Name: 억제되지 않은 기압 변량 을 통해 노화 마우스에서 호흡 패턴을 얻는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-04-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: 배우세요 마우스 호흡 패턴 측정을 위한 비침습적 기압 변량법. 이 기법은 마취나 구속 없이 깨어 있는 노화 마우스의 호흡을 정량화하여 유전자 변형 계통의 호흡 생리학 연구에 활용됩니다.

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저자들은 안젤라 르, 사라 루비, 마리사 미키가 동물 식민지를 유지하는 일에 대해 감사를 표하고 싶습니다. 이 작품은 1R15 HD076379 (L.R.D.), 3R15 HD076379 (CNR을 지원하는 L.R.D.) 및 자연 과학의 McDevitt 학부 연구 펠로우십 (BEE)에 의해 지원되었습니다.

모든 절차는 르 모인 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었다. 동물의 모든 사용은 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 가이드에 설명 된 정책에 동의했다8.
참고: (중요) 실험 전에 동물 사용에 필요한 모든 승인 및 교육을 받으세요. 실험자는 수면, 조난 및/또는 운동 아티팩트대 정상적인 스니핑 및 호흡의 징후를 포함하여 마우스 동작 및 활동 수준에 익숙해지는 것이 중요합니다.
1. 전신 기압 박리 챔버
<ol><li>커넥터, O-링 등을 포함한 기압 적도 측정 챔버에 대한 적절한 사용자 매뉴얼을 읽고 분석기(예: 대사) 및 소프트웨어에 특정한 파라미터를 정의하는 표준 프로토콜 파일을 만듭니다.</li>
	<li>모든 호스와 튜브가 챔버에 연결되어 있는지 확인하십시오. 기체 흐름 튜브(플로우인)와 진공 관(플로우 아웃)을 기압 간투 챔버에 직접 연결합니다. 참고: 유입은 표시된 바이어스흐름개구에 부착되어야 합니다.</li>
	<li>CO2,O2및 N2 가스 탱크를 가스 믹서에 부착합니다. 실험 전에 모든 가스 탱크가 열린 위치에 있는지 확인하십시오.</li>
</ol>2. 기압 변두리 챔버의 교정
<ol><li>기압 플티스모그래피 소프트웨어의 하드웨어 탭에서 7700 증폭기 설정을 선택하여 높고 낮은 가스 흐름을 보정합니다.</li>
	<li>실험 설계 및 가스 분석기(~0.1L/min)에 적합한 진공(챔버 에서 유동)을 설정합니다. 참고: 유출 속도는 교정 및 정확한 대사 기록을 위한 실험 전반에 걸쳐 동일하게 유지되어야 합니다.</li>
	<li>챔버에서 유동관을 제거하고 진공을 끄고 공기의 낮은 흐름을 설정합니다.</li>
	<li>해당 챔버의 로우 유닛 셀에 0을 입력하여 0 흐름을 기록합니다. 낮은 Cal 셀을 두 번 클릭하고 시간을 3초로 변경하고 측정값을누르고 있습니다.</li>
	<li>유량튜브를 재부착하고 가스(20.93%O2,밸런스N2)가가스 믹서로부터 기압 적도 챔버를 통해 흐르도록 한다.</li>
	<li>리터/분에서 유입을 밀리리터/초로 변환합니다. 해당 챔버에 대한 하이 유닛 셀을 클릭하고 밀리리터/초단위로 값을 입력합니다. High Cal을두 번 클릭하고 시간을 3초로 변경하고 측정값을클릭합니다.</li>
	<li>7700-증폭기 설치 탭을 열어 놓고 대사 분석기를 기압 간편화 소프트웨어로 교정합니다.</li>
</ol>3. 신진 대사 분석기 교정
<ol><li>가스 믹서 프로그램에서, 가스 믹서가 20.93%O2 및 79.07%N2를함유하는 가스의 흐름을 방출하도록 설정한다.</li>
	<li>대사 분석기에서O2 교정 수준을 20.93%로 설정하고CO2를 0%로 읽습니다. 적절한 값을 입력하면 다이얼을 다시 샘플로 돌립니다.</li>
	<li>높은 O2 백분율을 설정합니다. 기압 과다 모그래피 소프트웨어의 ABCD-4 탭을 클릭한 다음 C2 라인의 하이 유닛 아래에 20.93을 입력합니다. 하이 칼에서,3 s로 시간을 변경하고 측정을명중 .</li>
	<li>낮은 CO2 백분율을 설정합니다. C3 선의 낮은 Cal 아래에 0을 입력한 다음 시간을 3초로 변경하고 Low Cal에서 측정값을 클릭합니다.</li>
	<li>가스 믹서 프로그램에서O2 값을 10%로 변경하고CO2 값을 5%로 변경합니다. 가스 흐름이 이러한 값에 맞게 조정될 때까지 몇 분 정도 기다립니다. 대사 분석기에서 조정 노브를 돌려CO2를 5%로 교정합니다. 값이 보정되면 다이얼을 다시 샘플로 돌려야 합니다.</li>
