Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4<sup>+</sup> T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Anthony R. Di Carluccio; Eleonora Tresoldi; Michelle So; Stuart I. Mannering

doi:10.3791/59545

카르복시플루아세인 수치니미딜 에스테르를 이용한 증식 인간 항원 특이적 CD4+ T 세포의 정...

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Immunology and Infection

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Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4⁺ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

카르복시플루아세인 수치니미딜 에스테르를 이용한 증식 인간 항원 특이적 CD4+ T 세포의 정량화

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07:00 min

June 4, 2019

DOI: 10.3791/59545-v

Anthony R. Di Carluccio¹, Eleonora Tresoldi¹, Michelle So¹, Stuart I. Mannering^1,2

¹Immunology and Diabetes Unit,St. Vincent's Institute of Medical Research, ²Department of Medicine,University of Melbourne, St. Vincent's Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에 제시된 것은 염료 희석을 이용한 항원 단백질 또는 펩티드에 반응하여 증식CD4+ T 세포를 측정하기 위한 프로토콜이다. 이러한 분석종은 희귀 항원 특이적 T 세포에 특히 민감하며 항원 특이적 세포의 복제를 용이하게 하기 위해 변형될 수 있다.

이 프로토콜은 종종 약하고 감지하기 어려운 CD4T 세포 응답을 연구할 수 있는 플랫폼을 제공합니다. 이 기술은 항원 프리젠 테이션에 관한 사전 지식없이 CD4T 세포의 검출, 열거 및 격리를 허용합니다. 주요 장점은 타입-1 당뇨병과 같은 자기 면역 조건과 관련되었던 아주 수시로 희소한 인구인 CD4T 세포의 분석입니다.

건강한 기증자로부터 말초 혈액 샘플을 얻으면, 50 밀리리터 튜브에서 밀도 그라데이션 배지의 15 밀리리터 를 통해 35 밀리리터의 혈액을 겹쳐지기 전에 PBS에서 적어도 1 대 2 비율로 혈액을 희석시하십시오. 밀도 그라데이션 원심분리에 의해 세포를 분리하고 결과 상단 플라즈마 층의 약 20 밀리리터를 제거합니다. 그런 다음 적혈구 펠릿을 피하고 신선한 PBS에서 세포를 세 번 씻기 위해 주의를 기울이는 백혈구 층을 수집합니다.

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