IMPDH2 Pool- Human L-004330-00-0005</td><td>Dharmacon. 개별 참고 문헌 및 서열 J-004330-06: GGAAAGUUGCCCAUUGUAA; J-004330-07: GCACGGCGCUUUGGUGUUC; J-004330-08: 아그구카아우카카아아우우; J-004330-09: GGUAUGGGUUCUCGAUG;</td></tr><tr><td>Si RNA RSV N</td><td>Dharmacon</td><td>ON-TARGETplus custom siRNA</td><td>UUCAGAAGAACUAGAGGCUAU 및 UUUCAUAAAUUCACUGGGUUA</td></tr><tr><td>SiRNA NT</td><td>Dharmacon</td><td>ON-TARGETplus Non-targeting Pool</td><td></td></tr><tr><td>SiRNA 형질주입 시약</td><td>Dharmacon</td><td>DharmaFECT 1 Ref: T-2001-03</td><td>프로토콜 5.1단계 및 5.1.2단계는 이 시약에 최적화되어 있습니다.</td></tr><tr><td>중탄산나트륨 7.5% 용액</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25080094</td><td></td></tr><tr><td>분광형광계</td><td>Tecan Tecan</td><td>무한 M200PRO</td><td></td></tr></tbody></table>

생성, 증폭 및 재조합 호흡 syncytial 바이러스의 적정

Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses

재조합 형 바이러스를 사용 하 여 기본 또는 적용 바이러스학에 중요 한 되고있다. 역 유전학 둘 다 바이러스 성 복제 메커니즘을 해독 하 고 antivirals 연구 개발 플랫폼을 제공 하는 백신에 대 한 매우 강력한 기술 될 입증 되었습니다. 그러나 건설 및 부정적인 물가 RNA 바이러스 호흡 syncytial 바이러스 (RSV)에 대 한 역방향 유전자 시스템의 조작, 섬세 한 남아 있고 특별 한 노하우를 필요로 합니다. RSV 게놈은 약 15 kb는 모두 바이러스 성 RNA 복제 및 전송에 대 한 서식 파일의 단일 스트랜드, 부정 감지 RNA 이다. 우리의 역 유전학 시스템 인간의 RSV 긴 긴장 게놈 (HRSV)의 cDNA 사본을 사용합니다. 이 cDNA, 뿐만 아니라 cDNAs 바이러스 성 단백질의 중 합 효소 복잡 한 인코딩 (L, P, N 및 m 2-1) 개별 식 벡터 T7 중 합 효소 컨트롤 시퀀스 아래에 배치 됩니다. T7 중 합 효소는 안정적으로 표현, BSR-T7/5 셀에 이러한 요소의 transfection 세포질 복제와 재조합 RSV의 전사 유전자 변형된 virions를 야 기한 있습니다. BSRT7/5의 문화 상쾌한와 세포 표면에는, 새로운 RSV 감염 바이러스 성 확대를 위한 인간 형 간염-2 셀에 수집 됩니다. 증폭의 2 개 또는 3 라운드 1 x 106 1 x 107 플 라크 형성 단위 (PFU)를 포함 하는 바이러스 성 주식을 얻기 위해 필요 / mL. 최적의 수확, 냉동, 및 바이러스 성 주식의 적정 방법 자세히 여기 설명 합니다. 우리 무료 녹색 형광 단백질 (GFP) (RSV-GFP)를 표현 하는 각각 두 개의 재조합 형 바이러스를 만들어 여기에 제시 된 프로토콜을 설명 하거나 바이러스 M2-1 융합 GFP (RSV-M2-1-GFP). 우리 RSV-GFP를 사용 하 여 계량 RSV 복제와 RSV-M2-1-GFP 비디오 현미경 검사 법 기술을 사용 하 여 살아있는 세포에서 바이러스 성 단백질 역동성 뿐 아니라 바이러스 성 구조를 시각화 하는 방법을 보여 줍니다.

