Name: Opsonophagocytic 살해 분석 결과 세균성 병원 체에 대 한 면역학 응답을 평가 하 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 배우세요 조반식균살해검사(OPKA)를 Streptococcus pneumoniae에 적용하여 면역세포의 식균활성과 항체 효능을 평가하는 방법입니다. 이 기법은 면역치료제 개발에 필수적인 도구로 활용됩니다.

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우리는 우리의 실험실에서 OPKA 분석 실험에서 그의 귀중 한 원조에 대 한 박사 문 남 (알라바 마의 대학 버밍엄) 감사 합니다. 이 작품은 국가 학회 건강 그랜트 1R01AI123383-01A1 FYA에 의해 지원 되었다.

1. 문화, 차별화, 및 HL-60 셀의 유효성 검사

<ol><li>500 mL와 L-글루타민 및 50 mL 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청 RPMI의 HL-60 세포 배양을 준비 합니다. HL-60 세포의 분화에 영향을 미칠 수 있습니다이 항생제를 추가 하지 마십시오.</li>
	<li>전파/HL-60 세포의 유지 보수에 대 한 문화 5 x 106 셀 75 cm2 HL-60 세포 배양의 10 mL에 37 ° C, 5% CO2플라스 크 통풍. 최적의 세포 농도 유지 하기 위해 셀 3−4 일 마다 통로. 참고: 세포 농도 5 x 106/mL을 넘지 말아야 한다.</li>
	<li>1 mL 극저온 튜브 aliquoting 약 1 x 106 셀/mL 10% 디 메 틸 ⁚ (DMSO)와 HL60 배양에 의해 HL-60 셀의 일 주식을 생성 합니다. 참고: 작업 주식-80 ° c.에 저장 될 수 있습니다. 마스터 주식-120 ° c.에 저장 한다</li>
	<li>OPKA 이전 3 일 동안 살 균 필터 출장 75 c m2 플라스 크에서 37 ° C, 5% CO2 에서 자란 1.5 0.6 %N, N-dimethylformamide (DMF) HL-60 세포 배양의 15 ml에서 107 셀 x 여 HL-60 세포 분화.</li>
	<li>HL-60 셀 성공적으로 분화는 OPKA 분석 결과에 사용할 적절 한 생존 및 설립된 흐름 cytometry 프로토콜16,17에 따르면 세포 표면 마커를 테스트 하 여 확인 18,19. 차별화, 후 HL-60 세포를 수확 하 고 CD71, CD35, annexin V, 및 propidium 요오드 화물에 대 한 약 1 × 104 셀 붙일 활용 된 항 체/얼룩 얼룩. 참고: 차별화 된 셀 ≥65% 가능한, ≥55 %CD35 이어야 한다+, 및 ≤20 %CD71+ 통해 결정으로 설립 유효성 검사 프로토콜14 (그림 1).</li>
</ol>
2입니다. OPKA 버퍼 및 시 약의 준비

<ol><li>살 균 젤라틴와 Ca2 +/Mg2 +, 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청의 5 mL 2.5 mL 0.1%의 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) x 살 균 1의 42.5 mL를 혼합 하 여 살 균 opsonization 버퍼 B (OBB) 50 mL를 준비 합니다. 4 ° c.에 게</li>
	<li>아기 토끼를 보완 가져오고-80 ° c.에 저장</li>
	<li>얻거나 세균성 문화 접시 (즉, 15 x 100 m m2 5% 양 혈액 한 천 배지)을 준비.</li>
</ol>
3입니다. 세균 재고 샘플의 준비

