Name: 축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 s
Description: 배우세요 쥐 안면 신경 수술 기법을 통해 신경 손상 및 재생 과정을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 미세 수술, 형광 영상 및 조직 형태 분석을 활용하여 말초 신경 재활 치료법을 평가합니다.

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S.A.A.는 미국 안면 성형 및 재건 수술 레슬리 번스타인 보조금 프로그램에 의해 지원됩니다.

모든 내정간섭은 건강의 국가 학회 (NIH) 지침에 따라 엄격하게 수행되었습니다. 실험 프로토콜은 미시간 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 구현하기 전에 승인되었습니다. 10주령 성인 암컷 스프라그-다울리 쥐를 활용하였다.
1. 수술일 전
<ol><li>수술 일 전에 멸균 수술 기구, 진통제, 마취 약물 및 산소의 적절한 재고를 확인하십시오. 전체 목록은 재료 표를 참조하십시오.</li>
</ol>2. 수술 전 설정
<ol><li>적어도 두 명 (외과 의사와 조수)을위한 공간을 포함하여 적절한 작업 공간을 확보하십시오. 참고: 전용 수술대, 마취 기계 설치를 위한 공간, 멸균 및 백업 소모품을 위한 적절한 보관 공간이 필요합니다.</li>
	<li>시술 중에 사용할 작동 현미경을 교정합니다. 외과 의사는 손잡이 / 버튼 위에 살균 커버를 배치하여 현미경과 줌 / 초점 버튼의 핸들을 조정할 수있는 능력을 가지고 있는지 확인 참고 : 우리는 손잡이 / 버튼 위에 살균 된 알루미늄 호일을 사용했습니다.</li>
</ol>3. 마취 및 준비
<ol><li>마취 챔버에 동물을 배치하고 1.8 % 이소플루란 과 0.9 L / 분 산소를 통해 전신 마취를 유도.<ol>
<li>발가락 핀치에 대한 동물의 찡그린 반응을 평가하여 자발적인 호흡 평가와 의식 평가를 통해 적절한 마취 평면을 확인합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>각막 자극이나 건조함을 막기 위해 눈 윤활제를 양자간 발라주세요.</li>
	<li>면도기 또는 자동 클리퍼로 수술 부위를 면도하십시오.<ol>
<li>이 때 귀 태그 또는 꼬리 라벨/마킹을 통해 쥐 식별 방법을 설정합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수술 후 통증에 대한 예방을 위해 동물의 등을 따라 0.05 mg / kg buprenorphine의 피하 주사를 투여하십시오.</li>
</ol>4. 외과 접근 및 상해 패턴
<ol><li>동물을 수술대에 옮기고 노코콘을 통해 가스 흐름을 계속합니다. 온난화 패드가 동물과 멸균 장 아래에 위치하여 체온을 유지하도록 하십시오.</li>
	<li>멸균 된 거즈 (말려서 테이프로 고정)를 놓고 쥐를위한 목 롤로 사용합니다. 이것은 외과 필드의 향상된 노출을 제공할 것입니다. 동물의 적절한 위치는 효율적인 신경 식별 및 해부를 위해 가장 중요합니다.</li>
	<li>시술을 위해 동물의 얼굴 피부를 준비합니다. 클로르헥시딘 또는 요오드 기반 용액을 사용하여 70% 에탄올과 번갈아 가며 수술 부위를 3배 문질러 소독하십시오.</li>
	<li>원하는 경우 수술 절개를 계획하고 표시하십시오. 전방 후방 방향으로 입시쪽 귀를 조작하여 후면 피부의 자연스러운 접기를 결정합니다.</li>
	<li>날카로운 홍 채 가위 또는 숫자 15 블레이드를 사용 하 여 후 주름에 4 ~ 5mm 절개를 패션. 필요에 따라 절차의 나중에 확장할 수 있습니다.</li>
	<li>즉각적인 피하 근막을 통해 무딘 해부하고 노출을 향상시키기 위해 마이크로 바이틀러 리트랙터를 배치합니다. 이 지역에 작은 구경 혈관있을 수 있습니다 참고; Weitlaner 리트랙터를 통해 우월하거나 열등하게 후퇴하여 피하는 것이 가장 좋습니다.</li>
	<li>두개골 기지를 따라 삽입을 향해 열등한 에서 우수한 방향으로 여행할 때 전방 굴절 근육을 식별합니다.<ol>
<li>삽입 지점을 따라 근육 배를 통해 부드럽게 확산하여 전방 굴착 배의 힘줄을 드러냅니다. 힘줄은 두개골 베이스에 단단한 삽입과 근육에서 방출 필름 흰색 과정으로 나타납니다.</li>
	</ol></li>
