Name: 차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: 배우세요 차(Camellia sinensis L.) 잎에서 세포 현탁액 배양을 수립하여 살충제 물질대사를 연구하는 방법입니다. 이 기술은 식물 대사 경로 분석과 농약 분해 메커니즘 이해에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 중국의 국가 핵심 연구 및 개발 프로그램 (2016YFD0200900), 중국의 국가 자연 과학 재단 (No. 31772076 및 No. 31270728), 중국 박사 후 과학 재단 (2018M630700), 그리고 오픈 펀드의 지원을 받았습니다. 차 식물 생물학 및 활용의 국가 키 연구소 (SKLTOF20180111).

1. 차 캘러스 문화
참고: 멸균 잎은 연구그룹17에서처음 개발된 시험관내 재배 식물군 라인에서 유래되었다. 섹션 5까지의 모든 절차는 인큐베이터에서 배양 시간을 제외하고 멸균 층류 흐름 후드에서 수행되었다.
<ol><li>오토클레이브(121°C, 20분)에 앞서 두 배지(무라시게 및 스쿠그[MS] 기저 배지 및 감보그의 B5 액상 배지)의 pH를 5.8로 조정한다.</li>
	<li>가위를 사용하여 멸균 잎의 중간 정맥을 따라 자른 다음 페트리 접시에 약 0.3 cm x 0.3 cm의 작은 조각으로 각 반을 세분화합니다.</li>
	<li>멸균 이식(작은 잎 조각)을 식물 호르몬을 함유하는 MS 기저 매상에 2,4-D(1.0 mg L-1) 및 KT(0.1 mg L-1)에 놓는다. 6개의 이식체는 MS 기저 매질의 100 mL를 포함하는 300 mL 플라스크에 배치될 수 있다.</li>
	<li>위의 잎을 25°C의 일정한 온도에서 배양하여 어둠 속에서 배양한다. 28일 후, 유도된 캘러스의 1세대를 선택하고 신선한 플라스크(subculture)로 옮김을 옮김한다. 3−4 서브컬쳐 후 느슨하고 부서지기 쉬운 캘러스를 획득합니다.</li>
</ol>2. 차 세포 현탁액 배양
<ol><li>멸균 조건하에서 멸균 수술용 블레이드를 사용하여 고체 매체에서 부터 0.5−2mm 범위의 소인으로 격렬하고 부서지기 쉬운 느슨한 굳은살을 자릅니다.</li>
	<li>작은 굳은 면 약 3g의 무게를 달수 있습니다. 캘러스를 2,4-D(1.0 mgL-1)및 KT(0.1 mg L-1)로 보충한 B5 액상 매체 20 mL을 함유한 150 mL 플라스크에 넣습니다.</li>
	<li>액체 세포 현탁액을 120 rpm에서 흔들림 인큐베이터에서 일정한 온도(25±1°C)에서 배양하였다.</li>
	<li>배양 후 7~10일 후에 배양 플라스크를 제거하고 몇 분 간 방치하십시오.</li>
	<li>서브 컬쳐를 위한 종자 재료로 모든 상판을 신선한 매체로 가져 가라 (서스펜션 어머니 액체의 하위 배양 비율은 1 : 1과 1 : 2 사이의 범위 신선한 매체). 침전된 큰 굳은 살을 제거하십시오.</li>
	<li>각각 28일의 3-4 하위 배양 주기 후에 최종 잘 자란 세포 현탁액 배양을 얻는다.</li>
</ol>3. 세포 생존의 트리페닐 테트라 졸륨 염화물 분석
<ol><li>생존 력 염색 전에 대조군 세포로 100 °C에서 살아있는 세포의 샘플을 10 분 동안 죽입니다.</li>
	<li>원심분리기 6000 x g에서 8 분 동안 모든 세포 현탁액 배양. 인산완식염수(PBS) 완충액(pH 7.3)의 2.5 mL에서 세포를 일시 중단하기 전에 상판액을 제거하고 손으로 1분 간 흔들어 줍니다.</li>
	<li>0.4% 트리페닐 테트라졸륨 염화물(TTC) 용액의 2.5 mL를 추가하고 다시 손으로 흔들어 주세요.</li>
	<li>서 있는 인큐베이터(30°C)에서 1시간 동안 혼합물을 배양한다.</li>
</ol>4. 살충제를 가진 차 세포 현탁액 배양의 처리 그리고 샘플링
<ol><li>400 μL의 aliquot를 추가하여 4개의 네오니코티노이드(티아메톡삼, 아세트타미프리드, 이미다클로프리드, 이미다클로시즈) 또는 2개의 유기인산염(디메토아테 및 오메토아테)의 4개의 네오니코티노이드(500 μg mL-1)를 세포 현탁액 배양에 추가합니다. 각각. 참고: xenobiotic 행동을 비교하는 것이 목표인 경우에, 다른 화합물을 시험하기 위하여 세포 현탁액의 동일 어머니 배치를 이용하십시오.</li>
	<li>일정한 온도(25±1°C)에서 살충제를 사용하여 세포 현탁액의 샘플을 배양하고 인큐베이터 속도(120 rpm)를 흔들었다. 샘플을 0, 3, 5 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 및 75일에 샘플(4.3 단계 참조)을 수행합니다.</li>
	<li>네오니코티노이드를 함유한 샘플을 시험하려면, 균질한 세포 배양물의 1 mL aliquot를 제거하고, 1.5 mL 플라스틱 원심분리기 튜브에 넣고, 원심분리기를 4000 x g에서 2분 동안.<ol>
<li>고성능 액체 크로마토그래피 자외선(HPLC-UV) 및 초고성능 액체 크로마토그래피-사중극기(UPLC-QTOF) 질량으로 분석하기 전에 0.22-μm 모공 크기의 필터 멤브레인을 통해 초나토이를 통과합니다. 분광법(재료표).</li>
	</ol>
</li>
	<li>유기 인산염을 포함하는 샘플을 테스트하려면 세포 배양500 μL aliquot를 제거하고 35 mL 원심 분리튜브 또는 1.5 mL 플라스틱 원심 분리기 튜브에 넣습니다 (네오니코티노이드와 같은 후자의 샘플을 준비하십시오).<ol>
<li>염화나트륨 0.1 g과 아세톤/에틸 아세테이트 5mL(3:7, v/v)를 500 μL 샘플의 35mL 원심분리튜브에 넣습니다.</li>
		<li>혼합물을 1 분 동안 소용돌이로 한 다음 10 분 동안 휴식을 취합니다.</li>
		<li>상급제의 2.5 mL을 10 mL 유리 튜브에 넣고 40 °C에서 질소 증발기를 사용하여 거의 건조로 증발합니다.</li>
		<li>잔류물을 1 mL 아세톤, 와류 1 분 동안 용해하고 가스 크로마토 그래피 - 화염 광 측정 검출기 (GC-FPD)에 의해 분석하기 전에 0.22-μm 필터 멤브레인을 통과하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 살충제를 가진 손상되지 않은 차 식물의 견본 준비
참고 : 그대로 차 식물 시험은 영양 용액의 50 mL에서 성장 차 묘목을 사용하여 수경 시스템에서 실시되었다 (30 NH4+, 10 NO3-, 3.1 PO4-, 40 K+, 20 Ca2 +, 25 Mg2 +, 0.35 Fe 2+, 0.1 B 3+, 1.0 Mn2+ ,0.1 Zn2+ ,0.025 Cu2+, 0.05 Mo+및 10 Al3++ , mg L-1)18. 실험 온실은 안후이 농업 대학에서 20 °C에서 밝은 어두운 주기 (빛의 12 시간 및 어둠의 12 시간)에서했다.
<ol><li>15 일 동안 4 L 플라스틱 냄비에 5 개의 식물을 넣습니다.</li>
	<li>0 ppm (제어) 또는 티아메톡삼 100 ppm또는 디메토이트를 플라스틱 냄비에 각각 넣습니다.</li>
	<li>19를미리 담그는 것을 제외하고 이전 방법에 따라 손상되지 않은 식물 샘플을 준비한 다음 질량 분석법으로 분석하여 정확한 질량 스펙트럼을 얻습니다.</li>
</ol>6. 계측기 분석
<ol><li>
네오니코티노이드의 대사 행동의 HPLC 분석
	<ol>
<li>HPLC-UV(재료표)를 사용하여 254 nm의 파장에서 티아메톡삼과 아세타미프리드의 함량및 대사 산물을 검출하고, 4.3절의 시료에서 270 nm의 이미다클로스트리와 이미다클로시즈를 검출한다. 참고: HPLC-UV 상태는 이전 연구19와동일했습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
유기 인산염의 대사 행동의 GC 분석
	<ol>
<li>키랄 컬럼(재료 표)을 사용하여 GC-FPD에 의해 섹션 4.4에서 샘플에서 디메토에이트 및 오메토에이트함량을검출합니다.</li>
		<li>질소를 캐리어 가스로 사용하고 유량을 1.0 mL min-1로설정합니다.</li>
		<li>초기 온도를 120°C로 설정하고, 5분 간 유지한다. 온도를 30°C에서 150°C로 올리고 3분 간 유지한다. 10°C에서 170°C로 올리고 7분 동안 유지한다. 마지막으로 30°C 에서 210°C로 증가시키고-1분 간 유지합니다.</li>
		<li>스플릿리스 모드에서 사출 온도를 200°C로 설정; 검출기 온도를 250°C로 설정합니다.</li>
		<li>사출 량을 1 μL로 설정합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
세포 배양에서 살충제 대사산물의 UPLC-QTOF 분석
	<ol>
<li>C18 컬럼(물자 표)을 사용하여 UPLC-QTOF를 사용하여 세포 배양물(섹션 4.3의샘플)에서 살충제의 대사산물을 검출한다.</li>
		<li>유량을 0.2 mL min-1로설정합니다. 사출 량을 10 μL로 설정합니다.</li>
