Name: 변형 된 이종 성 복합체 동종 요법 연구에 대 한 쥐에서 변성 이성애 자 골 진 피부 플랩 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 배우세요 쥐를 이용한 혈관화 복합 동종이식 수술 모델로 이식편 거부와 혈관병증을 연구하는 방법을. 이 모델은 거부 반응 메커니즘과 치료 전략 평가에 활용됩니다.

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이 작품은 상 무에의 한 의원 지시 의료 연구 프로그램을 통해 건강 문제에 대 한 국방부 장관 비서에 의해 지원 되었다. W81XWH-13-2-0057. 의견, 해석, 결론 및 권장 사항은 저자의 것 이며 반드시 국방부가 승인 하지는 않습니다.

모든 동물 수술은 루이스 빌의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC 승인 프로토콜 18198) 및 관리 및 사용에 대 한 국립 건강 연구소 (NIH) 가이드에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행 되었다 실험실 동물10. 4 개월 된 남성 브라운-노르웨이 (RT1. An) 및 4 개월 된 남성 루이스 (RT1. L) 랫 트는 각각 VCA 공여 및 수혜자로 서 사용 되었다.
1. 기증자의 동종 재배 수확
<ol><li>기화 된 아이 소 루 레인을 사용 하 여 공여 동물을 챔버를 통해 적용 한다.</li>
	<li>사 타 구니 및 복 부 부위 뿐만 아니라 이식 편 공여 부위 (힌 사지)를 면도 한다. 그 다음에는가 위가 남긴 퍼지 양을 줄이기 위해 탈모 크림으로 치료 하십시오.</li>
	<li>복 강 내를 사용 하 여 기증자 동물을 깊숙이 마 취 (60) 케 타 민 (15mg/kg)/acepromazine (2mg/kg). 0.2 mL/100g의 초기 용량을 투여 하 고 모든 시간에 0.2 mL의 추가 용량을 제공 합니다. 편의상 2 단계 전에이 단계를 수행 하는 것은 선택 사항입니다.</li>
	<li>호흡, 체온 및 마 취의 깊이를 위해 마 취하에 있는 동안 동물을 지속적으로 모니터링 하 고 발가락 핀치 인출 반사 테스트를 사용 합니다.</li>
	<li>응고를 방지 하기 위해 수술 전에 목 덜 미 영역에서 헤 파 린 용액을 피하 (SC)로 30 U를 투여 한다.</li>
	<li>마스크, 헤드 커버, 일회용 절연 가운 및 일회용 장갑을 착용 하십시오.</li>
	<li>기증자 동물 부정사을가 열 패드에 놓습니다. 다리의 복 부 및 등 쪽 측면을 포함 하 여 수술 부위를 미리 준비, 스크러빙 및 드레이 핑 하 여 멸 균 수술 장을 생성 합니다. 돈 멸 균 장갑.</li>
	<li>메스 블레이드 #15를 사용 하 여 사 타 구니 오목한 구멍에 3cm 피부 절 개를 만들고 아이리스가 위를 사용 하 여 서 혜 부 지방 패드를 측면으로 반영 합니다.</li>
	<li>일반적인 대 퇴 혈관을 노출 하 고 복 부 근육을 철회 하는 탄성 밴드와 와이어 후크를 배치 합니다.</li>
	<li>해 부 현미경 (40x)을 사용 하 여 사 타 구니 인 대 아래에 있는 일반적인 대 퇴 혈관의 출현에서 척추를 근접 하 게 하 고 슬와 혈관의 합류에 대 한 거리를 이식 편으로 분해 합니다.</li>
	<li>마이크로 클립 및 양극 보석상의 집게를 사용 하 여, ligate 및 횡 정 대 퇴 골, 표 재 상 상 복 부 혈관, 사 포 성 동맥 및 근 위 꼬리 대 퇴 혈관과 같은 큰 동맥 및 정 맥 가지를 분할 하 여 동원 주요 대 퇴 혈관. 미세한 양극 집게를 사용 하 여 작은 가지를 소 작을.</li>
