Name: 스폰지 팁 전극 A 소설 원추형을 사용 하 여 애벌레 Zebrafish에 기록 하는 Electroretinogram (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: 배우세요 원추형 스폰지 팁 전극을 사용하여 애벌레 제브라피시(Danio rerio)에서 전막전위도(ERG)를 측정하는 방법을. 이 비용 효율적인 기술은 시각 발달 및 유전 질환 모델 연구에 반복 측정이 가능한 신뢰할 수 있는 기능적 판독값을 제공합니다.

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자금이 프로젝트에 대 한 제공 했다 교부 금에 의해 멜버른 신경 과학 연구소에서 (PTG, PRJ & BVB)에.

모든 electroretinogram (에) 절차 동물의 사용 그리고 배려에 대 한 호주 국민 건강 및 의료 연구 위원회 코드의 규정에 따라 수행 했다와 기관 동물 윤리 위원회에 의해 승인 된 멜버른의 대학입니다.
1. 버퍼 준비
<ol><li>준비 하는 금붕어 벨의 버퍼 (1.25 M NaCl, KCl 26mm, 25mm CaCl2, 10 m m MgCl2, 100 mM 포도 당, 100 mM HEPES) x 10 역삼 투 (RO) 물을 사용 하 여. PH 7.8에 버퍼를 조정 하 고 0.22 μ m 필터를 사용 하 여 버퍼를 소독. 4 ° C에서 10 배 버퍼 솔루션 주식3으로 저장 합니다. 참고: 벨의 버퍼 x 10은 3 개월 이내에 사용 되어야 한다.</li>
	<li>실험 당일, 역방향 삼 투 물을 사용 하 여 금붕어 벨의 버퍼 x 10을 diluting 하 여 금붕어 벨의 버퍼 x 1을 확인 합니다. 참고: 금붕어 벨의 버퍼 x 1는 PVA 스폰지, 스폰지 애벌레 zebrafish의 배치에 대 한 사용을 포함 하 여 그리고 기록 전극 끝에 스폰지를 포화 하는 데 사용 됩니다.</li>
</ol>2. 전극 준비
<ol><li>
원뿔 모양의 스폰지 기록 전극 준비.
	<ol>
<li>백 금 전극 리드 확장에서 남성 끝을 잘라 고 10mm 메스 블레이드를 사용 하 여 외부 소계 절연 코팅의 끝에서 제거 합니다. 알아서 하지 전극 리드의 내부 와이어를 손상.</li>
		<li>실버 와이어 (0.3 m m 직경)의 40 m m 길이 잘라 하 고 안전 하 게 노출된 내부 와이어와 함께 실버 와이어 entwining 여 이것을 전극 리드에 연결. 실버 와이어 노출 (그림 1A)의 ~ 15 m m 길이 떠나 단 열 테이프를 사용 하 여 관절을 싸는.</li>
		<li>60 9 V DC 소스를 사용 하 여 염화와 노출된은 와이어를 전기 도금 신호 전도 개선 하기 위해 s. 일반적인 염 분에 노출 된 실버 팁을 담가 그리고 배터리의 긍정적인 터미널에 다른 쪽 끝을 연결. 배터리의 부정적인 터미널에 다른 와이어를 연결 하 고 염 분2로 와이어의 다른 쪽 끝을 담가. 참고: 또는, 표 백제 솔루션 (활성 성분 42 g/L 나트륨도 발견 됐 죠)에 1 시간 동안 그것을 몸을 담글 하 여 실버 와이어 인터네셔널.</li>
		<li>PVA의 ~ 20 m m x 20 m m 스퀘어 콘 (그림 1A)를가 위를 사용 하 여 스폰지를 잘라. 벨의 버퍼 x 1를 사용 하 여 스폰지 포화. 접 안 렌즈에 눈금 막대와 현미경, 메스 블레이드 사용 하 여 모양 ~ 40 µ m 직경 원뿔의 꼭대기. 공기 건조 흡수 성 종이 조직에 원뿔 모양의 스폰지까지 고체. 참고: PVA 스폰지 포화 상당히 확장, 따라서 원뿔의 꼭대기를 형성 하기 전에 스폰지 염 분으로 포화 처음은 중요 하다.</li>