<ol><li>시험 될 세균성 strain(s)의 재고를 얻을. 참고: 이 프로토콜, serotype 3 구 균 (WU2, 박사 문 남 아낌없이 제공) 사용 됩니다에 대 한.</li>
	<li>약 2−4 h 37 ° c.에 대 한 적절 한 국물 (즉, 토 드-휴이 트 국물 + 0.5% 효 모 추출 물이 WU2 긴장에 대 한)에서 세균성 긴장을 성장 참고: 광학 밀도 600 nm (OD600) 문화의 0.6과 0.8 사이 여야 합니다.</li>
	<li>2 분 동안 6000 x g 에서 원심 분리 하 여 박테리아를 작은 하 고 적절 한 국물에 15% 글리세롤의 10−30 ml에서 셀 resuspend. 약 수 살 균 1.5 mL 원심 분리기 튜브와-80 ° c.에 게 세균성 문화 (약 수 당 500 µ L)</li>
	<li>37 ° C 물 욕조에 세균 주식의 한 유리병 밖으로 해 동. 세균성 세포를 작은 하 고 메 마른 조건 하에서 OBB의 500 µ L에서 resuspend.</li>
	<li>OBB (즉, 아무 희석의 10 µ L, 1시 10분의 10 µ L, 10 µ L 1: 100, 등등)에서 세균의 다른 희석을 준비 합니다. 치료 되지 않는 세균의 다양 한 희석을 사용 하 여 아래 설명 된 대로 OPKA 분석 결과 (섹션 4-6, 포함 HL-60/보완 공동 문화)를 수행 합니다. 30 ° C (아무 CO2)에서 하룻밤 격판덮개 문화. 참고: 온도 30 ° C는 자라 난;을 방지 하기 위해 WU2에 대 한 특정 다른 변종/serotypes 37 ° c.에서 최적의 성장 수 있습니다.</li>
	<li>치료 세균성 주식 HL-60 세포와 보완 공동 경작의 각 희석에 대 한 식민지를 계산 합니다. 박테리아의 어떤 희석 생성 수 식민지 (약 치료 박테리아 공동 HL-60 세포 배양에 대 한 80−120 CFUs)의 최적의 수를 결정 합니다. 이 희석이 세균성 주식을 포함 하는 미래 OPKAs에 대 한 note</li>
</ol>
4. 세균 치료 및 문화

<ol><li>세균성 주식 단계 3.3에서에서 준비의 1 개의 관 동 펠 릿 박테리아 (6000 x g 2 분)과 최적의 희석 단계 3.6에서에서 결정에 셀 펠 릿 OBB에서 resuspend.</li>
	<li>라운드-하단 96 잘 셀 문화 접시에 잘 당 resuspended 세균 희석의 10 µ L 플라스틱</li>
	<li>중복에서 각 실험 잘에 적절 한 항 체 또는 약물 치료의 20 µ L를 추가 합니다. 참고: 이 프로토콜에서 쥐에서 생성 serotype 특정 항 체 치료 X로 추가 됩니다 고 serotype 3 다 당 류 캡슐을 저하 알려진 glycoside 가수분해 효소 효소 치료로 Y (그림 2)4,20추가 됩니다. 제어 웰 스에 대 한 치료 우물 사용 되는 버퍼에 따라 PBS 또는 OBB, x 1을 사용 합니다.</li>
	<li>실 온에서 1 시간에 약 90 rpm에서 샘플 접시를 흔들어. 이러한 조건에 따라 최적의 온도 또는 테스트 되 고 치료의 동요 상태를 조정 합니다.</li>
</ol>
5. HL-60 세균성 공동 문화