	<li>꽃 창포가 위를 사용 하 여, 뒷 다리의 복 부 쪽을 따라 자른 이전 피부의 중심에서 발목 부 위에 피부 절 개를 만드십시오.</li>
	<li>그 아래에 있는 다른 내 전근 근육 뿐만 아니라, gracilis 근육을 절단 하 고, 수직으로는 중간 근 위부 혈관을 노출 및 ligate, 깊은 분기 작은 혈관, 그리고 좌 골 신경. 참고: 이 시점에서, 별도의 수술 테이블에, 다른 외과 의사는 삽 관 및 마 취 해야한다 (2.5%-3% 아이 소 잠복) 받는 동물; 이것은 외과 의사가 이식 편 배치를 위한 시간에 수령인 외과 부 대를 준비 하 고 접목의 허 혈 시간을 극소화 하는 것을 허용 합니다.</li>
	<li>기증자 동물에, 무릎과 발목의 수준에서 원주 형 피부 절 개를 확인 합니다. 무릎과 발목을 디스명료 하 게 하 고, 불필요 한 근육과 조직을 제거 하 고, 다리의 등 쪽 면에 수직 피부 절 개를 만들어 접목을 해제 합니다. 이 시점에서, 이식 편 (불 라와 경골으로 구성 된 관련 근육과 그 천공 기에 의해 양육 된 피부 섬으로 덮여)는 척추에 의해서만 연결 됩니다.</li>
	<li>작은 클램프를 대 퇴 동맥과 정 맥에 최대한 근접 하 게 배치 하 고, 사 타 구니 인 대 근처에서 척추를 가능한 한 근접 하 게 자릅니다.</li>
	<li>혈액의 접목을 플러시 하려면 27g의 플러싱 무딘 캐 뉼 러를 사용 하 여 대 퇴 동맥에 혈장 염 수 (30u/mL)를 주입 합니다. 참고: 헤 파 린 플러시 전에 동맥을 팽창 시켜 캐 뉼 러의 삽입을 위해 쉽게 접근 할 수 있습니다. 플러시 동안 대 퇴 정 맥 으로부터의 유출을 면밀히 관찰 합니다. 맑은 액체가 대 퇴 정 맥을 벗어나면, 플러시를 중지 하십시오.</li>
	<li>격리 된 접목을 따뜻한 생리 식 염 수에 젖은 거 즈에 싸서 즉시 수령인 동물의 식탁에 운반 하십시오. 이 때, 수용자 수술 부위는 이미 혈관 문 합을 위해 준비 되어야 한다.</li>
	<li>이식 후 수확 후 즉시 기 흉을 통해 기증자의 쥐를 안락사 시킵니다.</li>
</ol>2. 수용자 이식 수술
<ol><li>챔버를 통해 적용 되는 기화 된 아이 소 루 레인을 이용한 진정 유도에이 어, 수용자 동물을 인공 호흡기 조절 기관 튜브 및 2.5%-3% 아이 소 루 레인을 통해 깊이 마 취 시켰다. 참고: 이 단계에서 기증자 쥐는 여전히 마 취 됩니다.</li>
	<li>발가락 핀치 인출 반사 시험을 사용 하 여 수용자 동물의 심 박수, 호흡 률, 체온 및 마 취 깊이를 지속적으로 모니터링 합니다.</li>
	<li>탈수와 저 혈당을 예방 하기 위해서는 처음에는 2 mL의 락 트 링 된 링거 용액과 2.5%의 덱 스트로 스를 주사 하 고 수술 끝에 2 mL를 더 주입 합니다.</li>
	<li>사 타 구니 부위를 면도 한 다음 탈모 크림으로 치료 하 여가 위가 남긴 퍼지 양을 줄이십시오.</li>
	<li>마스크, 헤드 커버, 일회용 격리 가운 및 멸 균 장갑을 착용 하십시오.</li>
	<li>동물 부정사을가 열 패드 위에 놓습니다. 마 취 동안 각 막 찰과상을 방지 하기 위해 안과 연 고를 바르 십시오. 수술 부위를 준비 하 고, 닦 고, 드레이 핑 하 여 멸 균 수술 장을 만듭니다.</li>
	<li>메스 블레이드 #15를 사용 하 여 사 타 구니 오목한 구멍에 3cm 피부 절 개를 만들고 아이리스가 위를 사용 하 여 서 혜 부 지방 패드를 측면으로 반영 합니다.</li>
	<li>일반적인 대 퇴 혈관을 노출 하 고 복 부 근육을 철회 하는 탄성 밴드와 와이어 후크를 배치 합니다.</li>
	<li>머피 지점을 리 게이트 하 고 나눕니다.</li>
