Name: 근처-적외선-표시 에이전트와 쥐의 꼬리 정 맥 주사의 유효성 검사에 대 한 새로운 좋습니다 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 19 s
Description: 배우세요 쥐 꼬리 정맥 주사의 정확성을 검증하는 방법을 근적외선 형광 영상을 사용하여. 이 기술은 주사 품질을 평가하고 실험의 재현성을 높이는 데 도움을 줍니다.

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J.A.P. 및 J.M.J. 공동 neuropathic 고통에 효과 대 한 만성 수축 부상 쥐 모델에서 Nanoemulsions를 평가 하기 위한 실험 방법을 설계 되었습니다. J.M.J. 그리고 nanoemulsions, nanoemulsion 구성 및 제조에 대 한 프로세스와 전반적인 macrophage 대상 마약 배달 접근 설계 임신. J.M.J.는 J.M.J.의 지도 아래 더 L.L.에 의해 조립 되었다 nanoemulsion 생산 J.M.J., L.L., 및 S.P. 동물 치료, 수술, 행동, 꼬리 정 맥 주사는 nanoemulsion의 안정성 평가 되었다 그리고 NIRF 이미징 실시 했다 공동 석사 고 A.M.S. J.A.P.의 지도 아래 원고 작성 되었으며 석사 학위 준비 그리고 프로토콜 A.M.S에 의해 작성 되었습니다.
적외선 광학 이미징 뒤 케 인 대학 (피츠버그 조직 공학 이니셔티브 씨 그랜트 지원)에서 작은 동물 이미징 시스템에서 수행 되었다. J.M.J. 인정 국방부 보너스 번호 FA8650-17-2-6836, NIDA 보너스 번호 1R21DA039621-01, NIBIB 보너스 번호 R21EB023104-02와 AFMSA 보너스 번호 FA8650-17-2-6836에서 지원 합니다. J.A.P. 및 J.M.J 피츠버그 조직 공학 이니셔티브 씨앗 보조금에서 지원을 인정 한다. J.A.P.는 또한 Hunkele 드레드 병 상는 사무엘과 엠마 겨울 재단, 찰스 헨리 리치 II 기금 그리고 연방 보편적인 연구 향상 상을 인정 한다. J.A.P. 및 J.M.J. 뒤 케 인 대학 창립 학장의 학 제 연구 컨소시엄 보조금, 만성 통증 연구 컨소시엄을 지 원하는 지원을 인정 합니다.