<ol><li>HL-60 세포와 함께 처리 됩니다 DMF 3 일 이전 (단계 1.4 참조) 15 mL 원뿔 튜브에 HL-60 분화 세포를 수확 하 여 준비 합니다. 작은 셀 (500 x g, 3 분), 상쾌한, 삭제 및 1 x PBS의 적어도 10 mL로 씻어.</li>
	<li>씻어 셀 (500 x g, 3 분) 펠 렛, 상쾌한, 폐기 및 OBB 셀 resuspend (1 mL OBB와 함께 시작 하 고 셀 계산 후 1 x 107/mL의 최종 농도 대 한 조정).</li>
	<li>1:5 마지막 볼륨에 아기 토끼 보완 (살 균, undiluted 아기 토끼 혈 청, 나이 3−4 주)를 추가 합니다. 참고: HL-60-보완 혼합물의 최종 농도 1 x 107/mL 이어야 한다. 경우 보완 종속성 테스트, 열 비활성화 보완 활성 HL-60 셀을 포함 하는 두 번째 솔루션을 사용할 수 있습니다 (보완에 물 욕조에 배양 하 여 비활성화 될 수 있습니다 > 적어도 30 분 동안 55 ° C).</li>
	<li>1 h 세균성 문화 완료 (4.4 단계) 인 후에, 분할 각 샘플 (즉, 10 µ L의 두 개의 새로운 우물에 각 30 µ L 샘플) 두 그룹 (즉, 사용 20 µ L pipetting 오류에 대 한 계정이 원래 30 µ L 공동 문화)에 대 한 중복 웰 스 : 한 세트 HL-60-보완 공동 경작 되며 하나 박테리아만 포함 됩니다. 50 µ L을 우물의 각 실험 세트 (단계 5.3)에서 HL-60-보완 혼합물의 추가 (위임 + HL-60); 박테리아만 (위임된-HL-60)의 우물에 혼자 OBB의 50 µ L를 추가 합니다. 참고: 이 예제에서는 약 800 세균 CFUs 5 x 105/50 µ L HL-60 셀 초기 공동 문화에 사용 됩니다. 감염의이 다양성은 너무 높거나 너무 낮은 최종 식민지 숫자에 표시 된 대로, HL-60 세포 수 반대로 초기 세균 희석을 조정 합니다.</li>
	<li>1 h (아무 CO2) 37 ° C에서 96 잘 접시를 흔들어.</li>
</ol>
6. 샘플 도금 및 야간 보육

<ol><li>각 샘플에 적어도 50 µ L의 볼륨, OBB와 1:5 각 잘 희석.</li>
	<li>50 µ L 세균성 문화 접시, 샘플 사이의 적절 한 간격이 확보의 지정 된 영역에 직접 각 샘플의 플라스틱 15 x 100 m m2 에 대 한 한 접시, 한 접시에 피펫으로 약 4 샘플 라운드.</li>
	<li>커버 하 고 샘플을 실 온에서 약 15 분 동안 건조를 허용 합니다.</li>
	<li>반전 접시와 문화 30 ° C (아무 CO2)에서 하룻밤. 또는, 접시 형태에 대 한 제어 또는 무산 소 조건 세균성 성장 영향을 주는지 여부를 테스트 하는 혐 기성 항아리에 문화.</li>
	<li>야간 문화, 후 각 지정 된 샘플 지역에 식민지를 계산 합니다. 해당 컨트롤 및 HL-60 셀 공동 문화에 영향을 받지 않는 샘플 각 세트에서 라이브 셀의 수를 비교 하 여 데이터를 분석 (100% 세포 생존, 0%의 지표 세포 살해).</li>
</ol>

<ol><li>Romero-Steiner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+an+opsonophagocytic+assay+for+the+measurement+of+functional+antibody+activity+against+Streptococcus+pneumoniae+using+differentiated+HL-60+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Diagnostic+Laboratory+Immunology%22%5BJournal%5D)">Standardization of an opsonophagocytic assay for the measurement of functional antibody activity against Streptococcus pneumoniae using differentiated HL-60 cells.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 4 (4), 415-422 (1997).</li>
<li>Nanra, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsular+polysaccharides+are+an+important+immune+evasion+mechanism+for+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+and+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Capsular polysaccharides are an important immune evasion mechanism for Staphylococcus aureus.</a> Human Vaccines and Immunotherapeutics. 9 (3), 480-487 (2013).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

OPKAs 예방 접종6,8에 의해 유도 된 항 체 중재 면역 반응 평가에 필수적인 역할을 제공 합니다. 이 단순화 된 OPKA의 주요 중요성은 테스트할 조건에 (즉, 항 체, 효소 치료, 등.). 이런이 의미에서이 분석 결과에 먹어서, opsonins (즉, 항 체)의 기여를 테스트를 사용할 수 있는 동안 그것은 또한 사용할 수 있습니다 일반적으로 phagocytic 경로 억제 하는 독성 요소 (즉, capsular 류)을 극복 하는 방법을 평가 하. 잠재적으로 다중화 된 OPKA에 일반적으로 사용 되는 단계 수를 최소화 실험 결과 영향을 미칠 수 있는 문제 해결 및 사용 가능한 데이터를 얻기 위해 최적화의 양을 줄여 기술적 오류에 대 한 가능성을 최소화 합니다. 이 프로토콜은 유사 치료 조건에 적합, 그것은 많은 다양성에 대 한 허용.
HL-60의 문화 및 세균성 주식의 설...