	<li>10-0 나일론 단속 봉합 사를 사용 하 여, 정 맥 엔드-투-사이드 기술과 동맥 종단 간 기술을 통해 수령인 혈관을 아 스 톨 mose 기증자 혈관. 서서히 동맥과 정 맥에서 클램프를 풀어. 출혈에 대 한 anastomotic 사이트를 모니터링 하 고 필요한 경우 추가 봉합을 추가.</li>
	<li>효과적인 접목 재 관류를 보장 하기 위해 혈관 문 합을 시각적으로 평가 합니다.</li>
	<li>접목을 사 타 구니 주머니에 끼워 넣고 거꾸로 뒤집어 발목 관절이 우수 하 고 무릎 관절이 열 등 합니다.</li>
	<li>투 킹 봉합을 사용 하 여 인접 한 근육에 접목을 고정 시킵니다. 중단 된 수평 매트리스 피부 흡수 4-0 봉합을 통해 피부를 닫습니다.</li>
	<li>마 취에서 받는 동물을 제거 하 고 통풍 기에서 벗으 십시오. 열 지지대를 위해 동물을가 열 패드 위에 놓으십시오. 참고: 전체 작동 시간은 외과 의사의 경험과 외과 수술과 친분에 따라 3에서 4 시간 사이입니다.</li>
	<li>멜 록 시 캄 (1 밀리 그램/kg)을 피하로 통증을 억제 하 고 동물이 완전히 회복되 고 이동할 때까지 모니터링 합니다.</li>
</ol>3. VCA 수신자 모니터링
<ol><li>수용자 쥐를 단독으로 집 하 고 통증, 탈수, 체중 감소 및 외과 적 장애 (첫 번째 48 – 72 시간 동안) 또는 거절의 임상 징후에 대해 매일 모니터링 합니다. 통증 억제를 위해 처음 3 일 동안 매일 멜 록 시 캄을 피하 (1mg/kg)를 투여 한다.</li>
	<li>연구 엔드포인트에 기초 하 여, 투여 될 면역 억제제를 선택 한다.</li>
</ol>4. 조직학
<ol><li>흡입 된 아이 소 루 네 마 취 (2.5%-3%) 하에서, 원하는 시간 지점에서 기증자 이식 편 으로부터 시리얼 피부 및 기저 근육 생 검을 얻습니다. 피부는 생 검을 얻기 전에 긁 고 드 레이프 되어야 하며 멸 균 필드와 기술이 수행 되어야 합니다.</li>
	<li>흡수 4-0 봉합 사를 사용 하 여 1 ~ 2 개의 스티치로 상처를 닫습니다. 그것의 케이지에 동물을 반환 하 고 마 취에서 회복을 허용.</li>
	<li>10% 포 르 말린에 별도의 튜브에 생체 조직 조직을 고정 합니다.</li>
	<li>터미널 타임 포인트와 흡입 된 아이 소 루 네 마 취 (2.5%-3%)에서 기증자/받는 사람 경계에 걸쳐 있는 더 큰 피부 생 검을 취합니다. 조심 스럽게, 낙 지의 사이트에서 선박 가죽 끈 쌍을 찾습니다; 적절 한 사이트는 봉합으로 인해 명백 할 것입니다. 동맥 및/또는 정 맥에서 원하는 용기 샘플을 채취 하십시오. 10% 포 르 말린에서 모든 샘플을 개별적으로 수정 합니다. 조직 샘플을 수집 하 고, 동물이 여전히 아이 소 루 칸 마 취 하에 있는 동안, 그리고 기 흉을 통해 동물을 즉시 안락사 시킵니다.</li>
	<li>조직 프로세서 (또는 다른 바람직한 포함 기술)를 사용 하 여 파라핀-각 생 검을 자신의 블록에 포함 시킵니다. 피부 샘플의 경우, 모든 표 피 및 진 피 층이 단일 슬라이스 내에서 보일 수 있도록 조직의 방향을 잡습니다. 용기 샘플의 경우, 횡단면을 얻을 수 있도록 혈관의 방향을 잡습니다.</li>
	<li>마이크로 톰을 사용 하 여 6 µm 절편을 자르고 헤 마 톡 실린 및에 오신 (H & E) 염색을 위한 슬라이드에 적용 한다.</li>
	<li>표준 프로토콜을 사용 하 여 H & E에 얼룩.</li>
	<li>명시 야 현미경 기술을 사용 하 여 모든 원하는 조직 샘플의 대표 이미지를 얻습니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