	<li>높은 CO2 백분율을 설정합니다. 기압 과다 모그래피 소프트웨어에O2 및CO2에 적절한 값을 삽입하기 전에 분석기 판독값이 안정적인지 확인합니다. C3 아래에서 높은 단위를 클릭하고 5를입력합니다. 3s로 높은 칼을 변경하고 측정을명중 .</li>
	<li>낮은 O2 백분율을 설정합니다. C2 옵션 아래에서 낮은 단위를 클릭하고 10을입력합니다. 낮은 Cal, 입력 3초를 클릭하고 측정을클릭합니다.</li>
	<li>가스 믹서의 가스 값을 다시 20.93% O2 및 79.07% N2로변경합니다. 챔버가 이러한 값에 적응할 때까지 몇 분 간 기다립니다. 대사 분석기에서 자동으로 20.93% O2 및 0%CO2를읽지 않는 경우 3.1\u20123.7 단계를 반복하여 적절한 교정을 보장합니다. 인증 된 가스 탱크로 적절한 교정을 정기적으로 확인하십시오.</li>
	<li>기압 과다 모그래피 챔버에 연결된 유량계를 다시 확인합니다. 실험에 적합한 속도로 챔버 안팎으로의 공기 흐름을 조정합니다(일반적으로 0.1-0.3 L/min).</li>
	<li>모든 설정이 기압 변액 조영 소프트웨어에 적용되면 확인을 클릭하여 녹화를 시작합니다.</li>
</ol>4. 억제되지 않은 기압 적 개술
<ol><li>마우스의 무게와 초기 체온을 기록합니다. 빈 챔버에서 O2 및CO2 데이터를 수집하기 위해 챔버에 마우스를 배치하기 전에 10 분 기다립니다. 잡음과 냄새가 데이터 수집을 방해하지 않도록 마우스에 익숙한 조용한 지역에서 작업하십시오. 데이터 수집실에서 출입하는 문이나 직원의 개폐를 포함하여 가능한 중단을 방지합니다. 참고: 이 특정 프로토콜은 22 개월 된 남성 C57BL / 6J 마우스를 사용했습니다.</li>
	<li>첫 번째 시간 동안 마우스의 동작을 문서화하고 챔버에서 유입/나가는 흐름의 특정 값을 포함하여 자세한 메모를 작성합니다.</li>
	<li>챔버 습관의 60 분 후, 다음 60 분 동안 조용한 호흡의 세그먼트에 대한 시계. 스니핑과 그루밍없이 길이가 적어도 15 s 를 지속하는 세그먼트를나열합니다. 이식형 장치를 사용할 때는 10분마다 체온 을 측정하십시오.</li>
	<li>실험이 끝나면 챔버에서 마우스를 제거하고 케이지에 다시 놓습니다. 모든 장비를 청소하고 철저히 닦아야합니다. 물방울이 남아 있으면 가압 공기를 사용하여 제거하십시오.</li>
</ol>5. 호흡과 신진 대사의 패턴분석
<ol><li>기압 plethysmography 검토 파일을 열고 관심있는 동물에 대한 기록 된 노트를 참조하십시오.</li>
	<li>소프트웨어에서 대사 패널을 열고 챔버가 비어 있을 때O2 및 CO2의처음 10분의 평균을 취합니다. 이러한 값을 FiO2 및 FiCO2로기록합니다.</li>
	<li>기압 과식 소프트웨어의 흐름 패널을 봅니다. 특성 분석을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 적절한 매개 변수를 설정합니다. 메타 1 탭에서 5.2 단계에서 FiO2 및 FiCO2를 입력하고 메타 2아래의 챔버로의 흐름을 입력하여 VO2 및 VCO2를계산합니다.</li>
	<li>호흡 분석 패턴의 경우, 유동 패널 추적뿐만 아니라 동물 행동에 대한 메모를 사용하여 15초 동안의 조용한 호흡 시간을 확인합니다. 데이터 파서 탭에서 열린 데이터 파서 대화에서 15초 간격의 조용한 Parser View Mode 호흡 시간을 입력합니다.</li>
	<li>구문 분석 된 파생 된 데이터 저장을 클릭합니다. 스프레드시트에서 데이터 파일을 열어 binned 데이터를 가져옵니다.</li>
</ol>6. 무호흡증 및 증강 호흡 분석
<ol><li>열려 있는 검토 파일에서 파서 뷰 모드를종료합니다. 설정 및 P3 설정에서 그래프 설정 옵션으로 이동하여 유형에서 페이지 보기를 선택합니다. 창 수에 대해 5를 선택합니다. -2를 낮음으로 표시된 상자에 넣고 2를 0리터/초의 유량 측정을 위해 높음으로 표시된 상자에 넣습니다. 변경 내용을 적용합니다.</li>
	<li>흐름 추적 패널에서 30분 표시로 스크롤합니다.</li>
	<li>마우스를 챔버에 배치 한 후 30-60 분 동안 무호흡증 과 증강 호흡을 계산합니다. 무호흡증을 나타내는 0.5 s보다 오래 지속되거나 같은 호흡 기간을 정량화합니다. 증강 호흡은 1.25 mL /s 이상의 호흡 흔적의 급격한 상승과 -0.75 mL / s 이하의 급격한 감소로 표시됩니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