		<li>Chloriding, 후 공기 건조 5 분 삽입에 대 한 흡수 성 조직에 실버 와이어는 콘의 기지를 통해 건조, 고체, 원뿔 모양의 PVA 스폰지에 실버 와이어. 어떤 과잉 노출된 금속 태양광 아티팩트 (그림 1B-C)을 줄이기 위해 마스크 테이프를 사용 하 여 보 온. 참고: 각 실험 세션 후 실버 와이어에서 스펀지를 제거 합니다. 재사용에 대 한 역방향 삼 투 물 및 건조 공기를 사용 하 여 스폰지를 씻어. 최적의 신호 컬렉션을 보장 하기 위해 실버 와이어의 단일 사용은 권장 된다. PVA 스폰지 5 번 이상 재사용 하지.</li>
		<li>실험의 날, 벨의 버퍼 완전히 스폰지를 포화 하 적어도 15 분 동안 x 1으로 기록 전극의 스폰지 팁을 담가.</li>
	</ol>
</li>
	<li>스폰지 팁을 연결 하지 않고도 하지만, 위에서 설명한 대로 참조 전극을 준비 합니다.</li>
	<li>접지 전극을 상업적으로 가져옵니다.</li>
</ol>3. 제 브라 준비
<ol><li>다크 적응 zebrafish 애벌레 하룻밤 (> 8 h) 15 mL 튜브에 zebrafish를 배치 하 여 녹음 전에 (< 튜브 당 20 애벌레) 어두운 인큐베이터에 알루미늄 호 일에 싸여. 충분 한 산소 공급을 보장 하기 위해 뚜껑을 제거 합니다.</li>
	<li>녹화 당일, 애벌레를 포함 하는 호 일에 싸서 팔 콘 튜브에 뚜껑을 강화 하 고 튜브 빛-증거 인지 확인 합니다. 애벌레에 연구소를 전송 합니다.</li>
	<li>발광 다이오드 (LED; 17.4 cd.m-2, λ최대 600 nm)에서 희미 한 붉은 조명으로 어둠 속에서 배양 접시에 생선을 붓는 다. 광선이 수건을 사용 하 여 가벼운 노출을 최소화 하기 위해 접시를 커버.</li>
</ol>4. 스폰지 플랫폼 준비
<ol><li>35 mm 페 트리 접시에 snugly에 맞게 건조 PVA 스폰지의 사각형 컷. 스폰지의 두께 페 트리 접시의 깊이를 대략 동일 해야 확인 하십시오.</li>
	<li>기준 전극의 실버 와이어에 맞게 스폰지의 한쪽 끝을 통해 수직으로 작은 상처를 확인 하십시오.</li>
	<li>금붕어 벨의 버퍼 포화 될 때까지 x 1에 PVA 스폰지를 적시 게. 그런 다음, 깨끗 한 35 mm 페 트리 접시에 스폰지를 놓습니다. 솔루션 가벼운 손가락 보도에 대 한 응답에 스폰지에서 발산 될 때까지 여분의 액체를 흡수 하는 종이 타월을 사용 합니다.</li>
</ol>5. 동물 및 전극 위치
<ol><li>애벌레 금붕어 벨의 버퍼 x 1에 희석 0.02 %tricaine 사용 하 여 anesthetize</li>
	<li>3 mL 파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 전송 종이 타월 (2~ 3 cm)의 광장에는 마 취 유 충.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 촉촉한 스폰지 플랫폼에 유 충을 포함 하는 종이 타월을 놓습니다. 벨의 버퍼에 배어 좋은 브러시를 사용 하 여 유 충의 위치를 조정. 그 한쪽 눈 위쪽으로 직면 유 충 아래 종이 타월의 광장에서 가까운 액체에서 고립 된 확인 합니다.</li>
	<li>유 충에 녹음을 통해 촉촉한 유지 하 아이 젤 보습과 머리를 제외 하 고 애벌레 몸 유약.</li>
	<li>패러데이 케이지 (그림 1D) 안에 위치한 Ganzfeld 그릇 빛 자극 앞 작은 물이 열 플랫폼에 스폰지 플랫폼 페 트리 접시를 놓습니다. 참고: 스폰지와 애벌레 시체의 온도의 유지 보수 안정 르 그 신호를 보장합니다.</li>
	<li>플랫폼 스폰지 (그림 1D)에서 만든 컷에 참조 전극을 삽입 합니다.</li>
	<li>패러데이 케이지를 상업적으로 얻은 접지 전극을 연결 합니다.</li>