		<li>네오니코티노이드 처리 된 샘플의 경우 초기 이동 상을 85 % A (5 mM 암모늄 포메이트 물) 및 15 % B (아세토니트릴)로 설정합니다. 10분 이상, 이동단계 B를 38%로 늘리고 1분 동안 15%로 되돌리고 9분 동안 유지합니다.</li>
		<li>유기 인산염 처리 된 샘플의 경우 초기 이동 상을 55 % A (0.1 % 포믹 산 물) 및 45 % B (아세트 니트릴)로 설정합니다. 5분 이상, 이동단계 B를 70%로 올리고, 0.5분 이상 B의 45%로 되돌리고, 2.5분 동안 유지합니다.</li>
		<li>QTOF 작동 파라미터를 다음과 같이 설정한다: 가스 온도, 325°C; 건조 가스 (질소), 10 L 분-1; 시스 가스 온도, 350 °C; 시스 가스 흐름, 11 L 분-1; 모세관 전압, 4000 V; 노즐 전압, 1000 V; 단편성 전압, 네오니코티노이드 살충제에 대한 100 V 또는 유기 인성 살충제에 대한 110V; 스키머 전압, 65 V; 양이온 모드에서 작동합니다.</li>
		<li>계측기를 전체 스캔 스펙트럼으로 설정하고 MS/MS 모드를 대상으로 합니다.</li>
		<li>정확한 질량 도구를 사용하여 데이터를 처리합니다. MS/MS 항문뿐만 아니라 문헌12,15,20,21,22에서표준 제품이 없는 대사 산물을 추론한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
온전한 식물 추출물에서 살충제 대사산물의 UPLC-Orbitrap 분석
	<ol>
<li>UPLC-Orbitrap 질량 분광법 (재료 표)을 사용하여 그대로 식물 추출물에서살충제의 대사 산물을 검출합니다.</li>
		<li>질량 분석법(표재료)작동 파라미터를 다음과 같이 설정한다: 시스 가스 압력, 35 arb; 가스 온도, 300 ° C; 노즐 전압, 3.5 KV; 모세관 온도, 350 °C.</li>
		<li>세포 배양의 UPLC-QTOF 분석을 위해 용출 프로그램을 위(단계 6.3.3 및 6.3.4 단계)로 설정합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tentative+identification%2C+quantitation%2C+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh%2C+green%2C+and+white+teas+using+UPLC%2FDAD%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li>
<li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+green%2C+white%2C+black%2C+Oolong%2C+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li>
<li>Kopjar, M., Tadic´, M., Pilizˇota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green%2C+yellow+and+black+tea+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+and+Biological+Technologies+in+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li>
<li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Analytical+Methods%22%5BJournal%5D)">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li>
<li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+Nonsystemic+Behavior+of+the+Pesticide+Ferbam+on+Tea+Leaves+by+Engineered+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles.</a> Environmental Science & Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).</li>
<li>Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+C-14-Ethion+insecticide+in+the+presence+of+deltamethrin+and+dimilin+pesticides+in+cotton+seeds+and+oils%2C+removal+of+ethion+residues+in+oils%2C+and+bioavailability+of+its+bound+residues+to+experimental+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).</li>
<li>Fang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+Dynamics+and+Dietary+Risk+Assessments+of+Two+Neonicotinoid+Insecticides+during+Lonicerajaponica+Planting%2C+Drying%2C+and+Tea+Brewing+Processes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food%22%5BJournal%5D)">Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes.</a> Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).</li>
<li>Pan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissipation+pattern%2C+processing+factors%2C+and+safety+evaluation+for+dimethoate+and+its+metabolite+%28omethoate%29+in+tea+%28Camellia+sinensis%29%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis).</a> PloS One. 10 (9), e0138309(2015).</li>
<li>Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+intoxication+with+omethoate%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Legal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fatal intoxication with omethoate.</a> International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).</li>
<li>Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Residues+of+acephate+and+its+metabolite+methamidophos+in%2Fon+mango+fruit+%28Mangifera+indica+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Environmental+Contamination+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.).</a> Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).</li>
<li>Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradation+of+acephate+using+a+developed+bacterial+consortium+and+toxicological+analysis+using+earthworms+%28Lumbricus+terrestris%29+as+a+model+animal%5BTitle%5D)+AND+%22International+Biodeterioration+%26+Biodegradation%22%5BJournal%5D)">Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal.</a> International Biodeterioration & Biodegradation. 69, 1-9 (2012).</li>
<li>Ford, K. A., Casida, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metabolism+and+pharmacokinetics+of+seven+neonicotinoid+insecticides+in+spinach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).</li>