모든 프로토콜 관리 및 건강의 국가 학회 및 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 뒤 케 인 대학에서 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에서 지침에 따라 수행 했다.
1. 준비와 마 취
참고: 무 균 기술 절차의 전체에 대 한 사용 됩니다. 만 새로운 멸 균 자료 및 압력가 마로 소독 살 균 계기 사용 될 것 이다. 개인 보호 장비 (멸 균 장갑, 머리 모자, 수술 용 마스크 스크럽) 오염을 피하기 위하여 착용을 해야 합니다.
<ol><li>성인 남성 Sprague-Dawley 쥐 250-300 g의 무게는이 프로토콜에 사용 되었다. 쥐 표준 생활 상태에 적응, 12 h 빛/12 h 어두운 주기에, 그들을 유지 하 고 음식과 물 ad libitum 제공. 사회적 동물 집, 종이 침구에 그들을 유지 하 고 제공 하는 특별 한 동안을 피하기 위해 autofluorescence 이미징 ( 재료의 표참조) 다이어트.</li>
	<li>제대로 배치 난방 패드를 사용 하 여 20% 산소, 동물 깨어나면 또는 느낌을 유지 하지 않는 한 하지 미만 1.5 %isoflurane 아닌 3%의 유지 보수 수준에 의해 다음에 초기 5 %isoflurane 동물을 anesthetize.</li>
	<li>적절 한 마 취 pinches 꼬리에 응답의 부족을 통해 확인 합니다. 절차를 통해 생체 신호를 통해 뿐만 아니라 혈을 모니터링 합니다.</li>
</ol>2. 사전 주입 이미지 인수
<ol><li>(그림 1C, E) 꼬리에 형광의 기준을 설정 하는 측면 꼬리에 사출 사이트를 옆으로 동물을 배치 하 여 전 임상 NIR 형광 영상에 동물을 이미지. 모두 하얀 빛 (본문 보기)과 연결 된 룩 업 테이블 (LUT)와 NIRF 영상 및 관련된 소프트웨어를 사용 하 여 적외선 채널 가까운 동시 이미지 수집을 수행 합니다.</li>
	<li>다음 이미징, 동물을 이동 수술 테이블을 다시 하 고 꼬리 정 맥 주입 마 취 아래 장소. 참고: 동물의 생체 신호를 모니터링을 계속 하 고 다시 꼬리 핀치를 통해 적절 한 anesthetization.</li>
</ol>3. 꼬리 정 맥 주입 NIRF 포함 된 에이전트
<ol><li>
경향이 위치에서 동물, 꼬리를 등 쪽 면이 위로 향하도록 방향을 정하십시오. 최소 1 분 동양 그래서 측면 사이드 (오른쪽 또는 왼쪽)은 30 ° (시계 방향 또는 시계 반대 방향으로) 오른쪽 또는 왼쪽 꼬리 정 맥 (그림 1B)를 노출 하는 꼬리 정 맥에 대 한 따뜻한 물에서 꼬리 맥 관 구조 같은데요
	<ol>
<li>일단 측면 꼬리 정 맥 위치 하고있다 (나타나는 어두운 색 팽창 시), 2 x 반복 알코올 패드와 함께 전체 꼬리를 소독.</li>
		<li>연구 설계에 기반 한 적절 한 복용량에 적절 한 바늘 배치 실패 하면 꼬리와 더 인접 이동의 원심 と 척추에 주사를 시작 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>25-27 G 무 균 바늘을 삽입, 병렬 해제 꼬리에 바늘을 삽입, 180 ° 각도로 꼬리 측면 꼬리 정 맥으로, 경사. 정확한 위치를 보장 하기 위해 바늘의 가장자리 생각나 서 혈액을 관찰 합니다. 없는 플래쉬 백 명백한 경우 (제거 하지 않고 꼬리에서) 바늘 팁을 이동 천천히 정 맥 삽입을 찾을. 피하 위치, 아니 피 생각나 서 발생 합니다.</li>
