Name: 누드 마우스에서 2-Deoxyguanosine 처리 된 뮤린 배아 흉골의 신장 탈모 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: 배우세요 누드 마우스 신장 캡슐에 E18.5 흉골을 이식하는 방법으로 T세포 성숙과 흉선 상피세포 기능을 연구하세요. 2'-deoxyguanosine 처리된 조직을 사용하는 이 기술은 면역학 연구에 효과적입니다.

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이 작품은 진안대학의 S.J.와 광저우 중국 과학 기술 프로그램(그랜트 번호 201704020209 ~ S.J.)에 의해 지원되었습니다. 우리는 에이미 보타 (생물학과, 요크 대학, 토론토, ON M3J 1P3, 캐나다) 원고의 교정 및 편집에 감사드립니다.

제시된 의정서는 동물보호에 관한 진안대학교 윤리위원회의 지침을 준수한다.
참고: 사용되는 재질은 재료 표에 나열되어 있습니다.
1. 배아 흉골의 분리
<ol><li>실험 전에 모든 수술 기구를 오토클레이브하고 70% 에탄올로 벤치/후드를 살균합니다.</li>
	<li>이산화탄소를 사용하여 임신한 암컷 마우스를 마취 및 안락사시한다(18.5일 후 성공적인 짝짓기). 그런 다음 70 % 에탄올로 복부 부위를 닦으하십시오. 참고 : 여기에서 우리는 Insm1+/lacZ 여성과 Insm1+/lacZ 수컷을 짝짓기했습니다. 펜토바르비탈의 인트라센트액 주사는 자궁으로부터 배아를 분리하기 전에 수행되었고 각 배아에 대해 참수가 수행되었다.</li>
	<li>가위를 사용하여 방광에서 시작하여 자궁의 각 뿔까지 달리는 복부에 "V"모양의 컷을 만듭니다.</li>
	<li>가위를 사용하여 메소메아리움과 자궁 경부 / 질을 자르고 자궁을 수집하십시오. 차가운 인산완식염수(PBS)가 들어있는 페트리 접시에 자궁을 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 한 자궁 경적에서 다른 자궁 경적으로 전방 자궁 벽을 절단하여 둘러싸인 데시두아에있는 배아를 노출하십시오. 미세 핀셋을 사용하여 둘러싸인 데시두아 조직을 다시 껍질을 벗기고 탯줄을 잘라 배아를 풀어냅니다. 모든 배아를 새로운 페트리 접시에 얼음 위에 놓고 흉선이 분리될 때까지 놓습니다.</li>
	<li>배아를 70% 알코올로 닦아 내고 새로운 페트리 접시에 놓습니다. 이 단계에서 멸균 조건이 유지되도록 하십시오.</li>
	<li>가위로 아래턱에 가깝게 절단하여 배아의 머리를 제거하고 종이 타월로 혈액을 배출합니다. 다음으로, 같은 페트리 접시에 배아를 고정시고 척추 자세로 고정한다. 참고 : 우리는 Insm1 및 lacZ 지질 형질 티핑을 위해 각 배아의 꼬리 조각을 잘라냈습니다.</li>
	<li>가위를 사용하여 겨드랑이 앞을 따라 측면 흉부 벽을 수평으로 자른 다음 횡격막을 잘라 가슴을 엽니다. 흉선은 이제 기관 앞에 있고 심장에 인접한 두 개의 흰 엽으로 볼 수 있습니다.</li>
	<li>구부러진 팁 집게를 흉선 뒤에 놓고 흉선을 부드럽게 당깁니다. 흉선에 두 개의 관절 로브가 포함되어 있는지 확인하십시오.</li>
	<li>흉선을 1x PBS로 씻고 입체 현미경으로 결합 조직과 혈관을 다듬습니다.</li>
</ol>2. 분리된 배아 흉선 배양
<ol><li>배양 배지 500 μL(RPMI1640 + 15% 태아 소 혈청 (FBS) + 100 U/mL 페니실린 및 100 μg/mL 스트렙토마이신을 24웰 플레이트의 각 우물에 추가합니다. 깨끗한 티미를 우물 당 하나의 흉선으로 우물로 옮김으로 옮김을 옮김으로 옮김을 옮김을 옮김으로 옮김을 옮김을 바치자. 도 1은 배양 배지에서 고립된 흉선(thymus)을 표시한다.</li>
