쥐에서 종양 성장을 감소 하는 MicroRNA의 생체 내 억제

갑상선암 모델의 마이크로RNA 억제제에 기반한 첫 번째 치료법을 수행합니다. 이 개발 치료는이 질병의 치료에 대한 약속을 보여줍니다. 이러한 유형의 직교 형 모델, 치료 전달의 전신 경로를 사용하여, 새로운 microRNA 기반 약물의 검증을 용이하게.

우리는 마우스 갑상선에 인간 갑상선 암세포를 이식하기 위한 직교 모형을 사용하더라도, 이 모형은 그밖 암 모형을 위한 모든 체계일 수 있었습니다. 줄리아 라미레즈-모야와 아드리안 아쿠나와 함께 절차를 시연하는 것은 라켈 아로샤 리스코입니다. 그녀는 우리 연구소의 기술자입니다.

CAL-62 인간 갑상선 암 세포주 불완전배지를 확립한 후, 1회 10~6세포 알리코트에서 PBS 50마이크로리터에서 4도의 마이크로리터를 중단하고, 세포를 동일한 부피의 지하막 매트릭스와 혼합한다. 27 게이지 반인치 바늘을 장착한 1 밀리리터 주사기에 세포를 적재하고 6주 된 면역 결핍 밸브 C 누드 마우스의 왼쪽 측면에 샘플 100 마이크로리터를 피하로 주입합니다. 주입 후 2 주, 1 점 5 밀리 리터 튜브에 생체 내 실온의 160 마이크로 리터에 antagomiR 또는 제어 처리 완충액을 추가합니다.

그리고 혼합물의 복합성을 보장하기 위해 즉시 10 초 동안 용액을 소용돌이. 50도에서 30분 동안 치료 용액을 배양하고 마이크로 원심분리기에서 간단한 원심분리기를 제공합니다. 그런 다음, 퇴적처리복합체를 신선한 PBS와 철저한 혼합으로 6배 희석한다.

그리고 종양에 직접 치료의 전체 200 마이크로 리터 볼륨을 주입. 리터 당 40 밀리그램의 마이크로리터 50 마이크로리터를 일주일에 2번 피하하여 각 실험 동물에 주입합니다. 이소플루란 마취 후 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인합니다.

생체 내 생물 발광 이미징 시스템의 챔버에 동물을 배치하고 표준 프로토콜에 따라 생체 내 이미징 소프트웨어로 생물 발광 신호를 이미지화합니다. 그런 다음 종양 성장을 분석합니다. 치료 모두 비교 하 고 T 테스트를 사용 하 여 중요성과 성장 차이 결정.

직소 갑상선 종양 세포 접종의 경우 PBS의 5 마이크로 리터에서 CAL-62 세포의 알리쿼트를 중단하고, 7 주 된 판막 C 누드 마우스에 진통제 의 100 마이크로 리터와 100 마이크로 리터를 피하로 주입합니다. 발가락 핀치에 대한 반응이 부족하다는 것을 확인한 후, 동물을 해부현미경 아래에 놓고 동물의 목을 요오도포비달로 소독한다. 다음으로, 피부에 약 2센티미터 절개를 하고 침샘을 변위하여 목을 드러낼 수 있습니다.

해부 집게 및/또는 가위를 사용하여 스트랩 근육을 해부하여 기관지와 갑상선에 노출시키고 10 마이크로리터 주사기를 사용하여 크리시드 연골 측면에 위치한 오른쪽 갑상선 소리에 종양 세포의 5 마이크로리터 양을 주입합니다. 모든 세포가 전달되면 침샘 을 재배치하고 실크 브레이드, 코팅, 흡수할 수 없는 봉합사를 사용하여 절개를 닫습니다. 그런 다음 상처 부위에 요오도포비도네를 적용하고 마우스를 전체 복구할 때까지 모니터링하여 더믹 담요에 놓습니다.

갑상선 세포 주입 후 2~3주 후, 입증된 바와 같이 치료 용액을 준비하고, 마취된 갑상선 종양 베어링 동물의 정맥 부비동의 레트로 궤도 주입에 의해 정맥 내용액을 전달한다. 본 대표적인 실험에서, 종양의 성장은 마이크로RNA 146B 억제제 없이 종양내 주입, 음의 대조군에 대하여 현저하게 억제되었다. 일부 증식 마커의 종양 내 발현 수준은 또한 낮은 수준에서 관찰되었다, antagomiR 처리 종양에서, 대조 종양에 비해.

또한, 마이크로 RNA 표적의 회수는 종양 추출 RNA, 또는 단백질의 분석을 통해 연구될 수 있다. 개별 적인 micro RNA의 생체 내 억제가 효과적이고 갑상선 암 처리를 위해 치료적으로 이용될 수 있다는 것을 전체적으로 밝히는. 입증된 바와 같이 마우스에서 확립된 갑상선 종양의 조직학적 분석은 종양 조직의 갑상선 여포 아키텍처를 드러내며 종양을 둘러싼 상피 세포에 대한 염색을 허용합니다.

특히, microRNA 146B 억제제의 정맥 주사는 확립된 종양으로, 대조군 처리된 동물에 비해 종양 부피가 현저히 감소하는 결과를 낳는다. 또한, 1차 종양에서 새로 설명된 미생물RNA 146B 표적 DICER1의 발현은 항마이크로RNA 146B 치료 후 증가하고, 인성 마이크로 RNA 발현의 억제 가능성을 더욱 강조하고 따라서 갑상선암에서의 치료제로서 표적 유전자의 복원을 강조한다. 이 기술, 그리고 후속 리핀 결과, 갑상선암의 처리를 위한 비 경화 RNA에 근거를 둔 새로운 치료를 탐구의 가능성을 열어.