	<li>바늘의 가장자리에 주사 물질과 주사기를 삽입 합니다. 적절 한 배치를 달성 주사 액 주입 시 저항을 부과 하지 합니다. 주사는 원활 하 고 쉽게 사전 것입니다. 일단 주입, 바늘과 주사기를 제거 하 고 응고, 되도록 적어도 1 분 동안 멸 균 거 즈와 압력 흰색 빛 이미지에서 볼 수 있도록 꼬리에 펜으로 주입의 자리를 표시 합니다. 참고: 혈 종 또는 병 변 없이 사출 사이트에 표시 됩니다.</li>
	<li>바늘 팁 주사기 삽입 이동, 바늘을 제거 하 고 더 인접 동측 꼬리 정 맥에 바늘 항목 절차를 다시 시도 하십시오. 다른 재입국 포인트를 시도 하는 경우에 같은 바늘을 재사용 하지 마십시오. 참고: 또는, 주입 혈액 흐름 표시기는 IV 카 테 테 르와 함께 수행할 수 있습니다 ( 재료의 표참조). 이 venipuncture 동안 카 테 터의 시각적 확인의 이점이 있습니다. 앞에서 설명한 각도에, 경사 쪽 카 테 터를 삽입 합니다. 정확한 위치를 보장 하기 위해 혈액 흐름 표시기의 전체 길이에 프롬프트 플래쉬 백을 관찰 합니다. 약간의 압은 주입 하기 전에 선박에 적절 한 배치를 확인 하는 주사기로 혈액을 사용할 수 있습니다. 다시, 저항을 느낄 것입니다.</li>
</ol>4. 포스트 주입 이미지 수집
<ol><li>품질 평가 기준 사전 주입 이미지와 동일한 방향에서 전 임상 NIR 형광 영상에 꼬리 정 맥 주입을 다음을 수행 합니다. 동물 취 여전히 제대로 확인-이미징 동안 그렇게 될 것입니다-는 영상에서 그것을 배치 하기 전에. 참고: 사용 가능한 경우 서랍 housingwith 마 취 연결 및 동물에 대 한 마스크를 포함 하는 이미징 시스템을 사용 해야 합니다.</li>
	<li>측면 꼬리에 사출 사이트 (로 표시)를 노출 하는 측면 사이드에 동물을 방향을 정하십시오. NIRF 신호 주입의 위치에만 존재 인지 확인 합니다. 이 성공적인 꼬리 정 맥 주사 (그림 1D)를 나타냅니다. 참고: 신호는 전체 꼬리에 걸쳐 분산은, 피하 고, 따라서 실패 간주 됩니다 (그림 1F). 그림 2 는 실패 한 주사의 추가 예를 보여줍니다.</li>
</ol>5. 이미지 정량화
참고: 이 함수는 사용할 수 있는 경우 적외선 영상에 포함 된 이미징 소프트웨어 이미지 정량화를 수행할 수 있습니다. 또는, 다른 상용 이미지 분석 소프트웨어 사용된24수 있습니다.
<ol><li>포스트 주입 이미지에서 사출 사이트2,6형광의 주변 관심 영역을 그립니다.</li>
	<li>지역/강도로 지역과 상대 형광 강도 레코드를 측정 합니다. 질적으로 포스트 주입 및 기준선 사전 주입 이미지를 비교 하거나 적절 한 통계 분석 (연구 그룹 및 조건에 따라 다름)을 사용 하 여 quantitively. 참고: 연구원은 좋은 나쁜 주사에서 차별 또는 주입을 품질의 비율을 할당 하는 임계값을 결정할 수 있습니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