	<li>전방 굴착 근육과 힘줄을 식별 한 후, 더 근육 배를 철회하기 위해 Weitlaner 리트랙터를 조정합니다. 이후에 노출된 영역은 안면 신경의 주요 트렁크가 있는 3차원 공간입니다. 참고 : 이 부위는 두개골 기지에 의해 우월하고 중간으로 경계되며, 측면 측두엽 근육에 의해, 외이도에 의한 후방, 그리고 표면 측두동맥을 포함한 목의 구조에 의해 열등합니다.</li>
	<li>적절한 노출 후, 그것은 두개골 기지에서 스타일로마스토이드 포어맨을 종료 digastric 근육의 힘줄 아래에서 열등하게 여행으로 얼굴 신경의 주요 트렁크를 식별합니다. 신경은 동물의 parotid-masseteric 근막에 싸여 진주 백색 코드로 나타납니다. 다음과 같은 이유로 신경을 더 노출시킬 때주의를 기울이라.<ol>
<li>적극적인 해부, 또는 수직 스프레드를 피하십시오, 스트레치 매개 신경 실증 부상에 대해 보호하기 위해.</li>
		<li>이 수술 필드에 중이 식물을 소개 할 수 로 외이도 위에 얇은 조직을 위반에 대한 보호하기 위해 적극적인 후방 및 내측 지시 해부를 피하십시오.</li>
		<li>광범위 하 게 중간 및 열등 지시 해 부를 통해 표면 측두 동맥손상 하지 마십시오. 부상은 활발한 맥동 출혈로 식별됩니다.<ol>
<li>동맥이 다친 경우, 면팁 어플리케이터또는 집게를 통해 멸균 거즈로 신속한 압력을 가하십시오. 지압 제 또는 액체 피브린 실란트는 가까운 거리에 배치 할 수 있습니다. 동물은 유체 안정화를 위해 0.9 % 멸균 식염수의 피하 주입을 필요로 할 수 있음을 명심하십시오.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>주 트렁크를 열등한 방향으로 해부하여, stylomastoid 포라멘의 출구에서 분리하여 추적합니다.<ol>
<li>신경과 그 가지의 완전한 노출을 허용하도록 원래 절개를 확장합니다. 이 수술 후 sialocele 귀착될 수 있기 때문에 parotid 동맥의 중단을 피하기 위해주의하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>원하는 부상 패턴을 다음과 같이 유도한다.<ol>
<li>호감 부상의 경우, 단단히 신경을 잡고 압축 매끄러운 표면 보석의 집게를 사용하여9. 적절한 호감 부상을 보장하기 위해 30 s의 기간 동안 신경에 일정하고 재현 가능한 압력을 가하십시오.</li>
		<li>간단한 transection의 경우, 신경을 오버리 근막, 또는 즉각적인 상피, 미세 치아 집게와, 그리고 깨끗한 하나의 컷으로 원하는 지점에서 신경을 변환하는 날카로운 미세 가위를 사용합니다. 집게와 신경에 과잉 견인을 피하기 위해주의하십시오.</li>
		<li>신경 갭 모델의 경우, 간단한 성분절 손상과 유사한 방법을 사용하여 원하는 신경 갭을 생성합니다. 동물 간의 부상 패턴의 유사성을 보장하기 위해 원하는 신경 갭 길이에 면 팁 어플리케이터 컷의 멸균 샤프트를 사용 수술 중.</li>
	</ol></li>
</ol>5. 상처 폐쇄
<ol><li>멸균 식염수로 상처를 관개하고 멸균 거즈로 건조시면 됩니다.</li>
	<li>흡수성 봉합사를 사용하여 단순하고 피하 방식으로 피부 가장자리를 근사화하거나 상처 폐쇄에 허용되는 피부 접착제 또는 상처 클립을 사용합니다. 한 피부 가장자리의 깊은 피상적 인 물린 다음 반대 피부 가장자리의 후속 피상적 인 깊은 물린하여 매장 스티치를 배치합니다.</li>
</ol>6. 수술 후 회복
<ol><li>수술 후 통증 조절을 위해 비스테로이드 성 항 염증 진통제 (예 : 부프레노르핀 0.05 mg / kg 및 0.5 mg /kg 카프로펜)의 피하 주사를 투여하십시오. 동물의 등을 따라 주사를 놓습니다.</li>
	<li>마취제의 투여를 중단하고 동물이 추가로 1 분 동안 산소를 흡입 할 수 있도록하십시오.</li>
	<li>동물을 우발적인 섭취를 피하기 위해 침구 재료가 없는 무균 케이지(열 램프를 통해)에 놓습니다. 동물은 일반적으로 1-2 분 이내에 회복의 징후를 보여주고 뒷다리 기능의 지연 된 회복과 함께 방향 감각이 상실 될 수 있습니다.</li>
	<li>적절한 하우징 유닛에 있는 새장에 동물을 돌려보내고 수술 후 #1 통증에 대한 지속적인 예방을 보장하기 위해 수술 후 진통제를 투여하십시오.</li>
	<li>영양 실조, 각막 자극 또는 수술 부위 감염의 징후를 평가하기 위해 하루에 2 배의 동물을 모니터링하고 적절한 수술 로그를 유지하십시오.<ol>
<li>상당한 체중 감소가있는 경우 피하 방식으로 0.9 % 멸균 식염수 투여.</li>
		<li>동물의 깜박임 반사가 다시 확립 될 때까지 매일 윤활 눈 연고를 적용하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