<li>Frear, D. S., Swanson, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+cisanilide+%28cis-2%2C5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide%29+by+Excised+Leaves+and+Cell+Suspension+Cultures+of+Carrot+and+Cotton%5BTitle%5D)+AND+%22Pesticide+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).</li>
<li>Sandermann, H. Jr, Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+plant+cell+cultures+to+study+the+metabolism+of+environmental+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicology+and+Environmental+Safety%22%5BJournal%5D)">Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).</li>
<li>Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metabolite+profiling+of+the+insecticide+thiamethoxam+in+plant+and+cell+suspension+culture+of+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).</li>
<li>Lichtner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phloem+mobility+of+crop+protection+products%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Journal+of+Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Phloem mobility of crop protection products.</a> Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shoot+basal+ends+as+novel+explants+for+in+vitro+plantlet+regeneration+in+an+elite+clone+of+tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Horticultural+Science+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea.</a> Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).</li>
<li>Meng, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+Translocation%2C+Metabolism%2C+and+Distribution+of+Glyphosate+in+Nontarget+Tea+Plant+%28Camellia+sinensis+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L).</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).</li>
<li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+Extraction+Method+for+Determination+of+Neonicotinoid+Residues+in+Tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).</li>
<li>Karmakar, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence%2C+metabolism+and+safety+evaluation+of+thiamethoxam+in+tomato+crop%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop.</a> Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).</li>
<li>Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Dimethoate+and+Metabolites+Following+Foliar+Application+to+Plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).</li>
<li>Lucier, G. W., Menzer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+of+oxidative+metabolites+of+dimethoate+formed+in+rats%2C+liver+microsomes%2C+and+bean+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).</li>
<li>Yang, G. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYang%2C+GW+%22Construction+of+Camellia+sinensis+Cell+Suspension+Culture+and+Primary+Study+on+Kineties%22">Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties</a>. , College of Food Science and Nutrition Engineering. China Agricultural University. (2004).</li>
<li>Jiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+Metabolic+Behaviors+of+Six+Systemic+Insecticides+in+a+Newly+Established+Cell+Suspension+Culture+Derived+from+Tea+%28L.%29+Leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).</li>
<li>Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation%2C+growth+and+cryopreservation+of+plant+cell+suspension+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures.</a> Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).</li>
<li>Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+plant+growth+regulators+on+cell+growth+and+ginsenoside+saponin+production+by+suspension+cultures+of+Panax+quinquefolium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium.</a> Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).</li>
<li>Grover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoterpenoids+and+aroma+compounds+from+cell+suspension+cultures+of+Camellia+sinensis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%2C+Tissue+and+Organ+Culture%22%5BJournal%5D)">Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).</li>
<li>Lei, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Agricultural+Science+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li>
<li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Guihaia%22%5BJournal%5D)">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li>
<li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotic+Metabolism+in+Plants%3A+In+vitro+Tissue%2C+Organ%2C+and+Isolated+Cell+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Symposium+Series%22%5BJournal%5D)">Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques.</a> ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