VCA의이 모델을 개발, 몇 가지 주요 문제가 고려 되었다. 첫째, 그대로 뼈 (경골과 비 골), 골 수 및 이식에 피부를 포함 하는 것이 중요 했다. 성인 기증자에서 임상 손 이식 상당한 양의 활발 한 조 혈을 전송 하지 않는 동안, 골 수 틈새의 역할의 연구는 그대로 사용 하 여 더 나은 미러링, 혈관을 절단 보다는 긴 뼈, 어떤 결과 노출 된 골의 섬유 증. 또한, 폐쇄 된 골 골 절 세포 피부 플랩 디자인은 감염과 출혈의 위험을 감소 시킨다. 골 수와 피부는 모두 면역 반응을 유발 하는 데 사용 될 수 있는 고도로 면역 원 성 조직입니다. 둘째, 접목을 기능적으로 할 필요는 없으며, 복잡 한 골 합성과 접목을 필요로 하는 직교 모델의 필요성을 없애줍니다. 이것은 또한 장기 수술 절차 및 동물 불편 함11,12와 같은 기립 모델의 잘 알려진 귀찮은 결과 중 일부를 방지 합니다. 그러나, 이성애 디자인은 VCA 연구에 있...

절단에서 치명적인 조직 손실에 대 한 재건 수술, 폭발 부상, 악성, 그리고 선 천 성 결함은 환자에서 조직의 가용성과 기증자 사이트에서 발생 하는 추가 사망률에 의해 제한 됩니다. 일부 경우, 예컨대 화상 피해자 또는 사변형 수족, 재건을 위한 생 가능한 조직은 환자 로부터 사용할 수 없다. 1964에서, 최초의 현대 손 이식이 에콰도르에서 수행 되었다. 이것은 기술적인 성공, 당시에 유효한 면역 억제는 거절을 방지 하기 위하여 불충분 했 고, 이식 편 3 주 미만에서 분실 되었습니다1. 1998 및 1999에서, 면역 억제의 현대 시대에 있는 첫번째 손은 리옹, 프랑스2 및 미국 켄터키 주 루이스 빌에서 수행 되었다3. 처음으로, 재건 외과 의사 처럼 대체 수 있습니다. 얼굴이 식은 20054에서 처음 수행 되었으며, 다 수의 다른 VCA 접목은 이제 복 벽5, 자 궁 및 비뇨 생식 기 이식6과 같은 일상적으로 수행 되 고 있다.
고체 장기이 식을 달리, 대부분의 VCA 기술은 고도로 항 원 성 기증자 피부의 존재를 포함 한다. 임상 경험은 피부의 급성 거부 반응이 상대적으로 제어 하기 쉽지만 치료7에 잘 반응 하지 않는 기저 조직과 혈관의 만성 거부에 기여할 수 있다고 결정 했습니다. Alloimmune 반응과 관련 되었던 관 기능 장애는 VCA7의 필드를 위한 더 불길 한 장애물입니다. Macrovasculopathies는 관류 적자, 지연 된 치유, 및 염증 성 조건으로 이끌어 냅니다. Confluent 공격적인 대형 혈관 레이 및 국 소 막 증식은 손 이식 받는 사람7에서 발생 합니다. 또한 microvasculopathies는 VCA 합병증에도 기여할 가능성이 있으며 거부 이벤트로 이어질 수도 있습니다. 면역 및 비 면역 인자가 모두 손 이식 수용자의 레이에서 역할을 하는 반면, VCA에서 말단 혈관 기능 장애를 촉진 하는 특이 적 기전은 특히 저급, 만성 거부의 맥락에서 알려지지 않았다. 이러한 답이 없는 질문은 VCA 거부/유지 보수 및 레이 임상 과정 중에 접목의 시리얼 평가를 허용 하는 동물 VCA 모델의 개발을 필요로 합니다. 이러한 모델은 면역 억제, 전염 성 챌린지 및/또는 기타 수술 후 외상 부상8,9에 대 한 거부 및 레이에 대 한 통찰력을 제공 할 것입니다.
여기에 제시 된 동종의 쥐의 VCA 이성애 주제 힌 사지 골 독 피부 플랩 모델입니다. 이전에 출판 된 VCA 모델을 기반으로,이 절차는 기술적으로 수행 하기 쉽고, 많은 수의 재현성이 있으며, 수령인 동물에 게 최소한의 사망률과 불편 함을 나타냅니다. 이 모델은 VCA 수락 대 거부의 임상 및 조직 병리학 적 평가를 허용 하 고 거부에 관련 된 기저 면역 및 비 면역 메커니즘을 평가할 수 있는 기회를 제공 하도록 설계 되었습니다.

