Name: 비장 세포 생물학 및 이식 면역을 연구 하기 위한 혈관 화 된 이종 화제 비장 이식의 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: 배우세요 혈관화된 이종 비장 이식 마우스 모델을 통해 비장 세포 생물학 및 이식 면역을 연구하는 방법을. 동종이종 마우스를 사용하여 세포 운명과 기능을 추적하고 염증 질환에서 면역 반응 조절 메커니즘을 규명할 수 있습니다.

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저자는 노스웨스턴 대학 종합 이식 센터와 자원 및 자금 지원을 위한 의학 연구 코어 프로그램의 Feinberg 학교 감사 합니다. 구체적으로, 유 세포 분석 및 조직학 서비스는 노스웨스턴 대학교 유 세포 분석 핵심 시설과 마우스 조직학 및 표현 형 실험실에 의해 제공 되었으며, 각각은 로버트 H에 게 수 여 되는 NCI P30-CA060553에 의해 지지 되 고 있다. 루 리 종합 암 센터. 이 원고를 교정 해 주셔서 감사 합니다.

이 연구에서 모든 절차와 동물 사용은 노스웨스턴 대학 내부 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)가 승인한 프로토콜에 따라 수행 되었습니다. 본 연구에서, 8 ~ 10 주 남성 CD 72.8 및 CD 45.1 마우스 (둘 다의 BALB/c 배경, 잭슨 실험실에서)는 각각 비장 기증자 및 수혜자로 사용 되었으며, 신 제네 비장 이식 모델을 생성 하였다. 모든 동물은 노스웨스턴 대학의 동물 시설에서 무 균 환경에 보관 되었다. 안구 윤활제는 건조를 방지 하기 위해 마 취 후 모든 마우스에 적용 되었다.
1. 외과 준비, 마 취 및 진통 요법
<ol><li>외과 용 플랫폼에 멸 균 일회용 드 레이프 (45.7 x 66)를 놓습니다. 마우스를 살짝 잡고 케 타 민 (50 밀리 그램)과 자일 라 진 (10mg/kg) 복 강 내을 마 취 하 고 진통에 대 한 0.05 mg/kg 부 프레 노르 핀을 주사 합니다.</li>
	<li>발가락 핀치에의 한 마 취의 깊이를 확인 하 고, 면도기로 전체 복 부 영역에서 머리를 면도 하 고 6-10 배 확대에서 작동 현미경 아래 멸 균 수술 플랫폼에 마우스를 놓습니다.</li>
</ol>2. 기증자 비장 수확
<ol><li>알코올 준비 패드로 복 부를 소독 하 고, 수술 테이프로 사지를 고정 하 고,가 위를 사용 하 여 장티푸스 프로세스에 3-4 cm 중간 수직 피부 절 개를 만듭니다.</li>
	<li>종이 클립으로 만든 멸 균 견인 기를 사용 하 여 복 벽을 후퇴 시킵니다. 비장을 노출 하는 살 균 면봉으로 복 부 (외과 의사의 왼쪽) 측의 오른쪽 측면에 내장을 이동 합니다. 비장에 부착 된 짧은 위 맥을 멸 균 저온 소 작으로 소 작을 (도 1a). 비장에 37 ° c 생리 식 염 수를 적신 살 균 거 즈 조각을 넣고 촉촉한 상태로 유지 합니다 (그림 1b).</li>
	<li>문맥을 분리 하 여 췌 장 조직 (도 1c) 으로부터 정 맥을 리 팅 하 여 문맥 분기 (우수한 pancreaticoduodenal 정 맥 및 우측 위 정 맥); 비장 정 맥에서 말단을 문맥 주위에 봉합 사를 놓습니다 (그림 1d).</li>
	<li>비장 동맥 (그림 1e)와 대동맥 및 체 강 트렁크를 노출 하는 오른쪽에 비장의 플립. 간 동맥 및 위 동맥을 결 찰 하 여 대동맥-체 강-비장 동맥을 분해 하 고 동원 하십시오; 대동맥 근 위부 주위에 봉합 사를 부 강 동맥 (그림 1f-G)에 놓습니다.</li>
	<li>100 국제 단위 (IU) 헤 파 린을 열 등 한 대 정 맥 (IVC)에 주사 하 여 몸 전체를 heparinize 후 헤 파 린이 효과를 확인 하기 위해 3 분간 기다리십시오. 대동맥을 체 강 동맥으로 하 고, 문맥을 변환 하 고, 복 부 대동맥에서 혈장 콜드 (4°c) 생리 식 염 수 (10ml/20s)를 사용 하 여 몸 전체를 전신에 사용 합니다 (그림 1h).</li>
	<li>비장 정 맥의 세그먼트와 췌 장 조직의 작은 부분과 함께 관련 된 대동맥-체 강-비장 세그먼트 및 문맥 정 맥과 함께 구획 이식 편 블록을 수집 합니다. 이식 전에 4°c의 염 분 5 mL에 접목을 보존 한다. 경 추 탈 구에 의해 마우스를 안락사.</li>