	<li>전극 홀더를 기록 전극 연결 및 보안 stereotaxic 팔 micromanipulator (그림 1D)의 홀더. 3 mL 파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 다시 채도 대 한 전극의 스폰지 팁에 벨의 솔루션 x 1의 한 방울을 똑.</li>
	<li>전극의 배치에 대 한 르 그 플랫폼 위에 패러데이 케이지 현미경을 놓습니다. 참고: 조명은 dark-adaptation를 유지 하면서 dim 적색 LED (17.4 cd.m-2, λ최대 600 nm) 유 충의 관측을 허용 하 고 활성 전극의 배치에 의해 제공 되어야 한다.</li>
	<li>현미경 애벌레의 관찰 수 있도록 스폰지 플랫폼의 위치를 조정 합니다. 다음, 흡수 성 직물을 사용 하 여 전극 스폰지 팁에서 과잉 액체를 제거.</li>
	<li>(그림 1E) 애벌레 zebrafish 눈의 중앙 각 막 표면을 부드럽게 이어지도록 합니다 활성 전극 위치.</li>
	<li>Ganzfeld 그릇 스폰지 플랫폼으로 이동 하 고 유 충은 그릇에 의해 보호 확인 합니다.</li>
	<li>외부 전자기 소음을 줄이기 위해 패러데이 케이지를 닫습니다.</li>
</ol>6. Electroretinogram 기록
<ol><li>
특정에 시스템의 컴퓨터 소프트웨어를 사용 하 여 자극을 실행 하 고 데이터를2아래 권장 하는 설정에 따라 (자세한 재료의 표 참조).
	<ol>
<li>수집 소프트웨어에서 창 (2, 560 점)을 기록 한 650 ms 이상 4 KHz을 시스템의 샘플링 속도 설정 합니다.</li>
		<li>1000 × 시스템의 이득을 설정 합니다.</li>
		<li>1-300 hz 시스템의 대역 통과 필터링을 설정 합니다.</li>
		<li>노치 필터를 사용 하 여 60 Hz (또는 지역 유틸리티 주파수에 따라 50 Hz) 감소 잡음. 참고: 이상적인 소음 수준 ± 10 µ V 보다 더 이상 이어야 한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
아래 설명 된 절차를 사용 하 여 데이터 컬렉션을 시작 합니다.
	<ol>
<li>단일 테스트-플래시 (0.06 로그 cd.s/m2)를 사용 하 여 테스트 응답 전극의 위치를 평가 하기 위해 눈을 측정. 참고: B 파 진폭 4 dpf 애벌레에 25 µ V 보다 큰 테스트 플래시의이 강도 발생 한다. 강력한 응답, 측정 될 수 없는 경우 다음 전극 위치 고 다른 전극에 위치 잘 확인 플래시 테스트.</li>
		<li>어두운 동물 허용 다음 테스트-플래시, 녹음 하기 전에 완전 한 어둠 속에 3 분에 대 한 적응.</li>
		<li>현재 밝은 빛 농도를 주차에서 깜박입니다.</li>
		<li>전체 평균 신호 신호-잡음 레벨에 따라 반복 됩니다. 참고: 일반적으로, 더 많은 주차 가벼운 수준 (3 개 이상의 반복) 신호와 밝은 가벼운 수준 (일반적으로 반복 1) 적은 평균. 점차적으로 60 10에서 간 자극 간격을 길게 밝은 게 흐릿한 빛이 수준에서 s. 샘플 프로토콜은 표 1에 표시 됩니다.</li>
		<li>녹음 후 고통 없이 0.1 %tricaine 사용 하 여 애벌레를 죽 일.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7입니다. 분석
<ol><li>초기 부정적인 파를 구 유에서 한 파 진폭 및 긍정적인 b-웨이브 피크 부정적인-파 여 물통에서 b 파 진폭 측정 합니다.</li>
	<li>파의 여 물통을 b 파의 피크 자극 발병에서 a-와 b-웨이브 암시적 시간을 각각 측정.</li>
</ol>

