Name: 타입-2 당뇨병과 관련 하 여 무 알콜 수 막 염을 위한 진보 된 뮤 린 모형 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-26T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 17 s
Description: 학습하세요 비특이적 병원체 차단 환경에서 고지방 식이로 유도된 무알콜 지방간염(NASH) 쥐 모형을 이용한 지방 및 간 면역세포 분리 기법. 이 방법은 비만 유발 염증과 대사 항상성 유지에 관한 면역학적 메커니즘 이해에 기여합니다.

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우리는 Anke Jurisch, 다이아나 워 너, 닥터 카 린 위 테와 코르넬리아 헥 트만에 게 도움을 요청 하 여 바이오 레 전 드에서 Tiburzy 하는 실험 절차와 벤자민에 대 한 도움이 되는 정보를 제공 하 여 게이팅 전략에 대 한 의견을 주었다. J.S.는 헬름홀츠 교부 금 (ICEMED)에 의해 지지 되었다. 이 연구는 베를린 건강 연구소의 임상 연구 단위에서 보조금에 의해 지원 되었다 (BIH), "BCRT 보조금" 독일 연방 교육부와 연구와 아인슈타인 재단에 의해. K.S.-B. 그리고 h.-D.V.는 FOR2165에 의해 후원 된다.

이 연구는 우리 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 감독 하에 동물 복지 법 및 건강의 국립 연구소의 실험실 동물의 관리 및 사용에 대 한 가이드에 따라 수행 되었다. 동물 프로토콜은 독일 Charité 베를린의 제도적 윤리 지침에 따라 실시 되었으며, Landesamt의 Gesundheit und Soziales의 승인을 받았고, 도착 가이드라인을 준수 합니다.
1. 다이어트 유도 동물 모델
<ol><li>4 주의 나이에 비 SPF 주거에 마우스 (C57Bl 6J, 남성)를 전송 하 고 환경 병원 체/항 원의 넓은 범위에 지속적으로 그들을 노출 합니다. 항 원은이 방법으로 공기 통로에 의해 분배 되기 때문에 실험실 동물의 매일 취급에 의해 노출을 보장 합니다.</li>
	<li>22 ° c의 온도에서 12 h:12h 빛/어두운 주기에 있는 일반적인 여과기를 가진 열려있는 caging 시스템에서 쥐 (C57Bl, 수 컷, 12 주)를 유지 하십시오. 실험 식이와 침구를 조사 하거나 오토 클레이 브를 하지 마십시오. 마스크 또는 헤어 네트 없이 동물 주거 시설에 접근 하십시오. 동물 방 사이의 문을 엽니다. 에 어 샤워를 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>항 원이 공기 통로에 의해 분배 되도록 정기적으로 실험실 동물 및 스위치 룸의 일일 처리를 보장 합니다. 실험실 마우스 옆 객실에 보관 된 포유류 실험실 동물의 침구에서 항 원에 매일 비 특이 적인 미생물 노출을 가진 더러운 주택을 보완.</li>
	<li>유 세포 분석을 사용 하 여 혈액과 비장에서 CD44-CD62L 메모리 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 비율을 측정 합니다 (refefence13에서 설명한 바와 같이). 참고: 이 점에서 우리는 충분 한 미생물 노출의 증거로 CD8+ t 세포에서 이펙터 메모리 CD8+ t 세포의 20%의 증가를 정의 했습니다.</li>
	<li>시작 HFD (60로% 지방에서 19 킬로 퍼센트 단백질과 21 킬로%의 탄수화물과 5 주 오래 된 C57Bl/6J 남성 마우스와 6% 자당 함량의 물 소비를 7-15 주. HFD는 실험 과정 전반에 걸쳐 인슐린 저항의 발달을 유도 하기 위해 지방에서 60% kJ를 포함 해야 합니다 (전술한 바와 같이). 참고: 헤 마 톡 실린 염색은 간세포 벌 루 닝과 같은 조직 학적 특성을 수행 하 여야 하며, 말로 리 테 릭 체, 면역 세포 침 윤 및 거 대 병 증은 내 시와 같은 간 병리학을 입증 하는 것으로 확인 되어야 한다 (참고 로 나타낸 바와 같이 13).</li>
</ol>2. 시 약 및 용액의 제조
<ol><li>0.5% BSA와 ACK (암모늄 염화 물-칼륨) 용 해 완충 액으로 보충 된 인산 완충 식 염 수가 70% 에탄올을 준비 합니다.</li>
	<li>
염색 완충 액
	<ol>
<li>500 mL의 태아 송아지 혈 청 (FCS) 10ml를 용 해 하 여 2% FCS PBS를 얻었다. 사용 전에 염색 완충 액을 얼음에 넣습니다.</li>
		<li>용액을 4°c의 플라스틱 병에 보관 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
지방 조직 소화를 위한 콜라 게 나아 제 솔루션
	<ol>
<li>소 혈 청 알 부 민 (BSA)의 2.5 g을 PBS의 500 mL에 녹 인 후 0.5% BSA/PBS를 얻었다.</li>
		<li>CaCl2 의 74.5 g을 0.5% BSA/PBS에 녹여 10 MM cacl2 용액을 얻었다.</li>
		<li>10 mM CaCl2 PBS와 함께 0.5% BSA의 각 mL에 콜라 게 나 제 II ( 재료 표참조)의 1 mg을 추가 합니다.</li>
		<li>지방 조직 시료 1g 당 3 mL의 콜라 게 나 제 다이제스트 액을 준비 합니다. 각 분리에 대 한 신선한 콜라 게 나아 제 용액을 준비 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
간 조직 소화를 위한 콜라 게 나아 제 솔루션
	<ol>
<li>행 크 ´의 균형잡힌 염 용액 (HBSS)의 500 mL에서 BSA의 2.5 g을 분해 하 여 0.5% BSA HBSS를 얻었다.</li>
		<li>0.5%의 500 mL에 10 mL의 FC를 추가 하 여 0.5% BSA/HBSS를 얻습니다.</li>
		<li>콜라 게 나 제 IV ( 물질 표참조) 0.5 mg을 각각 2% FCS 0.5% BSA/hbss에 첨가 하십시오.</li>
		<li>2% FCS 0.5% BSA/HBSS 콜라 게 나아 제 용액 당 0.02 mg의 DNase를 첨가 한다.</li>
		<li>간 조직 시료 당 13 mL의 콜라 게 나 제 다이제스트 용액을 준비 합니다.</li>
		<li>각 분리에 대 한 신선한 콜라 게 나아 제 용액을 준비 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 단일 세포 현 탁 액의 생성
<ol><li>
지방 조직 소화
	<ol>
<li>자 궁 경부 탈 구를 따르는 아이 소 루 레인 마 취를 통해 생쥐를 안락사 시킵니다. 70% 에탄올로 가슴을 뿌려 주세요. 흉 강 및 심장을 노출 하는 늑 골 케이지의 전체 길이를 따라 외피 및 복 벽을 통해 5-6 cm 중앙 절 개를 조심 스럽게 만드십시오. 참고: 기본 장기를 손상 시 키 고가 위 팁을 유지 하지 마십시오.</li>
		<li>26G 바늘을 사용 하 여 좌 심 실의 꼭대기에 0.9%의 염 분 용액 10 mL 이상을 주입 하십시오. 참고: 성공적인 관류는 간 창백에 의해 지적 된다.</li>
		<li>가 위로 복 강을 열고 미세한 곡선가 위와 각 측면에 perigonadal fat 패드를 잘라. 미세 곡선가 위와 지방 조직 무게와 gonadal 조직을 분해.</li>
		<li>4 ° c에서 페 트리 접시에 미세 조각으로 지방 조직을 잘라가 위를 사용 하 여 기계적 해리를 수행 합니다. 지방 조직을 50 mL 원추형 원심 분리기 튜브로 전달 하 고 0.5% BSA/PBS의 1Ml와 함께 페 트리 접시를 헹 궈 냅니다.</li>
		<li>지방 조직의 1g 당 3 mL의 지방 조직 다이제스트 용액 (2.3 단계에서 제조 됨)을 추가 합니다. 부드러운 흔들림 (200 rpm) 하에서 20 분 동안 37 ° c에서 지방 조직 용액을 배양 합니다.</li>
		<li>지방 조직의 그램 당 0.5% BSA/PBS의 5 mL를 추가 하 고 얼음 위에 놓습니다. 10 mL 혈 청 피 펫으로 용액을 여러 번 트리 터 팅 하 고 플런저의 도움으로 스 트레이너 (100 µm)를 통과 시킵니다.</li>
		<li>4 ° c에서 10 분 동안 500 x g 에서 원심 분리기.</li>
		<li>피 펫 팅 하 여 부유 지방 세포 분 획을 제거 합니다. ACK 용 해 완충 액 1 mL에 세포 펠 렛 (기질 혈관 분 획)을 소생 시킵니다 ( 물질 표참조). 10ml의 10Ml를 추가 합니다.</li>
		<li>4 ° c에서 10 분 동안 500 x g 에서 원심 분리기.</li>
		<li>2% FCS PBS의 250 µ L에서 decant 상층 액 및 소생 세포 펠 렛.</li>
		<li>트리 판 블루 제외를 사용 하 여 혈 세포 측정기에 생존 셀의 수를 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
간 조직 소화
	<ol>
<li>PBS로 채워진 원추형 원심 분리기 튜브에 간을 저장 하 고 얼음을 운반 하십시오.</li>
