축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술
2020년 5월 5일
이 프로토콜은 부상의 다양한 유도 패턴의 설명을 포함하여 쥐 모델에서 안면 신경 수술에 대한 재현 가능한 접근 방식을 설명합니다.
이 프로토콜은 과학자들이 안면 신경 부상 과 많은 다른 매개 변수에 걸쳐 재생을 개선하는 방법 후 결과를 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 쥐 해부학은 안면 신경에 쉽게 접근 할 수 있다는 것입니다, 그것의 큰 규모는 우리가 관련된 부상 패턴을 모두 연구 할 수 있습니다. 이 기술의 응용 프로그램은 안면 신경 부상 후 환자의 재활로 확장.
재생 가능성으로 쥐는 재현 가능한 실험 모델을 제공합니다. 그리고이 방법은 안면 신경 마비 또는 마비를 위한 외과 및 의학 치료에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 그리고 다른 머리와 목 모델 이나 다른 말 초 신경에 번역.
양손을 사용하여 현미경으로 작동하는 것은 어려울 수 있습니다. 안면 신경 해부를 시도하기 전에 현미경으로 쌍안경 버전을 사용하는 것이 좋습니다. 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 쥐의 눈에 연고를 적용하고 수술 영역을 면도.
쥐 식별 을위한 방법을 설정하고 목 아래에 거즈 롤을 배치합니다. 노출된 피부를 3개의 번갈아 클로르헨시딘과 70%에탄올 스크럽으로 소독하고 쥐를 스테레오 현미경 아래에 놓습니다. 전방 후방 방향으로 입시측 귀를 조작하여 후분 피부의 자연적인 접이식을 결정합니다.
숫자 15 블레이드를 사용하여 후경에 2~3밀리미터 절개를 합니다. 절개 계획 및 배치는 상처 크기를 최소화하면서 안면 신경의 신뢰할 수 있는 식별을 보장하는 가장 중요한 단계입니다. 즉각적인 피하 근막을 무뚝뚝하게 해부하고 조직 노출을 향상시키기 위해 마이크로 바이틀란어 리트랙터를 배치합니다.
두개골 기지를 따라 삽입을 향해 열등한 방향으로 이동할 때 전방 디거스컬 근육을 식별합니다. 근육 삽입 점을 따라 근육 배를 통해 부드럽게 퍼져 전방 디거스산 배의 힘줄을 드러냅니다. 힘줄은 두개골 베이스에 고체 삽입과 근육에서 방출 필름 흰색 과정으로 나타납니다.
전방 디거스트릭 근육과 힘줄을 식별한 후 Weitlaner 리트랙터를 조정하여 근육 배를 더 후퇴시킵니다. 노출된 부위는 안면 신경의 주요 트렁크가 있는 입체 공간입니다. 틸로마스토이드 포맨의 출구에서 열등한 방향으로 신경을 따라 해부한다.
호감 부상 패턴을 유도하려면 매끄러운 표면의 주얼러 의 집게를 사용하여 30 초 동안 일정하고 재현 가능한 압력을 가하는 신경을 단단히 잡고 압축하여 적절한 호감 부상을 보장하십시오. 간단한 절단을 위해 미세 한 이빨 집게로 신경을 덮는 즉각적인 에피뉴리움을 잡고 날카로운 미세 시체를 사용하여 원하는 지점에서 신경을 단 한 번 잘라 내어 깨끗하게 변형시니다. 신경 갭 모델의 경우 조절 가능한 캘리퍼를 사용하여 원하는 신경 신경 갭 길이를 설정하여 동물 간의 유사한 부상 패턴을 보장하고 방금 입증된 것처럼 신경을 트랜스펙트합니다.
실험적 부상이 전달된 후, 멸균 식염수로 상처를 관개하고 멸균 거즈로 조직을 건조시다. 기관 지침에 따라 피부 절개를 닫기 전에. 여기서, 호감 부상을 가진 안면 신경의 주요 트렁크의 라이브 이미징이 성인 트랜스제닉 Thy1-GFP 쥐에서 제1 PES의 분기지점에 약 2~3밀리미터 의 질반이 나타난다.