<ol><li>Roper, C., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoper%2C+C+%22Handbook+of+Developmental+Neurotoxicology+%28Second+Edition%29%22">Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition)</a>. Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. , Academic Press. 143-151 (2018).</li>
<li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158(2016).</li>
<li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+expriment%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li>
<li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li>
<li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinogram+%28ERG%29+Measurements+in+Larval+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, pdb prot4973 (2008).</li>
<li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiololgy%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li>
<li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiololgy%22%5BJournal%5D)">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li>
<li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li>
<li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Matters%22%5BJournal%5D)">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003(2017).</li>
<li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+models+%26+mechanisms%22%5BJournal%5D)">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models & mechanisms. , dmm. 035220 (2018).</li>
<li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+medicine+reports%22%5BJournal%5D)">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li>
<li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li>
<li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li>
<li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li>
<li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+genetics%22%5BJournal%5D)">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li>
<li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li>
<li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li>
</ol>

저자 아무 공개가이 작품에 관련 된 있다.

에 르 그 같은 기능 해독 애벌레 zebrafish8,9,,1214를 공부 하는 데 사용 하는 도구 제품군에 점점 더 중요 한 되 고 있습니다. 작은 크기로 인해 애벌레 zebrafish 눈의, 유리 micropipettes 전극 가장 게시 프로토콜3,4,5,,89 에 기록으로 적응 되어 , 12 , ...