이 작품에서 우리는 (그림 2) 형광 단백질을 표현 하는 재조합 RSV 바이러스를 생산 하는 상세한 프로토콜을 설명. PRSV-GFP, GFP 유전자가 이전에 게시 작업21벚꽃 유전자에 대 한 설명 된 대로 P와 M 유전자 사이 도입 되었다. pRSV-M2-1-GFP, M2 유전자가 온전히 남아 그리고 SH와 G 유전자12사이 삽입 했다 M2-1-GFP에 대 한 추가 유전자 코딩. BSRT7/5 셀, 바이러스의 구조에 해당 하는 첫 번째 단계는 그림 2A에 표시 됩니다. 녹색 형광 세포의 작은 클러스터 RSV GFP와 RSV-M2-1-GFP 구조에 해당 하는 우물에서 보이는 72 h posttransfection 했다. 형광 신호 세포질에 GFP RSV 감염 된 세포에서 핵 무료 ...

우리를 생성 하는 방법을 설명 하 고 RSVs에 대 한 호흡 syncytial 바이러스 (RSVs)와 최적화 된 패 분석 결과 수정 유전자 증폭. 우리는 두 재조합 바이러스는 각각 RSV 복제의 정량화를 허용 하 고 라이브 RSV 포함 몸과 포함 시체 관련 된과 립 역동성의 분석을 생성 하 여이 프로토콜을 설명 합니다.

생성, 증폭 및 재조합 호흡 Syncytial 바이러스의 적정

The use of recombinant viruses has become crucial in basic or applied virology. Reverse genetics has been proven to be an extremely powerful technology, ...