		<li>4°c에서 페 트리 디쉬에 실린 지 스탬프를 사용 하 여 기계적 해리를 수행 한다. 따뜻한 간 다이제스트 용액 10ml를 포함 하는 50 mL 원추형 원심 분리기 튜브에 해 부 조직을 넣어. 3 mL의 간 다이제스트 용액으로 페 트리 접시를 헹 궈 냅니다.</li>
		<li>부드러운 흔들림 (200 rpm) 하에서 20 분 동안 37 ° c에서 간 조직 용액을 배양 합니다.</li>
		<li>HBSS 20 mL를 추가 합니다. 10 mL 혈 청 피 펫으로 용액을 여러 번 트리 터 팅 하 고 플런저의 도움으로 스 트레이너 (100 µm)를 통과 시킵니다.</li>
		<li>4 ° c에서 10 분 동안 500 x g 에서 원심 분리기. 상기 상층 액을 decant 하 고 HBSS 20 mL의 세포 펠 렛을 소생 시켰다.</li>
		<li>실 온에서 1 분간 30 x g에서 원심 분리 하 여 간세포 매트릭스를 제거 한다. 셀 펠 렛을 버리십시오.</li>
		<li>상층 액을 500 x g 에서 4°c에서 10 분간 원심 분리기. 10ml의 33% 저 점도 밀도 구배 용액 ( 재료 표참조)을 hbss로 원심 분리 (800 x g, 상 온; 브레이크 없음</li>
		<li>1 mL의 ACK 용 해 완충 액으로 펠 렛을 소생 하 고 실 온에서 4 분간 배양 한다. 그런 다음 HBSS 10ml를 추가 합니다. 참고: 상 등 액을 (간세포)와 함께 상 등 액을 매우 조심 스럽게 전사 파이 펫 (면역 세포와 적혈구를가지고 복용 하지 않고)를 버리고 폐기 한다.</li>
		<li>15 mL 원추형 원심 분리기 튜브에 30 μ m 스 트레이너를 통해 세포를 통과 하 고 4°c에서 10 분 동안 500 x g 에서 원심 분리기. 2% FCS PBS의 250 µ L에서 decant 상층 액 및 소생 세포 펠 렛.</li>
		<li>트리 판 블루 제외를 사용 하 여 혈 세포 측정기에 생존 셀의 수를 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 표면 염색
<ol><li>표 1 및 표 2에 기재 된 바와 같이 T 세포-서브 세트 (패널 1)와 선 천 면역 세포 (패널 2)에 대 한 항 체 혼합을 준비 한다. 부피는 항 체 농도에 관한 하나의 샘플 (100 µ L)에 대해 최적화 된다. 참고: 림프 구와 타고 난 면역 세포는 자동 형광의 차이를 제시 하 고 별도로 분석 해야 합니다.</li>
	<li>표면 염색을 위해 폴리스 티 렌 FACS 튜브에서 100 µ L에 최대 3 x 106 셀을 사용 하십시오. Fc 수용 체를 차단 하기 위해 10 µ L의 항 CD16/CD32 항 체 (희석 1:100)를 추가 하 고 얼음에서 10 분간 배양 한다. 얼룩 없는 네거티브 컨트롤 샘플을 사용 하 여 측면 산란 (SSC) 및 전방 산란 (FSC)을 조정 하 여 음수 셀 모집단의 위치를 확인 합니다.</li>
	<li>소용돌이 패널 1 및 패널 2에 대 한 항 체 혼합물의 적절 한 부피를 추가 한다. 생존 염료 1 µ L을 각 시료에 추가 하 여 살 균 및 죽은 세포 차별을 허용 합니다. 4°c에서 20 분 동안 배양 하 고 빛 으로부터 보호 합니다.</li>
	<li>2% FCS PBS로 두 번 세척 하 고 4°c에서 5 분 동안 300 x g 에서 원심 분리기를 사용 합니다.</li>
	<li>300 µ의 세포 펠 렛을 2% FCS PBS에 소생 시켜 FACS 분석까지 4°c에서 저장 한다. 참고: 측정을 시작 하기 전에 30 µm 세포 스 트레이너를 통해 세포를 폴리스 티 렌 FACS 튜브와 소용돌이로 통과 시켰다. 유 세포 분석은 1-3 h의 경우 4°c에서 2% FCS PBS에 저장 된 표지 된 세포로 수행 하였다. 세포는 최적화 된 결과를 위해 가능한 한 빨리 분석 되어야 합니다.</li>
</ol>5. 유 세포 분석 보상, 수집 및 게이팅
<ol><li>오염 되지 않은 네거티브 컨트롤 샘플을 실행 하 여 FSC 및 SSC를 설정 하 고 유 세포 집단의 전압을 조정 하 여 백혈구를 감지 하 고 파편과 생존 가능한 세포를 구별 합니다. 파편과 죽은 세포를 제외 하십시오. 참고: 간에 서의 세포 현 탁 액의 생존 율은 추가적인 밀도 분리 단계로 인해 perigonadal 지방 조직 으로부터의 세포 현 탁 액 으로부터의 생존 율 보다 낮을 수 있다.</li>
	<li>멀티 컬러 보정을 위해 단일 스테인드 컨트롤 샘플을 실행 합니다. 참고: 항 체 포획 비드는 관심 있는 세포 집단의 세포 수가 너무 낮아서 세포를 사용 하 여 보상할 수 없는 경우 스펙트럼 중첩을 조정 하는 데도 사용 될 수 있다. 세포의 가능한 자동 형광 신호를 검출 하는 것은 모든 항 체에 대 한 1 (FMO) 제어는 권장 하지만이 프로토콜에서는 적용 되지 않았다.</li>
	<li>측정을 시작 하 고 적절 한 수의 이벤트 (최소 5만 이벤트)를 수집 하 고 실험 데이터를 기록 합니다.</li>
	<li>분석용 FCS 데이터 파일을 내보내고 게이팅 전략을 설정 합니다. CD45+ 백백혈구를 게이트 하 여 후속 세포 집단을 식별 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Guh, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+co-morbidities+related+to+obesity+and+overweight%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The incidence of co-morbidities related to obesity and overweight: A systematic review and meta-analysis.</a> BMC Public Health. 9, 88(2009).</li>
<li>Prentki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+%CE%B2+cell+failure+in+type%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Islet β cell failure in type.</a> J Clin Invest. 116 (7), 1802-1812 (2006).</li>
<li>Shoelson, S. E., Lee, J., Goldfine, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Inflammation and insulin resistance.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (7), 1793-1801 (2006).</li>
<li>Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+linking+obesity+to+insulin+resistance+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes.</a> Nature. 444, 840(2006).</li>
<li>Exley, M. A., Hand, L., O'Shea, D., Lynch, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+the+immune+system+and+adipose+tissue+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Interplay between the immune system and adipose tissue in obesity.</a> Journal of Endocrinology. 223 (2), R41-R48 (2014).</li>
<li>Ferrante, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%2C+fat%2C+and+the+emergence+of+immunometabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Macrophages, fat, and the emergence of immunometabolism.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 4992-4993 (2013).</li>
<li>Winer, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+promote+insulin+resistance+through+modulation+of+T+cells+and+production+of+pathogenic+IgG+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies.</a> Nature Medicine. 17, 610(2011).</li>
<li>Onodera, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+macrophages+induce+PPAR%CE%B3-high+FOXP3%28%2B%29+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue macrophages induce PPARγ-high FOXP3(+) regulatory T cells.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li>