랫트 안면 신경 손상 모델은 수술 접근성, 분기 패턴 및 생리적 유의성27,,29, 33,,,33,34,,35,36으로인한 신경 영양 인자의 평가를 위한 가장 다재다능한 시스템으로 부상되었다. 비디오 데모와 형질전환 동물 데이터의 응용의 조합은 신경 재생 현상의 과학적 연구를위한 새로운 가능성을 엽니 다. 이 모형은 외상, 신경 영양 영향, 면역 조절 영향 및 미세 환경의 그밖 양상에 신경 반응의 체계적이고 상세한 특성화를 허용합니다. 임상 안면 신경 연구의 주요 목적은 모토뉴런 기능의 회복과 관련이 있지만, 모델은 신경 근육 접합부에서의 사건, 축색 수송의 뉘앙스 및 축색 신경...

머리와 목 부위의 두개골 신경 손상은 선천성, 전염성, 특발성, 난성성, 외상성, 신경학적, 종양학, 또는 전신 병인에 이차적일 수 있다1. 두개골 신경 VII, 또는 안면 신경은 일반적으로 영향을 받습니다. 안면 신경 기능 장애의 부각은 매년 100,000명의 사람들 당 20에서 30에 영향을 미치기 때문에 중요할 수 있습니다2. 안면 신경의 주요 운동 가지는 측두엽, zygomatic, 볼, 한계 하악골 및 자궁 경부 가지; 관련된 가지에 따라, 결과는 구강 무능력 또는 침을 흘리거나, 각막 건조, ptosis, dysarthria, 또는 안면 비대칭2,,3에이차 적인 시야 방해를 포함할 수 있습니다. 장기 이환율은 synkinesis의 현상을 포함, 또는 하나의 얼굴 근육 그룹의 무의식적인 운동, 독특한 얼굴 근육 그룹의 자발적인 수축을 시도. 안구 구강 합성은 안면 신경 손상의 후유증으로 비정상적인 재생의 가장 흔한 기능 장애, 당황, 감소 된 자부심, 삶의 질저하를 야기3. 개별 가지에 대한 부상은 선택적으로 손상된 기능을 지시합니다.
안면 신경 손상의 임상 치료는 잘 표준화되지 않고 결과를 개선하기 위해 추가 연구가 필요합니다. 스테로이드급성 안면 신경 부종을 완화할 수 있습니다., 보톡스는 synkinetic 움직임을 temporizing에 대 한 유용 하는 반면; 그러나, 개업의의 무기고에 있는 1 차적인 재건 선택권은 신경 수선, 대체, 또는 재애니메이션3,,4,,5,,6를통해 외과 적 개입을 관련시킵니다. 안면 신경 손상의 유형에 따라 안면 신경 외과 의사는 여러 가지 옵션을 활용할 수 있습니다. 간단한 절제술의 경우 신경 절제술이 유용하지만 케이블 이식 수술 수리는 신경 결함에 더 적합합니다. 기능의 복원을 위해, 외과 의사는 정적 또는 동적 얼굴 재애니메이션 절차를 선택할 수 있습니다. 얼굴 신경 부상 및 후속 수리의 많은 경우에, 심지어 경험이 풍부한 얼굴 신경 외과 의사의 손에, 최고의 결과는 여전히 지속적인 얼굴 비대칭 및기능적타협 7 결과 .