</ol>3. 수령인 비장 절제술 및 비장 접목 이식
<ol><li>수술 플랫폼에 발열 패드를 놓고 온도를 37 ° c로 조절 합니다. 멸 균 수술 플랫폼을 만들 수 있는가 열 패드의 상단에 살 무는 드 레이프 (45.7 x 66)를 놓습니다. 수술 준비 및 마 취를 위해 2.1 및 2.2 단계를 반복 하십시오. 2.1 단계 및 2.2 단계에서 설명한 바와 같이 3-4 cm 중간 선 절 개를 하 고 복 벽을 후퇴 시킵니다.</li>
	<li>조심 스럽게 수용자의 비장을 노출 하는 살 균 면봉으로 마우스의 오른쪽에 장을 이동 합니다. 비장 정 맥과 동맥을 ligate 하 고 비장의 제거.</li>
	<li>조심 스럽게 마우스의 왼쪽 측면에 내장을 이동 하 고 젖은 거 즈 (살 균 37 ° c 염 수로 적신)와 함께 내장을 커버. 인프라 대동맥 및 IVC의 요 추 분기를 분해 하 고 리 게이트; 두 개의 4mm 미세 혈관 클램프를 사용 하 여 인프라 대동맥과 IVC를 교차 클램프 합니다.</li>
	<li>11-0 나일론 봉합 사는 인프라 대동맥 (전체 두께)을 통과 하 고, 마이크로가 위를 사용 하 여 단일 절단으로 타원형 대동맥 절제술을 만듭니다 (길이는 기증자의 지름과 일치 해야 합니다. 그림 2a). IVC를 사용 하 여 30g 바늘을 관통 하 여 타원형의 venotomy를 만들고 마이크로가 위를 사용 하 여 정 맥 일치 길이를 기증자 포털로 확장 합니다 (그림 2a).</li>
	<li>혈장 염 (10 단위/m l)의 500 μ l를 사용 하 여 내 알루 민산 혈액 또는 혈전 (대동맥 및 IVC)을 지웁니다.</li>
	<li>비장 이식 부를 받는 쥐의 오른쪽 측면에 배치; 기증자의 대동맥 커 프와 기증자의 문맥을 주의 깊게 확인 하십시오. 혈관이 꼬여 있지 않은지 확인 한 후, 비장을 차가운 (4°c) 염 수로 적신 거 즈로 덮으 십시오.</li>
	<li>기증자의 대동맥 커 프를 수령인의 대동맥 절제술의 근 위 및 말단 꼭대기에 연결 하십시오 (아래와 같은 2 개의 스테이 봉합 사 (11-0 나일론 봉합 사). 기증자의 대동맥 커 프와 수용자의 아오 도교 절제술 (그림 2d) 사이에 연속 11-0 나일론 봉합 2-3 물기를 사용 하 여 문 합을 합니다. 비장 이식 편을 받는 사람의 왼쪽으로 돌립니다. 기증자의 대동맥 커 프와 받는 사람의 대동맥 절제술 (그림 2e) 사이의 문 합을 확인 하십시오.</li>
	<li>IVC의 내부에 4 ~ 5 물린 연속 봉합 사를 사용 하 여 기증자의 포털 정 맥을 수령인의 IVC의 후부 벽에 연결 하는 문 합을 수행 하 고 IVC 외부의 봉합 사를 닫으십시오 (그림 2fG).</li>
	<li>용기 클램프를 해제 하 고 비장 색상을 복구 할 때까지 출혈을 탬 핑 하기 위해 멸 균 면봉을 사용 하십시오 (그림 2h).</li>
	<li>연속 패턴의 5-0 합성 흡수 성 비 릴 봉합으로 복 부를 닫으십시오. 중단 된 패턴의 5-0 나일론 봉합 사로 피부 층을 닫으십시오. 참고: 4.7-4.8 단계에서 기증자의 문맥 및 수령인의 IVC 사이에 문 합을 먼저 하십시오 (단계 4.8); 그런 다음 대동맥의 내부에 2 ~ 3 개의 연속 봉합을 사용 하 고 대동맥의 외부에 봉합 사를 닫아 기증자의 대동맥 커 프와 수령인의 대동맥 절제술의 후방 벽 사이에 문 합을 만드십시오.</li>
</ol>4. 동물 회복
<ol><li>복 부를 닫은 후 4 개의 별도 위치 (0.25 mL/위치)를 통해 1 mL의 따뜻한 식 염 액을 피하에 주입 하십시오.</li>
	<li>처음 몇 시간 동안 온도 조절 인큐베이터 (30°c)에 마우스를 보관 하 고, 충분 한 의식이 회복 될 때까지 마우스를 모니터 한 다음, 일반 식품과 물을 사용 하 여 새 깨끗 한 케이지에 마우스를 옮겨가 열 패드 (30°c )이 케이지 아래에 있습니다. 마우스 수술 후 별도의 케이지에 보관 하십시오.</li>
</ol>5. 수술 후 통증 관리
<ol><li>진통 처방을 유지 하기 위해 0.05 mg/kg 부 프레 노르 핀 피하 24 h 및 48 h 후 수술을 주입 하십시오.</li>
</ol>

