Name: 혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: 학습하세요 쥐 장간동맥의 와이어 근측정법을 이용한 혈관 장력 평가 방법입니다. 혈관 주위 지방조직이 혈관 반응성을 조절하는 메커니즘을 탐구하여 고혈압 및 심혈관 질환 연구에 활용할 수 있습니다.

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내 피 세포 외에 PVAT에서 유래한 신호는 평활 근 톤 반응성의 조절에 중요 한 역할을 한다 (30). 건강 한 pvat는 비만 및 대사 증후군31,32와 같은 병리학 적 상태에서 손실 되는 동맥에 대 한 항 수축 효과를 발휘 하는 NO 및 항 염증 adiponectin을 방출 합니다. 질병 상태에서 pvat는 내 피 세포 기능 장애 및 기타 심혈 관 이상33,34의 발달에 기여 합니다. 비정상적인이 노스의 표현과 기능은 비만 동물35,36에서 동맥의 pvat에서 보고 되었습니다. 혈관 내 피 및 pvat 장애는 심혈 관 및 대사 이상 (23...

팽창과 동맥의 수축은 각각의 혈관 평활 근 세포의 이완 및 수축에 의해 달성 됩니다. 작은 동맥의 혈관 반응성의 변화는 혈액에 존재 하는 자율 신경 및 호르몬 (예: 카 테 콜 아민, 안 지 오 텐 신 II, 세로토닌, 바소)에 의해 동맥 혈압의 항상성 규칙에 기여 합니다. 지역 수준에서 평활 근 세포의 혈관 반응은 막의 내 피 세포와 동맥을 둘러싼 지방 조직의 신호에 의해 변조 됩니다 (그림 1).
내 피는 수 동적 장벽 뿐만 아니라 혈액과 기저 혈관 평활 근 세포 사이의 신호를 교환 하는 표면 역할도 한다. 다양 한 혈관 활성 물질을 방출 함으로써, 내 피는 혈관 톤 응답의 국부 제어에 중요 한 역할을 한다1. 예를 들어, 아 세 틸 콜린에 대 한 반응에서, 내 피 질 산화 질소 신 타제 (이 노스)는 산화 질소 (NO)를 생성 하는 내 피의 활성을 유발 하며,이는 용해성 guanylyl 사이 클론 (sGC) 을 활성화 시 킴으로써 기저 혈관 평활 근의 이완을 유도 한다 2. 다른 혈관 활성 물질에는 cyclooxygenases의 생성물 (예를 들어, 프로 스테이 시 클로 및 트 라 보네 아) 및 시 토 크롬 P450 모노 자 나아 제 (예: 12 hydroxyeicosatetraenoic 산, 12 hete) 및 epoxyeicosatrienoic 산, EETs) 및 혈관 활성 펩타이드 (예컨대, 엔도 텔 린 1 및 안 지 오 텐 신 II) 및 내 피 유래 하이퍼 편광 인자 (EDHF)3. 내 피 유래 혈관 확장 제와 혈관 수축 기 사이의 섬세 한 균형이 국부 혈관 운동 톤4,5를 유지 한다.
내 피 세포 기능 장애는 혈관 노화의 특징7인 내 피의 의존성의 혈관 확장6에서의 손상에 의해 특성화 된다. 나이가 들 수록 혈관 확장을 촉진 하는 내 피의 능력은 점진적으로 감소 하 게 되 고,이로 인해 혈 중 내 피 및 sGC에서의 비정상적인 발현 및 기능 뿐만 아니라 생체 이용률을 크게 감소 시 키 게 된다8 , 9 , 10. 감소 된 생체 이용률은 내 피 의존성 혈관 수축기의 생산을 증강 시킵니다. 나이 든 동맥에서, 내 피 세포 기능 장애는 벽 두께의 현저한 증가, 내측 핵의 수에 의해 반사 됨에 따라 배지에서 증식을 일으키고,이는 인간에서 관찰 되는 고혈압과 동맥 경화 증에서 동맥 농축을 연상 시키는 환자13,14. 또한, 비만, 당뇨병 또는 고혈압과 같은 병 리 생리학적 조건은 내 피 세포 기능 장애의 개발을 촉진 하는15,16.
혈관 주위 지방 조직 (PVAT)은 관 구조와 기능을 조절 하기 위해수많은 adipokines을 방출 합니다. Pvat의 항 수축 효과는 adiponectin, 과산화 수소 및 황화 수소18,20과 같은 이완 요인에 의해 매개 됩니다. 그러나, 위치 및 병 리 생리학적 조건에 따라, PVAT는 또한 다양 한 동맥 (21)에서 수축 반응을 향상 시킬 수 있다. Pvat가 생산 하는 수축 물질에는 안 지 오 텐 신 II, 렙 틴, 레 시 틴이 있으며 ROS22,23이 포함 되어 있습니다.  고립 된 혈관에 대 한 연구의 대부분에서, PVAT는 혈관 구조에 대 한 간단한 구조적 지원으로 간주 하 고 따라서 혈액 혈관 고리 세그먼트의 준비 동안 제거. 지방 기능 장애는 고혈압과 관련 된 심혈 관 합병증 (24)에 대 한 독립적 인 위험 인자를 나타내며, 혈관을 둘러싼 pvat의 관 반응성을 조사할 때 고려해 야 합니다. 다른 동맥.
상기 다중 와이어 myograph 시스템은 대동맥, 장 간 막, 신장, 대 퇴, 대뇌 및 관상 동맥 (25)을 포함 하는 다양 한 혈관의 혈관 운동 기능을 조사 하기 위해 널리 사용 되 고 있다. 여기에 설명 된 프로토콜은 와이어 myography를 사용 하 여 PVAT의 변조에 특별 한 초점을 맞춘 유전자 변형 마우스 모델에서 분리 된 장 간 막 동맥의 혈관 반응성을 평가 합니다.