연구소 테스트 요원의 misadministration 결과로 상당한 비용을 부담 한다. 꼬리 정 맥 주사와 misadministration 오류가 자주 발생 하는 기술자의 경험 있는 일관 된 성공을 속도 달성 하기 위해 마스터 하는 어려운 기술입니다. 성공적인 주입을 확인 하는 신뢰할 수 있는 방법은 없습니다. 이 프로토콜 연구원 murine 꼬리 정 맥 주입의 성공을 확인 하기 위해 질적, 양적 방법 함으로써이 문제에 솔루션을 제공 합니다. NIRF 이라는 nanoemulsion7,,825 (이 경우, 마약)에 선택의 에이전트를 통합 하는 여기, NIRF 소 동물 영상에 주사의 사이트에서 몇 군데와. 또한 비 nanoemulsion 기반 에이전트를 개발 하 여 상용 인프라-레드 염료를 통합 하 여 NIRF 이미징의 동일한 원리를 사용 하 여 옵션이입니다. 또한, 응용 프로그램, 종양 영상, 대사 등의 다양 한 준비-사용 이미징 에이전트 밀매, 세포 이미징, 그리고 apoptosis를 상업적으로 사용할 수 있습니다. 주사 수행도 사용 하 여 메 마른 바늘 또는 양자 택일로, IV 카 테 테 르; 이 연구원의 기본 설정에 따라 다릅니다. 또한, 자동된 꼬리 정 맥 주입기26 이 과정에서 데 사용 되 고이 방법론와 호환 됩니다. 그러나,이 기술에는 아직 되지 상용.
올바른 에이전트 관리의 더 높은 속도 보장 하는 꼬리 정 맥 주입 방법에 중요 한 단계가 있습니다. 첫째, 어떤 흙 이나 파편, 더 정 맥을 시각화 하는 연구원을 수 있도록 제거 하는 에탄올과 꼬리를 청소 한다. 따뜻한 물에 꼬리를 잠수 하 여 혈관을 dilating 이기도 메서드에서 매우 중요 한 단계 주입에 대 한 더 큰 표면 영역을 허용 합니다. 더 원심 시점 꼬리 정 맥에 주사는 여러 시도 필요 일부 오류에 대 한 수 있습니다. 사출 꼬리 정 맥은 동물의 시체의 꼬리 부분으로 크기에서 증가 꼬리에 더 인접 위치에서 시도 한다. 또한, contralateral 꼬리 정 맥 바늘 배치 동측 꼬리 정 맥에 이상 3 ~ 5 사이트에서 실패 하는 경우 사용할 수 있습니다.
테스트 에이전트의 성공적인 관리 약간 주입 시점에서 NIRF 신호 발생합니다. 주입의 행정 동안 저항을 느꼈다 고 꼬리에 아무 형광을 거의 경우 다음 주사 기록할 수 있습니다 성공. 만약 저항 주입 동안 느낌과 꼬리의 일부 길이 따라 흔적의 NIRF 신호 주입 실패로 기록 되 고 분할 피하. 형광 이미지는 사전 및 포스트 주입 및 주입의 품질 관찰 질적 또는 양적 주사의 사이트에서 형광 신호를 분석 하 여 평가 하 게 됩니다. 종종 NIR 형광 영상 동반 소프트웨어는이 분석을 수행.
메서드를 사용 하면 여러 가지 방법으로 적응 될 수 있다. 쥐와 쥐에 정 맥 주입을 꼬리에 적용 됩니다. 대부분 작은 동물 NIR 형광 이미 murine 설치류를 수용할 수 있을 것입니다. 마 취의 수준 연구 실험실의 IACUC 프로토콜에 따라 동물의 무게에 따라 조정 될 필요가 있다. 연구원의 공식화 에이전트에는 적외선 염료를 통합 하거나 특정 생물 학적 응용에 맞게 준비-사용 이미징 에이전트를 구입 하 여 또 다른 가능한 수정 nanoemulsion 기반 프로브의 준비 이다.
쥐가 상대적으로 큰 경우에 작은 동물 영상에 위치를 종종 어려울 수 있습니다. 테스트 이미지를 주입 하기 전에, 서랍에 동물 상태가 되 고 보기의 필드 ascertained 꼬리 표시 됩니다 따라서 것이 좋습니다. 테이프의 영상, 그것을 보장 하기 위해 서랍을 꼬리 이미징 동안 이동 하지 않습니다 도움이 됩니다.
작은 동물에 주사는 동시 실험 절차 방해와 동물 postinjection 의 안락사를 필요 시 약 라벨의 활용을 제한 하는 꼬리 정 맥의 품질을 평가 하고자 하는 다른 방법 12,13. 일부 시 약은 연구 결과 관련된, 동물의 치료 평가 실험 설계에서 것이 좋습니다 그래서 떨어질 수 있습니다.
이 방법은, 앞, 수 진보와 함께 세련 된 작은 동물 이미징 기술, 적외선 형광 프로브에 개선에. 다양 한 다른 응용 프로그램을 위한 통합된 적외선 염료와 생물 조사 사용할 수 있습니다 연구 디자인의 에이전트 관리 단계에서 주사의 품질을 확인 하기 위해이 방법2,3에에서 설명 된 대로 ,27,,2829,30,,3132.