프로토콜은 마우스의 조용한 호흡 기준선에 관한 정보를 제공뿐만 아니라 중앙 무호흡증과 증강 호흡에 대한 데이터를 수집합니다. 대표적인 결과는 10분 의 조용한 기준선이 오래된 마우스의 코호트에 대한 4개의 15s 시합의 평균에 비교될 때 호흡의 유사한 패턴을 가지고 있다는 것을 보여줍니다. 중요한 것은, 15s 시합은 통계적으로 다르지 않으며, 이 단은 Levene의 시험을 사용하여 서로 에 있는 변이가 없습니다. 이 데이터는 단 한 번의 짧은 시합이라도 조용한 호흡을 모니터링하기에 충분하다는 것을 보여줍니다. 그러나, 10 분 시합은 최소한의 스니핑과 그루밍 활동을 포함 할 수 있기 때문에, 15 s 대 10 분에서 마우스 내의 개별 적인 변이를 분석하는 것은 다른 사실 인정귀착될 수 있다는 것을 전적으로 가능합니다. 그러나 개별 마우스 기준선 세그먼트를 비교하기 위해 Levene의 테스트를 사용하면 이 프로토콜에 설명된 것과 는 다른 분석을 제공합니다. 전반적으로, 이 방법론의 디자인은 조용한 기준선의 더 긴 기간을 달성하기...