<li>Lackey, D. E., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+metabolism+by+the+innate+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Regulation of metabolism by the innate immune system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 12, 15(2015).</li>
<li>Calle, E. E., Kaaks, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overweight%2C+obesity+and+cancer%3A+epidemiological+evidence+and+proposed+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overweight, obesity and cancer: epidemiological evidence and proposed mechanisms.</a> Nature Reviews Cancer. 4, 579(2004).</li>
<li>Ibrahim, S. H., Hirsova, P., Malhi, H., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Nonalcoholic+Steatohepatitis%3A+Eat%2C+Delete%2C+and+Inflame%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases+and+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Nonalcoholic Steatohepatitis: Eat, Delete, and Inflame.</a> Digestive Diseases and Sciences. 61 (5), 1325-1336 (2016).</li>
<li>Beura, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recapitulating+adult+human+immune+traits+in+laboratory+mice+by+normalizing+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Recapitulating adult human immune traits in laboratory mice by normalizing environment.</a> Nature. 532 (7600), 512-516 (2016).</li>
<li>Sbierski-Kind, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+Housing+Conditions+Reveal+a+Major+Impact+of+Adaptive+Immunity+on+the+Course+of+Obesity-Induced+Type+2+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Distinct Housing Conditions Reveal a Major Impact of Adaptive Immunity on the Course of Obesity-Induced Type 2 Diabetes.</a> Frontiers in Immunology. 9 (1069), (2018).</li>
<li>Japp, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wild+immunology+assessed+by+multidimensional+mass+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Wild immunology assessed by multidimensional mass cytometry.</a> Cytometry Part A. 91 (1), 85-95 (2017).</li>
<li>Benedict, M., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-alcoholic+fatty+liver+disease%3A+An+expanded+review%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Non-alcoholic fatty liver disease: An expanded review.</a> World Journal of Hepatology. 9 (16), 715-732 (2017).</li>
<li>McNelis, J. C., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%2C+Immunity%2C+and+Metabolic+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages, Immunity, and Metabolic Disease.</a> Immunity. 41 (1), 36-48 (2014).</li>
<li>Ferrante, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Immune+Cells+in+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+Obesity+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The Immune Cells in Adipose Tissue.</a> Diabetes, Obesity & Metabolism. 15, 34-38 (2013).</li>
<li>Bertola, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+expression+patterns+of+inflammatory+and+immune+response+genes+associated+with+obesity+and+NASH+in+morbidly+obese+patients%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Hepatic expression patterns of inflammatory and immune response genes associated with obesity and NASH in morbidly obese patients.</a> PloS One. 5 (10), e13577(2010).</li>
<li>Turnbaugh, P. J., Bäckhed, F., Fulton, L., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-Induced+Obesity+Is+Linked+to+Marked+but+Reversible+Alterations+in+the+Mouse+Distal+Gut+Microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+%26+Microbe%22%5BJournal%5D)">Diet-Induced Obesity Is Linked to Marked but Reversible Alterations in the Mouse Distal Gut Microbiome.</a> Cell Host & Microbe. 3 (4), 213-223 (2008).</li>
<li>Singh, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+diet+on+the+gut+microbiome+and+implications+for+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Influence of diet on the gut microbiome and implications for human health.</a> Journal of Translational Medicine. 15 (1), 73(2017).</li>
<li>Müller, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+barrier+impairment+by+high-fat+diet+in+mice+depends+on+housing+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Nutrition+%26+Food+Research%22%5BJournal%5D)">Gut barrier impairment by high-fat diet in mice depends on housing conditions.</a> Molecular Nutrition & Food Research. 60 (4), 897-908 (2016).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