	<li>각 흉선-함유 잘 1.25 mM의 최종 농도에 2'-데옥시그라노신을 첨가한다.</li>
	<li>8일 동안 고립된 흉선에 배양하고, 2일마다 배양 배지와 2'-데옥시그라노신을 모두 상쾌하게 한다.</li>
</ol>3. 신장 캡슐에 캡슐 공간을 설정
<ol><li>바늘과 잘린 주입 튜브를 준비하려면 (그림2),가위를 사용하여 튜브 부분에 두피 정맥 바늘을 45 ° 각도로 잘라.</li>
	<li>누드 마우스의 무게를 측정한 다음 펜토바르비탈(1.5%)으로 마취 주입 (75 μg / g 체중).</li>
	<li>발가락 핀치를 따르는 반사가 관찰되지 않는 경우, 마우스를 오른쪽 측면 위치에 놓습니다.</li>
	<li>0.5 % 포비딘 요오드 면봉으로 수술 부위에서 신체 외부로 피부를 두 번 소독하십시오.</li>
	<li>가위를 사용하여 왼쪽 신장 부위의 척추에 5-9mm 피부 절개를 평행하게 만듭니다 (마지막 갈비뼈와 장골 문장 사이). 다음으로, 피하 조직과 근육을 절단하여 복강을 열고 신장을 노출시다.</li>
	<li>신장이 노출된 경우 한 손에 핀셋을 사용하여 척추 측 절개 가장자리에서 근육과 지방 조직을 들어 올립니다. 다른 한편으로는, 부드럽게 신장을 짜내십시오 (또는, 신장은 양손의 손가락을 사용하여 밖으로 압착될 수 있습니다).</li>
	<li>신장 캡슐이 수술 중에 촉촉한지 확인하기 위해 식염수로 신장 표면을 적시고 (0.9 % NaCl).</li>
	<li>신장 캡슐에 닉을 만들고, 3.1단계에서 제조된 바늘 팁을 사용하여 오른쪽 하단에 신장 캡슐을 부드럽게 긁어냅니다. 닉의 크기는 신장의 1/2-2/3 너비여야합니다. 신장에 긁히지 마십시오.</li>
	<li>3.1단계에서 제조된 주입 튜브를 신장 캡슐의 닉으로 밀어 넣는다. 신장 캡슐 안쪽에 3-4mm에 도달할 때까지 신장의 긴 측을 따라 신장으로 신장 캡슐을 부드럽게 해리하십시오. 주입 튜브를 다시 그립니다; 신장 잠복 공간이 설정됩니다.</li>
</ol>4. 배아 뮤린 흉선 이식
<ol><li>식염수로 2.3단계에서 배양된 흉선을 두 번 씻어 배양 배지를 고갈시켰다.</li>
	<li>3.1단계에서 준비된 잘린 주입 튜브를 주사기 연결 인터페이스의 주사기에 연결합니다. 준비된 흉선을 주입 튜브에 천천히 흡인합니다.</li>
	<li>잘린 주입 튜브를 신장 캡슐에 부드럽게 삽입하고 우수한 극에 도달하십시오. 흉선을 신장 캡슐에 전달; 동시에 부드럽게 주사기의 플런저를 밀어하면서 천천히 튜브를 철회.</li>
	<li>알코올 램프를 사용하여 3.1 단계에서 준비된 바늘을 약간 가열합니다. 흉선 전체가 잠복 공간 안에 있는지 확인 한 후 가열 된 바늘을 사용하여 닉을 소작하십시오.</li>
	<li>소작 후 복강 내 신장을 복원하십시오. 후막과 근육을 봉합.</li>
	<li>수정 된 중단 된 수직 매트리스 봉합사를 사용하여 피부 절개를 닫습니다 (적어도 3 개의 매듭을 묶고 여분의 실을 잘라냅니다).</li>
	<li>포비딘 요오드 면봉을 사용하여 절개를 소독하십시오. 통증을 완화하기 위해, 플루니신의 피하 주사 (체중의 2 μg / g)는 수술 중 수술 후 3 일 동안 수행되었습니다.</li>
	<li>마취에서 완전히 회복 될 때까지 적외선 램프 아래에 마우스를 따뜻하게 유지하십시오.</li>
	<li>이식된 흉선과 표현형 분석을 수행하기 전에 8주 동안 수령인의 신장 캡슐에 흉선 보관5,8,9.</li>
</ol>