작은 동물에 에이전트의 관리의 많은 실험의 중요 한 포인트 역할을 합니다. 그것은 어디 에이전트 배달 될 것 이며, 그 후, 어떻게 될 에이전트에 그 후 결정 합니다. 다른 노선 에이전트 관리1에 사용할 수 있습니다, 있지만 배달의 정 맥 경로 특정 에이전트에 대 한 기본 경로가입니다. IV 주입 1 통과 조직 효과 외부 용 질 absorption1에 대 한 필요성을 우회 하는 혈 류로 직접 주입 하는 에이전트 수 있습니다. 또한 대상 셀 혈 류2,3 , 순환 시스템 내 모든 조직에 직접 배달에 대 한 수 있습니다. 설치류, 여러 혈관 수 간주 됩니다, 잘리고, saphenous, 그리고 꼬리 정 맥을 포함 하 여.
이 방법에서는, 생물 조사를 포함 하는 NIRF 염색-이 경우, nanoemulsion (그림 1A)3,,45,6-쥐의 측면 꼬리 정 맥에 주입 됩니다. 이 특정 NIRF 포함 된 nanoemulsion 이전 이미지 neuroinflammation vivo에서 그리고 neuropathic 고통2,3,4,의 쥐 모델9 vivo7, 8 전 추적을 사용 되었습니다. 5,,1011. 전 임상 NIR 형광 이미징 주입 전후 이미징 실시 ( 재료의 표참조). 이 에이전트 관리의 품질을 확인 하는 도구 역할을 합니다. 기준선 이미지를 위한 기초로 꼬리 정 맥 주입 역할 이전 이미지입니다.
점점 동물 연구에서 정 맥으로 관리 nanoemulsions는 생물학 프로브와 대상 에이전트12,13,,1415으로 활용 되고있다. 꼬리 정 맥16,17를 통해 에이전트를 관리 하는 검증 된 도전 이다-마약, 바이러스 성 벡터, 또는 다른 조사-주사의 전체 내용을 성공적으로 혈 류를 입력 한 확인을 하지는 주변 조직17. 따라서, 시각화 및 성공적인 사출의 품질을 평가 하는 방법 도움이 됩니다.
일반적으로, 열 램프 또는 따뜻한 물 주입 전에 그것의 시각화를 허용 하는 정 맥의 팽창 하면 꼬리를 따뜻하게 하는 데 사용 됩니다. 이렇게 하면 쉽게 입국 정 맥, 하는 동안 하지 화합물의 전체18,19,,2021에 혈 류를 입력 했는지 여부를 분별 하는 양적 방법이입니다. 이것은 어디 정 맥 대조 희미하게 피부와 같은 검은 쥐에 동물의 변종에 아직도 더 어렵게 된다. 일반적으로, 탐정 저항 주사 하는 동안, 시각화 에이전트22,23의 피하 누출을 나타내는 꼬리에 볼록한 경우에 발생 하 여 실패 한 주입을 게이지 수 있습니다.
이 연구에서는 NIRF 이미징 라이브 쥐의 측면 꼬리 정 맥에 주입 nanoemulsion의 작은 동물 NIRF 이미징 시스템에 수행 ( 재료의 표참조). 쥐 먹이 특별 한 정화 ( 재료의 표참조) 일반적인 본질적인 형광을 줄이기 위해 다이어트. 하얀 빛과 800 nm 형광의 동시 이미지 수집 NIRF 영상 및 관련된 소프트웨어를 사용 하 여 캡처됩니다. 상대 형광 강도 사전 주입 및 포스트 주입 상태에서 꼬리에 측정 된다. 주사의 사이트에서 (수익 ROI)의 지역에 대 한 형광 강도 기록 하 고 투자 수익의 영역으로 나눈. 질적 평가 어떤 주사는 받아들일 수 할 수 있다. 필요에 따라 추가 정량 분석 허용 주사에 대 한 임계값을 설정 하 고 어느 시점에서 통계적 의미를 계산할 수 있다 그룹으로 ROI 측정을 할당 하 여 수행할 수 있습니다.
이 유효성 검사 전략 다음 꼬리 정 맥 주사를 이용 하 여 연구의 표준 에이전트 관리의 증가 일관성 때문 향상 시킵니다. 꼬리 정 맥 주입의 품질 평가의이 방법은 쉽게 여러 회사에서 상업적으로 제공 하는 인프라-레드 형광 프로브를 포함 하도록 다른 에이전트에 대 한 사용자 지정할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>100% 산소 공기 탱크</td><td>AirGas Heathcare</td><td>N/a</td><td>동물의 환기용.</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>다중 소스</td><td>알코올</td><td></td></tr><tr><td>패드</td><td>Henry Schein</td><td>112-6131</td><td></td></tr><tr><td>인공 눈물</td><td>Henry Schein</td><td>100-2634</td><td>이것은 마취되는 동안 쥐의 눈을 보호합니다.</td></tr><tr><td>Beaker</td><td>Multiple sources</td><td>n/a</td><td>이것은 꼬리 정맥을 확장하기 위해 따뜻한 물을 보유합니다.</td></tr><tr><td>증류수</td><td>다중 소스</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>배기 팬</td><td>위험 기술</td><td>n/a</td><td>실험실의 환기를 위해 내장되어 있지 않은 경우.</td></tr><tr><td>페이스 마스크</td><td>복수 소스</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>튜브와 페이스 마스크가 있는 가스실</td><td>다중 소스</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>거즈 패드</td><td>Henry Schein</td><td>100-2634</td><td></td></tr><tr><td>헤어 보닛</td><td>다중 소스</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>히팅 램프</td><td>멀티</td>리스 <td>소스 n/a</td><td></td></tr><tr><td>히팅 패드</td><td>멀티플 소스</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>사우스메딕 Inc.</td><td>ND66794-013-25</td><td></td></tr><tr><td>패딩 벤치 천</td><td>박스 보드 제품 Inc.</td><td>026755100I</td><td></td></tr><tr><td>진주 소동물 이미저</td><td>Li-COR Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pearl Trilogy 소동물 이미징 시스템</td><td>LI-COR Biosciences</td><td>해당 없음</td><td>견적은 제조업체 웹 사이트를 통해 제공됩니다. Perkin Elmer(VisEn Medical FMT)와 같은 다른 제조업체는 전임상 NIR 형광 이미저를 제공합니다.</td></tr><tr><td>스크럽, 실험복, 신발 커버</td><td>복수 출처</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>샤프 용기</td><td>복수 출처</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>특별 다이어트</td><td>Research Diets, Inc, New Brunswick, NJ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley rats</td><td>Hilltop Animals, Springdale, PA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 주입 캡</td><td>다중 출처</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>멸균 바늘, 27 G</td><td>다중 소스</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>SURFLO IV 카테터, 24 G, 노란색</td><td>TERUMO</td><td>SR+OX2419C1</td><td>이것은 멸균 바늘 사용의 대안입니다. 올바른 정맥 삽입에 대한 추가 표시를 제공합니다.</td></tr><tr><td>수술용 장갑</td><td>복수 출처</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>수술용 테이프</td><td>복수 출처</td><td>해당 없음</td><td></td></tr></tbody></table>