1, 2, 3 및 4 주 후 상해에서 형광의 점진적 반환의 평가는 이 형질전환 동물에 있는 신경 재생을 감시하기 위한 마커로 이용될 수 있습니다. 조직학적 분석은 축축경 직경, 이물질의 양, 신경 섬유, 신경 섬유, 신경 비율 및 밀도 측정의 정량화를 허용하는 한계 하악 분열의 단면 이미지를 얻는 데 사용될 수 있다. 안면 신경을 식별할 때 관련 해부학 신경이 보이는지 확인하기 위해 필요에 따라 re트랙터의 배치를 자주 조정하는 것이 중요합니다.
이 절차에 따라 관련 신경 및 근육은 다른 실험 군에 비해 재생 정도를 평가하기 위해 면역 조직화학 분석을 위해 수확될 수 있다. 그것의 발달 후에, 이 기술은 안면 신경 상해 후에 기능적인 결과를 공부하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 구체적으로, synkinesis의 현상을 미치는 방법.
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개요
본 프로토콜은 쥐 모델을 이용한 안면신경 수술의 재현 가능한 접근 방식을 상세히 다루며, 특히 손상 패턴과 재생 결과에 초점을 맞춥니다. 이는 안면신경 손상 재활을 위한 수술 기법 및 의학적 치료법 연구를 용이하게 합니다.
주요 연구 구성 요소
과학 분야
- 신경과학
- 재생 의학
- 동물 모델
배경
- 쥐 모델은 안면 신경에 쉽게 접근할 수 있게 해줍니다.
- 이 수술 기법은 신경 손상 및 재생 방법을 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다.
- 쥐의 해부학적 특징을 통해 다양한 손상 패턴에 대한 세밀한 연구가 가능합니다.
연구 목적
- 안면신경 마비 또는 불완전 마비에 대한 치료적 접근법을 평가합니다.
- 안면신경 손상 후 재생에 대한 이해를 높입니다.
- 여러 연구에서 재현 가능한 상세한 수술 기법을 개발합니다.
사용된 방법
- 본 연구는 안면신경 수술적 개입을 위해 쥐 모델을 사용합니다.
- 주요 절차에는 압착 손상과 절단이 포함되며, 신뢰성 확보를 위해 구체적인 수술 단계가 기술되어 있습니다.
- 재생 결과를 모니터링하기 위해 생체 이미징 및 조직 형태 분석이 사용됩니다.
- 현미경 하에서의 체계적인 해부가 강조되며, 이를 위해 숙련된 기술과 준비가 필요합니다.
주요 결과
- 안면신경의 성공적인 시각화 및 조작을 통해 재생 과정을 평가할 수 있습니다.
- 형광 이미징과 조직형태계측학적 분석은 신경 회복에 대한 정량적 측정 지표를 제공합니다.
- 본 기술은 신경 손상 후 발생하는 연합운동(synkinesis) 현상에 대한 중요한 통찰을 제시합니다.
결론
- 본 연구는 안면 신경 손상 및 재생 분석을 위한 기초 프로토콜을 확립합니다.
- 이를 통해 연구자들은 신경 재활의 기능적 결과와 치료적 접근법을 탐구할 수 있습니다.
- 본 방법론은 말초 신경 연구의 광범위한 응용 분야에 있어 중요한 시사점을 제공합니다.
자주 묻는 질문
산업적 관련성 요약
쥐 안면신경 손상 모델은 축삭 재생 및 억제를 평가할 수 있는 재현 가능한 플랫폼을 제공하며, 신경 재생 치료제 개발에 있어 표적 검증을 지원합니다. 이 모델의 확장성과 해부학적 접근성은 손상 패턴과 재생 반응의 일관된 평가를 가능하게 하여, 신경 영양 인자 또는 억제 방지 후보 물질의 전임상 위험 제거(de-risking)를 용이하게 합니다. 본 모델은 인간의 안면신경 복구 전략과 관련하여 정량화 가능한 조직형태측정학적 및 기능적 판독 값을 제공함으로써, 기초 발견 연구와 중개 연구를 연결합니다.
바이오 제약 R&D의 전략적 응용
초기 발견 및 타겟 검증
- 과학적 가치: 정의된 신경 압착, 절단 또는 간격 손상 후의 축삭 억제 기전 및 재생 경로의 조사를 가능하게 합니다.
- 운용적 가치: 표적 결합 및 경로 조절을 평가하기 위해 신경 활성 시약 또는 세포의 일관된 전달을 지원합니다.