제 브라 (Danio rerio) 시각적인 신경 과학의 연구를 포함 하 여 널리 유전 척추 모델 되고있다. 이 종족의 증가 인기 유전자 조작, 높은 보존된 척추 영상 시스템 (신경, 해부학 적 형태와 조직, 형식과 기본 유전학), 높은 통치의 용이성 등 장점을 표시 될 수 있습니다. 그리고 축산 포유류 모델1에 비해 저렴 한 비용. 비-침략 적 electroretinogram (에) 오래 사용 되었습니다 임상 인간의 시각 기능을 평가 하 고 비전의 크고 작은 설치류 등 애벌레 zebrafish2,3 범위에서 계량을 실험실 속 , 4 , 5. 가장 일반적으로 분석된에 구성 요소는 a 파와 b 파, 빛 감지 대뇌와 바이 폴라 수에서 발생 하는 각각. 애벌레 zebrafish, 망막에 뚜렷한 레이어 3 일 후 수정 (dpf)에 의해 설립 되 고 터미널 포토 리셉터 콘의 형태학 synapses 4 dpf6,7전에 성숙. 애벌레 zebrafish의 외부 망막 기능 따라서 4 dpf는 르 그 이후이 이른 나이에서 측정 가능한 것을 의미 하기 전에 설정 됩니다. 짧은 실험 주기 모델의 높은 처리량 속성 때문에 르 그에 적용 된 애벌레 zebrafish 질환 모델의 기능 평가 위한 컬러 비전 및 망막 개발 분석, 시각적 circadian 리듬 공부 그리고8,,910,,1112마약 테스트.
그러나, 애벌레 zebrafish에 대 한 현재 접근에 채택 하기 어렵게 만들 수 있는 몇 가지 복잡 한 있다. 일반적으로 기록 전극3,,45,13, 고품질 micropipette 필요로 하로 전도성 액체로 채워진 유리 제 micropipette를 사용 하 여 게시 된 애벌레 zebrafish에 프로토콜 팁3. 특수 장비, micropipette 끌어당기는 등 및 microforge, 어떤 경우에는 그들의 제조에 대 한 필요 합니다. 이 한정 된 자원 가진 실험실에 대 한 도전이 될 수 있습니다 그리고 애벌레 zebrafish 시각적 기능의 측정을 위해 사용할 수 있는 작은 동물에 시스템에 적응 하는 경우에 추가 비용을 리드. 부드럽게 하는 경우에 날카로운 micropipette 팁 애벌레 눈의 표면을 손상 수 있습니다. 또한, 전기 생리학에 대 한 상업 micropipette 홀더 고정된 실버 와이어로 구성 됩니다. 이러한 전선 고정 증가 유지 보수 비용을 선도 하는 새로운 소유자의 구입을 요구 하는 반복 사용 후 패 된다.
여기는 원뿔 모양의 스폰지 팁 기록 전극, 애벌레 zebrafish에 측정에 대 한 설립된 작은 동물에 설정을 적응에 특히 유용 합니다을 사용 하 여 르 그 방법에 설명 합니다. 전극 일반적인 폴 리 비닐 아세테이트 (PVA) 스폰지 및 기타 특수 장비 없이 괜 찮 실버 와이어를 사용 하 여 쉽게 이루어집니다. 우리의 데이터는이 새로운 전극 민감하고 안정적 4와 7 dpf 사이 애벌레 zebrafish에 망막 신경 회로의 기능 개발을 설명 하는 보여준다. 이 경제적이 고 실용적인 스폰지 팁 전극 연구원 새로운 르 그 시스템을 구축 또는 기존 작은 동물 시스템, zebrafish 연구에 대 한 수정에 유용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>0.22 & 마이크로; m 필터</td><td>Millex GP</td><td>SLGP033RS</td><td>필터 10&times; 살균 용 금붕어 링거의 버퍼</td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>Terumo</td><td>DVR-5175</td><td>30G &times; &frac12; " 바늘을 사용하여 전극 스폰지 팁에 식염수 방울을 추가하여 ERG 신호의 건조 및 노이즈 증가를 방지합니다.</td></tr><tr><td>30 G &시간; &frac12; " 바늘</td><td>Terumo</td><td>NN*3013R</td><td>식염수 toteh sopnge 팁 전극을 추가합니다.</td></tr><tr><td>바이오앰프</td><td>ADInstruments</td><td>ML135ERG</td><td>신호 증폭용.</td></tr><tr><td>표백제 솔루션&nbsp;</td><td>King White</td><td>9333441000973</td><td>은색 전극 염소화의 대체 방법. 활성 성분 : 42g / L 차아 염소산 나트륨.</td></tr><tr><td>순환 수조</td><td>Lauda-Ko?nigshoffen</td><td>MGW Lauda</td><td>온수 플랫폼을 만드는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>전극 리드</td><td>Grass Telefactor</td><td>F-E2-30</td><td>은선 전극을 증폭기에 연결하기 위한 백금 케이블.</td></tr><tr><td>패러데이 케이지</td><td>측광 솔루션 국제&nbsp;</td><td></td><td>신호 대 잡음비를 개선하기 위해 어두운 적응을 유지하고 Ganzfeld 설정을 포함합니다.</td></tr><tr><td>Ganzfeld Bowl</td><td>광도 측정 솔루션 International&nbsp;</td><td></td><td>맞춤형으로 설계된 광 자극기: 직경 36mm, 조리개 크기 13cm.</td></tr><tr><td>Luxeon LED</td><td>필립스 라이트 Co.</td><td></td><td>광 자극용: 20개의 5W 및 1개의 1W LED.</td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 50-2625</td><td>실험 중 기록 전극을 잡습니다.</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel</td>, <td>Microsoft</td><td>버전 2010</td>, <td>데이터 분석을 위한 스프레드시트 소프트웨어.</td></tr><tr><td>모이스처라이징 아이 젤</td><td>GenTeal Gel</td><td>9319099315560</td><td>탈수를 방지하기 위해 녹음 중 제브라피쉬 유충을 덮는 데 사용됩니다. 활성 성분 : 0.3 % Hypromellose 및 0.22 % carbomer 980.</td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫</td><td>Copan</td><td>200C</td><td>유충 제브라피쉬를 조심스럽게 옮기는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>파워랩 데이터 수집 시스템</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td>는 <td>LED를 제어하여 자극을 생성합니다.</td></tr><tr><td>PVA 스폰지</td><td>MeiCheLe</td><td>R-1675</td><td>유충 제브라 피쉬의 배치 및 원뿔 모양의 전극 ti</td></tr><tr><td>식염수 용액</td><td>Aaxis Pacific</td><td>13317002</td><td>은선 전극 전기 도금을 위해.</td></tr><tr><td>Scope Software</td><td>ADInstruments</td><td>버전 3.7.6</td><td>Powerlab 시스템을 통해 자극을 동시에 트리거하고 데이터</td></tr><tr><td>Silver (가는 원형 와이어)</td><td>A& E 금속</td><td>0.3mm</td><td>ERG 전극을 기록하고 참조하기 위해 사용됩니다.</td></tr><tr><td>실체 현미경&nbsp;</td><td>라이카</td><td>M80</td><td>원뿔 모양의 스폰지 정점(접안렌즈에 눈금 막대 포함)의 모양을 만들고 측정하는 데 사용됩니다. 전극 배치를 위해 패러데이 케이지에 배치됩니다.</td></tr><tr><td>트리카인&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>E10521-50G</td><td>제브라피쉬 유충 마취용.</td></tr><tr><td>수온식 플랫폼</td><td>맞춤 제작</td><td></td>: <td>ERG 기록 중 스폰지 플랫폼과 유충 몸체의 온도를 유지하기 위해</td></tr></tbody></table>