Opsonophagocytic 분석 결과 (OPKA)를 죽이 세균성 구조 또는 기능 변경 이후의 변화 면역 반응 및 기능에 연결 하기 위한 중요 한 도구입니다. 이와 같이, 그것 자주 면역 기반 항 체 치료, 백신 후보자, 효소 최적화 등의 효능을 결정 하기 위해 분석 결과 보완으로 사용 됩니다. Vivo에서 분석 실험 공간이 세균 감염 모델에 보호를 결정 하는 데 필요한 반면는 OPKA 평가 세균성 세포 죽음에 면역 기여 가장 기본적인 구성 요소를 사용할 수 있습니다: 박테리아, 면역 세포, 및 실험 치료입니다. 이전 연구는 OPKAs 수정 하 고 다양 한 박테리아와 serotypes, 연쇄 상 구 균 균1,2 포도 상 구 균, 녹 농 균3를 포함 하 여 사용할 수 있습니다 나타났습니다. 또한, 이러한 최적화 된 분석 실험 박테리아를 더 개선 보완-중재 면역 세포4 및 항 체 치료에 액세스할 수 있도록 하는 효소의 기능을 포함 하 여 다른 실험적 치료를 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다. opsonization5. 고전적인, OPKA 분석 결과 성공적으로 사용 되었다 기초 및 임상 연구에서 병원 체 특정 항 체6,,78,9에 의해 유도 된 보호에 대 한 강력한 표시기로 설정 .
Opsonophagocytic 살해의 평가 대 한 면역 세포의 다른 종류를 사용할 수 있습니다. 1 일반적으로 사용 되 phagocytic 인구는 HL-60 인간 leukemic 세포 라인. 이 셀 라인 배양에서 사 promyelocytes로 유지 될 수 있다 그러나, 그들은 다른 약물 치료10,11을 통해 다양 한 활성화 상태에 분화 될 수 있다. HL60 n의 처리, N dimethylformamide 강한 phagocytic 활동11활성화 된 호 중구에 셀 라인을 차별화합니다. HL-60 셀 최적화 되어10이 먹어서 분석 실험 위해 자주 사용 하는 동안 다른 기본 polymorphonuclear 백혈구 면역 실험12팔으로 사용할 수 있습니다.
또한, 이러한 분석 실험 또는 단순화 된13 수 다중화14 테스트할 박테리아의 여러 항생제 내성 변종에 보고. 멀티플렉스 메서드는 더 효율적으로 한 접시15자리 당 단위 (CFUs)를 형성 하는 세균성 식민지를 셀 수 있는 소프트웨어의 개발을 통해 실현 하였습니다. 여기, 하나의 세균, HL-60 셀, 아기 토끼 보완, 긴장과 혈액 한 천 배지를 사용 하 여 효율적인된 방안을 설명 합니다. 이 방법으로 여러 치료 세균성 감염에 타고 난 면역 반응 수 변조 하는 방법에 대 한 특정 연구 질문을 해결 하기 위해 신속 하 게 평가 될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>Annexin V (APC conjugated)</td><td>BioLegend</td><td>640919</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD35, human (PE conjugated)</td><td>BioLegend</td><td>333405</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD71, human (PE conjugated)</td><td>BioLegend</td><td>334105</td><td></td></tr><tr><td>bacterial strain to use (i.e., Streptococcus pneumoniae, WU2)</td><td>Bacterial Respiratory Reference Laboratory (Dr. Moon Nahm)&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈액 한천 플레이트</td><td>Hardy 진단</td><td>A10</td><td></td></tr><tr><td>태아 클론 혈청</td><td>HyClone</td><td>SH30080.03</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Sigma</td><td>G9012-1L</td><td></td></tr><tr><td>HL-60 세포</td><td>ATCC</td><td>CCL-240</td><td></td></tr><tr><td>IgG 이소타입 제어 (PE 접합)</td><td>BioLegend</td><td>400907</td><td></td></tr><tr><td>N,N-dimethylformamide (DMF)</td><td>Fisher 화학 물질</td><td>UN2265</td><td></td></tr><tr><td>프로피듐 요오드화물</td><td>시그마</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 매체 L-글루타민</td><td>코닝</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr></tbody></table>