이 기사는 이식물의 선택, 세포 생존력의 결정, 높은 대사를 가진 차 세포 현탁액 배양의 확립을 포함하여 차 식물 조직에 있는 농약 물질 대사의 모형을 설치하는 상세한 과정을 제시합니다 활동. 식물 조직의 모든 부분은 살균 된 환경에서 굳은 살을 시작하는 데 사용할 수있습니다 25. 차 잎은 이 연구에서 캘러스 개시를 위해 선택되었으며, 잎이 지하 부분보다 덜 오염되는 경향이 있을 뿐만 아니라 작물의 식용 부분이며 농약 적용의 주요 대상이기 때문입니다.
본 연구에서는, 시험관 내에서 자란 멸균 식물로부터 절제된 잎과 현장에서 수확한 잎으로부터의 캘러스의 유도 속도 및 성장 상태를 비교했다. 멸균 된 잎은 갈색 과 오염의 훨씬 낮은 속도와 필드 성장 잎에 비해 유도의 높은 비율을 했다. 이는 현장에서 자란 식물의 잎이 에탄올과 수은을 사용하여 표면 살균을 거쳤을 뿐만 아니라 성장 환경의 변화뿐만 아니라 멸균 된 잎이 멸균 환경에서 재배되어...

차는 세계에서 가장 널리 소비되는 무알코올 음료중 하나입니다 1,2. 차는 우디다년 동백꽃의 잎과 싹에서 생산되며 L. 차 식물은 광대한 농장에서 재배되며 수많은 곤충 해충3,4에취약하다. 유기인산및네오니코티노이드 살충제는 백색파리, 잎호퍼 및 일부 레피도프테란 종6,7과 같은 해충으로부터 차 식물을 보호하기 위해 전신 살충제5로 자주 사용된다. 적용 후, 이러한 살충제는 흡수되거나 식물로 전이됩니다. 식물 내에서, 이러한 전신 살충제는 식물 효소에 의해 가수 분해, 산화 또는 환원 반응을 통해 형질전환될 수 있다. 이러한 변형 제품은 모 화합물보다 더 극성 및 덜 독성이 있을 수 있습니다. 그러나 일부 유기 인산염의 경우 일부 제품의 생체 활동이 더 높습니다. 예를 들어, 아세트산은 보다 독성이 강한 메타미도포스8, 9, 및 이메토에이트 내로 대사되어10,11. 식물 대사 연구는 따라서 식물 내의 농약의 운명을 결정하는 데 중요하다12.
식물 조직 배양은 농약 대사를 조사하기 위한 유용한 플랫폼으로 입증되었으며, 확인된 대사산물은 그대로식물13,14,15에서발견되는 것과 유사하다. 조직 배양, 특히 세포 현탁액 배양의 사용은 몇 가지 장점을 갖는다. 첫째, 실험은 미생물이 없는 실험을 수행하여 미생물에 의한 농약 변형 또는 분해의 간섭을 피할 수 있습니다. 둘째, 조직 배양은 언제든지 사용하기 위한 일관된 물질을 제공한다. 셋째, 대사 산물은 손상되지 않은 식물보다 조직 배양에서 추출하기가 더 쉬울 수 있으며, 조직 배양은 종종 인터링 화합물이 적고 화합물의 복잡성이 낮습니다. 마지막으로, 조직 배양은 단일 실험16에서일련의 농약 대사를 비교하는데 보다 용이하게 사용될 수 있다.
본 연구에서는 멸균 재배 차 식물의 잎에서 파생 된 세포 현탁액이 성공적으로 확립되었습니다. 차 세포 현탁액 배양은 6개의 전신 살충제의 발산 거동을 비교하기 위해 사용되었다.
이 상세한 프로토콜은 연구원이 차에 있는 xenobiotics의 신진 대사 운명을 공부하기 위하여 유용한 식물 조직 문화 플랫폼을 설치할 수 있도록 몇몇 지도를 제공하기 위한 것입니다.