- 예측적 가치: 축삭 직경, 섬유 밀도 및 잔해 제거의 조직형태계측학적 정량화를 통해 표적 효능 및 기전적 리스크 감소를 위한 객관적 지표를 제공합니다.
스크리닝 및 분석법 개발
- 분석 준비도: 재생 촉진 화합물 또는 억제성 길항제의 높은 재현성 스크리닝에 적합한 표준화된 손상 모델을 생성합니다.
- 정량적 출력: 형광 표지된 축삭의 라이브 이미징과 조직 형태 측정 분석을 통해 종단적이고 정량화 가능한 재생 추적이 가능합니다.
- 확장성: 쥐 모델은 두개 내에서 두개 외 신경 분절에 이르는 외과적 조작이 가능하여 다중 파라미터 평가를 지원합니다.
중개 및 전임상 연구
- 중개적 연속성: 안면 신경 재활의 임상적 종점과 일치하도록 기능적 회복 및 합성 운동(synkinesis) 완화 평가를 용이하게 합니다.
- 전임상 모델링: 질병 관련 말초 신경계에서 중추 또는 말단 기관 조작 및 세포 치료의 평가를 가능하게 합니다.
- 위험 조정 발전: 신뢰할 수 있는 생존율과 종 간 일관성을 통해 고위 종으로의 중개 전 go/no-go 결정을 지원합니다.
파이프라인 및 워크플로 통합
이 모델은 조절된 신경 손상을 통한 표적 검증을 가능하게 하고, 화합물 스크리닝을 위한 분석법 개발로 이어지며, 기능적 및 구조적 결과 측정치를 통해 재생 치료법의 전임상 평가를 지원함으로써 신약 발견 워크플로우에 통합됩니다.
- 발견 생물학: 표준화된 손상 패러다임을 통해 축삭 성장 억제제 및 촉진제에 대한 가설 검증을 용이하게 합니다.
- 스크리닝: 재생 역학 및 충실도에 미치는 화합물의 효과를 평가하기 위해 재현 가능한 신경 손상 모델을 제공합니다.
- 분석: 조직 형태 측정 및 형광 기반 리드아웃을 통해 용량-반응 및 표적 결합 분석을 위한 정량적 데이터를 제공합니다.
- 중개 연구: 축삭 재생 지표를 연합운동과 같은 기능적 결과와 연결하여 임상적 관련성을 뒷받침합니다.
- 기업적 재사용: 여러 치료 양식과 시점에 걸쳐 반복적인 테스트가 가능한 재사용 가능한 수술 플랫폼을 구축합니다.
운영 및 기업 영향
- 과학적 가치: 정량화 가능하고 재현 가능한 손상 및 재생 지표를 통해 축삭 재생 연구의 기전적 모호성을 줄입니다.
- 운영적 가치: 표준화된 수술 기법과 수술 후 평가 프로토콜을 통해 실험실 간 일관성과 데이터 신뢰성을 높입니다.
- 전략적 가치: 표적 생물학을 명확히 하고 후기 단계의 신경 재생 프로그램에서 실패 위험을 낮춤으로써 조기 진행 여부(go/no-go) 결정에 기여합니다.
- 포트폴리오 영향: 임상적으로 유의미한 말초신경 모델에서 검증된 표적 조절을 바탕으로, 신경 재생 후보 물질의 위험 조정 우선순위 선정을 가능하게 합니다.
실행 시 고려 사항
- 실체현미경 안내 하에 설치류 신경해부학에 대한 숙련도와 미세수술 전문 지식이 필요합니다.
- 표준화된 손상 유도를 위해 미세-Weitlaner 견인기, 보석용 핀셋, 미세 가위 및 조절 가능한 캘리퍼를 포함한 특수 기구에 의존합니다.
- 종단적 축삭 추적 및 조직 형태 계측 분석을 위해 형질전환 리포터 라인(예: Thy1-GFP) 또는 면역조직화학적 처리가 필수적입니다.
- 쥐의 생존을 보장하고 재생 평가 시 혼란 변수를 최소화하기 위한 수술 후 관리 프로토콜이 요구됩니다.
- 마우스 모델에 비해 제한적인 유전적 조작 가능성으로 인해 유전자 녹아웃 또는 과발현 접근법을 통한 기전 분석에 제약이 있을 수 있습니다.