재조합 바이러스의 사용은 바이러스 복제 메커니즘을 해독하고 백신을 위한 개발 플랫폼을 제공하기 위한 강력한 기술입니다. 마찬가지로, 좋은 품질의 바이러스 성 주식의 세대는 응용 연구에 가장 기본적인 연구에서 모든 바이러스 연구에 매우 중요합니다. 재조합 바이러스의 구조, 최적의 수확, 동결 및 RSV 주식의 적정은 모든 바이러스 학적 연구에 대한 중요한 방법입니다.그들은 전통적인 것으로 간주 될 수 있지만 섬세 하 게 남아 특정 전문 지식이 필요. 전일, 밀리리터 농도당 0.5백만 개의 세포에서 완전한 배지에서 BSR-T7/5 세포를 중단한다. 6웰 플레이트에 잘 셀 서스펜션의 2밀리리터를 분배합니다.다음날 80~90%에 도달할 때까지 이산화탄소를 5%로 섭씨 37도에서 배양합니다. 각 바이러스를 구출하기 위해 먼저 튜브에 해동 된 역 유전학 벡터를 혼합 한 다음 트랜스페션 시약 제조업체의 프로토콜에 따라 트랜스페션으로 진행합니다. 다음으로 혼합 벡터에 감소된 혈청 배지의 250 마이크로리터를 추가합니다.또 다른 튜브에서, 감소된 혈청 매체의 250 마이크로리터에서 이 형질 시약의 10 마이크로리터를 희석시. 튜브를 부드럽게 소용돌이쳐 5분간 기다립니다. 두 튜브의 내용을 혼합하고 실온에서 20 분 동안 기다립니다.한편, BSR-T7/5 세포를 혈청 배지 1밀리리터로 헹구고 1.5밀리리터의 최소 필수 항생제 항생제를 웰당 10%의 태아 종아리 혈청으로 보충한다. 필요한 경우 이산화탄소 환경의 섭씨 37도에서 배양하십시오. 20분 간 배양한 후, 각 우물에 500마이크로리터의 형체를 넣습니다.3일 동안 5%의 이산화탄소 환경에서 37도의 섭씨에서 세포를 배양합니다. 구조 효율을 모니터링하려면 하루에 한 번 20배 배율로 반전된 형광 현미경으로 GFP 형광에서 관찰하십시오. 트랜스펙션의 셋째 날에, 전감염된 BSR-T7/5 6웰 플레이트의 각 우물에 있는 스크래치 세포.세포와 상체를 각각의 상체를 멸균 2 밀리리터 미세원심분리기 튜브로 옮기다. 세포막에서 구조된 바이러스를 방출하기 위해 각 튜브를 30초 이상 격렬하게 소용돌이킵니다. 구조된 바이러스의 첫 번째 증폭을 위해, 먼저 전날 시드된 HEp-2 플레이트로부터 배양 배지를 제거한 다음, 신선한 통로 제로 바이러스 현탁액의 웰당 500 마이크로리터를 신속하게 추가한다.HEp-2 플레이트를 시소 로커에 섭씨 37도에 두어 2시간 동안 부드러운 교반을 합니다. 구조 된 바이러스의 첫 번째 통로를 생성하려면 inoculum의 500 마이크로 리터를 버리고 2 % FCS로 MEM의 2 밀리리터를 추가하십시오. 3일 동안 이산화탄소 5%에서 37도의 플레이트를 배양합니다.20X 배율에서 반전형 형광 현미경하에서 감염을 모니터링하려면 하루에 한 번 통로 제로 현탁액에 감염된 HEp-2 세포의 GFP 형광을 관찰한다. 밝은 필드 현미경에서, RSV 세포 병증 효과를 반영하는 작은 syncytia 및 세포 분리의 외관을 관찰합니다. 구조된 바이러스를 증폭시키기 위하여는, 먼저 FCS 가 없는 MEM의 바이러스 현탁액을 희석하여 밀리리터 당 50, 000 PFU에서 3밀리리터 서스펜션을 획득한 다음 HEp-2 플라스크에서 배지를 제거한다.3밀리리터 바이러스 현탁액을 빠르게 추가하고 2시간 동안 부드러운 교반을 위해 시소 로커에 섭씨 37도의 플라스크를 배양합니다. 다음으로 접종을 제거하고 폐기하고 2 %의 FCS로 MEM의 15 밀리리터를 추가합니다. 2~4일 동안 이산화탄소 5%에서 섭씨 37도에서 배양합니다.바이러스를 수확하는 적당한 시간을 추정하기 위하여는, 20X 배율에서 반전된 형광 현미경의 밑에 세포 형태와 GFP 형광을 확인하십시오. 이는 일반적으로 HEp-2 세포 층의 50%에서 80%가 감염 후 48시간 에서 72시간 사이에 발생하는 RSV 세포병증 효과로 인해 분리될 때입니다. 다음으로 셀 스크레이퍼를 사용하여 모든 세포를 긁어냅니다.세포와 상체를 함께 수집하고 50 밀리리터 원심 분리 튜브로 옮기십시오. 10X RSV 보존 솔루션의 부피의 1/10을 추가합니다. 