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강력한 증거가 나왔다 비장 유래 단 핵 구는 동맥 경화 증 등의 멸 균 염증 과정에서 중요 한 역할을 한다19, 급성 허 혈 성 뇌 (20 ) 또는 폐 부상18뿐만 아니라 심근 I/R 부상 및 리 모델링21,22,23. 이 보고서는 심혈 관 질환이 중요 한 (특히 그것은 세계적으로 번호를 하나의 살인자입니다 주어진) 많은 만성 질환에서 비장의 아래 인식 역할을 강조 표시 합니다. 비장 이식의 마우스 모델 다양 한 질병에 비장 파생 된 면역 세포 뿐만 아니라 그들은 비장에 프라이 밍 하는 방법의 역할을 발견할 수 있는 좋은 기회를 제공 합니다. 예를 들어, 비장 이식의 마우스 모델을 사용 하 여, 소용돌이는 허 혈 성 심근 손상에 응 하 ...

비장 본문에 가장 큰 보조 림프 장기 이며 면역 및 조 혈 시스템에 중요 하다. 그 기능은 주로 두 가지 형태학 적으로 별개의 구획, 적색 펄프 및 백색 펄프1에 의해 수행 된다. 적색 펄프는 망상 섬유, 망상 세포 및 관련 대 식 세포로 구성 된 정 맥 공동 및 비장 코드의 입체 메시 작업입니다. 이 독특한 구조는 붉은 펄프가 외국 물질과 오래 되거나 손상 된 적혈구를 제거 하는 효과적인 혈액 필터 역할을 할 수 있습니다. 백색 펄프는 모 낭을 포함 하 고, 한계 구역 및 periarteriolar 림프의 보호관 (PAL) 및 항 원 포착 및 처리, 림프 구 유도, 변환, 증식 및 성숙에 대 한 중요 한 사이트입니다2. 그럼에도 불구 하 고 비장은 림프절과 같은 다른 림프 기관이 기능을 수행 할 수 있으며 비장의 손실이 일반적으로 사망으로 이어지는 것이 아니기 때문에 일반적으로 분배 가능한 기관으로 간주 되었습니다. 비장 절제술 따라서 널리 비장 부상 또는 양성 혈액 질환 환자에 대 한 치료 방법으로 수행 된3. 그러나, 비장 절제술을 가진 환자는 많은 장기 합병증을 직면 합니다. 세균 감염은 비장 절제술의 최고 인식 합병증 이다4,5. 최근, 압도적인 후 비장 절제술 패 혈 증은 높은 사망률과 관련 된 비장 절제술의 집중적 인 합병증으로 인식6. 더욱이, 최근의 역학 연구는 비장 절제술이 심혈 관 질환의 발생과 관련 될 수 있음을 나타내며, 비장의 추가 생리 기능을 탐구 하는 것을 제안7,8.
비장 자동 이식 및 비장 allotransplantation 모두 클리닉에서 활용 되었습니다. 현재, 비장에 의해 자동 이식 큰 전조에 만든 파우치에 비장 조직의 섹션을 이식 하 여 외상 비장 절제술 후 비장 기능을 보존 하기 위한 유일한 가능성으로 간주 됩니다9,10. 그러나이 수술의 효능은 수술 후 합병증으로 인해 비장 조직의 무 균 괴 사와 수술 후 유착으로 인 한 작은 창 자 폐색이 발생할 수 있습니다 (11). 비장 allotransplantation 다중 내장 이식12에 관여 합니다. 다중 내장 이식 으로부터의 임상 증거는 비장 allotransplantation 이식 편대 숙주 질환 (GVHD)을 유발 하지 않고 작은 창 자 이식 거부에서 보호 역할을 할 수 있음을 시사한다. 그러나 다중 내장 이식의 구성 요소로 서 비장 allotransplantation의 유익한 효과에 관한 문학은 여전히 제한적 이며 근본적인 기전이 정의 될 수 있다. 2006에서, Yair Reisner et은 마우스에 T 세포가 없는 배아 비장 조직을 이식 하 여 혈우병을 치료할 수 있다고 보고 하였으며, 유전자 질환 인 GVHD (13)를 유발 하지 않고, 비장 이식이 치료 약속을 보유 하 고 있음을 지지 한다 특정 질병. 따라서, 비장 이식의 치료 가능성에 대 한 추가 조사에 대 한 필요성이 있다.
비장 이식의 동물 모델은 비장 이식의 잠재적 인 치료 효과를 테스트 할 뿐만 아니라 질병 진행에서 비장 유래 면역 세포의 비 평가 기능을 탐구 하는 것이 중요 합니다. 실험적인 전체 비장 이식 모델은 코헨14에 의해 검토로 1900 년대 초 이후 문서화 되었습니다. 1969, coburn 리처드 j.와이 외. 쥐에 비장 이식의 기술15,16. 더 최근, 소용돌이 스키 FK 외. 비장 이식17의 마우스 모델을 설명 했다. 쥐 모델에 비해, 비장 이식의 마우스 모델은 여러 가지 고유 한 장점으로 인해 더 매력적 이다. 예를 들어, 마우스 모델을 활용 하 여 쥐 모델에서 사용할 수 없는 광대 한 다양 한 시 약 들에 접근할 수도 있습니다. 또한, 콘 제 닉 마우스 (예를 들어, CD를 사용 하는 마우스, 예컨대)를 이용 하 여 비장이 식은, 비장 (18)의 운명, 장 수 및 기능을 추적 하는 것을 가능 하 게 한다. 소용돌이 스키 FK 외에 의해 작업을 기반으로17, 우리는 또한 쥐에 비장 이식의이 간단 하 고 향상 된 프로토콜을 설립. 