<table><tbody><tr><td>Acepromazine</td><td>Henry Schein</td><td>5700850</td><td></td></tr><tr><td>Adventitia 가위</td><td>ASSI&nbsp;</td><td></td><td></td>SAS15R8</tr><tr><td>근사화 클램프 (더블)</td><td>ASSI</td><td>ABB2V, ABB22V</td><td></td></tr><tr><td>근사기 클램프 (단일)</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>클램프 적용 펜치</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>CAF4</td><td></td></tr><tr><td>해부 가위</td><td>ASSI</td><td>SDS18R8</td><td></td></tr><tr><td>플러싱 무딘 바늘 27 G</td><td>SAI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>헤파린 나트륨</td><td>sagent</td><td>25021-400-30</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson 수의학</td><td>14043-704-06</td><td></td></tr><tr><td>보석상 양극성</td><td>ASSI</td><td>103000BPS03</td><td></td></tr><tr><td>보석상 겸자 #3</td><td>FST</td><td>11231-30</td><td></td></tr><tr><td>케타민 HCl 100 mg/mL</td><td>Zoetis</td><td>043-304</td><td>DEA 라이선스 필요</td></tr><tr><td>Lactated Ringer Solution</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-03</td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer Solution + 5% Dextrose</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-09</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Henry Schein</td><td>11695-6925-2</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 펜치</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>JFAL3</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 니들 홀더</td><td>ASSI</td><td>B138</td><td></td></tr><tr><td>Prograf (Tacrolimus) 5 mg/mL</td><td>Astellas</td><td>0469-3016-01</td><td></td></tr><tr><td>봉합사, 10-0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>W2790</td><td>또는 10-0 Ethilon (2830)</td></tr><tr><td>봉합사, 4-0 코팅 Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>J714D</td><td></td></tr><tr><td>용기 확장기 집게</td><td>ASSI</td><td>D5AZ</td><td></td></tr><tr><td>자일라진</td><td>베트원</td><td>13985-612-50</td><td></td></tr></tbody></table>

변형 된 이종 성 복합체 동종 요법 연구에 대 한 쥐에서 변성 이성애 자 골 진 피부 플랩 모델

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

혈관 화 된 복합 동종 이식 (VCA)은 재건 수술에서 비교적 새로운 분야 이다. 인간적 인 VCA에 있는 임상 성과는 손과 얼굴 이식 및, 더 최근에, 복 부 벽, 자 궁 및 비뇨 생식 기 이식 포함 합니다. 기능적 결과는 초기 기대치를 초과 했으며 대부분의 수신자는 향상 된 삶의 질을 즐깁니다. 그러나 임상 경험이 축적 되 면 면역 억제에서 만성 거부 및 합병증을 해결 해야 합니다. 접목에 실패 한 많은 경우에, 원인이 되는 병리학은 허 혈 성 레이 되었습니다. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">VCA, 특히 허 혈 성 레이 관련 된 급성 및 만성 거절의 생물학적 기전은 연구의 중요 한 영역입니다. 그러나, VCA 환자의 아주 작은 수로 인해, 제안 된 메커니즘의 평가는 실험 모델에서 더 나은 해결 된다. 여러 그룹은 VCA 거부 및 레이 관련 미해결 문제 중 일부를 해결 하기 위해 동물 모델을 사용 했다. 다양 한 종을 포함 하는 몇몇 모형 디자인이 문헌에 기술 되어 있다. 여기에서 우리는 번역 VCA 연구를 위해 이용 될 수 있는 쥐에 있는 VCA 이성애 주제 힌 사지 골이 피부 플랩의 재현성 있는 모형을 제시 합니다. 이 모델은 낮은 수준의 사망률을 유지 하면서 생 검 및 다양 한 이미징 방식을 포함 한 접목의 시리얼 평가를 가능 하 게 합니다.