근처-적외선-표시 에이전트와 쥐의 꼬리 정 맥 주사의 유효성 검사에 대 한 새로운 좋습니다

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

쥐의 꼬리 정 맥에 정 맥 (IV) 관리 에이전트의 어렵고 일관성 없는 될 수 있습니다. 꼬리 정 맥 주사를 최적화 시 약 혈 류로 직접 도입 될 필요가 많은 실험 절차의 핵심 부분입니다. 무의식적으로, 주사는 피하, 과학적 결과 가능 하 게 변경 될 수 있습니다. 이 메서드는 성공적인 꼬리 정 맥 주입 vivo에서. 이미징의 기능을 제공는 법인된 근 적외선 형광 (NIRF) 염료와 nanoemulsion 기반 생물 조사에 활용 하 여, NIRF 영상 사용 하 여 에이전트의 주입 전후 이미지 가져옵니다. 허용 IV 주입은 다음 질적 또는 양적 결정 주사의 사이트에서 NIRF 신호 강도에 따라.

쥐 NIRF 포함 된 nanoemulsion 측면 꼬리 정 맥에 주사 했다 그리고 프로토콜에 설명 된 대로 사전 및 포스트 주입 이미지 작은 동물 영상 (자료 테이블)와 함께 찍은. 포스트 주입 이미지 품질로 사출 품질에 대 한 평가 '좋은 주사'로 배치 (n = 7)과 '나쁜 주사' (n = 4) 그룹. 질적 평가 후 주입 영역 형광 강도 관찰 하 여 수행 되었다. 최적의 주입에서 NIRF 신호는 사출 사이트에 국한 됩니다. 신호 없음 에이전트를 완전히 혈 류로 전치 되어 있기 때문에 주사 성공 하면 볼 것입니다. 나쁜-품질 사출 꼬리의 길이 따라 분산 NIRF 신호를 표시 합니다.
이미지는 함께 NIRF 영상 소프트웨어와 함께 분석 했다. 관심 지역 사이트 사전 주입 이미지 (그림 1C, E) 및 포스트 주입 이미지 (그림 1D, F)에 형광의 주변에 당겨 졌다. 형광 꼬리의 길이 걸쳐 볼 수 있던 이미지는 용납할 수 없는 것으로 간주 되었고 분석 (그림 2)에서 제거. 지역 및 형광 강도의 측정 기록 되었다. 지역/형광 강도 대 한 값 계산 하 고 (그림 1G)을 꾸몄다. 상당한 차이 (홀 t-테스트) 형광에서 사전 및 사후 주입 이미지 사이의 강도 '나쁜 주입' 그룹 (그림 1G)에서 관찰 되었다 (p = 0.0024).
<img alt="나노입자 주입 연구; 개략도, 주사 전/후 이미징, 형광 강도 그래프." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59295/59295fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1 : NIRF 기반의 nanoemulsion 및 꼬리 정 맥의 이미지. (A) A nanoemulsion 기반 생물 프로브 NIRF 염료를 포함 하는 (B)는 측면 꼬리 정 맥에 주사와 NIRF 영상에 몇 군데. (C 와 D) 사전 및 postinjection의 이미지는 좋은 주입. (E 와 F) 사전 및 postinjection의 이미지 나쁜 주입. 흰색 화살표는 주입의 포인트를 나타냅니다. 질적 평가 주사의 사이트에서 NIRF 신호의 정도 평가 하 여 나쁜 주입에 비해 좋은 주입의 성공이 가능 하다. 허용 되지 않는 주사는 꼬리의 길이 걸쳐 형광 표시 하 고 분석 (그림 2)에서 제거 되었습니다. (G) 이미지 사출 품질 조사에서 할당에 대 한 임계값으로 형광 강도의 정량적 측정을 또한 분석할 수 있습니다. 그래프에 오차 막대는 SEM. 반영 '좋은 주입' 그룹, n = 7. '나쁜 주입' 그룹, n = 4. 사전 및 postinjection 이미지를 비교할 때 '나쁜 주입' 그룹에 형광 강도에 통계적 차이가 있다 (홀 t-테스트; p = 0.0024). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59295/59295fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="마우스 형광 이미징, 꼬리의 GFP 발현; 생물학적 연구; 비교 분석, 패널 A-C." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59295/59295fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2 : 나쁜 주사의 예. (A) 형광 신호는 꼬리의 일부를 본. (B) 형광 신호는 꼬리의 전체 길이 걸쳐 본. (C) 형광 신호 전체 꼬리와 동물의 시체의 꼬리 영역에서 무 겁 게 분산. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59295/59295fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