<table><tbody><tr><td>아세트 아미 프리드 (99.8 %)</td> <td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>46717</td><td>CAS 번호 : 135410-20-7</td></tr><tr><td>아세토 니트릴 (CAN, 99.9 %)</td> <td>테디아</td><td>AS1122-801</td><td>CAS 번호 : 75-05-8</td></tr><tr><td>한천</td><td>Solarbio 과학 & 기술</td><td>A8190</td><td>CAS 번호: 9002-18-0</td></tr><tr><td>Clothianidin (99.8%)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>525</td><td>CAS 번호: 210880-92-5</td></tr><tr><td>디메토에이트(98.5%)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>109217</td><td>CAS 번호: 60-51-5</td></tr><tr><td>이미다클로프리드(99.8%)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>91029</td><td>CAS 번호: 138261-41-3</td></tr><tr><td>Imidaclothiz(99.5%)</td><td>토론토 연구 화학 물질</td><td>I275000</td><td>CAS 번호: 105843-36-5</td></tr><tr><td>키네틴 (KT, >98.0%)</td><td>솔라바이오사이언스 & 기술</td><td>K8010</td><td>CAS 번호: 525-79-1</td></tr><tr><td>오메토에이트(98.5%)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>105491</td><td>CAS 번호: 1113-02-6</td></tr><tr><td>폴리비닐폴리피롤리돈(PVPP)</td><td>Solarbio Science & 기술</td><td>P8070</td><td>CAS 번호: 25249-54-1</td></tr><tr><td>수크로오스</td><td>토크리스 바이오사이언</td>스 <td>5511</td><td>CAS 번호: 57-50-1</td></tr><tr><td>티아메톡삼(99.8%)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>20625</td><td>CAS 번호: 153719-23-4</td></tr><tr><td>트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC, 98.0%)</td><td>Solarbio Science & 기술</td><td>T8170</td><td>CAS 번호: 298-96-4</td></tr><tr><td>2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, >98.0%)</td><td>Guangzhou Saiguo Biotech</td><td>D8100</td><td>CAS No: 94-75-7</td></tr><tr><td>키랄 컬럼</td><td>Agilent CYCLOSIL-B</td><td>112-6632</td><td>크로마토그래피 컬럼(30m &times; 0.25mm &times; 0.25 & μ; m)</td></tr> <tr><td>가스 크로마토 그래피 (GC)</td> <td>Shimadu</td><td>2010-Plus</td><td>와 화염 광도 검출기 (FPD)&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)</td><td>Agilent</td><td>1260</td><td>Paired with 자외선 검출기(UV)</td></tr><tr><td>HSS T3 C18 컬럼</td><td>Waters</td><td>186003539</td><td>크로마토그래피 컬럼(100 mm &times; 2.1 mm &times; 1.8 &mu; m)</td></tr><tr><td>초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC)</td><td>Agilent</td><td>1290-6545</td><td>Tandem Quadrupole Time-of-Flight 질량분석기(QTOF)</td></tr><tr><td>초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC)</td><td>Orbitrap 질량분석기에 연결된</td> <td>Thermo Scientific</td><td>Ultimate 3000-Q Exactive Focus</td></tr></tbody></table>

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 l.) 잎

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

차 공장의 체외 조직을 사용하여 살충제 대사를 연구하기위한 플랫폼이 개발되었습니다. 멸균차 식물로부터의 잎은 식물 호르몬 2,4-디클로로페녹시아세트산(2,4-D, 1.0 mg L-1)과 키네틴(KT, 0.1mg L-1)을 가진 무라시게및 스쿠그(MS) 기저 매에 느슨한 굳은살을 형성하도록 유도하였다. 캘러스는 각각 28 일 동안 지속되는 3 또는 4 라운드의 후 형성되었습니다. 느슨한 캘러스(약 3 g)를 동일한 식물 호르몬을 함유하는 B5 액상 배지로 접종한 후 25±1°C에서 어둠 속에서 흔들리는 인큐베이터(120 rpm)에서 배양하였다. 3-4 서브컬쳐 후, 차잎에서 유래된 세포 현탁액을 1:1 및 1:2(현탁액 어머니 액체: 신선한 배지) 사이의 하위 배양 비율로 확립하였다. 이 플랫폼을 사용하여, 6개의 살충제(5 μg mL-1 각 티아메톡삼, 이미다클로프리드, 아세트타미프리드, 이미다클로시즈, 디메토에이트 및 오메토아테)를 차 잎 유래 세포 현탁액 배양에 첨가하였다. 살충제의 대사를 액체 크로마토그래피 및 가스 크로마토그래피를 사용하여 추적했습니다. 차 세포 현탁액 배양의 유용성을 검증하기 위해, 처리된 세포 배양 및 손상되지 않은 식물에 존재하는 티아메톡산 및 디메토이트의 대사산물을 질량분광법을 사용하여 비교하였다. 처리된 차 세포 배양에서, 티아메톡산의 7개의 대사산물 및 디메토아테의 2개의 대사산물이 발견되었으며, 처리된 그대로 식물에서는 티아메톡삼의 대사산물 2개와 디메토에이트 중 하나만 발견되었다. 세포 현탁액의 사용은 특히 차와 같은 어려운 매트릭스에 대해 그대로 차 식물의 사용에 비해 대사 분석을 단순화했다.