<table><tbody><tr><td>아세틸콜린</td><td>시그마-알드리치</td><td>A6625</td><td><강한>재고 농도</강한>: 10-1 M 작업 농도: 10-10 to 10-5 M</td></tr><tr><td>L-NAME (N&omega;-nitro-L-arginine methyl ester)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N5751</td><td>재고 농도: 3 x 10-2 M 작업 농도: 10-4 M</td></tr><tr><td>Phenylephrine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6126</td><td>재고 농도: 10-2 M 작업 농도: 10-10 to 10-5 M</td></tr><tr><td>U46619 (9,11-dideoxy-9&alpha;,11&alpha; 메탄에폭시 프로스타글란딘 F2&알파;)</td><td>Enzo</td><td>BML-PG023-0001</td><td>주식 농도: 10-5 M 작업 집중: 1-3 x 10-8 M</td></tr><tr><td>멀티와이어 근그래프</td><td>덴마크어 MyoTechnology (DMT)</td><td>620M</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/26</td><td>AD설치</td><td>ML848</td><td></td></tr><tr><td>Labchart7</td><td>AD 설치</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Adipo-SIRT1 야생형 마우스</td><td>실험실 동물 유닛, 홍콩 대학교</td><td>CULATR NO.: 4085-16</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 코팅 페트리 접시</td><td>덴마크어 MyoTechnology (DMT)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>텅스텐 와이어</td><td>덴마크 MyoTechnology (DMT)</td><td>300331</td><td></td></tr><tr><td>수술 도구</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

병 태 생리학적 자극에 대 한 변경 된 혈관 톤 반응성은 광범위 한 심혈 관 및 대사 성 질환의 발달에 기여 합니다. 내 피 세포 기능 장애는 동맥의 혈관 수축 감소와 혈관의 개선에 대 한 주요 범인을 나타낸다. 지방 (지방) 동맥을 둘러싼 조직은 혈관 평활 근 세포의 내 피 의존적 이완 및/또는 수축 조절에 중요 한 역할을 한다. 내 피와 혈관 주위 지방 조직 사이의 교차 회담은 와이어 myography 시스템에 의해 장착 된 혈관을 사용 하 여 ex 생체 내 평가 될 수 있다. 그러나, 다른 종, 나이, 유전 배경 및/또는 병 태 생리학적 조건의 동물에서 파생 된 동맥에 대 한 최적의 설정을 설정 해야 합니다.