이러한 최적이 아닌 결과는 안면 신경 재생에 대한 광범위한 연구를 촉진했습니다. 관심의 광범위한 주제는 합성88,9,,10,,11의장기적인 결과에 대처하는 데 도움이 되는 다양한 신경 재생 인자의 효과를 결정하고, 특정 신경 억제제의 잠재력을 평가하는, 신경 수리 기술을 완성하고 혁신하는 것을 포함한다. 시험관 내 모델은 프로 성장 또는 억제 인자의 일부 특성을 평가하는 데 사용할 수 있지만,이 주제에 대한 진정한 번역 연구는 번역 가능한 동물 모델을 통해 가장 잘 수행됩니다.
연구자들이 양과 같은 대형 동물모델과마우스(12,,13)와같은 소형 동물 모델을 모두 활용했기 때문에 어떤 동물 모델을 활용해야 할지 결정하는 것은 어려울 수 있다. 대형 동물 모델은 이상적인 해부학 시각화를 제공하지만, 그 사용에는 전문 장비와 인력이 쉽게 또는 쉽게 구할 수 없습니다. 또한, 효과를 입증하기 위해 연구에 전원을 공급하는 것은 매우 비용 금지 및 잠재적으로 많은 과학 센터의 가능한 범위 내에서 하지 않을 수 있습니다. 따라서, 소형 동물 모델이 가장 빈번히 활용된다. 마우스 모델은 안면 신경 수술과 관련된 다수의 결과를 평가하는 데 활용될 수 있다; 그러나, 신경의 제한된 길이는 큰 갭 부상(14)과같은 특정 패턴을 모델링하는 과학자의 능력을 제한 할 수 있습니다.
따라서, 쥐 뮤린 프로토타입은 과학자가 혁신적인 외과 적 수술을 수행하거나 억제 또는 프로 성장 인자를 활용하고 광범위한 결과 매개 변수에 걸쳐 효과를 평가 할 수있는 주력 모델로 부상했습니다. 쥐 얼굴 신경 해부학은 예측 가능하고 쉽게 재현 가능한 방식으로 접근합니다. 그것의 더 큰 규모는 마우스 모형에 비교하여, 간단한 transections에서 5 mm 간격15,,16에구역 수색하는 수술 결함의 넓은 범위를 모델링을 허용합니다. 이것은 또한 요인의 국소 배치, 요인의 내신경 주사, 및 이원이식 또는 교량17,,18,,19,,20,,21,,22,,23의배치를 포함하여 결함 부위에서 복잡한 개입을 적용 할 수 있습니다.
쥐의 유순한 성질, 그 신뢰할 수있는 해부학 및 효과적인 신경 재생에 대한 경향은 앞서 언급 한 부상24의 수술 패턴에 대한 응답으로 많은 결과 측정의 수집을 허용합니다. 쥐 모델을 통해 안면 신경 과학자는 면역 조직화학을 통한 부상, 신경 및 근육 조직학적 결과에 대한 전기 생리학적 반응을 평가할 수 있으며, 생체 패드의 추적 운동을 통한 기능적 결과 및 눈 폐쇄를 평가하고, 형광 또는 공초점 현미경을 통한 미세 및 거시적 변화, 기타,26,27,2811,,,22,,,23,25, 26 , 27 , 27 , 28 ,28. 따라서, 이하의 프로토콜은 쥐 안면 신경및 유도될 수 있는 상해 패턴에 대한 외과적 접근법을 개략적으로 설명할 것이다.