쥐의 VCA 이성애 주제 힌 사지 골 피부 플랩 모델은 면역 억제 하에서 장기 동종 요법 생존을 허용 합니다. 이 모델은 신뢰할 수 있고 재현 가능 하며 간편 하 게 수행할 수 있습니다. 플랩은 사 타 구니 지역에 잘 숨겨져 있으며 동물에 게 최소한의 사망률과 불편 함을 구성 합니다. 피부 프레 젠 테이 션은 동종의 생존 및 거부의 임상 징후입니다 (그림 1). 플랩 디자인은 총 임상 모니터링을 가능 하 게 하 고 레이저 도플러와 같은 다양 한 이미징 기술을 위한 기회를 만듭니다 (그림 2). 피부, 근육 및 동맥의 시리얼 생 검을 통해 다양 한 거부 단계에서 조직 병리학 적 후속 조치 및 분석을 달성할 수 있습니다 (그림 3).
<img alt="Figure 1...

혈관 화 된 복합 알로이 식은 이식 받는 사람에 게 생명을 바꾸는 혜택을 제공 하지만, 이식 거부와 레이의 생물학적 원인은 제대로 이해 되지 않습니다. 여기에 제시 된 설치류 수술 모델은 재현 가능 하 고 임상적으로 관련 된 모델을 제공 하 여 연구원 들이 그 발생을 막기 위해 거부 사건과 잠재적인 치료 전략을 평가할 수 있도록 합니다.