opsonophagocytic 살해 분석 결과 세균성 병원 체에 대 한 면역학 응답을 평가 하

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

호스트의 세균성 식민지에 면역 반응의 중요 한 부분은 이다 식 균 작용. Opsonophagocytic 살해 분석 결과 (OPKA) phagocytic 세포는 세균 대 공동 교양 있는 실험적인 절차 이다.입니다. 면역 세포 phagocytose 하 고 보완 종속 방식에서 세균성 문화를 죽 일 것 이다. 중재 하는 면역 세포 살해의 여러 가지 요인에 따라 달라 집니다 효율과 어떻게 다른 박테리아를 확인 하기 위해 사용할 수 있습니다 세포 죽음에 관하여 문화 비교. 이 방법에서는, 특정 세균성 긴장 또는 serotypes에 대 한 잠재적인 면역 기반 치료제의 효능을 평가 수 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 기본적인 문화 조건 및 셀 세 치료 조건 및 HL-60 면역 세포 공동 문화 후 세균 세포 생존 능력을 결정 하는 단순화 된 OPKA를 설명 합니다. 이 메서드는 다른 폐 렴 serotypes, capsular와 acapsular 긴장, 및 다른 세균 종 수와 성공적으로 이용 되어. 이 OPKA 프로토콜의 이점은 그것의 간명, 다양성 (로이 분석 결과 opsonins로 항 체 치료에 국한 되지 않습니다), 그리고 시간과 기본 실험 그룹을 평가 하기 위해 시 약의 최소화.

HL-60 차별화의 유효성 검사는 OPKA를 시작 하기 전에 수행 되어야 합니다. 이 CD11b, CD35, CD71, 및 annexin V (그림 1)의 세포 외 식을 결정 하려면 cytometry 사용 하 여 수행할 수 있습니다. Propidium 요오드 화물은 또한 생존의 표식으로 사용할 수 있습니다. 치료를 받고 이후 DMF와 3 일, CD35의 식을 증가 한다 (모든 셀의 ≥55%) CD71의 표현을 감소 한다 (모든 셀의 ≤20%). Annexin V +와 함께 propidium 요오드 화물 (PI +) 세포의 비율 이어야 한다 &lt; 충분 한 보장을 35% 세포 생존 능력. 이러한 비율 최소 요구 사항을 충족 하지 못하면, 토론에 설명 된 대로 문화 조건 조정 되어야 한다.
CFUs 단계 6.5에서에서 얻은 수 비교 그림 2와 같이 치료 제어 그룹 (100% ...

이 opsonophagocytic 죽이 분석 결과 응답 하 고 다른 치료 조건에 기반 하는 박테리아를 죽 일 phagocytic 면역 세포의 기능을 비교 하는 데 사용 됩니다. 고아 하 게,이 분석 결과 opsonin로 박테리아에 대하여 제기 하는 항 체의 효과 기 기능을 평가 하기 위한 황금 표준 역할을 합니다.