<table><tbody><tr><td>1.8% 이소플루란</td><td>VetOne</td><td>13985-030-40</td><td></td></tr><tr><td>11-0 나일론 미세 봉합사</td><td>AROSuture</td><td>TK-117038</td><td></td></tr><tr><td>4-0 monocryl 봉합사</td><td>VWR</td><td>75982-084</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 SR</td><td>ZooPharm</td><td>MIF 900-006</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MFCD00079028</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhexidine</td><td>VWR</td><td></td><td></td>IC19135805</tr><tr><td>보석상 겸</td>자 <td>VWR</td><td>21909-458</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 Weitlaner 견인</td>기 <td>VWR</td><td>82030-146</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>VWR</td><td>100492-348</td><td></td></tr><tr><td>미니 건절개 가위</td><td>VWR</td><td>89023-522</td><td></td></tr><tr><td>번호 15 메스 블레이드</td><td>VWR</td><td>102097-834</td><td></td></tr><tr><td>작동 현미경</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>바셀린 아이 젤</td><td>Pharmaderm</td><td>B002LUWBEK</td><td></td></tr><tr><td>멸균수</td><td>VWR</td><td>89125-834</td><td></td></tr><tr><td>조직 접착제</td><td>Vetbond, 3M</td><td>NC9259532</td><td></td></tr><tr><td>물 도체 패드</td><td>아쿠아 릴리프 시스템</td><td>ARS2000B</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaine</td><td></td><td></td><td>국소 진통제로 사용</td></tr></tbody></table>

축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

이 프로토콜은 쥐 얼굴 신경 손상 모델에서 축축한 재생 및 억제를 연구하는 일관되고 재현 가능한 방법을 설명합니다. 얼굴 신경은 두개내 세그먼트에서 시간외 코스에 이르기까지 전체 길이를 따라 조작 할 수 있습니다. 재생 속성의 실험 연구에 사용 되는 신경 부상의 세 가지 기본 유형이 있다: 신경 호감, transection, 그리고 신경 간격. 가능한 내정간섭의 범위는 신경의 외과 조작, 신경 성 시약 또는 세포의 납품, 및 중앙 또는 말기 조작을 포함하여 광대합니다. 신경 재생을 연구하기위한이 모델의 장점은 단순성, 재현성, 종 간 일관성, 쥐의 신뢰할 수있는 생존율, 그리고 뮤린 모델에 비해 증가 된 해부학 적 크기를 포함한다. 그것의 한계는 마우스 모형 과 쥐의 최상급 재생 능력에 비해 더 한정된 유전 조작을 관련시킵니다, 안면 신경 과학자는 신중하게 복구를 위한 시간 점을 평가하고 더 높은 동물과 인간 연구 결과에 결과를 번역할지 여부를 이렇게. 안면 신경 손상에 대한 쥐 모델은 신경 재생의 해석 및 비교를 위한 기능적, 전기 생리학적 및 조직체학적 파라미터를 허용합니다. 그것은 인간 환자에 있는 안면 신경 상해의 파괴적인 결과의 이해 그리고 처리를 발전시키는 쪽으로 엄청난 잠재력을 자랑합니다.