<ol><li>Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+and+negative+selection+of+the+T+cell+repertoire%3A+what+thymocytes+see+%28and+don%27t+see%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see).</a> Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).</li>
<li>Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+tolerance%3A+learning+self-control+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Central tolerance: learning self-control in the thymus.</a> Nature Reviews Immunology. 5, 772-782 (2005).</li>
<li>Spits, H., Touraine, J. L., Yssel, H., de Vries, J. E., Roncarolo, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+host-reactive+and+MHC-restricted+T+cells+in+a+transplanted+severe+combined+immunodeficient+%28SCID%29+patient+suggest+positive+selection+and+absence+of+clonal+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Presence of host-reactive and MHC-restricted T cells in a transplanted severe combined immunodeficient (SCID) patient suggest positive selection and absence of clonal deletion.</a> Immunological Reviews. 116, 101-116 (1990).</li>
<li>Nagamine, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+APECED+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the APECED gene.</a> Nature Genetics. 17, 393-398 (1997).</li>
<li>Yanagihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intronic+regulation+of+Aire+expression+by+Jmjd6+for+self-tolerance+induction+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Intronic regulation of Aire expression by Jmjd6 for self-tolerance induction in the thymus.</a> Nature Communications. 6 (8820), (2015).</li>
<li>Jenkinson, W., Jenkinson, E., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+2-dGuo-Treated+Thymus+Organ+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures.</a> Journal of Visualized Experiments. (18), (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22T-Cell+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">T-Cell Development: Methods and Protocols</a>. Bosselut, R., Vacchio, M. S. , Methods in Molecular Biology, vol. 1323 (2016).</li>
<li>Anderson, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projection+of+an+immunological+self+shadow+within+the+thymus+by+the+aire+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Projection of an immunological self shadow within the thymus by the aire protein.</a> Science. 298 (5597), 1395-1401 (2002).</li>
<li>Takaba, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fezf2+Orchestrates+a+Thymic+Program+of+Self-Antigen+Expression+for+Immune+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fezf2 Orchestrates a Thymic Program of Self-Antigen Expression for Immune Tolerance.</a> Cell. 163 (4), 975-987 (2015).</li>
<li>Morillon, Y. M. 2nd, Manzoor, F., Wang, B., Tisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+transplantation+of+different+aged+murine+thymic+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and transplantation of different aged murine thymic grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52709(2015).</li>
<li>Caetano, S. S., Teixeira, T., Tadokoro, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+the+mouse+thymus+using+2-photon+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of the mouse thymus using 2-photon Microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), e3504(2012).</li>
<li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+Withdrawal+I%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Blood Withdrawal I.</a> Lab Animal Research. , JoVE. Cambridge, MA. (2019).</li>
<li>Gierl, M. S., Karoulias, N., Wende, H., Strehle, M., Birchmeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zinc-finger+factor+Insm1+%28IA-1%29+is+essential+for+the+development+of+pancreatic+beta+cells+and+intestinal+endocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">The zinc-finger factor Insm1 (IA-1) is essential for the development of pancreatic beta cells and intestinal endocrine cells.</a> Genes & Development. 20 (17), 2465-2478 (2006).</li>
<li>Tao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Insm1+Impairs+Postnatal+Baseline+%CE%B2-Cell+Mass%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Insm1 Impairs Postnatal Baseline β-Cell Mass.</a> Diabetes. 67 (12), 2615-2625 (2018).</li>
</ol>

이해 상충이 선언되지 않았습니다.