현장에서 자란 차 나무와 멸균 환경에서 시험관 내에서 자란 차 식물에서 절제된 잎에서 수확한 잎에서 칼의 유도는 MS 매체에 재배 한 후 오염, 브라우닝 및 유도를 측정하여 비교했습니다. 그림1A)를 참조하십시오. 캘러스 성장은 20, 37, 62 및 90일의 배양(도1B)에서기록되었다. 시험관내에서 자란 잎에서 유래한 캘러스는 재배 90일 동안 밭에서 자란 잎에서 유래한 캘러스보다 더 활발한 성장을 보였다. 멸균 된 잎에서 나온 캘러스는 밝은 노란색이었고, 밭에서 자란잎의 캘러스는 갈색이었습니다 (그림 1B).
2,4-D23의1.0 mgL-1의</sup...

이 연구는 살충제 와 같은 전체 식물에 의해 채택될 수 있는 외부 화합물의 대사를 연구하는데 사용될 수 있는 차(동백나무)에서 유래된 세포 현탁액 배양을 확립하기 위한 프로토콜을 제시한다.

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

차는 전 세계에서 가장 인기있는 음료 중 하나입니다. 살충제는 때때로 해충으로부터 차 식물을 보호하는 데 사용됩니다. 일부 전신 살충제는 티 트리의 효소에 의해 이것을 위해 만들 수 있습니다.그리고 산화, 가수 분해 또는 환원 반응을 통해 통합됩니다. 식물 세포 현탁액 배양은 농약의 식물 대사 행동을 쉽게 연구하기 위해, 쉽게 사용할 수 있습니다. 이 방법에는 몇 가지 장점이 있습니다.첫째, 무료 미생물의 조건에서 작동할 수 있으므로 미생물에 의한 농약 분해의 간섭을 피할 수 있다. 둘째, 언제든지 우리에게 일정한 재료를 제공 할 수 있습니다. 마지막으로, 그것은 또한 단일 실험에서 농약 행동의 이론을 비교 하기 위해 쉽게 사용할 수 있습니다.이 연구에서는 차 잎의 가변색으로부터 차 세포 현탁액 배양을 확립합니다. 세포 현탁액의 최적 배양 상태는 6 농약의 소멸 행동을 비교하기 위해 사용되었습니다. 이 실험은 자오 웨이팅과 게 구오친에 의해 수행됩니다.이것은 우리의 차 멸균 화분은 절제의 근원으로 작동 합니다. 가위를 사용하여 멸균 잎의 중간 날개를 따라 잘라. 그리고, 페트리 접시에 약 0.3 배 0.3 센티미터의 작은 조각으로 각 절반을 세분화.멸균 식소균을 2, 4-D 및 KT가 포함된 MS 시각적 매체에 놓습니다. 6개의 이출은 300 밀리리터 플라스크에 배치할 수 있습니다. 어둠 속에서 섭씨 25도의 일정한 온도에서 잎을 배양합니다. 28 일 후, 유도 된 callus의 첫 번째 세대를 선택한 다음 신선한 플라스크로 전송합니다.3~4개의 하위 문화권 후에 느슨하고 가변 콜러스를 획득합니다. 멸균 조건하에서 멸균 수술 블레이드를 사용하여 고체 매체에서 가변 및 느슨한 굳은 칼을 작은 조각으로 잘라냅니다. 우리는 캘러스의 작은 조각의 약 3 그램입니다.콜러스를 2, 4D, KT가 포함된 B5에 넣습니다. 어둠 속에서 흔들리는 인큐베이터에서 일정한 온도로 액체 세포 현탁액을 배양합니다. 7~10일 의 배양 후, 문화 플라스크를 제거하고 몇 분 동안 서 둡니다. 여기에 퇴적물으로 상체를 가지고 신선한 매체에 문화를 강제합니다.침전된 큰 굳은 굳을 제거합니다. 각각 28일의 4~3개의 서브배양 주기 후에 최종 잘 손질된 세포 현탁액 배양을 획득한다. 생존 력 염색 하기 전에 대조구로 10 분 동안 100 섭씨에서 살아있는 세포의 샘플을 유지 합니다.원심분리기 는 6, 000 G.에서 8분 동안 모든 세포 현탁액 배양을 제거하고 PBS 버퍼의 5 밀리리터로 세포를 일시 중단하고 손으로 1 분 동안 흔들어 전에 상신제들을 제거합니다. TTC 용액의 2.5 밀리리터를 추가하고 다시 손으로 흔들어 줍니다. 섭씨 13도에서 서있는 인큐베이터에서 1 시간 동안 혼합물을 배양하십시오.모든 네오니코티노이드 티아메톡삼, 아세티노프리드, 이미다클로프리드, 이미데프로제스의 스톡 솔루션을 살균하기 위해 400마이크로리터의 알리쿼터를 추가합니다. 모든 유기 첫 번째 단계. 디메토이트 및 세포 현탁액 배양으로 각각 omethoate.