아래에 설명 된 프로토콜은 신뢰성과 타당성을 표준화 된 방식으로 결합 하 고 비장 생물학 및 이식 면역을 연구 하는 도구로 활용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>케타민</td><td>Wyeth</td><td>206205-01</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>139-236</td><td></td></tr><tr><td>헤파린 용액</td><td>Abraxis 제약 제품</td><td>504031</td><td></td></tr><tr><td>주입 등급 일반 식염수</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>70 % 에탄올</td><td>Pharmco 제품 Inc.</td><td></td><td></td>111000140</tr><tr><td>ThermoCare 소동물 ICU 시스템</td><td>Thermocare, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adson 집게</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-5230</td><td></td></tr><tr><td>Derf 바늘 홀더</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-7822</td><td></td></tr><tr><td>극세 마이크로 해부 가위</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-5881</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 클립</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>7-0 실크</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 103</td><td></td></tr><tr><td>11-0 나일론 4mm (3/8) 바늘</td><td>Sharpoint DR4</td><td>AK-2119</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD45.2 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>553772</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD45.1 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>553776</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD11b 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>557657</td><td></td></tr><tr><td>Ms B220 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>553089</td><td></td></tr><tr><td>Ms Ly6C 항체</td><td>eBioscience</td><td>48-5932-80</td><td></td></tr><tr><td>Ms Ly6G 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>561236</td><td></td></tr><tr><td>Ms F4/80 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>565614</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD11c 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>558079</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD3 항체</td><td>eBioscience</td><td>48-0032-82</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD4 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>552051</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD8 항체</td><td>BD Bioscience</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD&TRADE; 수정 가능한 바이올렛 데드 셀 스테인 키트</td><td>Thermo Fisher</td><td>L34955</td><td></td></tr></tbody></table>