UBP는 호흡 패턴1,2,2,3,,4의평가를위한 일반적인 기술입니다. 이 방법에서, 마우스는 주 챔버 (동물이 보관되는 곳)와 기준 챔버 사이의 압력 차이가 값을 얻기 위해 기압계를 통해 여과되는 폐쇄 챔버에 배치됩니다. 결과 UBP 설치는 비침습적이고 억제되지 않으며 마취 또는 수술의 필요 없이 호흡 측정을 평가할 수 있습니다. 또한 이 기술은 시간이 지남에 따라 동일한 마우스에서 여러 측정이 필요한 연구에 적합합니다. 호흡 주파수, 조수 부피 및 미세 환기와 같은 변수는 단일 시험 또는 여러 번의 시험을 통해이 방법으로 정량화 될 수 있습니다. 전신 UBP는 또한 피크 흐름과 호흡 주기 기간의 측정을 제공합니다. 이러한 매개 변수는 함께 호흡 패턴을 정량화합니다. 기록된 호흡 추적을 통해 데이터를 검토하고 주어진 기간 내에 표시되는 중앙 무호흡증 수를 계산할 수 있습니다. 이 카운트는 조수 부피 및 흡기 시간의 분석과 함께 호흡 패턴의 다른 변화를 측정하는 데 사용할 수 있습니다.
폐 생리학적 파라미터의 직접적인 평가를 위해 여러 비침습적 과염 기법이 존재하는 반면, 전신 UBP는 마우스에 최소한의 과도한 스트레스로 호흡 기능을 스크리닝하는 방법을 허용한다. 조수 중견 유량 측정을 이용하고 또한 비침범성인 헤드 아웃 과다 모그래피는 다른 많은 유형의 과다 모그래피 (예 : 이중 챔버 과다 모그래피)와 마찬가지로 구속에 의존합니다. 이러한 방법은 기도 응답성을 측정하기 위해 설치류 모델에서 사용되었지만5,목 칼라 또는 작은 구속 튜브의 사용은 적응하고 휴식 수준으로 호흡을 반환하기 위해 마우스 (대 다른 종)를 더 오래 걸릴 수 있습니다.
최적의 공기 호흡 세그먼트를 얻는 것은 기준선 비교를 위한 중요한 고려 사항입니다. 상업적으로 이용 가능한 과다 모그래피 시스템의 사용이 증가함에 따라 많은 실험실에서 호흡 패턴 데이터를 수집할 수 있습니다. 중요한 것은, 호흡의 패턴은 수집 기간 내내, 특히 마우스를 위해 가변적입니다. 즉, 실험자의 교육 수준이 결과를 혼동하지 않도록 하는 수단으로 기준 분석을 표준화할 필요가 있습니다. 공기 호흡 세그먼트를 수집하는 방법에는 여러 가지가 있으며, 실험 설계 간의 변화의 한 영역역할을 합니다. 한 예로 챔버1내에서 이전에 정의된 시간 집합을 따르는 최종 10-30분의 데이터를 평균화하는 반면, 다른 방법은 마우스가 5-10분6동안눈에 띄게 진정될 때까지 기다리는 것을 포함한다. 후자는 2-3 h를 달성 하기 위해 걸릴 수 있습니다 및 경우에 따라, 마우스가 충분히 오랫동안 진정 되지 않은 경우 재판을 포기 해야 할 수 있습니다. 이 관심사는 관찰된 행동이 더 불안하고 흥분하는 마우스의 긴장에 대한 특히 중요한 고려사항입니다 7. 이 마우스는 챔버 환경에 적응하는 데 더 오래 걸릴 수 있으며 짧은 시간 동안만 침착하게 유지합니다. 기준선 수집에 전념하는 시간을 제한하여 각 마우스의 챔버 시간을 표준화합니다.
실험자는 마우스의 휴식 동작 값을 포괄하는 적절한 기준선을 획득하지만 적시에 발생하는 것이 중요합니다. 따라서, 이 보고서의 목적은 마우스에서 호흡 매개 변수에 대한 짧은 조용한 기준 값을 얻기 위해 사용되는 방법에 대한 설명을 제공하는 것입니다. 또한, 우리는 무호흡증과 증강 호흡이 챔버에서 첫 번째 시간 동안 정량화 될 수 있다고보고합니다.