튜브를 5초 동안 활발하게 소용돌이시키고 원심분리기는 200배g에서 5분간 소용돌이어 서스펜션을 명확히 합니다.상체를 50밀리리터 튜브로 옮기십시오. 소용돌이와 알리텍은 알코올 내성 태그로 표시된 극저온 튜브의 서스펜션을 간략하게 알리쿼트합니다. 튜브를 미리 식히고 영하 80도 알코올을 최소 한 시간 동안 담그고 영하 80도에서 보관하십시오.플라크 적정 분석법을 수행하기 위해 먼저 멸균 물로 상업용 10X MEM을 희석하고 L-글루타민, 밀리리터 페니실린 당 1, 000 단위, 밀리리터 연쇄 상감 절제술당 1 밀리그램을 추가하여 2배 최소 필수 매체를 만듭니다. 희석을 활발하게 흔들어 섭씨 4도에 보관한 다음 FCS가 없는 MEM 의 마이크로리터 900개를 6개의 튜브에 추가합니다. 바이러스 알리쿼트해와 5초 동안 적극적으로 소용돌이를 가합니다.직렬 희석을 만들기 위해 먼저 바이러스의 마이크로리터 100마이크로리터를 첫 번째 튜브에 있는 배지의 900 마이크로리터에 추가합니다. 튜브에 캡을 놓고 몇 초 동안 소용돌이를 통해 내용을 혼합한 다음 두 번째 튜브에서 배지의 900 마이크로 리터에 첫 번째 희석제 100 마이크로리터를 추가합니다. 튜브와 소용돌이에 캡을 넣습니다.여섯 번째 튜브까지이 절차를 반복합니다. HEp-2 12웰 플레이트에 바이러스 이름과 전체 희석을 적는다. 얼룩이 있는 동안 분리될 수 있으므로 플레이트와 덮개에 맞게 마크를 추가합니다.플레이트에서 배지를 제거하고 400 마이크로리터를 잘 분배합니다. 바이러스 흡착을 위해 2시간 동안 섭씨 37도에서 플레이트를 배양합니다. 바이러스 흡착 시, 2X MEM의 pH를 약 7.2로 조정하여 미세결정 셀룰로오스 오버레이를 먼저 조절하여 멸균 나트륨 중탄산염 용액을 7.5%로 조절한다.오버레이 100밀리리터를 얻으려면 2X MEM 10밀리리터, 2.4%의 단결정 셀룰로오스 서스펜션 10개, MEM의 밀리리터 80개를 2%FCS로 보충하고 적극적으로 혼합합니다. 2시간 배양이 끝나면 접종을 제거하지 않고 12웰 플레이트의 각 웰에 오버레이2~3밀리리터를 넣습니다. 6일 동안 이산화탄소 5%에서 섭씨 37도에서 플레이트를 배양합니다.크리스탈 바이올렛 용액으로 세포를 염색하려면 먼저 판을 부드럽게 흔들어 미세 결정 셀룰로오스 오버레이를 벗습니다. 수퍼나티를 제거하고 1X PBS로 세포를 두 번 씻은 다음 크리스탈 바이올렛 용액의 1 ~2 밀리리터를 추가하고 10 - 15 분 기다립니다. 후속 판 염색을 위해 재사용할 수 있는 용액을 제거합니다.마지막으로 바이러스 티터를 건조 플레이트의 우물에 보이는 플라크 수와 접종 부피 및 희석의 일부로 계산합니다. 음수 조절에 대한 플라크 분석법을 수행하여 N, P, L 및 M2-1의 발현 플라스미드만으로 감염되어 가장 낮은 희석에서 플라크가 없음을 드러냈습니다. 상기 전지로부터 얻은 티터는 구조가 효율적이라면 밀리리터당 100PFU 이상이 될 것으로 예상되었다.이 티터는 통로를 통해 1~2번 의 통로에서 밀리리터당 100만 PFU에 도달했습니다. 이러한 형광 바이러스 덕분에, 단백질 N과 세포 단백질 IMPDH를 표적으로 하는 siRNA에 의한 RSV 발현의 억제를 쉽게 관찰하고 측정할 수 있다. 대조적으로, 비표적화 siRNA 또는 세포 단백질 GAPDH에 대하여 siRNA로 전감염된 세포 세포에 대한 강력한 GFP 신호가 관찰되고 측정되었다.마찬가지로 이러한 바이러스는 항바이러스 화합물에 의한 RSV 곱셈억제의 쉬운 관찰을 가능하게 했다. HEp-2 감염 된 세포에서 형광 단백질 M2-1을 추적 하는 것은 매우 동적 구조로 IB와 IB 관련 과립을 보였다. IB는 융합하고 더 큰 구형 포함을 형성 할 수있는 모바일 및 구형 구조로 관찰되었다.IB 관련 과립은 성장하고, 큰 IB 관련 과립으로 융합한 다음 사라진 작은 IB 관련 과립의 형성과 함께 지속적인 조립 분해 주기를 겪었습니다. 미세 결정 셀룰로오스 오버레이를 사용하여 RSV의 플라크 적정 프로토콜은 다른 세포 및/또는 기타 바이러스에 쉽게 적응될 수 있다. 그것은 미세 결정 셀룰로오스의 농도를 조정해야합니다.