비장 세포 생물학 및 이식 면역을 연구 하기 위한 혈관 화 된 이종 화제 비장 이식의 마우스 모델

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

비장은 면역 및 조 혈 시스템의 항상성에 중요 한 역할을 하는 독특한 림프 기관. 원인에 관계 없이 비장 절제술을 받은 환자는 압도적 인 사후 비장 절제술 감염을 개발 하 고 깊은 정 맥 혈전 증과 악성 종양의 증가 위험을 경험 하는 경향이 있다. 최근, 역학 연구는 비장 절제술은 심혈 관 질환의 발생과 관련 될 수 있음을 표시, 비장의 생리 적 기능이 아직 완전히 인식 되지 않은 것을 시사. 여기서, 우리는 혈관 화 된 이종 화제 비장 이식의 마우스 모델을 소개 하 고,이는 상이한 생물학적 과정에서 비장 면역 세포 서브 세트의 기능 및 행동 활동을 연구 하기 위해 활용 될 수 있을 뿐만 아니라, 또한 시험 하는 강력한 도구가 될 수 있다 특정 질병에서 비장 이식의 치료 잠재력. 이 모형의 주요 외과 단계는 기증자 비장 수확, 수령인 기본 비장의 제거, 및 비장 접목 혈관 신생을 포함 합니다. 콘 제 닉 마우스 균 주를 사용 하 여 (예를 들면, 마우스 CD 및 CD를 가진 생쥐), 우리는 신 유전학 이식 후에, 기증자 유래 비장 림프 구와 골수성 세포가 이식 수술의 날 초기에 접목에서 이전 된 것을 관찰 했습니다. 여러 유형의 받는 사람 세포의 유입, 따라서 독특한 키메라를 생성.  비교적 어려운 기술에도 불구 하 고,이 절차는 > 90% 성공률으로 수행 할 수 있습니다. 이 모델은 비장 유래 면역 세포에 대 한 별개의 역할을 발견 할 수 있는 좋은 기회를 제공 하 여 정상 상태 및 비장의 이식에 따라 질병 설정 시의 운명, 장 수 및 기능을 추적 허용 다른 질병 과정.

마우스 비장 이식의 전체 절차는 경험 있는 마이크로 외과 의사에 의해 90 분 이내에 완료 할 수 있습니다. 우리 실험실은 쥐에서 100 비장 이식 이상을 수행 했습니다. 성공률은 90% 이상입니다, 모두의 생존에 의해 정의 된 마우스와 비장 후 수술 일 (포드) 1 또는 포드 7 (우리의 연구 종점)에 접목. 비장 이식의 생존은 비장 세포의 거시적 외관 및 유 세포 분석기 분석에 의해 확인 되었다. 우리의 경험을 바탕으로, 비장 이식 편이 괴 사 된 경우 비장 세포의 대부분이 죽은 것 처럼 유 세포 분석 (살아있는/죽은 세포 생존 분석)은 비장 이식의 생존 여부를 결정 하는 데 매우 민감합니다. 이 절차의 기술적 과제, 일반적인 합병증 및 문제 해결은 표 1에 요약 되어 있습니다.
이식 편 형태학을 시험 하기 위해이 식을 후, 하 ...

이 프로토콜은 비장 세포의 운명과 장 수를 연구 하는 강력한 도구 역할을 하는 기술적으로 도전적인 모델 인 바소 이종 화제 비장 이식의 마우스 모델의 수술 단계를 자세히 설명 하 고, 별개의 비장의 메커니즘 세포 집단은 질병 진행 및 이식 면역에 있다.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