스폰지 팁 전극 a 소설 원추형을 사용 하 여 애벌레 zebrafish에 기록 하는 electroretinogram

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

제 브라 (Danio rerio) 발달 연구에서 척추 모형으로 일반적으로 사용 되 고 특히 시각적인 신경 과학에 대 한 적합 합니다. 비주얼 퍼포먼스의 기능 측정, electroretinography (에) 더 높은 척 추가 있는 종에서 잘 설립 되었습니다 이상적인 비-침략 적 방법입니다. 이 접근은 점점 zebrafish, 초기 단계에서 발달 애벌레 포함에 시각적 기능을 검토를 위해 사용 되 고 있습니다. 그러나, 애벌레 zebrafish에 날짜에 대 한 가장 일반적으로 사용 되 기록 전극 유리 제 micropipette 전극 제조, 한정 된 자원을 가진 실험실에 대 한 과제를 제시에 대 한 특수 장비를 필요로 하는. 여기, 선물이 애벌레 zebrafish에 프로토콜 사용 하 여 원뿔 모양의 스폰지 팁 전극. 새로운 전극 제조 및 핸들, 더 경제적이 고 유리 제 micropipette 보다 애벌레 눈 손상 가능성이 쉽습니다. 이전에 게시에 방법 처럼 현재 프로토콜 각각 포토 리셉터와 양극 세포 응답, a-와 b-파도를 통해 외부 망막 기능을 평가할 수 있습니다. 프로토콜은 zebrafish 애벌레, 지원 유틸리티, 감도, 및 새로운 전극의 신뢰성의 초기 개발을 통해 시각적 기능의 상세를 설명 명확 하 게 수 있습니다. 단순화 된 전극 새로운 르 그 시스템 구축 또는 기존 작은 동물에 장치는 제 브라를 사용 하 여 시각적인 신경 과학 연구자를 돕고 zebrafish 측정에 대 한 수정 모델 유기 체 때 특히 유용 하다.

이 섹션에 측정 한 매일 4에서 7 dpf에 대 한 대표적인 결과를 제공 합니다. 4 dpf에 응답 강력한 a-와 b-파 구성 요소, 각각 대뇌와 양극 세포에서 발생 하는 표시. 각 나이에 테스트, b 파의 진폭 증가 빛의 강도 (그림 2; 그림 3). 특히, 나 이와 함께 증가 하는 주차 섬광에 애벌레 zebrafish 망막의 감도. A-와 b-웨이브 명확한 신호 했다 더 오래 된 애벌레 (그림 2)에 대 한 이러한 농도에 탐지 하는 반면-1.61 cd.s/m2 4 dpf, 로그 보다 낮은 농도에서 인식할 수 없었다. B 파 응답 4와 5의 dpf 사이 크게 성장 (P &lt; 0.0001; 그림 2A -B; <st...