Opsonophagocytic 살해 분석 결과 세균성 병원 체에 대 한 면역학 응답을 평가 하

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

이 분석법은 세균 구조의 변조와 면역 세포 기반항균 활성에 기능을 연결합니다. 따라서, 잠재적인 처리의 중요한 면역 치료는 향상한 세균성 정리의 가능성을 결정하는 에서 평가될 수 있습니다. 편협성 살인 분석은 전통적으로 강균에 대해 제기 된 항체의 효과적인 기능을 평가하기위한 금 본위제 역할을합니다.이 프로토콜은 기존의 높은 처리량 표준화 된 분석보다 단순성과 다기능성을 제공합니다. 이 프로토콜에서, 우리는 연쇄상 구균 폐염에 대한 약물 치료의 효과와 이러한 효과가 박테리아의 향상된 phagocytosis로 변환하는 방법을 조사합니다. 여기서, 우리는 연쇄상 구균 폐염 세포에 OPKA를 적용합니다.그러나 이 프로토콜은 면역 세포에 의한 그밖 병원체의 phagocytic 살인을 평가하기 위하여 채택될 수 있습니다. 세균 주식을 최적화하고 최종 CFO가 최적의 범위 내에 속하는지 확인하는 데 시간을 바칩니다. HL60 세포가 실행 가능하고 활성상태이며 기능적으로 활성 세포를 보장하기 위해 다른 배양 조건을 시도하는 것이 좋습니다.시각적 데모는 샘플을 도금하는 방법과 계산 가능한 샘플을 달성하는 방법을 더 잘 이해할 수 있습니다. 시작하려면 L-글루타민으로 보충된 500밀리리터 RPMI와 15밀리리터열 불활성 태아 소 혈청으로 구성된 HL60 세포 배양 미디어를 준비하십시오. HL60 세포의 전파 및 유지 보수를 위해 75 평방 센티미터의 HL60 세포 배양 매체의 10 밀리리터에서 5 백만 개의 세포를 배양하여 섭씨 37도및 이산화탄소 5 %의 플라스크를 배출합니다.HL60 세포의 작동 주식을 생성하려면 HL60 배양 배지에 밀리리터 당 약 1백만 개의 세포를 1밀리리터 극저온 튜브에 10% 디메틸 설프리산화물로 보충합니다. HL60 세포를 분화하기 위해, 배양은 HL60 세포 배양 배지의 15 밀리리터에서 7세포에 1.5배 10배, 멸균 필터에 0.6%DMF로 보충된 멸균 필터에 75평방센티미터플라스크는 섭씨 37도, 이산화탄소 5%를 OPKA 이전 3일 동안 1.5배 10배 로 보충하였다. 세균성 주식 샘플을 준비하려면, 37섭씨에서 약 2 ~4 시간 동안 적절한 국물에 WU2 세균 균주를 성장.다음으로, 2분 동안 6천 회 G에서 원심분리에 의해 박테리아를 펠렛하고 적절한 국물에 15%의 글리세롤의 10~30밀리리터에서 세포를 재보페킹한다. Aliquot 균 배양 멸 균 1.5 밀리 리터 원심 분리 튜브와 8

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는 - 수용체 제공 여러 FC의 표현 형광 항원 코팅 구슬과 monocytic 세포 라인을 활용하여 표준의 수용체 사용량과 phagocytic 활동 결정하고, 임상 샘플에서 항원에 특정한 항체의 phagocytic 활동을 결정하기 위해 높은 처리량 흐름 cytometric 분석을 제시 관심의 항원에 대한 재현할 패션.

임상 항체 샘플 Phagocytic 활동 결정

출처: Nagre, N. 외 마우스의 폐포 대식세포 섭취와 박테리아 제거. J. Vis. Exp. (2019).이 영상은 IgM과 보보체로 옵소니시된 양 적혈구를 이용한 보체 수용체 매개 식구 평가를 시연하며, 이후 쥐 대식세포에 의한 흡수를 보여줍니다. 식의 정도는 헤모글로빈 촉매에 의해 산화된 디아미노플루렌의 청색색 생성 산물을 측정하여 정량화됩니다.

옵소니즈드 적혈구를 이용한 보체 매개 식세포작용 모델 in vitro

출처: 세만, B. G., et.al. 그람 음성 세균 패혈증의 신생아 영상 모델. J. Vis. 경험 (2020)이 영상은 신생아 쥐 비장에서 호중구와 염증성 단핵구를 분리하여 발광 박테리아 살해 분석법에 적용하는 과정을 보여줍니다. 기계적 해리, 적혈구 용해, 자기 구슬 기반 세포 농축, 박테리아 배양, 항생제 보호를 포함합니다. 시간 측정된 발광 측정은 초기 박테리아 내화와 면역 매개 제거를 나타냅니다.