<table><tbody><tr><td>이산화탄소 분석기</td><td>AEI Technologies</td><td>CD-3A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>이산화탄소 센서</td><td>AEI Technologies</td><td>&nbsp; P-61B</td><td></td></tr><tr><td>컴퓨터는</td><td></td><td></td><td>Ponemah 요구 사항을 준수해야합니다</td></tr> : <tr><td>드라 라이트 비드</td><td>PermaPure LLC</td><td>DM-AR</td><td></td></tr><tr><td>흐름 제어</td><td>AEI Technologies</td><td>R-1</td><td>진공</td></tr><tr><td>유량계</td><td>TSI</td><td>4100</td><td>챔버 당 하나 및 진공 가스 혼합기 용 1 개 필요</td></tr><tr><td></td><td>MCQ Instruments</td><td>GB-103</td><td></td></tr><tr><td>가스 탱크</td><td>Haun</td><td></td><td>100% 산소, 100% 이산화탄소, 100% 질소 - 식품 등급 또는 일반 실내 공기 및 가스 문제를 위한 사전 혼합 탱크</td></tr><tr><td>산소 분석기</td><td>AEI Technologies</td><td>S-3A</td><td></td></tr><tr><td>산소 센서</td><td>AEI Technologies</td><td>&nbsp; N-22M</td><td></td></tr><tr><td>폴리우레탄 배관</td><td>SMC</td><td>TUS 0604 Y-20</td><td></td></tr><tr><td>Ponemah 소프트웨어</td><td>DSI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>작은 설치류 약실</td><td>Buxco/DSI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>온도계 (LifeChip 체계)</td>정확한 체온을 가지고 가는 온도계의 아무 유형나 <td>Destron 두려워</td><td></td>하는 것은 <td>적당합니다, 그러나 이식할 수 있는 칩의 사용은 가지고 가기를 위한 동물에게 최소 교란을 허용합니다 동물이 UBP 챔버에 있는 동안 여러 체온 측정&nbsp;</td></tr><tr><td>트랜스듀서</td><td>Validyne</td><td>DP45</td>는 <td>챔버당 하나가 필요합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>전신 혈량계 시스템&nbsp;</td><td>Data Science International (DSI)</td><td></td><td>에는 ACQ-7700, 압력/온도 프로브 등이 포함됩니다.</td></tr></tbody></table>

억제되지 않은 기압 변량 을 통해 노화 마우스에서 호흡 패턴을 얻는 방법

Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography

억제되지 않은 기압 적당층 (UBP)은 호흡 빈도, 조수 부피 및 미세 환기가 일상적으로보고되는 마우스에서 호흡 패턴을 정량화하는 방법입니다. 또한 중앙 무호흡증과 보강 호흡의 존재를 포함하여 호흡의 신경 출력에 관한 정보를 수집 할 수 있습니다. UBP를 위한 중요한 고려사항은 호흡 도전에 대한 반응을 해명하기 위하여 불안하거나 활동적인 행동의 최소한의 충격으로 호흡 세그먼트를 얻는 것입니다. 여기에서, 우리는 조용한 호흡의 더 긴 시합을 기다리는 것에 필적하는 나이 든 마우스에서 짧고 조용한 기준선을 장악할 수 있는 프로토콜을 제시합니다. 짧은 시간 세그먼트의 사용은 마우스의 몇몇 긴장이 점점 흥분하거나 불안할 수 있고, 조용한 호흡의 더 긴 기간이 적당한 기간 안에 달성되지 않을 수 있기 때문에, 가치가 있습니다. 우리는 UBP 챔버에 22 개월 된 마우스를 배치하고 취득하는 데 2-3 시간을 했다 더 긴 10 분 조용한 호흡 기간에 분 60-120 사이의 네 개의 15 의 조용한 호흡 세그먼트를 비교했다. 우리는 또한 30 분 숙고 기간에 따라 조용한 호흡 세그먼트 전에 중앙 무호흡증 및 증강 호흡의 수를 얻었습니다. 우리는 조용한 호흡의 10 분이 훨씬 짧은 15 s 의 지속 시간을 사용하는 것과 비슷하다는 것을 보여줍니다. 또한, 이러한 15s의 조용한 호흡 세그먼트에 이르는 시간은 중앙 기원의 무호흡증에 관한 데이터를 수집하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 조사자가 일정 시간 내에 호흡 패턴 데이터를 수집할 수 있게 해주며 흥분성 행동의 증가된 양을 나타낼 수 있는 마우스에 대해 조용한 기준선 측정을 실현할 수 있게 합니다. UBP 방법론 자체는 호흡 패턴 데이터를 수집하는 유용하고 비침습적 인 방법을 제공하고 마우스가 여러 시간 지점에 걸쳐 테스트 할 수 있습니다.