스 테아의 각 막 염은 비만, 인슐린 저항성 및 dyslipidemia15와 같은 대사 이상과 강한 연관이 있다. 여러 연구에 따르면, 지방 조직 염증은 선천적인 면역계와 적응형 면역 체계의 세포의 변화 된 수준을 포함 하 여 타입-2 당뇨병의 병 인을 구동할 수 있다는 것을 나타냅니다.4,5,17 . 또한 비만이 면역 경로의 활성화를 조절 하 여 간 합병증18을 유발할 수 있음을 발견 했습니다. 각 면역 세포 집단은 인슐린 저항성 및 항 각 막 염의 발달에 다른 방법으로 기여 하기 때문에 지방 및 간 염증 반응에서 면역 세포 표현 형의 특성화에 대 한 관심이 증가 하 고 있습니다.
<p class="jove_...

비만은 심장 병, 치기, 무 알콜 항 암 각 막 염 (내 시), 타입-2 당뇨병 (T2D) 및 몇몇 유형의 암의 발달을 위한 다 인 성과 무질서 및 중요 한 위험 요소입니다. 비만의 보급은 급속 하 게 세계적으로 증가 하 고 있습니다. 오늘날 세계 인구의 약 30%가 21억 명이 비만 또는과 체중1입니다. 비만-관련 된 인슐린 저항은 포도 당 항상성2를 유지 하는 인슐린을 위한 증가 한 필요를 보충 하기 위하여 췌 장 섬 베타 세포가 소진 될 때 T2D로 이끌어 낼 수 있습니다.
지방 조직은 지방 세포를 포함 하는 다양 한 세포 유형으로 구성 되어 있으며, 내 피 셀, 섬유 아 세포 및 면역 세포. 비만의 진행 도중, 면역 세포의 수 그리고 활동에 있는 변경은 비 대 성 지방 조직3의 저급 한 염증을 이끌어 낼 수 있습니다,4. 구체적으로, 과도 한 에너지 섭취는 혈당, 중성 지방 및 유리 지방산의 만성 상승 수준을 동반 하 고, 지방 세포 저 산소 증, 내 소포체 스트레스, 손상 된 미토 콘 드리 아 기능 및 향상 된 사이토카인 분 비, 염증 성 지방 면역 세포의 활성화의 결과5,6. 과거 연구는 주로 선천적인 면제에 집중 했습니다, 그러나 더 최근에 적응 하는 면역 세포 (T와 B 세포)는 포도 당 항상성의 중요 한 규칙으로 부상 했습니다. 그들은 염증 성 (CD8+ t 세포, Th1 및 B 세포 포함) 또는 주로 조절 기능 (규제 T (treg) 세포, Th2 세포 포함)을 소유 하 고 인슐린 저항성을 악화 시키거나 보호 할 수 있습니다7,8 , 9.
또한, 지방 조직10에의 한 사이토카인의 증가 된 생산을 포함 하 여 비만이 증가 하는 방법을 설명 하기 위해 여러 가지 기전이 제안 되었다. 내 쉬, 무 알콜 지방 간 질환의 진보적 인 형태와 선진국의 주요 건강 부담은, 조직 학적으로 풍 화 된 간세포, 지질 축적, 섬유 증 및 연골 염을 특징으로 하 고 진행 될 수 있다 간 경 변, 단 부 질환 또는 간세포 암 종. 몇몇 식이요법 (예를 들면 메티오닌과 콜린 결핍 다이어트11)은 비 인간 동물 모델에서 내 시 같은 간 병리학을 유도 하는 것으로 알려져 있지만, 이러한 접근법의 대부분은 내 쉬와 그 대사에 대 한 인간의 상태를 탈환 하지 않는다 그들은 특정 유전자 녹아웃을 필요로 하는 결과, 비 생리 식이 조작 또는 인간의 내 쉬의 전형적인 인슐린 저항이 부족. 또한, 신진 대사 질환의 근본적인 메커니즘에 대 한 우리의 이해는 현재 표준 특정 병원 체 무료 (SPF) 조건 하에 보관 된 실험실 마우스를 사용 하 여 수행 된 실험을 기반으로 합니다. 이러한 장벽 시설은 비정상적으로 위생 적 이며 인간 들이 겪는 미생물 다양성을 고려 하지 않으며,이는 임상 접근법에 대 한 동물 연구의 번역 과정에서 어려움을 고려할 수 있는12,13 , 14.
인간 면 역학적 상태를 재생 하는 고급 마우스 모델에서 인슐린 저항성 및 내 시를 개발 하는 동안 지방 조직과 간에 서 상이한 면역 세포 서브 세트를 조사 하기 위해, 마우스를 반 멸 균 된 개별 케이지 내에 수납 하였다 장벽 없는 조건. 항 원 노출 조건 하에 보관 된 마우스는 이미 15 주 동안 고 지방 식이 요법 (HFD)을 먹이는13의 후 내 시 같은 간 병리학을 개발 했습니다. 그들은 나이 일치 하는 SPF 마우스에 비해 그들은 거 대 한 신경 병 증을 개발, 간 침투 및 면역 세포의 활성화.
이 원고는 내 시의 모델에서 마우스 지방 조직과 간에 서 면역 세포 서브 세트를 정의 하 고 계산 하는 강력한 유 세포 분석을 설명 합니다. 유 세포 분석기 분석은 RT-PCR 또는 면역 조직 화학 접근법과 달리 개별 세포의 여러 파라미터를 동시에 검출할 수 있게 합니다.
요약 하자면, 우리의 연구는 인슐린 저항과 내 쉬의 개발과 또한 인간의 상태에 대 한 충실도를 나타내는 기본 메커니즘을 조사 하기 위한 단기 HFD의 마우스 모델을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>100 &마이크로; M 세포 스트레이너&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 주사기&nbsp;</td><td>BD&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>26G x 5/8 바늘&nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>305115</tr><tr><td>35mm 페트리 접시&nbsp;</td><td>팔콘</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>40 &마이크로; M 세포 스트레이너&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>ACK 용해 버퍼&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700 안티-마우스 CD45</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>103127</td><td>AB_493714 (BioLegend Cat. 103127)</td></tr><tr><td>분석 소프트웨어&nbsp;</td><td>FlowJo 10.0.8 소프트웨어</td><td></td><td></td></tr><tr><td>APC 안티-마우스 CD11c 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>117309</td><td>AB_313778 (BioLegend Cat. 번호 117309)</td></tr><tr><td>APC 안티-마우스 KLRG1 (MAFA) 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>138411</td><td>AB_10645509 (BioLegend Cat. 번호 138411)</td></tr><tr><td>BV421 안티-마우스 CD127 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>135023</td><td>AB_10897948 (BioLegend Cat. 번호 135023)</td></tr><tr><td>BV421 안티-마우스 F4/80 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>123131</td><td>AB_10901171 (BioLegend Cat. 번호 123131)</td></tr><tr><td>BV605 안티-마우스 CD279 (PD-1) 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>135219</td><td>AB_11125371 (BioLegend Cat. 