배아 흉골의 신장 탈캡슐 이식은 생체 내에서 흉선 상피 세포 기능 및 T 세포의 성숙 과정을 연구하는 중요한 방법이다. 배아 흉선 장기 배양 및 이식에대한 여러 실험 연구가 있지만 6,7,우리의 프로토콜은 뮤린 배아 흉선 배양 및 신장 subcapsular에 대한 간단한 대체 절차를 제공합니다 이전 흉선 조직에 대한 이식.
우리의 프로토콜은 여러 가지 수정 6, 7,10,11을통합하여 이전 프로토콜을 개선합니다. 첫째, E14-E16 흉선 대신, 우리는 이식을 위해 E18.5에서 분리된 흉선에 이용했습니다. 장점은 이 후기 발달 단계에서 흉선이 상대...

흉선은 중앙 면역 기관이며, 흉선 내 의 흉선 세포는 양성 및 음성 선택을 거치고 성숙한 T 세포1,2가됩니다. 비정상적인 양성 또는 음성 선택은 각각3,4.면역 결핍 또는 자가 면역 병리로 인해 발생합니다. 따라서 흉선 이식은 기증자의 흉선에서 T 세포 선택 과정을 연구하는 중요한 접근법이다. 이 방법은 돌연변이때배아 치명적인 표현형을 일으키는 원인이 되는 유전자 돌연변이에 의해 중재된 흉선 상피 기능을 분석할 때 특히 중요합니다 5.
이식 된 흉선에서 수령인의 T 세포의 성숙을 연구하기 위해서는 흉선 내의 기증자의 림프구가 고갈될 필요가 있습니다. 이를 위해, 배아 14-, 15- 또는 16일(E14, E15, E16) 흉선은 일반적으로6,7을선택한다. 더 성숙한 단계에서 흉선또한 성공적으로 2'-deoxyguanosine로 취급하여 기증자의 림프구의 고갈될 수 있습니다. 그러나, 림프구를 고갈시키고 오래된 흉선 배양을 사용하기 위한 상세한 프로토콜은 이전에8,9에기술되지 않았다. 이식 프로토콜은 여러 연구에 의해 도입된 동안10,11,이러한 프로토콜의 추가 수정 및 개선이 필요하다.
우리의 프로토콜은 두 부분으로 구분된다: (i) 2'-deoxyguanosine 함유 매체에서 배양에 의해 후기 발달 단계 E18.5 흉선에서 T 림프구의 고갈. (ii) 배양된 흉선의 이식. 이 절차에서는, 우리는 신장 상해의 감소된 기회를 가진 신장 캡슐로 큰 조직 (E18.5 흉선)를 전달하는 간단한 쪽을 개발했습니다. 나중 단계 흉선에 집중하는 동안, 우리의 프로토콜은 또한 다양한 발달 단계 또는 그밖 유사한 크기의 조직에서 흉선의 이식을 위한 수정으로 직접 또는 수정으로 이용될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>0.5% 포비돈 요오드</td><td>Shanghai Likang Distinfectant Hi-Tech Co.Ltd</td><td>20171113</td><td></td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨 주입</td><td>Shandong Qilu Pharmaceuyical Co.Ltd</td><td>2C17112101</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 멸균 주사기</td><td>Solarbio</td><td>YA1090</td><td></td></tr><tr><td>2'-Deoxyguanosine</td><td>MEC</td><td>HY-17563</td><td>1M DMSO에서, 1:800 사용(최종 1.25mM)</td></tr><tr><td>24 웰 플레이트</td><td>Corning Incorporated</td><td>Costar 3524</td><td></td></tr><tr><td>4-0 나사산이 있는 외과용 봉합사 바늘</td><td>NingBo Cheng-He Microsurgical Instruments Factory</td><td>China YY0166-2002</td><td></td></tr><tr><td>60mm 세포 배양 접시</td><td>Corning Incorporated</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>70% ETOH</td><td>LIRCON 20181221</td><td></td><td></td></tr><tr><td>APC 안티 마우스 CD8a 항체</td><td>Biolegend</td><td>100711</td><td>1:100</td></tr><tr><td>굽은 끝 미세 집게, JZ 10cm</td><td>Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd.</td><td>JD1060</td> 사용 <td>전 살균</td></tr> 주입 용 <tr><td>Cefmetazole Sodium</td><td>Sichuan Hexin Pharmaceutical co, Ltd</td><td>17062111 0.5ml</td><td>0.9 % NaCl 용액, 7.5ul / g 체중</td></tr><tr><td>해부 가위, JZ 10 cm</td><td>Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd.</td>에 079 6mg<td>JC2303</td><td>소</td></tr><tr><td>태아 혈청(FBS?</td><td>GIBCO</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>미세 집게, JZ 10cm</td><td>상하이 의료 기기 그룹 Co., Ltd.</td><td>JD1050</td><td>사용 전 살균</td></tr> 방법 <tr>유<td>세포 분석</td><td>BD</td><td>FACSCanto II</td><td></td></tr><tr><td>Flunixin meglumine</td><td>MACLIN</td><td>F810147</td><td>1ml 0.9% NaCl 용액, 2ul/g 체중</td></tr><tr><td>겸자, Dumont#5</td><td>World Precision Instruments</td><td>14098</td><td>사용 전 살균</td></tr><tr><td>적외선 램프</td><td>OTLAN</td><td>MT-810</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더, JZ 14 cm</td><td>상하이 의료 기기 그룹 Co., Ltd.</td><td>J32010</td><td>사용 전 살균</td></tr><tr><td>PE 안티 마우스 CD4</td><td>Biolegend</td><td>100511</td><td>1:100</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신 혼합물</td><td>GIBCO</td><td>15140122</td><td>1:100</td></tr><tr><td>펜토바르비탈 나트륨 염</td><td>시그마</td><td>P3761</td><td>PBS의 1.5% 용액, 체중 75ug/g</td></tr><tr><td>RPMI1640 매체</td><td>GIBCO</td><td>C14-11875-093</td><td></td></tr><tr><td>두피 정맥 바늘</td><td>Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td><td>XC001</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>VANNAS</td><td>S11014-12</td><td>사용 전 살균</td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>OLYMPUS</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>멸균 15cm 면봉</td><td>Guangzhou Haozheng</td><td>20150014</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈 5 cm x 7 cm-8P</td><td>Guangzhou Haozheng</td><td>20172640868</td><td></td></tr><tr><td>멸균 PBS (1x)</td><td>GENOM</td><td>GNM20012</td><td></td></tr><tr><td>조직 겸자, JZ 12.5 cm</td><td>Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd.</td><td>J41010</td><td>사용하기 전에 살균하려면</td></tr></tbody></table>