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

소수의 혈관 화된 복합 동종 이식은 이식 거부의 근본 원인을 연구하기 위해 신뢰할 수 있는 재현 가능한 동물 모델을 임상적으로 필요로 합니다. 피부, 근육 및 뼈와 같은 임상적으로 관련된 조직은 모두 모델에 존재합니다. 또한, 우리의 모델의 비 기능적 특성은 빠른 수술, 플랩에 대한 허혈성 시간 감소, VCA의 직교 모델에 비해 낮은 이환율을 허용합니다.손 이식 수신자에서, 기증자 선박의 혈관병증은 혈관의 완전한 폐쇄로 이어질 수 있으며, 접목 된 손에 허혈성 손상. 이 모델은 이러한 혈관 병증 사건의 개발을 연구하기위한 도구입니다. 이 외과 모형을 시도하기 전에, 1 차적인 외과 의사는 거형 혈관 외과 기술에 익숙하고 능숙해야 합니다.이것은 복잡하고 긴 절차입니다. 시각적 데모는 다른 실험실이 그에 따라 준비하고 수술의 단계를 이해하는 데 도움이됩니다. 먼저 사타구니 굴착에 피부 절개를 하여 기증자 쥐의 뒷다리를 수확하여 대퇴혈관을 노출시하십시오.페디클의 해부에 도움이 될 복부 피부 절개를 합니다. 무릎과 발목의 분리에 따라 등색 피부 절단을 하고, 페디클을 트랜스로 이식편을 해방시키고, 이식편을 즉시 수령인 수술테이블로 이송하여 이식편의 허혈시간을 최소화하기 위해 수취인 동물의 수술 부위를 사전에 준비한다. 수령인 동물에, 노출 및 이전과 같이 대퇴혈관을 해부한 다음, 접목, 정맥 종단, 동맥 종단간 을 마취한다.이식편을 잉게날 포켓에 넣고 거꾸로 방향을 지정합니다. 마지막으로, 피부를 봉합합니다. 절차를 시작하려면 마취 된 기증자 쥐를 면도 한 다음 탈필 크림을 사용합니다.스크러프 부위에 헤파린 30유닛을 피하한다. 동물 척추를 가열 패드에 놓고 다리의 등쪽 측면을 포함하여 수술 부위를 준비하고, 스크러빙하고, 드레이핑하여 멸균 수술장을 생성합니다. 메스 블레이드 번호 15를 사용하여 기증자 쥐의 사타구니 굴착에서 3 센티미터 피부 절개를합니다.홍채 가위를 사용하여 나중에 잉게날 지방 패드를 반사합니다. 면봉이 있는 무딘 해부를 사용하여 일반적인 대퇴혈관을 노출한 다음, 탄성 밴드가 있는 와이어 후크를 배치하여 복부 근육을 후퇴시킵니다. 최대 40배율의 해부 현미경하에서 마이크로 가위, 3번 직선 주얼러 집게, 5번 45도 각진 포셉을 사용하여 인Uinal 인대 하에서 일반적인 대퇴혈관의 출현으로부터 페디클을 근교로 해부하고, 포일라이트 혈관의 결합에 해부한다.마이크로 클립과 양극성 보석상을 사용하여 큰 동맥 및 정맥 가지를 분리하여 주요 대퇴혈관을 동원합니다. 작은 가지를 소작하기 위해 미세양극성 집게를 사용합니다. 홍채 가위를 사용하여 뒷다리의 복부 면을 따라 발목 부위에 절단된 이전 피부의 중심에서 피부 절개를 합니다.그라실리스 근육과 그 밑에 있는 다른 흡인 근육을 수직으로 자르고 내측 근위 빈관 혈관, 깊은 분지 작은 혈관 및 상골 신경을 드러내고 호위합니다. 이 시점에서, 별도의 수술 테이블에, 다른 외과 의사는 이식 배치시간에 받는 사람 수술 부위를 준비하고, 접목의 허혈 시간을 최소화하기 위해 받는 동물을 삽관하고 마취해야합니다. 무릎과 발목의 수준에서 외경 피부 절개를하고, 무릎과 발목을 분해하고, 외부 근육과 조직을 제거합니다.비골과 경골으로 구성된 접목을 해방시키기 위해 뒷다리의 등쪽에 수직 피부 절개를 하고 이제는 페디클에 의해서만 연결됩니다. 대퇴 동맥과 정맥에 가능한 한 근교로 작은 클램프를 놓고 인기구 인대에 가능한 한 가깝게 페디클을 잘라. 27 게이지 플러싱 무딘 캐뉼라를 사용하여 혈액 이식편을 세척하기 위해 대퇴 동맥에 헤아린식 식염수를 주입하십시오.고립 된 이식편을 따뜻한 식염수에 담근 거즈로 감싸고 즉시 수용자 동물과 함께 테이블로 운반하며 수술 부위는 이미 혈관 해부학을 위해 준비됩니다. 수령인 쥐를 삽관하고 산소 분당 1리터와 균형을 이루는 2.5~3%의 기화 이소플루란으로 심도 마취합니다. 동물 척추를 난방 패드에 놓고 수술 부위를 스크럽하고 드레이프합니다.첫 번째 외과 의사는 기증자 동물에서 이식을 해방하기 위해 노력하고 있는 동안 메스 블레이드 번호 15를 사용하여 마취된 수령쥐의 사타구니 굴착에서 3센티미터 피부 절개를 합니다. 홍채 가위를 사용하여 나중에 잉게날 지방 패드를 반사합니다. 일반적인 대퇴골 혈관을 기증자 동물과 동일한 방식으로 노출 한 후, 복부 근육을 후퇴시키기 위해 탄성 밴드와 와이어 후크를 놓습니다.그런 다음 머피 가지를 리게이트하고 나눕니다. 10-0 나일론을 사용하여 봉합사를 중단, 아나스토모기증자 혈관. 정맥 종단간 기술을 통해 받는 선박에.그런 다음 종단 간 기술을 통해 동맥 해부학을 수행합니다. 점차적으로 클램프를 방출 한 후, 출혈을위한 아나스토모틱 부위를 모니터링하고 필요한 경우 추가 봉합사를 추가하십시오. 효과적인 이식 재관전을 보장하기 위해 혈관 해부학을 시각적으로 평가합니다.그런 다음 이식편을 잉게날 포켓에 삽입하고, 발목 관절이 우수하고 무릎 관절이 열등하여 거꾸로 방향을 지정합니다. 접목 접목을 인접한 근육에 고정하기 위해 봉합사를 사용하십시오. 마지막으로, 중단 된 수평 매트리스 피부 흡수 성 4-0 봉합사를 통해 피부를 닫고 원고에 설명 된 바와 같이 수술 후 관리를 계속합니다.쥐 VCA 이종성 힌드림 골다발성 플랩 모델은 면역 억제 하에서 장기간 동종 이식 생존을 허용합니다. 플랩은 사타구니 부위에 잘 숨겨져 있으며 동물에게 최소한의 이환율과 불편함을 가합니다. 면역 억제 치료가 중단되었을 때, 접목이 거부되었다.동종 이식의 도플러 이미지는 VCA 직후 최소한의 혈액 주입에서 64 일째에 플랩의 완전한 재보정으로의 전환을 보여줍니다. 45일째에 합성 동종 이식의 피부 생검은 피부 성분의 정상적인 형태를 나타내고, 면역억제제의 더 낮은 복용량으로 매일 치료되는 75일째에 거부되는 동종 동종 이식에 위축 및 단핵 세포 침투가 있는 반면. 45일째에 합성 동종 이식의 근육 생검은 정상적인 형태를 보여줍니다, 반면 근육 위축 및 단일 핵 세포 침투는 98 일에 거부에 동종 동종 이식에서 명백하다, 면역 억제제의 낮은 복용량으로 매일 치료.45일째에 합성성 동종 이식의 대퇴동맥 생검은 98일째에 거부되는 동종 동종 이식의 대퇴동맥과는 대조적으로, 면역억제제의 더 낮은 복용량으로 매일 취급되는 동맥의 일반적인 형태를 보여줍니다. 이 모델은 급성 거부, 만성 거부 및 혈관 병증의 발달에 대한 감염 및 외과 적 모욕과 같은 환경 요인의 효과를 테스트하는 도구를 제공합니다. 면역 억제 약물은 접목의 장기 생존을 위해 요구된다.이 약은 화학적으로 유해하며 주의하고 적절한 인력 보호 장비로 처리해야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