비장 이식의 마우스 모델은 염증성 질환에서 국부 및 전신 면역 반응의 조절에서 비장의 역할을 발견할 수있는 좋은 기회를 제공합니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 자생 마우스를 사용하여 비장 이식이 비장의 운명, 장수 및 기능을 확인할 수 있다는 것입니다. 시술을 시작하기 전에, 수술 플랫폼에 멸균 일회용 커튼을 배치하고 마취 기증자 마우스에 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인합니다.전체 복부 부위에서 모발을 면도하고 마우스를 6~10배배율로 수술 현미경으로 멸균 수술 플랫폼에 배치합니다. 알코올 준비 패드로 노출된 피부를 살균하고 수술 용 테이프로 팔다리를 고정하십시오. 3~4센티미터 의 중간피부 절개를 통해 복부를 입력하여 증정에서 xyphoid 과정에 연결합니다.피부 혈관을 소작하고 더 나은 노출을 달성하기 위해 양쪽의 측면 복부에 절개를 확장합니다. 멸균 면봉을 사용하여 내장을 복부 의 오른쪽 측면으로 이동하여 비장을 노출시키고 멸균 저온 소생을 사용하여 비장에 부착 된 짧은 위 정맥을 소생시합니다. 비장 위에 섭씨 37도식식염수에 담근 멸균 거즈 조각을 넣고 췌장 조직에서 포털 정맥을 분리하고 분리하고 동원합니다.포털 정맥의 가지를 시연한 대로 리게이트합니다. 비장 정맥에서 포털 정맥 탈장 주위에 봉합사를 놓고 비장을 오른쪽으로 뒤집어 대동맥과 비장 동맥을 체강 트렁크에 노출시하십시오. 대동맥 의 고장 비장 동맥을 해부하고 동원하고 대동맥 근위 주위에 봉합사를 체강 동맥에 배치한다.100개의 국제 헤파린 유닛을 열등한 베나 카바 또는 IVC에 주입하여 전신을 헤파린화합니다. 3 분 후, 대동맥근에 있는 간 및 위 동맥을 체강 동맥에 리게이트합니다. 포탈 정맥을 트랜스펙트하고 전신을 4도의 밀리리터로 퍼펙트하여 복부 대오르타 탈반에서 체강 트렁크에 이르기까지 식염수를 분리합니다.비장 이식편을 수집하고 비장 정맥의 세그먼트와 췌장 조직의 작은 부분과 함께 포털 정맥에서 연관된 대동맥 체강 비장 세그먼트로 블록을 수집합니다. 그런 다음 섭씨 4도의 5 밀리리터에서 이식편을 보존하십시오. 수술 부위가 기증자를 위한 것으로 준비된 후 중간선 절개를 통해 받는 복부를 입력하고 비장 정맥과 동맥을 결집하여 받는 사람 원어민 비장을 제거한다.장 조직을 37도 에 담근 거즈로 덮고 창자를 왼쪽으로 조심스럽게 움직입니다. IVC에서 frarenal 대동맥의 요추 가지를 해부하고 리게이트하고 IVC의 관음대동맥을 교차 클램프로 두 개의 4 밀리리터 미세 혈관 클램프로 분리합니다. 11-0 나일론 봉합사를 관금 대자를 통해 놓고 혈관을 철회하여 미세 가시와 타원형 대뇌절제술을 생성할 수 있습니다.30 게이지 바늘을 사용하여 IVC를 관통하여 타원형 독절제술을 만들고 기증자 포털 정맥의 길이까지 개방을 확장합니다. 대동맥과 IVC를 500 마이크로리터의 혈관 내 혈액 또는 혈전을 제거하고 기증자 비장 이식편을 받는 복부의 오른쪽 측면에 놓습니다. 기증자 대동맥 커프와 포털 정맥을 주의 깊게 식별합니다.혈관이 뒤틀리지 않는 것을 확인한 후 비장 접목을 섭씨 4도에 담근 거즈로 덮습니다. 2개의 11-0 스테이 봉합사를 사용하여, 기증자 대동맥 근동 및 말단 정점에 기증자 대동맥 근동을 연결하고 기증자 대동맥 근근과 수령인 의 전방 벽 사이 연속 11-0 나일론 봉합사의 2-3 바이트와 해부학을 만듭니다. 비장 이식편을 수령인의 왼쪽으로 돌리고 기증자 대동맥 근동과 받는 사람 대동맥 절제술의 후방 벽 사이의 해부학을 만듭니다.기증자 포털 정맥과 받는 사람 IVC 사이의 정맥 해부학을 수행하여 각 측면에 연속 봉합사의 4 ~5 바이트를 수행합니다. 먼저 혈관 루멘 내의 후방 벽을 봉합한 다음 동일한 봉합사를 사용하여 전방 벽을 닫습니다. IVC 외부의 아래 쪽 모서리에 매듭을 놓으면서 해부학을 완료합니다.이제 혈관 클램프를 방출하고 비장 색상이 회복 될 때까지 출혈을 탐포네이드멸 면봉을 사용합니다. 5-0 합성 흡수 성 비릴 봉합사로 복부를 연속 패턴으로 닫고 5-0 나일론 봉합사로 피부 층을 중단 된 패턴으로 닫습니다. 그런 다음 따뜻한 식염수 250마이크로리터를 4개의 분리된 위치에 피하시키고 동물이 홈 케이지로 이송하기 위한 충분한 의식을 되찾을 때까지 모니터링을 통해 처음 몇 시간 동안 30도 온도 제어 인큐베이터에서 마우스를 따뜻하게 한다.헤마톡클린과 비장 동위 이식의 요신은 이식 후 1일과 7일 비장 동소 이식의 건축이 첫 수술 후 주 동안 그대로 남아 있음을 드러낸다. 이식 후 기증자 비장 세포 이동을 조사하는 유동 세포 분석은 비장 세포의 약 50%가 이식 후 하루에 파생된 기증자이며 약 46%가 유도된 것으로 나타났다. 이식 후 7일 후, 기증자 유래 백혈구는 전체 비장의 약 32%를 차지하며, 수령인 유래 세포는 약 53%까지 증가하여 1일 초이르림프절, 혈액 및 골수로 이주하여 최소한 7일 동안 고유한 치머라세포를 생성하는 독보적인 치메라세포를 생성합니다.비장 기증자로 유전자 변형 노크 마우스를 사용하면 비장 세포 파생 중재자 또는 질병 프로세스의 주요 신호 경로의 역할에 대한 조사를 허용합니다. 이 모형은 병원체, 상해, 염증, 또는 이식 거부에 응하여 비장 세포 집단의 기계장치를 탐구하기 위한 강력한 공구일 수 있었습니다.