여기, 선물이 애벌레 zebrafish에서 빛 갖는 electroretinogram 응답의 측정을 간소화 하는 프로토콜. 소설 원뿔 모양의 스폰지 팁 전극에 electroretinogram를 사용 하 여 신뢰할 수 있는 결과 낮은 비용으로 달성 하기 쉽게 하는 애벌레 zebrafish에 시각적 개발의 연구를 만들기 위해 도울 수 있다.

스폰지 팁 전극 A 소설 원추형을 사용 하 여 애벌레 Zebrafish에 기록 하는 Electroretinogram

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

이 프로토콜은 시각 발달 및 유전 질환 모델의 중요한 기능 적 판독을 제공하는 애벌레 얼룩말피에서 전기 전세 사진 또는 ERGs의 측정을 단순화하는 데 도움이됩니다. 이 프로토콜에 사용되는 전극을 기록하는 부드러운 스폰지 팁은 경제적이고 쉽게 사용할 수있는 재료를 사용하여 제조하기 쉽고 애벌레 눈에 잠재적 인 손상을 방지할 수 있습니다. 부드러운 스폰지 팁 전극은 동일한 눈의 반복된 ERG 측정을 용이하게 할 수 있습니다.이 절차에 새로운 개인은 절차 전반에 걸쳐 사용되는 희미한 빨간색 조명 아래에서 작업하기가 어려울 수 있습니다. 그러나 어두운 적응을 유지하는 것이 중요합니다. 원뿔 모양의 스폰지 기록 전극을 준비하기 위해 백금 전극 납 연장에서 끝을 자르고 메스를 사용하여 확장의 새로운 끝에서 외부 폴리테트라플루오로틸렌 절연 코팅의 10 밀리미터를 제거합니다.직경 0.3mm의 실버 와이어의 40밀리미터 조각을 자르고 노출된 내부 와이어로 실버 와이어를 결합하여 전극 리드에 와이어를 단단히 부착합니다. 약 15mm 길이의 실버 와이어를 노출시키는 절연 테이프로 조인트를 감싸는 다. 다른 와이어를 배터리의 음수 단말에 연결하고 와이어의 다른 끝을 식염수에 담급다.노출된 실버 와이어를 일반 식염수에 담그고 다른 쪽 끝을 9볼트 직류 소스의 양단에 연결합니다. 60초 후, 흡수성 조직에 와이어를 놓아 건조시다. 그 동안, 폴리 비닐 아세테이트 스폰지의 20 ~ 20 밀리미터 사각형을 원뿔 모양으로 자르고 한 번 링거의 버퍼에 스폰지를 포화.접안렌즈에 스케일 바가 있는 가벼운 현미경아래에서 메스 블레이드를 사용하여 콘의 정점을 약 40 마이크로미터 직경으로 형성합니다. 원뿔 모양의 스폰지를 흡수성 티슈 페이퍼에 공기 건조시고 단단할 때까지 닦습니다. 실버 와이어를 말린 고체 원뿔 모양의 폴리 비닐 아세테이트 스폰지에 삽입하기 전에, 마스크 테이프를 사용하여 과도한 노출된 금속을 절연하여 광전지 유물을 감소시킵니다.실험 당일, 스폰지 팁 전극을 링거의 버퍼에 15분 간 담그어 스폰지를 완전히 포화시합니다. 녹음 하기 최소 8 시간 전에 뚜껑없이 하나의 15 밀리리터 튜브에 20 마리 이상의 얼룩말 애벌레를 놓고 어두운 인큐베이터에 알루미늄 호일에 싸여 있습니다. 인큐베이션이 끝나면, 광방출 다이오드의 희미한 붉은 조명 아래, 어두운 색으로 조정된 제브라피쉬를 페트리 접시에 붓습니다.스폰지 플랫폼을 준비하려면, 스폰지가

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

우리는 흡입 전극을 사용하여 단일 마우스 콘에서 플래시 응답을 기록하는 방법을 보여줍니다.