번호 135219)</td></tr><tr><td>BV605 안티 마우스 NK-1.1 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>108739</td><td>AB_2562273 (BioLegend Cat. 번호 108739)</td></tr><tr><td>BV650 안티-마우스/인간 CD11b 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>101239</td><td>AB_11125575 (BioLegend Cat. 번호 101239)</td></tr><tr><td>BV711 안티-마우스/인간 B220 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>103255</td><td>AB_2563491 (BioLegend Cat. 번호 103255)</td></tr><tr><td>BV785 안티 마우스 CD8a 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100749</td><td>AB_11218801 (BioLegend Cat. 번호 100749)</td></tr><tr><td>C57Bl/6J 마우스, 수컷, 5주 된 마우스&nbsp;</td><td>Forschungseinrichtungen f&uuml; r experimentelle Medizin (FEM)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>자선&eacute; - Universit&auml; 베를린</td><td>A119.1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소 NB 4G 입증 된 등급&nbsp;</td><td>세르바&nbsp;</td><td></td><td></td>11427513</tr><tr><td>콜라겐 분해 효소 유형&nbsp;</td><td>워딩턴&nbsp;</td><td></td><td></td>LS004197</tr><tr><td>원뿔형 원심분리기 튜브 15mL&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 원심분리기 튜브 50 mL&nbsp;</td><td>팔콘</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>DNAse&nbsp; &nbsp;</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td></td><td></td>4716728001</tr><tr><td>태아 소 세럼&nbsp;</td><td>Biochrom</td><td>S0115</td><td></td></tr><tr><td>필터 30&micro; 엠&nbsp;</td><td>셀트릭&nbsp;</td><td></td><td></td>400422316</tr><tr><td>FITC 안티 마우스 CD3 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100203</td><td>AB_312660 (BioLegend Cat. 번호 100203)</td></tr><tr><td>유세포 분석&nbsp;</td><td>BD-LSR 포르테사&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>펜치&nbsp;</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>F4142-1EA</td><td></td></tr><tr><td>HBSS&nbsp;</td><td>생물 분석 GmBH&nbsp;</td><td>085021-0500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>고지방 다이어트&nbsp;</td><td>SSNIF</td><td>E15741&ndash; 34&nbsp;</td><td>지방에서 60kJ%, 19&thinsp; 단백질에서 kJ%, 그리고 21&thinsp; 탄수화물</td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위에서 kJ%&nbsp;</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>S3146</td>은 <td>해부 목적으로 사용됩니다&nbsp;</td></tr><tr><td>PE 안티 마우스 CD25 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>101903</td><td>AB_312846 (BioLegend Cat. 번호 101903)</td></tr><tr><td>PE/Cy7 안티 마우스 CD62L 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>104417</td><td>AB_313102 (BioLegend Cat. 번호 104417)</td></tr><tr><td>PE/Cy7 안티-마우스 I-A/I-E (MHCII) 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>107629</td><td>AB_2290801 (BioLegend Cat. 번호 107629)</td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 안티-마우스 CD4 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100565</td><td>AB_2563684 (BioLegend Cat. 번호 100565</td></tr><tr><td>) Percoll 솔루션&nbsp;</td><td>Biochrom</td><td>L6115</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cy5.5 안티-마우스 CD44 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>103031</td><td>AB_2076206 (BioLegend Cat. 번호 103031)</td></tr><tr><td>PerCP/Cy5.5 안티-마우스 Gr-1 항체</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>108427</td><td>AB_893561 (BioLegend Cat. 번호 108427)</td></tr> <tr><td>인산염 완충 식염수&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12559069</td><td></td></tr><tr><td>세포 여과기 캡이 있는 둥근 바닥 튜브</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>38030</td><td></td></tr><tr><td>TruStain fcX 안티 마우스 CD16/32</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>101301</td><td>AB_312800 (BioLegend Cat. No. 101301)</td></tr><tr><td>트리판 블루&nbsp;</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>T6146</td><td></td></tr><tr><td>좀비 NIR 고정 가능한 생존력 키트</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>423105</td><td>바이어블리티 염색&nbsp;</td></tr></tbody></table>