초기 수술 후, 결과 측정의 두 가지 주요 유형이 있다: 살아있는 동물의 직렬 측정 및 동물을 희생 해야 하는 측정. 직렬 측정의 예로는 화합물 근육 작용 전위측정(30)등의 전기생리학적 측정, 레이저 보조 또는 비디오그래피 수단을 통한 안면 근육 움직임의 평가9,형질전환 동물에서 얼굴 신경의 재성장의 반복적인 라이브이미징(31,,32)이포함된다. 도 1은 성인 형질전환Thy1-GFP 랫트에서 Thy1-GFP 안면 신경의 주요 트렁크의 생생한 이미징을 도시한다. 호감 상해는 한계 하악골 가지에, 첫번째 pes의 분기 점에 대략 2-3 mm 말단에서 수행되었습니다. MetaMorph 이미징 소프트웨어를 활용하여, 우...

이 프로토콜은 부상의 다양한 유도 패턴의 설명을 포함하여 쥐 모델에서 안면 신경 수술에 대한 재현 가능한 접근 방식을 설명합니다.

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

이 프로토콜은 과학자들이 안면 신경 부상 과 많은 다른 매개 변수에 걸쳐 재생을 개선하는 방법 후 결과를 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 쥐 해부학은 안면 신경에 쉽게 접근 할 수 있다는 것입니다, 그것의 큰 규모는 우리가 관련된 부상 패턴을 모두 연구 할 수 있습니다. 이 기술의 응용 프로그램은 안면 신경 부상 후 환자의 재활로 확장.재생 가능성으로 쥐는 재현 가능한 실험 모델을 제공합니다. 그리고이 방법은 안면 신경 마비 또는 마비를 위한 외과 및 의학 치료에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 그리고 다른 머리와 목 모델 이나 다른 말 초 신경에 번역.양손을 사용하여 현미경으로 작동하는 것은 어려울 수 있습니다. 안면 신경 해부를 시도하기 전에 현미경으로 쌍안경 버전을 사용하는 것이 좋습니다. 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 쥐의 눈에 연고를 적용하고 수술 영역을 면도.쥐 식별 을위한 방법을 설정하고 목 아래에 거즈 롤을 배치합니다. 노출된 피부를 3개의 번갈아 클로르헨시딘과 70%에탄올 스크럽으로 소독하고 쥐를 스테레오 현미경 아래에 놓습니다. 전방 후방 방향으로 입시측 귀를 조작하여 후분 피부의 자연적인 접이식을 결정합니다.숫자 15 블레이드를 사용하여 후경에 2~3밀리미터 절개를 합니다. 절개 계획 및 배치는 상처 크기를 최소화하면서 안면 신경의 신뢰할 수 있는 식별을 보장하는 가장 중요한 단계입니다. 즉각적인 피하 근막을 무뚝뚝하게 해부하고 조직 노출을 향상시키기 위해 마이크로 바이틀란어 리트랙터를 배치합니다.두개골 기지를 따라 삽입을 향해 열등한 방향으로 이동할 때 전방 디거스컬 근육을 식별합니다. 근육 삽입 점을 따라 근육 배를 통해 부드럽게 퍼져 전방 디거스산 배의 힘줄을 드러냅니다. 힘줄은 두개골 베이스에 고체 삽입과 근육에서 방출 필름 흰색 과정으로 나타납니다.전방 디거스트릭 근육과 힘줄을 식별한 후 Weitlaner 리트랙터를 조정하여 근육 배를 더 후퇴시킵니다. 노출된 부위는 안면 신경의 주요 트렁크가 있는 입체 공간입니다. 틸로마스토이드 포맨의 출구에서 열등한 방향으로 신경을 따라 해부한다.