일정한 온도에서 살충제와 세포 현탁액의 배양 샘플, 그리고 인큐베이터 속도를 흔들어. 다른 날에 샘플을 가져 가라. 네오니코티노이드를 함유한 시료를 테스트하려면 동질세포 배양의 1 밀리리터 알리쿼트를 제거한다.1.5 밀리리터 플라스틱 원심분리기 튜브에 넣고 원심분리기는 4, 000 G에서 2분간 배치합니다. HPLC-UV 및 UPLC QTOF에 의해 분석하기 전에 0.22 마이크로미터 필터 멤브레인을 통해 상체를 전달합니다. 샘플을 테스트하려면 유기 첫 번째 단계에서 계속하십시오.세포 배양의 500 마이크로리터 알리쿼트를 제거하고 35 밀리리터 원심분리기 튜브 또는 1.5 밀리리터 플라스틱 원심분리기 튜브에 넣습니다. 염화 나트륨 0.1 그램과 5 밀리리터 추출물 용매를 500 마이크로리터 샘플의 35 밀리리터 원심분리기 튜브에 넣습니다. 1 분 동안 혼합물을 소용돌이.그리고 10 분 동안 휴식을 취할 수 있습니다. 2.5 밀리리터의 상체를 10 밀리리터 유리 튜브에 넣고 섭씨 14도에서 질소 증발기를 사용하여 거의 건조함으로 증발하십시오. 잔류물을 1밀리리터 아세톤으로 녹입니다.1 분 동안 소용돌이, GC-FPD에 의해 분석하기 전에 0.22 마이크로 미터 필터 멤브레인을 통과. 15 일 동안 4 리터 플라스틱 냄비에 5 개의 식물을 넣습니다. 밀리리터당 0 마이크로그램 또는 티아메톡삼밀리리터당 100마이크로그램을 플라스틱 냄비에 넣으세요.이전 방법에 따라 그대로 식물 샘플을 준비, 사전 침을 제외하고 다음 Orbitrap 질량 분광법에 의해 분석. HPLCUV를 사용하여 254 나노미터의 파장에서 티아메톡삼과 아세티모프리드의 함량 및 대사 산물을 감지하고, 270 나노미터의 이미다클로프리드와 이미데프로사제의 함량과 대사 산물을 검출한다. 관 열을 사용하여 GC-FPD에 의한 디메트호이트와 오메토이트 의 함량을 감지합니다.탄소-18 컬럼을 사용하여 UPRC QTOF를 사용하여 세포 배양에서 살충제의 대사산물을 검출한다. UPLC 궤도 랩 질량 분광법을 사용하여 시험 식물 추출물에서 살충제의 대사 산물을 감지합니다. 한 멸균 화분의 캘러스는 오염 브라우닝이 낮지만 고른 차 잎에서 callus의 유도성이 높습니다.멸균 잎에서 파생된 캘러스는 항상 밝은 황색이었고, 수확한 잎에서 추출한 캘러스는 갈색 반점이 있는 흰색이었습니다. KT 농도가 리터당 0.1밀리그램이되었을 때, 캘러스는 황색으로 변하고 질감이 느슨했습니다. 2, 4-D 농도가 리터당 1밀리그램이었을 때 콜러스의 성장률은 61.5%까지 가장 높았으며, KT의 농도는 리터당 0.5밀리그램이었다.캘러스의 성장 데이터가 최고였고 캘러스의 성장률이 46.9%에 가장 높았기 때문에 식물호먼트의 가장 좋은 조합은 KT의 리터당 2, 4D, 0.1밀리그램으로 차 캘러스 성장을 위한 것이었다. 캘러스는 네 번째 하위 문화권에 의해 잎을 완전히 덮었고, 하위 문화 주기가 28 일 이었을 때. 캘러스는 황색과 느슨한 질감과 갈색이 없는 힘차게 성장했습니다.칼러스의 총 데이터와 세포 현탁액의 색상을 비교한 후, B5 액체 배지는 세포 현탁액 배양에 더 적합하였다. 세포 현탁액 배양의 OD 값은 세포 성장의 양을 나타내는 데 사용되었다. 재배 75일 동안 40밀리리터당 15그램의 비율은 다른 두 비율보다 OD 값이 상당히 높았습니다.티 셀 서스펜션 배양 내의 세포 생존능력은 TTC 염색에 의해 시험되었다. 무색 TTC 화합물은 살아있는 세포의 미토콘드리아에서 탈수소 효소에 의해 붉은 포마딘으로 변환될 수 있지만 죽은 세포에서는 색을 변경할 수 없습니다. 그리고 이것은 차 세포 현탁액 배양을 확립하는 전체 과정입니다.이것은 세포 현탁액 배양 기술을 사용하여 차에 있는 다른 살충제의 물질 대사의 첫번째 비교 연구입니다. 몇몇 살충제 대사산물은 확인되었고, 그 중 일부는 보관된 차 식물에서 더 조사되었습니다. 이 새로운 방법은 차 또는 다른 식물에 농약 대사 연구의 모델로 봉사 할 수 있습니다.