타입-2 당뇨병과 관련 하 여 무 알콜 수 막 염을 위한 진보 된 뮤 린 모형

An Advanced Murine Model for Nonalcoholic Steatohepatitis in Association with Type 2 Diabetes

비만은 만성 저 학년 염증과 인슐린 저항성과 관련 되어 있으며, 2 형 당뇨병 및 무 알콜 수 막 염 (내 쉬)과 같은 만성 대사 질환의 증가 하는 보급에 기여 합니다. 최근의 연구는 프로 염증 성 면역 세포가 비만 비 대 지방 조직과 간을 침투 시키는 것을 확립 했습니다. 신진 대사 항상 성의 맥락에서 면역 세포의 새로운 중요성을 감안할 때, 타입-2 당뇨병과 내 시의 개발 중에 그들의 수정 사항을 정량화 하 고 특성화 하는 중요 한 필요가 있다. 그러나, 인간 내 쉬의 전형적인 병 태 생리학적 특징을 유도 하는 동물 모델은 희소 하다.
이 문서에서는, 우리 내 시의 신뢰할 수 있는 마우스 모델에서 간 및 지방 조직에서 고립 된 면역 세포 하위 집합을 식별 하는 자세한 프로토콜을 제공 합니다, 비 특이 적 병원 체 없는 (SPF) 조건 하에서 주택 고 지방 다이어트 (HFD) 마우스에 의해 설립 적어도 7 주 동안 장벽. 우리는 유 세포 분석기에 의해 비-SPF 조건에서 마우스의 처리, 조직의 소화 및 대 식 세포, 천연 킬러 (NK) 세포, 수지상 세포, B 및 T 세포 서브 세트의 식별을 입증 한다. SPF HFD 마우스 및 비 SPF 마우스의 대표적인 유 세포 분석 플롯이 제공 된다. 신뢰할 수 있고 해석할 데이터를 얻기 위해 항 체의 사용, 조직 소화를 위한 정확 하 고 정밀한 방법 및 유 세포 분석 실험에서의 적절 한 게이팅을 중요 한 요소입니다.
미생물 항 원에 대 한 비-SPF 조건에서 그들을 주택에 의해 쥐에 있는 생리 적 항 원 노출을 복원 하는 내정간섭은 면역학 변경 사이 링크를 조사 하기를 위한 관련 도구를 제공할 수 있었습니다, 규정식에 의하여 유도 된 비만과 관련 된 장기 합병증.

설명 된 프로토콜은 식이 유도 된 내 쉬의 모델에서 뮤 린 perigonadal 지방 조직과 간에 서 분리 된 선천적인 및 적응 면역 세포의 표면 마커의 특성화를 허용 합니다. 이 모델에서, 내 시는 HFD 플러스 자당 (6%)의 투여에 의해 유도 되었다 이전에 보고 된 바와 같이 C57Bl/6J 마우스에서 7 내지 15 주 동안식 수를 한다. 중요 하 게는, 생쥐는 반 멸 균 상태에 보관 되었고, 따라서 실험 전반에 걸쳐 환경 항 원에 노출 되었다. Spf 조건에서 보관 된 HFD 마우스 먹이 쥐와 spf 및 비 SPF 조건에서 보관 된 초 우 다이어트 마우스는 컨트롤로 제공 됩니다. HFD 공급은 이미 두 그룹에서 7 주 후에 상당한 체중 증가를 가져왔다. 체중에 있는 중요 한 다름은 주 4 (P &lt; 0.001)에서 첫번째 명백 하 고 다음 실험적인 주 내내 중요 하 게 남아 있었습니다. 그러나, 체중 증가에 있는 중요 한 다름은 7 주13</s...

간단 하 고 신뢰할 수 있는 식이 유발 설치류 동물 모델에 대 한 무 알콜 지방 각 막 염 (내 쉬)에 대 한 설명, 동물의 비 SPF 주택을 통해 달성 하 고 특정 높은 뚱뚱한 다이어트의 관리. 우리는 마우스를 환경 세균에 노출 시 킴으로써 인간 면 역학적 조건을 다시 캡처하는 간 및 지방 면역 세포 하위 세트의 식별을 설명 합니다.