누드 마우스에서 2'-deoxyguanosine 처리 된 뮤린 배아 흉골의 신장 탈모 이식

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

흉선은 T 세포의 발달 그리고 분화에 있는 필수적인 역할을 하는 중요한 중앙 면역 기관입니다. 흉선 이식은 생체 내에서 흉선 상피 세포 기능 및 T 세포 성숙을 조사하는 중요한 방법입니다. 여기에서 우리는 2'-deoxyguanosine (기증자의 림프구를 고갈하기 위하여) 심질 누드 마우스의 신장 캡슐로 처리된 배아 흉선을 이식하기 위하여 우리의 실험실 에서 이용된 실험적인 방법을 기술할 것입니다. 이 방법은 간단하고 효율적이며 특별한 기술이나 장치가 필요하지 않습니다. 이 간단한 방법을 통해 얻은 결과는 이식된 흉선이 수령인의 T 세포 생산을 효과적으로 지원할 수 있음을 보여주었다. 또한 프로토콜과 관련하여 몇 가지 핵심 사항을 더 자세히 설명합니다.

여기서 우리는 2개의 완전한 로브를 포함하는 고립된 E18.5 흉선(그림 1)을 보여준다. 또한, 주입 튜브에 경사를 형성하기 위해 잘린 두피 정맥바늘을 보여줍니다 (그림 2). 다음으로, 우리는 또한 수용자 마우스 내에서 8주 성장 한 후 신장캡슐 (도 3A)과 흉선에 이식 된 흉선위치의 대표적인 이미지를 보여 준다 (도3B). T 세포가 흉선으로 이식된 누드 마우스에서 생산되었는지 여부를 확인하기 위해 이식된 흉선과 말초 혈액 모두에서 CD4 및 CD8 항체 염색 및 유세포 분석 분석을 사용하여 세포 집단을 검출했습니다. 말초 혈액은 앞서 설명한 바와 같이 레트로 궤도 부비동으로부터 수집되었다12. 우리는 T 세포가 이식된 흉선과 흉선으로 이식된 누드 마우스의 말초 혈액 ...