UBP의 결과는 정상 공기 가스 하에서 수행된 16세(22개월 된) 마우스에서 호흡 패턴의 평가로서(균형 잡힌N2를가진 20.93%O2)가 보고되었다. 분석은 먼저 4개의 짧은 15s 세그먼트의 평균 대 더 긴 10 분 조용한 호흡 세그먼트 (2 시간 이상 을 얻었다)의 비교를 포함했습니다 (분 60-120 안에 정량화). 호흡이 활발한 호흡 동작없이 일치하는 조용한 호흡의 대표적인 흐름 추적은 그림 1A에제공됩니다. 유사한 추적이 동물에게서 수집될 때, 호흡의 100%는 소프트웨어에 의해 받아들여져야 합니다. 그러나 그림 1B는 마우스가 챔버를 탐색하고, 스니핑 및/또는 그루밍하는 보다 활동적인 세그먼트에서 호흡을 나타냅니다. 그림 1B에 ...

억제되지 않은 기압 적당층 은 깨어있는 마우스에서 호흡의 패턴을 정량화하는 데 사용됩니다. 표준화된 프로토콜 아래에 있는 15s 세그먼트는 조용한 호흡의 연장된 기간과 유사한 값을 표시한다는 것을 보여줍니다. 이 방법론은 또한 챔버에서 첫 번째 시간 동안 무호흡증과 증강 호흡의 정량화를 허용합니다.

Unrestrained barometric plethysmography (UBP) is a method for quantifying the pattern of breathing in mice, where breathing frequency, tidal volume, and ...