정규화 인자 k 를 구하는 길이/인장 관계의 시험
혈관 세그먼트에 적용 되는 스트레칭의 양은 액 틴의 상호 작용의 정도에 영향을 미치며, 따라서 최대의 활성 력이 개발 되었습니다. 따라서, 모든 유형의 혈관에 대해, 최대 활성 력에 필요한 스트레칭 양을 결정 하는 것은 적절 한 근 전도 연구에 필요 합니다. 여기서, 길이/장력 관계의 정상화는 마우스 모델 로부터 분리 된 장 간 막 동맥에 대해 수행 된다 (도 2). 동맥 세그먼트는 스테인리스 핀 (40 μ m 직경)에 있는 4 개의 약 실 철사 myograph 체계 ( 물자 표참조)에서 중단 되었습니다. 등각 투영 장력은 기록 프로그램으로 컴퓨터에 연결 된 아날로그-디지털 컨버터를 사...

이 프로토콜은 마우스에서 분리 된 장 간 막 동맥의 경 벽 등각 장력을 평가 하는 와이어 묘 조 그래피의 사용을 설명 하며, 내 피 세포 및 혈관 주위 지방 조직에서 방출 되는 요인에의 한 변조를 특별히 고려 합니다.

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

우리는 유효하게 그들을 둘러싸고 있는 지방의 존재 또는 부재에 있는 동일 동물 또는 다른 동물 또는 동맥에서 또는 내피의 존재 또는 부재에서 준비를 유효하게 비교할 수 있도록 아주 엄격한 프로토콜이 필요합니다. 이 실험 기술의 주요 장점은 우리가 동상 측정 조건하에서 동일한 동맥의 고리를 비교하고 따라서 우리가 조사하는 실험 요인의 영향에 관하여 유효하게 결론을 내릴 수 있다는 것입니다. 이 프로토콜은 다른 유전자 변형 동물의 지방 조직에 의해 혈관 반응성의 변조에 대한 통찰력을 제공합니다.지방 조직 기능 장애는 고혈압과 관련 심장 혈관 합병증에 대한 독립적 인 위험 요소를 나타냅니다. 당사의 근사 에는 특히 장착 중에 선박이 손상되지 않도록 하고 선박이 다양한 자극에 적절하게 반응하도록 하기 위해 각 지점에서 각 지점에서 극도의 주의가 필요한 여러 가지 복잡한 단계가 포함됩니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 막심 동맥 고리의 준비 및 해부로 이 절차를 시작합니다.컴퓨터를 켜고 데이터 기록 소프트웨어를 엽니다. 실험을 새 이름으로 랩 차트 데이터 파일로 저장하여 원래 설정 파일을 덮어쓰지 않도록 합니다. 정규화 설정 창을 열고 K 팩터를 하나로 설정합니다.IP 교정, 대상 압력, 온라인 평균 시간 및 지연 시간의 기본 값을 수락합니다. 설정을 저장하려면 확인을 클릭합니다. 관심 있는 채널을 선택하고 정규화 창에서 와이어 직경, 조직 끝점 및 초기 마이크로미터 판독을 입력합니다.정상화 절차를 시작하려면 마이크로미터 나사를 시계 반대 방향으로 돌려 혈관에 첫 번째 수동 스트레칭을 적용합니다. 선박이 안정화될 때까지 3분을 기다린 후, 정규화 창에 새 마이크로미터 판독값을 입력합니다. 벽 장력은 자동으로 계산되고 그래프의 점으로 표시됩니다.각 수동 스트레칭 후, 제어 크렙스 버퍼를 150 밀리알륨 염화칼륨을 함유한 이소 삼투압 높은 칼륨 크렙으로 대체하십시오. 수축이 약 3분 만에 고원에 도달하면, 칼륨 활성화 력으로부터 각 스트레치에서 패시브 포스를 빼서 활성력을 기록한다. 벽 장력과 내부 둘레 값을 계산합니다.높은 칼륨 버퍼를 신선한 크렙스 버퍼로 대체하여 높은 칼륨 상태를 제거하십시오. 5분 동안 세 번 세탁을 반복합니다. 수동 스트레칭을 유도하고 활성 장력이 감소하기 시작할 때까지 대체 회전에서 활성 수축을 유도하여 정규화 단계를 반복합니다.높은 칼륨 크렙스 버퍼를 철저히 씻어 내고 30~45분 동안 준비를 균형하게 준비합니다. 