호감 부상 패턴을 유도하려면 매끄러운 표면의 주얼러 의 집게를 사용하여 30 초 동안 일정하고 재현 가능한 압력을 가하는 신경을 단단히 잡고 압축하여 적절한 호감 부상을 보장하십시오. 간단한 절단을 위해 미세 한 이빨 집게로 신경을 덮는 즉각적인 에피뉴리움을 잡고 날카로운 미세 시체를 사용하여 원하는 지점에서 신경을 단 한 번 잘라 내어 깨끗하게 변형시니다. 신경 갭 모델의 경우 조절 가능한 캘리퍼를 사용하여 원하는 신경 신경 갭 길이를 설정하여 동물 간의 유사한 부상 패턴을 보장하고 방금 입증된 것처럼 신경을 트랜스펙트합니다.실험적 부상이 전달된 후, 멸균 식염수로 상처를 관개하고 멸균 거즈로 조직을 건조시다. 기관 지침에 따라 피부 절개를 닫기 전에. 여기서, 호감 부상을 가진 안면 신경의 주요 트렁크의 라이브 이미징이 성인 트랜스제닉 Thy1-GFP 쥐에서 제1 PES의 분기지점에 약 2~3밀리미터 의 질반이 나타난다.1, 2, 3 및 4 주 후 상해에서 형광의 점진적 반환의 평가는 이 형질전환 동물에 있는 신경 재생을 감시하기 위한 마커로 이용될 수 있습니다. 조직학적 분석은 축축경 직경, 이물질의 양, 신경 섬유, 신경 섬유, 신경 비율 및 밀도 측정의 정량화를 허용하는 한계 하악 분열의 단면 이미지를 얻는 데 사용될 수 있다. 안면 신경을 식별할 때 관련 해부학 신경이 보이는지 확인하기 위해 필요에 따라 re트랙터의 배치를 자주 조정하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 관련 신경 및 근육은 다른 실험 군에 비해 재생 정도를 평가하기 위해 면역 조직화학 분석을 위해 수확될 수 있다. 그것의 발달 후에, 이 기술은 안면 신경 상해 후에 기능적인 결과를 공부하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 구체적으로, synkinesis의 현상을 미치는 방법.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 마취 준비부터 안면 신경 손상 유도까지 단계를 자세히 설명하는 쥐 모델의 수술 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜은 의학 연구에서 신경 재생 및 수술 기법을 연구하는 데 유용합니다.

쥐 모델에서 안면 신경 손상 유도

이 비디오는 안와하신경을 결찰하여 쥐 모델에서 구강안면 신경병성 통증을 유도하는 방법을 보여줍니다. 그 결과 신경 손상과 염증이 발생하여 비정상적인 통증 신호를 유발하고 만성 통증 상태를 모방할 수 있으며, 이는 구강 안면 통증 분석을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

안와하신경결찰을 통한 쥐 모델에서 구강안면 신경병성 통증 유도

출처: Deseure, K., et al. Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to study Trigeminal Neuropathic Pain. J. Vis. 특급 (2015). 이 비디오는 쥐 모델에서 안와하신경을 수축시켜 신경병성 통증을 유발하는 방법을 보여줍니다. 안와하신경을 노출시키고 결찰자를 묶어 이를 수축시킨 후, 손상 부위의 면역 반응은 통증 신호를 뇌에 전달하는 주변 뉴런의 흥분성을 증가시킵니다.