여기 우리는 근 적외선 형광 염료에서 이미징 데이터 통합 에이전트 또는 생물 학적 프로브를 이용 하 여 쥐의 꼬리 정 맥 주사의 유효성을 검사 하는 방법을 제시. 꼬리는 전에 몇 군데와 주입, 후 형광 신호는 정량, 그리고 사출 품질의 평가 이루어집니다.

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

주사 정확도를 검증하고 평가하는 이 방법은 일관되고 재현 가능한 꼬리 정맥 주사를 촉진하기 위한 동물 연구에서 중요한 품질 관리 단계와 중요한 단계를 제공합니다. 형광 이미징을 통해 주사를 평가하는 것은 에이전트가 의도 한 수량으로 혈액 순환을 입력했는지 여부를 결정하는 이점을 제공합니다. 꼬리 정맥 주사는 시각적 데모에서 혜택을 받는 실습 조작이며 주사 부위에서 주입된 제제의 클리어런스를 관찰하여 향상시킬 수 있습니다.무자밀 살렘과 절차를 시연하는 것은 브룩 딜, 내 실험실에서 박사 과정 학생이 될 것입니다. 꼬리 정맥 주입 전에, 형광 기준선을 확립하기 위해 노출 된 꼬리에 주입 부위와 가까운 적외선 형광 이미저에 나중에 마취 된 동물을 배치합니다. 이미지가 획득 된 후, 동물을 외과 용 벤치로 옮기고 따뜻한 물에 침수하여 꼬리 혈관을 팽창시다.약 1 분 후, 측면이 볼 수 있도록 꼬리를 방향을 지정합니다. 측면 꼬리 정맥은 색상이 어둡게 나타납니다. 알코올 패드와 정맥의 길이를 살균.꼬리를 측면으로 배치하고 25~27게이지 바늘 벨벨면을 선택된 측면 꼬리 정맥에 위쪽으로 삽입하고, 꼬리의 해골 골골 부위에서 시작하여 적절한 바늘 배치가 필요에 따라 실패할 경우 더 근접이동한다. 성공적인 바늘 삽입에서, 혈액 플래시백은 바늘의 테두리에서 관찰되어야합니다. 플래시백이 명백한 경우 꼬리에서 제거하지 않고 바늘 끝을 천천히 움직이면 정맥 삽입을 찾습니다.바늘이 제대로 배치되었을 때, 주사용 물질로 주사기를 바늘의 테두리에 삽입하고 플런저를 우울하게하여 내용물을 정맥으로 전달합니다. 또는 혈류 표시기를 사용하는 카테터를 사용할 수 있습니다. 카테터의 표시기 세그먼트의 프롬프트 플래시백은 올바른 배치 다음에 관찰됩니다.약간의 배압은 주입하기 전에 용기에 적절한 배치를 확인하기 위해 주사기로 혈액을 당기는 데 사용할 수 있습니다. 다시 말하지만, 저항은 느껴지지 않을 것입니다. 모든 재료가 전달되면 바늘을 제거하고 혈전을 보장하기 위해 적어도 1 분 동안 멸균 거즈로 압력을 가하십시오.주사 부위를 펜으로 표시하여 주사 부위가 획득된 이미지의 백색 광 채널에 표시되도록 합니다. 주사 부위의 후 사출 형광 신호를 평가하기 위해 동물을 근적외선 이미징 단계로 돌려보내 측면의 동물을 방향을 지정하여 측면 꼬리에 주사 부위를 노출하여 이미징을 시연합니다. 기준선 및 후사 주사 부위형광을 분석하기 위해, 꼬리 정맥 주입 후 형광 영역 전후의 주사 부위 근처의 꼬리에 근거리 적외선 이미저 소프트웨어에 관심 영역을 그릴 수 있다.성공적으로 전달 된 주사는 주입 전후형 광등 신호의 거의 동등하게 낮은 수준을 보여줍니다. 꼬리 길이 전체에 형광이 보이는 이미지는 허용되지 않으며 분석에서 제거해야합니다. 모든 행동, 외과 적 또는 전 생체 분자 기술은이 절차에 따라 정상적으로 수행 될 수 있습니다.이 기술은 꼬리 정맥 주입을 위한 품질 관리를 제공합니다, 제대로 주입된 에이전트의 정맥 혈류에 의한 빠른 간격을 드러내거나, 정맥이 놓치면 주사 부위에 풀링. 이 방법에 사용되는 시약은 위험하지 않습니다, 그러나, 형광 기반 에이전트가 유해 물질과 통합되는 경우 적절한 예방 조치를 취해야한다.