Obesity is associated with chronic low-grade inflammation and insulin resistance, contributing to an increasing prevalence of chronic metabolic diseases, ...

이 방법은 면역 대사 분야에서 면역 세포의 기여에 대 한 질문에 대답 하는 데 도움이 수 있습니다 비만 유도 염증에 대 한 지방 및 간 간염 조직에서 간염. 이러한 기술은 비특이적 병원체가 없는 설치류 하우징 하우징을 통해 달성된 무알코올 성 지방 간염의 식이 유발 모델에서 지방 및 간 면역 세포의 분리에 최적화되어 있다. 이 방법은 신진 대사 항상성의 유지에 관련 된 면역 메커니즘의 우리의 이해를 심화 하는 데 도움이 수 있습니다.일반적으로, 이 기술에 새로운 개별은 기능적으로 실행 가능한 해리된 세포의 수율을 최대화하고 유동 세포 측정에 있는 적당한 게이팅을 설치하는 투쟁할 것입니다. 지방 조직 단일 세포 현탁액을 생성하려면 안락사 마우스의 가슴을 70 %에탄올로 분사하고 늑골 케이지의 전체 길이를 따라 정립 및 복벽을 통해 5 ~ 6 센티미터 의 중앙 절개를 조심스럽게 만들어 흉막과 심장을 노출시합니다. 26 게이지 바늘을 사용하여, 왼쪽 심실의 정점에 0.9 % 식염수 용액의 적어도 10 밀리리터를 주입하고 복막 구멍을 열기 위해 가위를 사용합니다.그런 다음 epigonadal 지방 조직을 해부하고 무게를 측정합니다. 50 밀리리터 원피스 튜브로 조직 조각을 옮기기 전에 4도에서 페트리 접시에 지방 조직을 기계적으로 분리합니다. 페트리 접시에 0.5%의 소 세럼 알부민 또는 BSA를 PBS에 넣고, 지방 조직 1그램당 3밀리리터의 지방 조직 소화 용액을 튜브에 첨가합니다.섭씨 37도, 분당 200회 회전에서 20분 후 PBS에 0.5%BSA의 5밀리리터를 추가하고 얼음 위에 지방 소화를 넣습니다. 10밀리리터 세로지컬 파이펫으로 솔루션을 여러 번 트리투레이하고 플런저를 사용하여 100마이크로미터 스트레이너를 통해 솔루션을 전달합니다. 조직 분획을 원심분리로 분리하고 파이펫을 사용하여 부동 지방 세포 분획을 버립니다.기질 혈관 분수 세포 펠릿을 암모늄 염화 칼륨 또는 ACK, 리시스 버퍼의 1 밀리리터로 재중단하여 몇 초 후 PBS에서 2 %의 태아 종아리 혈청 또는 FCS의 10 밀리리터로 용해 반응을 중지합니다. 이어서, 원심분리에 의해 고립된 백혈구를 수집하고, 계산을 위해 PBS에서 2%FCS의 250 마이크로리터에서 펠릿을 재중단한다. 주사기 스탬프를 사용하여 페트리 접시에 조직을 기계적으로 해리하기 전에 얼음에 PBS의 원추형 튜브로 간을 수확 4섭씨.해부된 간 조직 조각을 따뜻한 간 소화 용액 10밀리리터를 포함하는 50 밀리리터 튜브로 옮기고, 신선한 간 소화 용액 3밀리리터로 페트리 접시를 헹굽니다. 섭씨 37도에서 20분, 분당 200회 회전 후 HBSS 20밀리리터로 소화를 멈추고 10밀리리터 세로지컬 파이펫으로 조직 슬러리를 여러 번 세리세타트합니다. 플런저를 사용하여 100마이크로미터 스트레이너를 통과하고 원심분리로 간 세포를 수집합니다.펠릿을 신선한 HBSS 20 밀리리터로 재중단하고 원심분리에 의해 간세포 매트릭스를 제거합니다. HBSS에서 33% 낮은 점도 밀도 그라데이션 배지 용액의 10 밀리리터에서 펠릿을 재중단하여 원심분리용 상체를 수집합니다. 간 면역 세포를 밀도 그라데이션 원심분리에 의해 분리하고 ACK 용해 완충제의 1 밀리리터에서 백혈구 펠릿을 다시 중단합니다.실온에서 4분 후, HBSS 10밀리리터로 용액을 멈추고 30마이크로미터 모공 스트레이너를 통해 세포를 원심분리를 위한 15밀리리터 튜브로 필터링합니다. 그런 다음, 계산을 위해 PBS에서 2%FCS의 250 마이크로리터에서 펠릿을 다시 중단합니다. 고립 된 백혈구 집단의 유동 세포 측정 분석을 위해, 개별 폴리스티렌 형광 활성화 세포 선별, 또는 FACS, 튜브로 관심의 조직에서 PBS에서 2 %FCS의 100 마이크로 리터의 6 세포에 최대 3 배 10을 추가합니다.각 튜브에 10개의 항 CD16/CD32 항체를 첨가하여 얼음에 10분 동안 비특이적 결합을 차단한 다음, 항체 혼합물의 적절한 부피와 시료당 생존성 염료 1편으로 염색하여 살아있는 세포 차별을 허용합니다. 빛으로부터 보호되는 섭씨 4도에서 20분 후, 시료를 2밀리리터 2밀리리터와 세척당 PBS, 원심분리기는 섭씨 4도에서 5분간 300배씩 세척합니다. 그런 다음, 신선한 PBS 플러스 FCS에서 펠릿을 다시 중단합니다.유동 세포측정에 의해 세포를 분석하려면, 스테인드 네거티브 제어 샘플을 사용하여 전방 및 측면 산란을 설정하고, 유동 세포계의 전압을 조정하여 실행 가능한 백혈구 집단을 감지하고 이물질을 배제한다. 다음으로, 실험 샘플을 실행하기 전에 다색 보정을 위해 단일 스테인드 컨트롤 샘플을 실행하고 튜브 당 4개의 이벤트에 대해 최소 5회 10회 수집합니다. 그런 다음 분석을 위해 FCS 데이터 파일을 내보내고 CD45 양성 백혈구에 대한 게이팅 전략을 설정하여 후속 면역 세포 집단의 식별을 허용합니다.여기서, 뮤린 페리고나달 지방에서 이중 차별 및 생존성 스테인링을 포함하는 T 세포 하위 집단을 위한 대표적인 게이팅 전략이 나타난다. CD45 양성 백혈구는 CD4 및 CD8에 대해 먼저 게이트되고 그 후 CD44 및 CD62 리간드에 대해 순진한, 중앙 메모리, 이펙터 메모리 및 이펙터 T 세포를 구별합니다. CD44 양성 세포는 CD127, 킬러 셀 렉틴 과 같은 수용체 G1 및 프로그램된 데스-1을 더 특징으로 합니다.여기서, B 세포, 과립구, 자연 킬러 세포, 대식세포 및 수지상 세포를 분석하기 위한 게이팅 전략이 도시된다. 이펙터 메모리 CD4 양성 및 CD8 양성 세포의 높은 비율은 비 SPF 조건에 수용 된 고지방 다이어트 마우스에서 검출 될 수 있지만, 반면 간 내 순진한 CD4 양성 및 CD8 양성 T 세포는 7 주에 SPF 고지방 다이어트 마우스에 비해 이러한 동물에서 상당히 낮은 것으로 나타났습니다. 중증 스테토시스는 대식체 스테토시스, lobular 염증, 간세포 풍선 및 파괴 된 lobular 구조의 증가를 포함하여 고지방 식단에서 발견되는 반면 일부 SPF 마우스만이 간에서 온화한 지방 축적을 나타낸다.또한, 천연 킬러 세포의 비율은 고지방 식이 요법의 지방 조직에서 더 높으며, 고지방 식단 SPF 마우스는 수지상 세포의 높은 비율을 입증했다. 이 절차를 시도할 때, 그렇지 않으면 언급되지 않는 한 얼음과 어둠 속에서 세포를 유지하는 것이 중요합니다. 이제 단일 세포 현탁액을 올바르게 준비하는 방법과 유동 세포 측정 실험을 위해 뮤린 지방과 간 조직을 격리하는 방법에 대한 좋은 이해가 있어야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