이 프로토콜은 마우스에서 호흡의 패턴을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 중요한 것은, 결과를 혼동할 수 있는 유전자 변형긴장에 있는 액티브한 행동의 충격을 최소화할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비침습적이며 마취 또는 스트레스 유도 구속의 사용을 필요로하지 않는다는 것입니다.모든 호스와 튜브가 기압 플류스모그래프 챔버에 연결되어 있는지 확인하고 가스 유입 튜브와 진공 유출 튜브를 기압 플리츠모그래피 챔버에 직접 연결하여 시작합니다. 챔버로 낮은 흐름을 보정하려면 챔버 안팎으로 흐름을 설정하고 챔버로 흐르는 튜브를 제거합니다. 진공을 끄고 낮은 단위 셀에 0을 입력하여 기압 주름 소프트웨어의 7700 증폭기 설정에서 0 흐름을 기록합니다.그런 다음 유입 튜브를 다시 부착하고 진공 흐름을 켜고 높은 흐름을 보정하고 20.93 %의 산소 균형 질소 가스가 가스 믹서에서 기압 주름 챔버를 통해 흐를 수 있도록합니다. 다음으로 분당 리터에서 측정된 유입 값을 초당 밀리리터로 변환하고 높은 단위 셀을 클릭하여 초당 밀리리터값으로 입력합니다. 높은 cal을 두 번 클릭하고 시간을 3초로 변경하고 측정값을 클릭합니다.그런 다음 7700 증폭기 설정 탭을 열어 대사 분석기를 기압 적 주름 소프트웨어로 보정하십시오. 대사 분석기를 보정하기 위해 가스 믹서 프로그램에서 가스 믹서를 20.93 %의 산소와 79.07 %의 질소로 설정합니다. 그리고 대사 분석기에서 산소 보정 수준을 20.93%로 설정하고 이산화탄소를 0%로 설정하여 적절한 값이 가스 분석기에 입력되면 다이얼을 다시 시료로 돌려 높은 산소 및 낮은 이산화탄소 비율을 설정합니다.기압 플리츠모그래피 소프트웨어의 ABCD 4 탭을 클릭하고 산소에 대한 C2 라인의 높은 단위에서 20.93을 입력합니다. 높은 칼 아래에서 시간을 3초로 변경하고 측정값을 클릭합니다. 이산화탄소에 대한 C3 라인의 낮은 칼 아래 0을 입력합니다.그런 다음 시간을 3초로 변경하고 낮은 칼로리에서 측정을 클릭합니다. 가스 믹서 프로그램에서는 산소 값을 10%로 변경하고 이산화탄소 값을 5%로 변경하고 가스 흐름이 이러한 값에 적응할 때까지 몇 분 정도 기다립니다. 신진 대사 분석기에서 조정 노브를 돌려 이산화탄소를 5%로 보정하여 값을 보정한 후 다이얼을 다시 샘플로 돌립니다.분석기 판독값이 안정적이지 않은지 확인한 후 C3 아래의 높은 단위를 클릭하고 이산화탄소에 대해 5대를 입력합니다. 그런 다음 높은 cal을 3초로 변경하고 측정을 클릭합니다. C2 옵션 에서 낮은 단위를 클릭 하 고 입력 10 산소에 대 한 낮은 칼, 입력 3 초 및 측정을 클릭 합니다.가스 믹서를 다시 20.93%의 산소와 79.07%의 질소로 변경하고 챔버가 이러한 값에 적응할 때까지 몇 분 간 기다립니다. 유동 믹서와 산소 이산화탄소 분석기가 제대로 수행되고 있는지 확인하기 위해 인증 된 가스 탱크와 추가 교정을 정기적으로 실행합니다. 대사 분석기를 보정한 후 기압 플류스모그래프 챔버에 연결된 유량계를 다시 확인하고 챔버 안팎의 공기 흐름을 조정하여 실험에 적합한 속도로 조절한다.모든 설정이 기압 플리츠모그래피 소프트웨어에 적용된 경우 획득 탭에서 닫기를 클릭합니다. 억제되지 않은 기압 주름 촬영을 위해 마우스의 무게와 초기 체온을 홈 케이지로 되돌리기 전에 기록합니다.마우스를 챔버에 넣기 전에 빈 챔버에서 배경 산소 및 이산화탄소 데이터를 수집하기 위해 10 분 기다립니다. 첫 번째 시간 동안, 챔버의 유입 및 유출의 특정 값을 포함하는 상세한 메모를 복용 동물의 행동을 문서화합니다. 챔버 습관의 끝에서, 이식 형 장치를 사용할 때 체온 측정을 복용 다음 60 분 동안 조용한 호흡의 세그먼트에 대한 감시.스니핑, 그루밍 또는 탐험없이 진정 호흡의 인스턴스가 적절하게 식별 될 수 있도록 일반적인 마우스 행동에 익숙해주의하십시오. 실험이 끝나면 마우스를 케이지로 돌려보내 장비를 철저히 청소하고 닦아냅니다. 신진 대사 분석을 위해, 소프트웨어에서 대사 패널을 열고 챔버가 비어있을 때부터 산소와 이산화탄소 수준의 처음 10 분의 평균을 얻을 수 있습니다.기압 플리츠모그래피 소프트웨어의 흐름 패널을 보고 오른쪽 단추를 클릭하여 특성 분석하여 적절한 매개 변수를 설정합니다. 호흡 분석 의 패턴에 대 한, 동물 행동에 대 한 노트를 사용 하 여 조용한 호흡의 15 초 에 대 한 시간을 확인 뿐만 아니라 흐름 패널 추적. 그런 다음 데이터 파서 탭에서 열린 파서 대화 에서 시간을 입력하고 Parser 보기 모드를 클릭하여 특정 15초 관심 세그먼트만 표시합니다.무호흡증과 보강된 호흡을 분석하려면 공개 검토 파일에서 파서 보기 모드를 종료하고 P3 설정 및 그래프 설정을 클릭하여 페이지 뷰를 창 수로 선택하고 5개. 마이너스 2를 낮게 표시된 상자에 입력하고 초당 밀리리터의 흐름 측정값에 대해 높은 라벨이 붙은 상자에 2개를 입력하고 변경 사항을 적용합니다. 그런 다음 흐름 추적 패널의 30분 마크로 스크롤하여 마우스를 챔버에 배치한 후 30~60분 동안 무호흡증과 보강된 호흡을 수동으로 계산합니다.이 분석을 위해, 정지된 호흡의 기간은 0.5 초 이상 또는 동일하게 되는 무호흡증을 나타냅니다. 증강 호흡은 초당 1.25 밀리리터 를 초과하는 호흡 흔적의 급격한 상승으로 표시되며 초당 0.75 밀리리터 이하로 급격히 감소합니다. 22개월 된 마우스에서 조용한 호흡을 추적하는 이 대표적인 흐름은 호흡이 적극적인 호흡 동작과 일치하지 않는 패턴의 전형입니다.이 호흡 패턴은 마우스가 챔버 스니핑 및 /또는 그루밍을 탐구하고이 방법론에 사용되는 호흡 수집의 유형에 이상적이지 않은 동안 보다 활동적인 세그먼트에서. 두 시간 지점 사이의 호흡 차이의 가능한 패턴의 평가를 위해 선택된 파라미터는 호흡 주파수, 조수 부피, 미세 환기, 조수 부피 피증 시간 비율 및 분 환기 배출 이산화탄소 비율을 배출하였다. 추가 분석은 주파수, 조수 부피, 분 환기, 조수 부피 피증 시간 비율 및 분 환기 배출 이산화탄소 비율을 위한 4개의 15초 기준 세그먼트각각을 수행하였다.호흡 측정의 어떤 패턴에 대한 4 시간 세그먼트 사이의 가변성에 있는 어떤 시간 점 및 아무 의미있는 다름도 찾아낸다. 30~60분 동안 각 동물에 대해 관찰된 무호흡증 및 증강 호흡의 정량화는 숙성된 동물이 30분 범위 내에 많은 수의 무호흡증과 증강 호흡의 존재를 선보였다는 것을 밝혔다. 연구원은 또한 내정간섭 또는 치료에서 유래된 호흡 패턴에 있는 어떤 변경을 문서화하기 위하여 저산소증 또는 hypercapnia와 같은 가스 도전을 채택할 수 있습니다.이 기술은 뚜렷한 행동 차이를 나타낼 수 있는 작은 설치류 및 유전자 변형된 동물 긴장에서 호흡의 패턴을 특성화하기위한 수단을 제공합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