a-mouse-model-vascularized-heterotopic-spleen-transplantation-for

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

이 비디오는 혈관화된 이종성 비장 이식의 마우스 모델을 생성하는 수술 방법을 보여줍니다. 마취된 기증자 마우스의 복강을 외과적으로 열어 비장을 제거합니다. 하대정맥(inferior vena cava)과 대동맥(infrarenal aorata)을 확인하고, 요추 가지를 결찰하고, 선천성 기증자 마우스(congenic donor mouse)의 비장을 이종(heterotopic transplant)으로 이식할 수 있는 구멍을 만듭니다. 혈관 문합을 완료하고 이식된 비장으로의 혈류를 회복시키면 절개 부위를 봉합하고 마우스의 회복을 모니터링합니다.

혈관화된 이종성 비장 이식의 마우스 모델

이 비디오는 인간 면역 체계와 간 세포를 가진 이중 인간화 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이는 인간 간 세포와 조혈 줄기 및 전구 세포를 비장 내 주사를 통해 형질전환 면역 결핍 마우스에 이식하여 간 세포의 생착과 인간 면역 세포의 발달을 유도하는 것을 포함합니다.

인간 간 세포와 면역 세포를 이용한 인간화 마우스 모델 개발

간 전이 전임상, 뮤린 모델 hemispleen 주입 기법을 통해 수행 하였다.

간 전이의 전임상 쥐과 모델

우리는 마우스의 대동맥 삽입 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜의 목표는 동맥의 동종면역 반응 및 그에 따른 장기 이식 실패에 기여하는 동맥 변화와 관련된 병리학적 과정 및 치료 전략을 연구할 수 있는 모델을 제공하는 것입니다.

동종 유도 혈관 거부 및 이식 동맥 경화 마우스 모델

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 기사에서는 반고체 기저막 매트릭스 내에서 비장 세포를 응집하고 캡슐화하기 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 기저막 매트릭스 구축물은 오가노이드 발달 연구 또는 생체 내 이식 및 조직 재생 연구를 위한 3차원 배양에 사용할 수 있습니다.

쥐 비장 조직 형성을 조사하기 위한 Basement Membrane Matrix Encapsulated Cell Aggregation

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

배우세요 혈관화된 이종 비장 이식 마우스 모델을 통해 비장 세포 생물학 및 이식 면역을 연구하는 방법을. 동종이종 마우스를 사용하여 세포 운명과 기능을 추적하고 염증 질환에서 면역 반응 조절 메커니즘을 규명할 수 있습니다.

비장 세포 생물학 및 이식 면역을 연구 하기 위한 혈관 화 된 이종 화제 비장 이식의 마우스 모델

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