마우스 콘 Photoreceptors에서 단일 셀 석션 레코딩

우리는 그대로 마우스 망막에서 막대와 원뿔 photoresponses를위한 transretinal electroretinogram (에르그) 레코딩 비교적 간단한 방법을 설명합니다. 이 방법은 자신의 가벼운 반응을 분리하고 분리된 평면 마운트 망막에 걸쳐 배치 필드 전극을 사용하여 그들을 기록하는 photoreceptors에서 시냅스 전송 블록의 활용합니다.

마우스 망막에서 Transretinal 에르그 레코딩 :로드 및 원뿔 Photoresponses

형광 염료의 역행 전송 해부학 적 투사에 따라 신경 세포의 하위 인구 레이블. 레이블 축삭은 시각적 대상이 될 수...

역행 형광 라벨이 확인 된 신경 세포의 표적 세포 외 단일 단위 기록을 허용<em&gt; 생체 내</em

이 프로토콜은 성체 제브라피쉬에서 전기생리학을 수행하는 절차를 설명합니다. 이 방법은 생체 내에서 신경 활동을 측정하는 데 사용할 수 있습니다.

성체 제브라피시 전기생리학: 생체 내 뉴런의 세포 외 전기 활동을 측정하는 방법

이 비디오는 마비된 제브라피시 유충에서 구심성 뉴런의 전기 신호를 측선 신경절 근처에 마이크로피펫을 배치하고 신호 캡처를 위해 느슨한 밀봉을 형성하여 기록하는 방법을 보여줍니다. 세포외 용액은 이 과정에서 신경 세포의 생존력을 유지합니다.

고정된 제브라피시 유충에서 구심성 뉴런의 전기 신호 모니터링

애벌레의 zebrafish forebrain에서 세포 필드 잠재력을 기록하는 간단한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 강력한를...

애벌레의 Zebrafish의 Forebrain Electrophysiological 기록

이 논문은 성인 제브라 피쉬는, 고정 삽관 및 녹음 및 손상 동물에서 신경 활동의 조작을 허용하는 생체 전기 생리학 실험에 사용 할 수있는 방법에 대해 설명합니다.

온전한 성인 Zebrafish의의 뇌에 전기 생리학 기록

우리는 미세 조작 및 전기 망막검사 기술을 사용하여 제브라피시 유충의 전기망막검사(ERG) 분석 방법을 제시합니다. 이것은 생체 내에서 제브라피시 유충의 시각 기능을 분석하는 간단하고 간단한 방법입니다.

Zebrafish의 애벌레에서 비주얼 응답의 전위도 분석

이 원고는 제브라 피쉬 배아 및 유충의 척수 신경 세포에서 전기 생리 녹음하는 방법을 설명합니다. 준비는 현장에서 뉴런을 유지하고 자주 최소 절개를 포함한다. 이 방법은 초기 애벌레 단계를 통해 초기 전기 흥분의 인수, 척추 신경의 다양한 전기 생리학 연구 할 수 있습니다.

Zebrafish의<em&gt; 시츄</em&gt; 척수 척추 감각과 운동 뉴런 전기 생리 녹음 준비

여기서, 우리는 DEPDC5 유전자의 일시적인 억제로 인한 간질의 제브라피시 모델의 개발 및 특성화를 위한 프로토콜을 제시한다.

간질의 제브라피시 모델의 행동 및 생리학적 분석

우리는 모델 척추 동물 머리 세포 시스템에서 모터 명령 중 발포성 뉴런 활동의 변화를 모니터링하는 프로토콜을 설명합니다.

얼룩말피에서 수영하는 동안 후방 측면 라인 발신 신경의 활동

배우세요 원추형 스폰지 팁 전극을 사용하여 애벌레 제브라피시(Danio rerio)에서 전막전위도(ERG)를 측정하는 방법을. 이 비용 효율적인 기술은 시각 발달 및 유전 질환 모델 연구에 반복 측정이 가능한 신뢰할 수 있는 기능적 판독값을 제공합니다.

스폰지 팁 전극 A 소설 원추형을 사용 하 여 애벌레 Zebrafish에 기록 하는 Electroretinogram

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