SCIREQ Inc의 몬트리올, 품질 관리, 현재의 프로토콜은 호흡 역학의 측정​​뿐만 아니라 강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 흡입 메타 콜린에 대한기도 응답의 평가 (flexiVent을 실행하는 데 필요한 절차에 대한 자세한 단계별 설명을 제공합니다 , 캐나다).

강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 호흡기 시스템 역학의 평가

호흡 생리학의 평가는 전통적으로 동물의 억제 또는 진정을 요구 기술에 의존하고있다. 무제한 전신 혈량 측정법은, 그러나, 동물 모델에서 호흡 생리의 정확하고 비 침습적 정량 분석​​을 제공합니다. 또한, 기술은 종 연구를 허용 마우스의 호흡 평가를 반복 할 수 있습니다.

무제한 전신 혈량 측정법을 사용하여 마우스의 호흡 기능을 측정

이 논문은 이식 된 원격 장치를 통해 전신 혈량 측정법 및 근전도와 질병 진행에 걸쳐 자유롭게 행동 근 위축성 측삭 경화증 (ALS) 마우스 모델에서 인공 호흡기 근육 활동의 측정을 반복하는 방법을 소개한다.

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우리의 연구는 저산소 환기 반응 (HVR)에 경동맥 바디 (CB)에 있는 leptin 신호의 효력에 집중합니다. 우리는 CB 탈동 후 HVR에 렙틴의 효과를 측정하는 '기능 상실' 실험과 CB에서 렙틴 수용체의 과발현 후 HVR을 측정하는 '기능의 이득' 실험을 수행했습니다.

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이 프로토콜은 세균성 호흡기 질환 진행을 비 침습적으로 모니터링하기 위해 단순화 된 전신 혈량 검사 장치의 구성 및 사용을 제시합니다.

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