신생아 쥐 비장 식세포에 의한 박테리아 사살의 시험관 평가

이 동영상은 혈청에 존재하는 항체의 보체 매개 살균 활성을 평가하는 기술을 보여줍니다. 이 접근법은 분리된 혈청과 병원성 박테리아 및 외인성 보체 단백질을 결합합니다. 배양 시, 박테리아는 한천 플레이트에서 성장하고, 생산된 콜로니는 혈청 살균 역가를 측정하기 위해 정량화됩니다.

항체의 보체 매개 박테리아 활성을 위한 혈청 박테리아 분석

이 비디오에서는 유세포 분석을 사용하여 식균작용 후 인간 호중구에 대한 악성 및 덜 독성이 있는 Staphylococcus aureus 균주의 세포 독성을 검출하는 분석을 시연합니다.

포도상구균 (Staphylococcus aureus)의 세포 독성 분석 : phagocytosis 후 호중구에 대한 균주

이 비디오는 인간 호중구와 폐렴구균의 공동 배양을 사용한 체외 oponophagocytic killing assay를 보여줍니다. 항체와 보체 단백질은 박테리아의 옵슨화를 촉진하여 호중구가 박테리아를 인식하고 죽일 수 있도록 하여 성공적인 호중구 옵소노식세포 활성을 보여줍니다.

박테리아 병원체에 대한 Opsonophagocytic Killing Activity 평가

이 비디오는 옵소니화된 박테리아와 면역 세포 간의 상호 작용을 조사하기 위한 옵소노 준수 분석을 보여줍니다. 항캡슐 항체가 포함된 테스트 혈청으로 처리된 형광 표지 박테리아는 대식세포로 배양됩니다. 대식세포를 형광으로 염색한 후, 대식세포 표면에 부착된 박테리아를 시각화를 위해 현미경으로 관찰합니다.

안티 캡슐 항체에 의한 캡슐화된 박테리아의 옵소니화를 평가하기 위한 Opsono-Adherence Assay

여기, 선물이 D. discoideum (아메바)를 사용 하 여 호스트 planktonic 또는 표면에 부착 된 세균의 독성을 측정 하는 프로토콜. 독성은 1 시간 동안 측정 하 고 호스트를 죽이 형광 현미경 검사 법 및 이미지 분석을 사용 하 여 계량. 이 프로토콜 P. 농 균박테리아를 사용 하 여 설명 합니다.

아메바를 사용 하 여 빠른 이미지 기반 세균 독성 분석 결과

여기 선물이 vivo에서 백신의 평가 위한 우아한 프로토콜 효과 호스트 면역 반응. 이 프로토콜은 바이러스 성, 세균성, 백신 모델 또는 기생 병원 균에 대 한 적응 될 수 있다.

호스트 병원 체 응답 및 쥐에 백신의 효능 평가

여기 우리는 혈 청에서 항 체의 Shigellacidal 활동을 측정 하는 프로토콜을 제시. 혈 청은 박테리아와 외 인 보수, 인 큐베이 팅, 혼합 그리고 반응 혼합물은 한 접시에 도금. 실행 가능한 박테리아는 계산, 자동된 식민지 열거자를 사용 하 고 살 균 titer를 결정 하는 데 사용 되는 식민지를 형성 한다.

높은 처리량 Shigella-특정 살 균 시험

opsono-준수 분석법은 백신 개발에서 항체의 opsonic 기능을 평가하기 위한 opsono-phagocytic 살인 분석법에 대한 대안적 방법입니다.

바실러스 탄트라시스 및 기타 캡슐화된 병원균에 대한 백신 개발에서 기능적 항체를 평가하는 Opsono-준수 분석

배우세요 조반식균살해검사(OPKA)를 Streptococcus pneumoniae에 적용하여 면역세포의 식균활성과 항체 효능을 평가하는 방법입니다. 이 기법은 면역치료제 개발에 필수적인 도구로 활용됩니다.

Opsonophagocytic 살해 분석 결과 세균성 병원 체에 대 한 면역학 응답을 평가 하

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