후속 실험 중에 활성 수축 응답만 기록되도록 기저 장력을 0으로 재설정합니다. 각 동맥의 인접한 섹션에서 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 페어링된 동맥 링을 준비하고 마운트합니다.PVAT가 그대로 있는 동맥 링 1개를 준비하고 다른 하나는 PVAT를 제거합니다. 정상화 후, 크렙스를 함유한 챔버에 115밀리알륨 염화칼륨 용액을 추가하여 높은 칼륨 크렙스 버퍼로 동맥 세그먼트를 사전 계약한다. 고원 기간에 수축 후, 높은 칼륨을 씻어 신선한 aerated 크렙스 버퍼로 버퍼를 교체.5분 동안 세 번 세탁을 반복합니다. 염화칼륨 자극을 반복하고 세 번 세척하고 염화칼륨 자극으로 인한 장력에서 기준장력을 빼서 염화칼륨에 대한 최대 수축 반응을 기록한다. 마지막 수축 및 세척 후, 따뜻하고, 분화 된 크렙스 버퍼로 챔버를 리필하고 다음 작업을 수행하기 전에 약 30 분 동안 동맥을 복구 할 수 있습니다.각 챔버에, 유족의 누적량을 추가하여 정지 제제의 농도 의존성 증가 및 등소장력을 유도한다. 고뇌의 마지막 복용량을 추가 한 후, 철저하게 약물을 씻어 신선한 크렙스 버퍼로 챔버를 다시 작성합니다. 염화칼륨의 백분율이 증가함에 따라 농도 의존성 반응을 플롯하여 최대 수축을 유도합니다.산화 질소의 기여를 평가하기 위해, phenylephrine의 첨가 전에 30 분 동안 산화 질소 신디마제 억제제 L-NAME로 제제를 배양. 제2 농도 응답 곡선을 순차적으로 수행하기 위해, 챔버를 완전히 반복적으로 세척하여 톤의 추가 변화가 관찰되지 때까지 이전의 모든 작용제를 제거하십시오. 길이 장력 관계의 정규화는 표준 차우 또는 고지방 식단으로 공급되는 마우스 모델으로부터 분리된 막질 동맥에 대해 수행되었다.수은 교원 압력 또는 IC100의 100밀리미터에 해당하는 내부 둘레가 얻을 때까지 동맥 세그먼트의 증분 스트레칭에 의해 수동 길이 장력 관계가 확립되었다. 각 스트레칭 후, 115 밀리머발륨 염화 칼륨수축을 자극하기 위해 적용되었다. 활성 길이 장력 곡선은 Y축의 활성 힘 데이터와 X축의 마이크로미터 데이터에서 계산된 IC 값에서 플롯되었습니다.피크 고원 내에 있는 IC 값은 IC1입니다. 정규화 계수인 K는 IC1 및 IC100의 비율로 계산되었으며, 이는 후속 실험에서 동일한 용기 유형의 샘플에 적용될 수 있었다. 여기에 는 주변 PVAT의 유무에 관계없이 막질 동맥에서 페닐레프린에 대한 혈관 수축 반응의 출력 기록이 표시됩니다.페닐레프린의 누적 농도는 16주 된 아디포셋 1마리마우스로부터 수집된 막질 동맥의 수축을 자극하기 위해 적용되었다. 수축 반응은 150 밀리알륨 염화칼륨의 백분율로 기록되고 최대 수축을 유도했다. 수축 곡선 아래 영역은 비교를 위해 플롯되었습니다.adiposet 1 마우스에서 PVAT페닐프린에 대한 반응에 대한 수축 방지 효과를 유도. KCL 유도 수축을 얻을 때, 응답은 안정적이고 안정적이어야 한다. KCL의 3가지 증분 투여 후에도 응답이 계속 증가하는 경우 KCL 자극이 필요할 수 있습니다.긴장의 최적 조건을 달성하기 위해, 정상화 단계는 매우 중요하다, 이 혈관을 열 수있는 힘을 결정으로. 제대로 수행되지 않으면 전체 실험에 영향을 미칩니다. 이 프로토콜은 페닐레프린 유도 수축 또는 이완 이외에 다른 설정에 적용될 수 있다.예를 들어, 심분 지방 조직의 존재 또는 부재에서, 자율 신경, 또는 내피. 이 프로토콜을 통해 연구자들은 비만, 당뇨병 및 심혈관 질환과 같은 다양한 병리학 적 조건하에서 병들게 된 동물 모델의 작은 혈관을 검사 할 수 있습니다.