generation-amplification-titration-recombinant-respiratory-syncytial

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 호흡기 세포융합 바이러스(RSV)에 대한 중화 항체를 측정하기 위한 분석을 보여줍니다. RSV 중화 항체가 포함된 혈청을 사용한 사전 배양은 바이러스 입자를 중화하여 세포 감염 및 플라크 형성을 줄입니다. 그런 다음 바이러스에 감염된 세포는 플라크 시각화를 위해 고정, 차단 및 형광단 접합 항체 표지를 받습니다. 이 과정을 통해 RSV의 50%를 중화하는 가장 높은 혈청 희석액을 식별할 수 있으며, 이는 중화 역가를 나타냅니다.

호흡기 세포융합 바이러스에 특이적인 중화항체 역가를 측정하기 위한 분석

인간 호흡기 세포융합 바이러스(HRSV)는 어린 유아에게 심각한 세기관지염을 유발할 수 있습니다. 중증 HRSV 질환의 발병 기전 중 일부는 숙주 면역 반응에 의해 발생합니다. HRSV를 이용한 일차 인간 면역 세포의 자극은 염증 경로 및 감염의 활성화를 연구하기 위한 빠르고 재현 가능한 모델 시스템을 제공합니다.

인간 호흡기 세포융합 바이러스 감염에 대한 인간 말초 혈액 단핵 세포의 면역 반응을 연구하기 위한 체외 모델

높은 처리량,이 연구에 설명 합니다 호흡 syncytial 바이러스 (RSV)에 대 한 특정 중화 항 체 titer를 확인 하려면 이미징 기반 마이크로 중화 분석 결과. 이 분석 결과 형식은 다른 샘플 형식에 대해 테스트 되었습니다.

향상 된 높은 처리량 호흡 Syncytial 바이러스 (RSV) 마이크로 중화 분석 결과

여기에서, 우리는 병원체 복구 및 전사체 분석에 선행된 더 낮은 호흡기관에 주입의 비침범성 경로를 제공함으로써 이차 세균성 폐렴 연구를 향상시키는 방법을 제시한다. 이러한 절차는 재현 가능하며 캐뉼라, 가이드 와이어 또는 광섬유 케이블과 같은 특수 장비 없이도 수행할 수 있습니다.

이차 세균성 폐렴의 뮤린 모델을 위한 정확한 병원균 전달 및 회복 시스템

호흡기 싱크량 바이러스(RSV) RNA 합성의 심층 기계분석의 경우, 바이러스 특이적 뉴클레오캡시드(NC)의 후속 체외 조립을 위해 RNA-프리 뉴클레오프로틴(N0)의 공동발현을 위해 샤페론 인포단(P)을 활용하는 프로토콜을 보고한다.

호흡기 싱크량 바이러스의 바이러스 특이적 뉴클레오캡시드의 생성 및 조립

플라스미드 DNA의 인플루엔자 바이러스의 구조는 독감 연구자 인플루엔자 바이러스의 생물학의 여러 측면을 연구하는 재조합 바이러스를 생성하고, 잠재적인 벡터 또는 백신으로 사용할 수있는 기본적인 필수 실험 기법입니다.

플라스미드 DNA의 재조합 독감 바이러스의 생성

에서 유전자의 구조와 기능 분석의 효율적인...

B 세포의 재조합 생산 및 Retroviral 감염

단백질 misfolding의 순환 증폭 (PMCA)는 prion 변환과 변형 및 종 장벽의 연구에서 시험 관내 분석이다. 또한 prion 검출 분석으로 사용할 수 있습니다.

Prions의 단백질 Misfolding의 순환 증폭

이 보고서의 연구 결과와 결론은 저자의 이러한하며 반드시 질병 통제 예방 센터 (CDC)의 의견을 대표하지 않습니다.

양극화 인간기도 액체 덮인 문화를 구축 호흡기 병원균에 대한 숙주 세포 응답을 공부하는 상피 Calu-3 전지<em&gt; 체외에서</em

복제 cDNA를 같은 유전자를 역 참조 방식에서 재조합 arenaviruses의 구조는 연구자 arenavirus의 생물학의 다양한 측면, 특정 바이러스 유전자 산물의 역할뿐만 아니라, 서로 다른 특정 도메인 및 잔류의 기여를 조사 할 수 있습니다 . 마찬가지로, 인간의 병원성 arenaviruses을 방지하기 위해 효과적이고 안전한 백신의 생성에 새로운 가능성을 제공하는 백신 개발을위한 FDA 승인 세포주 (베로)의 유전학 기술을 역으로 수행합니다.

FDA 승인 베로 세포 백신 개발을위한 재조합 Arenavirus의 생성

학습하세요 BSR-T7/5 세포를 이용한 재조합 호흡 Syncytial 바이러스 생성 및 증폭 방법과 최적화된 플라크 분석법을 통해 바이러스 복제를 정량화하고 실시간으로 바이러스 내포체를 분석하는 기술을 익히세요.

생성, 증폭 및 재조합 호흡 Syncytial 바이러스의 적정

더 많은 동영상 탐색