쥐의 혈당과 Intralipid 만성 주입을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 모델은 기관의 기능과 생리 학적 매개 변수에 대한 영양 과잉의 영향을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

쥐의 만성 영양 주입의 모델

간 전이 전임상, 뮤린 모델 hemispleen 주입 기법을 통해 수행 하였다.

간 전이의 전임상 쥐과 모델

우리는 여기에서 제2형 당뇨병의 마우스 모델, Leprdb에서 섬을 분리하기 위한 프로토콜과 2개의 광자 현미경을 사용하는 온전한 섬에서 인슐린 분비를 측정하기 위한 라이브 셀 분석의 세부 정보를 제시합니다.

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

본 연구에서는, 지방산 염 나트륨 올레아테를 사용하여 분화된 HepaRG 세포에서 간 용술증을 유도하기 위한 상세한 프로토콜을 설명하고, 일관된 항스톡스를 포함한 지질 축적의 검출 및 정량화를 위한 방법을 채택한다. 라만 산란 (CARS) 현미경 검사법, 세포 형광 분석, 오일 레드 O 염색, 및 qPCR.

분화된 HepaRG 세포에서 베아토시스 유도 및 특성화

현재 프로토콜은 비알코올성 지방간염(NASH) 동안 세포외 기질(ECM) 리모델링의 역학을 시각화하기 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼을 구축하기 위해 간 상피내 관류/탈세포화 및 이광자 현미경 방법을 최적화합니다.

비알코올성 지방간염 마우스 모델에서 간 세포외 기질의 3D 이미징

이 프로토콜은 박출률(HFpEF)이 보존된 고지혈증 유발 심부전의 쥐 모델을 복제하기 위한 자세한 접근 방식을 제시합니다. 이 설계는 아데노 관련 바이러스 9-심장 트로포닌 T-저밀도 지단백질 수용체(AAV9-cTnT-LDLR)와 폴록사머-407(P-407)의 투여를 결합합니다.

박출률이 보존된 고지혈증 유발 심부전의 쥐 모델

이 프로토콜은 고지방 식단 수유와 스트렙토조토신 주사의 조합을 통해 당뇨병성 심근병증을 유발하는 방법을 설명합니다. 이 접근 방식은 당뇨병성 심근병증에 대한 과학적 연구를 위한 신뢰할 수 있는 프레임워크를 제공하고 임상 치료 적용을 위한 잠재적인 방법을 탐색하는 것을 목표로 합니다.

쥐 당뇨병성 심근병증 모델의 모델링 및 평가

대사 기능 장애, 간 유전자 발현 변화 및 진행성 섬유증 3기로 진행되는 섬유증을 포함하여 인간 MASLD와 유사한 간 조직병리학적 변화를 동반한 대사 기능 장애 관련 지방성 간 질환(MASLD)의 마우스 모델. 이 모델은 MASLD 병태생리학 연구 및 새로운 치료법의 전임상 연구에 사용할 수 있습니다.

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이 연구는 일반적으로 지방 췌장을 특징으로 하는 단순 비만을 나타내는 비만 쥐 모델을 확립하기 위해 재현 가능하고 표준화된 방법을 제공합니다. 또한 췌장 조직 샘플링 및 면역조직화학에 대한 자세한 프로토콜도 포함되어 있습니다.

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Trichuris muris 감염은 모성 쥐가 보호 Th2 반응을 생성하고 민감한 쥐가 병적인 Th1 반응을 생성하는 Th2 면역의 창자 모델입니다.

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