여기서 우리는 금 본위 것으로 보인다 orthotopic 쥐 뒷다리 - 사지 이식 절차를...

쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식

무료 조직 전송이 널리 종양학 절제술 및 외상 후 형태와 기능을 복원하는 재건 수술에 사용됩니다. 수술하기 전에이 조직을 전처리하는 것은 결과를 향상시킬 수 있습니다. 이 문서에...

Myocutaneous 국소 빈혈 reperfusion 상해의 쥐 모델 : 현장 가로 직근 abdominis의 Myocutaneous 플랩의

혈관 복합 Allotransplantations (VCA)는 임상 현실이되었다. 그러나, VCA의 다양한 임상 적 적용은 만성 다중 약물의 면역 억제로 제한됩니다. 저자는 최소화하거나 잠재적 VCA에서 면역 억제의 필요성을 제거 할 수 신규 면역 전략을 번역하는 신뢰성 있고 재현 가능한 대형 동물 모델을 제시한다.

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

현재 어떤 종류 vascularized 복합 allotransplantation의 긴-장기-면역 억제, 어려운 생활을 경계 표시에 대 한 지원에 따라 달라 집니다. 선물이 새로운 돼지 tibial VCA 모델 뼈 VCA를 공부 하 고 장기 면역 변조 없이 뼈 생존을 유지 하기 위해 수술 신생의 사용 방법을 설명 하는 데 사용할 수 있습니다.

돼지 Tibial Allotransplantation 외과 신생: 새로운 큰 동물 뼈 나가도록 복합 Allotransplantation 모델

이 논문은 근막 상복부 자유 피판을 들어 올려 쥐의 목으로 옮기는 데 필요한 단계를 설명합니다.

무료 조직 전송의 모델 : 쥐 상복부 무료 플랩

이 프로토콜은 면역학 및 기능 적 회복의 동시 연구를 향해 기어드 혈관 복합 동종 이식 (VCA)의 견고하고 재현 가능한 모델을 제시한다. 손 바느질 혈관 아나토모와 신경 응착오른쪽 중간 허벅지 뒷다리 직교 이식에 세심한 기술에 투자 된 시간은 기능적 회복을 연구 할 수있는 능력을 산출한다.

다음 단계: 쥐의 기능적 회복을 극대화하기 위한 신경 응복 성 직교 힌지 이식 모델

이 논문은 쥐에 있는 부분이성 골균 플랩 이식 프로토콜 및 중간 후속에 있는 그것의 잠재적인 결과를 제시합니다.

쥐의 부분 이종화 힌드래그 이식 모델

본 프로토콜은 돼지 근막-피부 피판 모델과 혈관화된 복합 조직 연구에서의 잠재적 용도를 설명합니다.

혈관화된 복합 동종이식편 생명공학 연구를 위한 신뢰할 수 있는 돼지 근막-피부 피판 모델

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

배우세요 쥐를 이용한 혈관화 복합 동종이식 수술 모델로 이식편 거부와 혈관병증을 연구하는 방법을. 이 모델은 거부 반응 메커니즘과 치료 전략 평가에 활용됩니다.

변형 된 이종 성 복합체 동종 요법 연구에 대 한 쥐에서 변성 이성애 자 골 진 피부 플랩 모델

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