assessment-vascular-tone-responsiveness-using-isolated-mesenteric

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

본 논문은 죽상동맥경화증의 여러 단계를 평가하기 위해 의학 연구에서 일반적으로 사용되는 혈관 기능 및 형태에 대한 몇 가지 비침습적 평가에 대한 방법론적 고려 사항을 설명합니다.

혈관 기능 및 형태의 비 침습적 평가에 대한 방법 론적 접근

인슐린 유도 혈관 근육 관류를 조절 하 고 증가 microvascular 표면적 (microvascular 모집) 용 질 exchange에 사용할 수 있는 혈액과 조직 interstitium 사이. 결합된 intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 동시에 큰 배와는 미세 혈관에서 인슐린의 활동을 평가 하 여 vivo에서.

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

Videomicroscopy 시스템은 고립 된 지방 조직 arterioles 생리 및 약리 자극에 대 한 응답에서의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 이 기술은 비만 인 간에 있는 다른 지방 조직 도메인에 microvascular 고기 검사를 사용할 수 있습니다.

인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

새로운 혈관 형성 및 동 정적인 신경 분포 개장 하는 지방 조직에서 중추적인 역할을 재생합니다. 그러나, 시각화 및 양적 측정 지방 조직에 기술적인 문제가 남아 있다. 여기 우리는 성공적으로 레이블 및 양적 혈관과 다른 adipose 조직에 신경 섬유의 밀도 비교 하는 프로토콜을 제시.

혈관과 신경 섬유 지방 조직에서 공동 얼룩

여기서는 생쥐 대동맥 주위 지방 조직에서 기질 혈관 분획 유래 지방세포의 분리, 배양 및 지방 유도를 설명하여 혈관 주위 지방 조직 기능 및 혈관 세포와의 관계를 연구할 수 있습니다.

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Stromal Vascular Fraction-derived Preadipocytes from Mouse Periaortic Adipose Tissue(마우스 대동맥 주위 지방 조직에서 기질 혈관 분획 유래 지방세포의 분리, 배양 및 지방 유도)

이 기사에서는 인간 신장 동맥 분지의 분리 및 기능 평가를 위한 단계별 프로토콜을 제시하여 의약품 개발을 위한 전임상 연구를 촉진합니다.

인간 신장 동맥 가지의 다단계 미세해부 및 기능-구조 프로파일링

학습하세요 쥐 장간동맥의 와이어 근측정법을 이용한 혈관 장력 평가 방법입니다. 혈관 주위 지방조직이 혈관 반응성을 조절하는 메커니즘을 탐구하여 고혈압 및 심혈관 질환 연구에 활용할 수 있습니다.

혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가

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