우리는 2'-데옥시구아노신 처리 된 E18.5 흉선을 누드 마우스의 신장 캡슐로 이식하는 간단하고 효율적인 방법을 제공합니다. 이 방법은 흉선 상피 세포 기능과 T 세포 성숙 의 연구에서 보좌관해야한다.

누드 마우스에서 2'-Deoxyguanosine 처리 된 뮤린 배아 흉골의 신장 탈모 이식

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

흉부 이식은 흉부 상피 세포 기능 및 생체 내T 세포 성숙을 조사하기위한 중요한 방법입니다. 이 간단하고 효율적인 프로토콜은 신장 캡슐로 후속 이식을 위해 마우스 18.5 흉자를 분리하고 배양하는 데 사용할 수 있습니다. 18.5 흉부 이식프로토콜은 다른 발달 단계또는 유사한 크기의 다른 조직에 대해 흉부 이식을 위해 수정될 수 있다.또한,이 절차는 매우 간단합니다. 일부 케이스 스탬프에 대한 세부 정보는 이 기술을 처음 수행할 때 신중하게 검토해야 합니다. 이 절차에는 시각화로 더 잘 설명할 수 있는 자세한 조작이 포함되어 있습니다.희생 후, 배아일 18.5을 70%에탄올로 닦아내고, 방광에서 자궁의 각 뿔까지 복부에 V자형 절단을 하기 위해 자동 살균된 멸균 기구를 사용한다. 가위를 사용하여 심술관과 자궁 경부 및 질 부위를 자르고 자궁을 얼음에 차가운 PBS가 들어있는 페트리 접시로 수확하십시오. 전방 자궁 벽을 한 자궁 뿔에서 다른 자궁 뿔로 자르고 envelop 내의 배아를 데시두아로 노출시키고 미세 핀셋을 사용하여 데시티 조직을 벗겨냅니다.탯줄을 잘라 배아를 얼음 위에 새로운 페트리 접시로 옮길 수 있습니다. 첫 번째 흉기를 수확하려면 70 %의 알코올로 한 배아를 닦고 배아를 새로운 페트리 접시로 옮으려면. 참수 후, 축산 의 위치에 있는 접시에 있는 배아를 고치고, 감방 전면을 따라 수평으로 측면 가슴 벽을 잘라멸균 가위를 사용하십시오.가슴을 열어 다이어프램을 잘라. 흉선은 기관 앞에 위치하고 심장에 인접한 두 개의 흰색 엽으로 볼 수 있어야합니다. 심근 뒤에 구부러진 팁 집게를 조심스럽게 삽입하고 부드럽게 당겨 조직을 수확합니다.흉선의 무결성을 확인하여 두 개의 관절 엽이 포함되어 있는지 확인합니다. 그런 다음 스테레오 현미경을 사용하여 결합 조직과 혈관을 다듬기 전에 PBS로 흉선을 씻으하십시오. 모든 티미가 수집되면 각 깨끗한 조직을 24개의 웰 플레이트의 개별 우물로 옮기고 500마이크로리터의 배양 배지를 잘 함유한다.그리고 2'deoxygranosine를 잘 당 1.25 밀리머의 최종 농도에 추가합니다. 그런 다음 8 일 동안 세포 배양 인큐베이터에 고립 된 티미를 놓습니다. 문화의 마지막 날에, 45도 각도로 주입 튜브 부분에 두피 정맥 바늘을 잘라 누드 받는 사람의 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인하기 위해 가위를 사용합니다.수술대에 마우스를 오른쪽 측면 위치에 놓고 0.5%의

renal-subcapsular-transplantation-2-deoxyguanosine-treated-murine

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

절연 아일 레츠의 이식은 제 1 형 당뇨병에 대한 잠재적인 치료로 제안되었습니다. 여기 마우스 pancreata에서 아일 레츠를 분리하고 신장의 subcapsular 공간을 이식하는 방법을 설명합니다.

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

본 연구진은 흉선의 생체 내 영상 획득을 위한 새로운 실험실 도구 및 프로토콜을 개발하였습니다. 이러한 기술은 T 세포 발달이 일어나는 흉선 내의 "니치(niches)"를 식별하는 데 도움이 될 것입니다.