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연구 설치류와 함께 안전하고 편안하게 일하는 것은 처리 및 규제 방법의 핵심 역량이 필요합니다. 이 문서는 안전하게 처리하고 효과적으로 마우스 및 쥐에 화합물을 관리하는 데 필요한 기본 원칙을 제시합니다.

수동 규제와 마우스 및 쥐 일반적인 합성 관리 경로

출처: Grames, MS, et al. 쥐에게 아데노 관련 바이러스의 정맥 투여 방법 및 팁 및 중추신경계 형질도입 평가. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 쥐에서 재조합 아데노 관련 바이러스(AAV)의 꼬리 정맥 주사를 보여줍니다. 외측 꼬리 정맥에 주입된 후 바이러스는 혈류로 들어가 심장을 순환한 후 뇌에 도달하여 뉴런으로 들어가 신경 치료 응용을 위한 표적 단백질 생산을 촉진합니다.

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여기, 비 취 쥐 진공 추출 튜브 시스템을 사용 하 여 간단한 꼬리 정 맥 혈액 샘플링 방법을 설명 합니다. 이 방법은 혈액에 직접 노출의 위험을 감소 하 고 단일 venipuncture에서 여러 샘플을 채 취하고 단순화 합니다.

진공 혈액 수집 시스템으로 비 취 쥐의 꼬리 정 맥에서 혈액 컬렉션 반복

마이크로 버블 에이전트를 가진 집중한 초음파는 혈액 두뇌 장벽을 초점하고 일시적으로 열 수 있습니다. 이 기술은 혈액 뇌 장벽을 통해 에이전트의 넓은 범위를 제공하기 위해 사용되었습니다. 이 문서에서는 MRI 지침유무이드 없이 설치류 뇌에 국소화된 전달을 위한 자세한 프로토콜을 제공합니다.

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여기에서, 우리는 독특하게 디자인된 온난화/억제 장치를 사용하여 설치류 꼬리 정맥 주사를 위한 효과적이고 효율적인 방법을 제시합니다. 혈관 확장 및 억제 과정의 개시를 간소화함으로써,이 프로토콜은 최소한의 고통을 가진 동물의 큰 그룹의 정확하고 적시에 정맥 주사를 허용합니다.

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당뇨병성 망막증은 실명의 주요 원인 중 하나입니다. 조직학, 혈액-망막 장벽 파괴 분석, 및 형광 혈관조영술은 망막의 병태생리학을 이해하는 데 유용한 기술이며, 이는 당뇨병성 망막병증에 대한 효율적인 약물 스크리닝을 더욱 향상시킬 수 있다.

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