study-on-metabolism-six-systemic-insecticides-newly-established-cell

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 원고는 살충제 자화율을 조사하고 arthropod 해충에 연락을 저항하고 체계적 살충제를 감지하는 데 사용되는 기술을 보여주고 설명합니다.

모니터링 살충제 저항 Bioassays

이 원고는 쌍떡잎 잡초에서 절제된 잎으로 제초제 대사율을 효과적으로 정량화하여 변동성을 줄이고 전체 식물 분석에서 일반적으로 관찰되는 제초제 흡수 또는 전좌의 가능한 교란 효과를 제거하는 방법을 설명합니다.

절제 잎 분석과 쌍자엽 잡초의 제초제 대사의 요금을 측정

살충제의 평가는 종종 성인 곤충보다는 미성숙 단계에 대해 목표로하고 있습니다. 여기, 우리는 첫 번째 nymphal 침대 버그 단계에 대한 비교와 함께 침대 버그 계란에 대한 살충제를 평가하기위한 프로토콜을 제시한다. 이러한 프로토콜은 비 성인의 삶의 단계에서 살충제의 효능을 평가하기 위해 다른 곤충에 따라 조정 될 수있다.

베드 버그에 대해 살충제 효능을 평가하는 방법에있어서,<em&gt; CIMEX lectularius</em&gt;, 계란과 첫 령충

여기, 우리 제시 집 플라이 carboxylesterase 단백질에서 생체 외에서 잠재 중재 곤충 세포 표현 시스템으로 생산 하 고 나중 기능 metabolizing permethrin에 그들의 역할을, 특성화를 프로토콜 pyrethroid 부여 셀 기반 MTT 분석 결과 및 체 외에서 대사 연구를 실시 하 여 저항.

살충제 내성 집 파리, 파리 자리 부채 에 Carboxylesterases의 기능 특성

여기, 선물이 토양 요인 (예, 기판 종류 및 습기 콘텐츠)에 대 한 응답 Ectropis grisescens 의 성숙한 애벌레의 pupation 선호를 조사 하는 프로토콜 선택 생물 검정을 사용 하 여. 우리 또한 제시 pupation 동작에 영향을 주는 요소를 확인 하려면 아니오 선택 생물 검정의 프로토콜의 survivorship E. grisescens.

선택 및 아니오 선택 생물 검정 Pupation 환경과 Ectropis grisescens 의 출현 성공 공부

본 프로토콜은 고독한 꿀벌 인 Osmia excavata의 유충에게 살충제로 오염 된 조항을 먹이는 방법을 설명합니다. 이 절차는 독방 꿀벌의 유충에 대한 살충제의 생태 독성을 검사합니다.

살충제가 독방 꿀벌의 유충에 미치는 영향 평가

그린 커피 과일 (GF)을 사용하는 방법은 커피 베리 보러 (CBB)에 대한 살충제의 독성을 테스트하기 위해 개발되었습니다. 살충제 또는 독성 물질은 CBB 감염 전후에 소독 된 GF에 적용되었습니다. 곤충 사망률, 기피성 및 생식 능력은 다른 매개 변수 외에도 평가되었습니다.

커피 베리 보어 hypothenemus hampei에 대한 통제제 및 살충제를 테스트하는 방법론

본 프로토콜은 식물에서 2,4-디브로모페놀 대사산물을 식별하기 위한 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다.

식물에서 2,4-dibromophenol의 대사 해명

이 프로토콜은 나비목 곤충 유충에 대한 식물 화학 물질의 잠재적 독성 효과를 평가하기 위한 의무 섭식 분석을 설명합니다. 이것은 확장성이 뛰어난 곤충 생물 검정으로 치사 및 치사 용량, 억제 활동 및 생리학적 효과를 쉽게 최적화할 수 있습니다. 이것은 친환경 살충제를 스크리닝하는 데 사용할 수 있습니다.

Helicoverpa armigera에 대한 Phytochemicals의 살충 효과를 평가하기 위한 공급 분석 시스템 개발

이 프로토콜은 식물에서 트리아졸 살충제의 대사 산물의 통합 세포 독성을 평가하는 새로운 방법을 설명합니다.

식물에서 전형적인 Triazole 살충제의 대사 산물의 세포 독성 평가

배우세요 차(Camellia sinensis L.) 잎에서 세포 현탁액 배양을 수립하여 살충제 물질대사를 연구하는 방법입니다. 이 기술은 식물 대사 경로 분석과 농약 분해 메커니즘 이해에 활용됩니다.

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

더 많은 동영상 탐색