2 - 광자 현미경을 사용하여 마우스 Thymus의 Intravital 영상

세포 이식은 광수용체 손실을 특징으로 하는 망막 변성의 치료를 위한 전략을 나타낸다. 여기에서 우리는 이식 가능한 광수용체의 농축 및 성인 마우스로그들의 감하 이식을 위한 방법을 기술합니다.

성인 마우스 망막으로 MACS 정제 광수용체 전구체 세포의 감하 이식

이 보고서는 면역 결핍 마우스 수혜자의 신장 캡슐 아래에 다른 노화 기증자 마우스의 쥐 흉선을 이식하는 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 이 접근법의 목표는 생체 내에서 T 세포 발달 및 흉선 선택 이벤트를 모델링하는 것입니다.

분리 및 다른 세 쥐 흉선 이식의 이식.

이 기사는 T 세포 자손의 생성, 표현형 및 수의 동역학을 분석하여 흉선 침전 전구 세포를 특성화하는 생체 내 및 시험관 내 방법론에 대해 설명합니다.

흉선의 특성 사용하여 마우스 배아에서 전구 세포를 정착<em&gt; 생체</em&gt;와<em&gt; 체외</em&gt; 분석 실험

쥐의 전체 두께 피부 이식은 동종 설정에 거부 반응을 연구하는 잘 확립 된 모델이다. &gt; C57BL / 6 전층 피부 이식 - 여기, 우리는 BALB / C를 수행에 관련된 각 단계의 튜토리얼을 제공합니다.

쥐의 전체 두께 피부 이식

우리는 끄 덕의 부분 hepatectomy (PHx) 및 비장을 통해 세포 이식 수행을 위한 프로토콜을 설명 했습니다. SCID (끄 덕 임. CB17-Prkdcscid/J) 쥐. 이 프로토콜에서 절 개 노출 하 고 셀의 intrasplenic 이식에 대 한 또 다른 절 개에 의해 따라 간 좌 엽 resect 이루어집니다.

끄 덕 임에서 부분 Hepatectomy 후 Hepatocytes의 intrasplenic 이식 SCID 마우스

여기, 우리는 암에 대 한 신뢰할 수 있는 전 임상 모델을 만드는 생물학 관련 사이트에서 초음파 유도 신경 (NB) 및 Ewing의 육 (ES) 세포의 주입을 활용 (설립 세포 및 종양 환자에서 파생 된 셀) 프로토콜 제시 연구입니다.

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

우리는 murine 모델에 주입의 정 맥 및 양수 내 노선을 통해는 utero에 이식 (IUT)을 수행 하기 위한 프로토콜을 설명 합니다. 독특한 면역 관용 태아 환경에 셀, 바이러스 성 벡터, 및 다른 물질을 소개 하는 것이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

정 맥 및 양수 내 Utero Murine 모델에 이식

프로토콜의 목표는 레이저 스캐닝 현미경 마우스 눈의 앞쪽 챔버에 thymic 임 플 란 트에 의해 thymocytes의 경도 intravital 실시간 추적을 보여주는 것입니다. 각 막의 투명도는 이식의 vascularization 지속적으로 녹음 시 조 셀 모집 및 성숙한 T 세포 출구 수 있습니다.

레이저 스캐닝 현미경 검사 법에 의해 눈의 앞쪽 챔버에 Thymocytes의 비보에 추적 실시간

이 프로토콜은 망막 변성이 있거나 없는 마우스 수용자에서 수술 합병증 발생률이 낮은 망막하 세포 이식편을 안전하고 정확하게 전달하기 위한 동공 시야 유도 경공막 접근법을 제시합니다.

망막 변성 마우스 모델에서 망막하 이식편의 Transpupillary-Guided Trans-Scleral Transplantation

배우세요 누드 마우스 신장 캡슐에 E18.5 흉골을 이식하는 방법으로 T세포 성숙과 흉선 상피세포 기능을 연구하세요. 2'-deoxyguanosine 처리된 조직을 사용하는 이 기술은 면역학 연구에 효과적입니다.

누드 마우스에서 2'-Deoxyguanosine 처리 된 뮤린 배아 흉골의 신장 탈모 이식

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