Induction of Neuropathic Pain in a Rat Model by Constriction of the Infraorbital Nerve

출처: Olmstead, D. N., et al., Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury. J. Vis. 특급 (2015). 이 비디오는 마우스의 안면 신경 파쇄 절차를 보여주며, 주요 랜드마크를 둔기로 해부하면 스타일로마스토이드 구멍에서 안면 신경 줄기가 노출됩니다. 그런 다음 겸자를 사용하여 신경 줄기를 압박하여 축삭 손상을 유도하고 신경 신호 전달을 방해합니다.

Performing Crush Axotomy on the Facial Nerve in a Mouse 모델

출처: Cheah, M., et al. 등뿌리 신경절 주사(Dorsal Root Ganglion Injection)와 등뿌리 크러시 손상(Dorsal Root Crush Injury)은 감각 축삭 재생의 모델입니다. J. Vis. 특급 (2017). 이 비디오는 바이러스 현탁액을 배측근신경절(DRG)에 주입하고 마취된 쥐에서 등쪽 뿌리 분쇄를 통해 제어된 축삭 손상을 유도하는 단계별 절차를 보여줍니다. 이 프로토콜에는 DRG를 노출시키고, 축삭 재생을 촉진하기 위해 성장 촉진 바이러스 벡터를 전달하고, 감각 신경 손상 및 재생을 모델링하기 위해 척수에 대한 축삭 연결을 절단하는 것이 포함됩니다.

배근 신경절 주입 및 등뿌리 크러시 손상을 사용하여 쥐의 감각 축삭 재생 모델링

후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 이 특정 속성은 세포 이식에 사용할 수 있습니다. 우리는 여기에서 후두 신경 손상 모델에서 OECs의 사용을 기반 셀룰러 이식 모델을 제시한다.

말초 신경 손상 후 기능 회복을 평가하기 위해 후각 Ensheathing 세포의 이식

마우스의 안면 신경을 절개하거나 으깬 축삭 절개술을 수행하는 방법을 자세히 설명하는 수술 프로토콜을 제시합니다. 안면 신경 축삭 절개술은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 연구하고 치료 기술을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

이 프로토콜은 감각 축삭 재생을 연구하기 위한 모델로 성체 쥐에서 바이러스 벡터와 동시 등쪽 뿌리 압착 손상과 함께 등뿌리 신경절(DRG) 주사를 사용하는 것을 제시합니다. 이 모델은 감각 축삭 재생을 촉진하기 위한 유전자 요법의 사용을 조사하는 데 적합합니다.

등쪽 뿌리 신경절 사출 및 지느러미 루트 감각 축삭의 재생을위한 모델로 부상 크러시

여기에서는 두개골 거근 장뇨근(LAL)의 생체 내 전기천공법(in vivo electroporation)과 탈질법(denervation)을 결합한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차를 통해 신경근 시냅스의 재생에서 근육 유래 단백질의 잠재적 역할을 연구할 수 있습니다.

In Vivo Electroporation과 Cranial Levator Auris Longus Skeletal Muscle의 단기 신경 재생이 결합되었습니다.

이 프로토콜은 망막 신경절 retrogradely 세포, 및 이후 망막 신경절 세포 생존과 apoptosis를 분석하기 위해서는 시신경의 호감 부상을하기 위해 레이블을하는 방법을 보여줍니다. 그것은 녹내장을 포함하여 시신경 신경 장해의 종류에 대한 실험 질병 모델입니다.

망막 신경절 세포의 생존을 공부 시신경의 호감 상해 Murine 모델

배우세요 쥐 안면 신경 수술 기법을 통해 신경 손상 및 재생 과정을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 미세 수술, 형광 영상 및 조직 형태 분석을 활용하여 말초 신경 재활 치료법을 평가합니다.

축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술

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