Name: 암 줄기 세포를 표적으로 하는 반대로 신 생물 성 약 검열을 위한 생리학 환자 파생된 3D Spheroids (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: 학습하세요 환자 유래 3D 스피로이드를 이용한 항암제 선별 방법을. 교수형 드롭 모델로 암 줄기 세포를 표적화하고 화학요법 내성을 연구하여 정밀의학 기반 맞춤형 치료법을 개발합니다.

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이 작품은 주로 DOD OCRP 초기 경력 조사자 상 W81XWH-13-1-0134 (GM), DOD 파일럿 상 W81XWH-16-1-0426 (GM), DOD 조사자 시작 상 W81XWH-17-OCRP-IIRA (GM), 난소 암및 미시간 난소 암에 대한 리브킨 센터에 의해 지원됩니다 얼라이언스. 이 간행물에 보고된 연구는 수상 번호 P30CA046592의 밑에 건강의 국가 학회의 국립 암 학회에 의해 지원되었습니다. CMN은 그랜트 번호 1256260에서 국립 과학 재단 대학원 연구 펠로우십에 의해 지원됩니다. MEB는 국가 필요 지역 (GAANN) 펠로우십에서 교육부 대학원 지원에 의해 지원됩니다.

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저자는 공개 할 것이 없다.

3D 스페로이드 형성을 위한 384웰 매달려 있는 드롭 플레이트 플랫폼은 모든 세포 생물학 또는 암 생물학 실험실을 위한 쉽게 구현되는 도구입니다. 이 생리학적 플랫폼은 높은 처리량 약물 스크리닝을 허용하면서 생리학적으로 관련된 3D 배양 내에서 세포주뿐만 아니라 1차 환자 샘플을 연구할 수 있게 합니다. 또한 이 플랫폼은 배양 조건이 고도로 조정가능하도록 하여 도금 밀도, 세포 공동 배양 비율, 세포 외 성분 및 배지 조성을 엄격하게 제어할 수 있도록 합니다. 더욱이, 이 생리적인 플랫폼은 qRT-PCR, FACS 및 각종 화상 진찰 방법과 같은 크고 작은 세포 수를 요구하는 다운스트림 분석 기술에 실험이 높게 순종할 수 있게 합니다. 활용의 용이성은 경험과 함께 제공되지만, 새로운 연수생은 빠르게 성공하게되고, 일단 파이펫팅의 속도와 용이성을 마스터합니다. 따라서, 이러한 생리학적 플랫폼은 개인화된 3D 약물 스크리닝, CSC 생물학 및 화학저항성 조사에 매우 적용가능하다.
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전 세계적으로 암 관련 사망률은 2018년 980만 명에 이르렀으며, 개선된 치료법개발의 필요성을 강조하고 있다. 안타깝게도, 새로운 항암제 개발을 위한 개선된 전략의 필요성을 나타내는 약 6억 5천만 달러의 비용이 드는 단일 약물의 개발로 인해 암 치료제 개발 비용이 증가하고 있습니다. 암 줄기 세포 (CSC), 증가 화학 저항을 특징으로3,자기 갱신 하는 능력, 그리고 새로운 종양을 종자 하는 능력4 종양 재발에 대 한 책임 것으로 생각 된다4,전이5,및 화학 저항4,6, 이는 모두 종양의 악성 용량에 기여하므로 높은 사망자 수입니다. 난소암에서, 이 세포는 복강내의 악성 복수액에서 풍부하게 발견되며, 이는 나쁜 임상 결과와 관련된 상태이다1. CSC의 악성 기능의 결과로, 전통적인 화학요법과 함께 사용하기 위하여 새로운 CSC 표적으로 하는 약을 개발하는 추진이 있었습니다. 포함 하는 CSC 표적 약물의 개발에 수반 하는 몇 가지 도전이 있다: 1) 시험관에서 CSC를 확장 하 고 유지 에 어려움; 2) 환자 샘플의 부족; 3) 배양 플랫폼의 생리적 관련성; 4) 환자 들 간의 약물 감수성의 이질성. 이 프로토콜은 이러한 각 과제를 극복할 수 있는 높은 처리량의 3D 문화 플랫폼 구현에 대해 설명합니다. 특히, 이 시스템은 소수의 환자 유래 난소 CSC를 사용하여 신속한 약물 스크리닝을 허용하며, 다운스트림 분석 기술에 매우 적합합니다. 난소암과 CSC를 연구하는 데 이상적이지만, 당사의 플랫폼은 복잡한 3D 환경에서 다른 암 과 분화 세포 유형을 연구하는 데에도 유용합니다.
복합 3차원(3D) 모델은 암세포, 비암 지지 세포 및 세포외 매트릭스(ECM) 단백질로 구성된 3D 틈새 시장인 종양 미세환경(TME) 단백질을 연구하는 데 매우 중요합니다. 이러한 3D 환경은 시험관내 전통적인 2D 세포 배양에 비해 독특한 세포 형태, 세포 세포 및 세포 매트릭스 상호작용, 세포분화, 세포 이동, 세포 밀도 및 확산 구배를 초래한다 4. 이러한 모든 요인은 3D 배양 내의 차동 약물 반응에서 절정을이며, 약물 내성 및 생리적 관련성증가를 나타내며 7,8. CSC 분화 및 화학 저항성에서 3D TME의 역할로 인해 생리학적 미세 환경에서 약물을 대상으로 하는 CSC를 선별하는 것이 중요합니다. CSC 약물 스크리닝 플랫폼의 생리학적 관련성을 개선하는 것은 환자 특정 약물 스크리닝, 약물 개발, 치료 전략의 제형 및 궁극적으로 임상 결과를 개선할 수 있는 잠재력을 가지고 있다. 약물 스크리닝에 사용되는 플랫폼이 높은 처리량과 다운스트림 분석 방법과 호환되어 유망한 약물의 비용, 시간및 임상 번역 시간을 최소화하는 것이 똑같이 중요합니다 9.
현재, 복합TME는 생리학적을 제공하기 때문에 뮤린 합성 종양 모델, 세포주 유래 이종이식 및 환자 유래 이종이식(PDX) 모델(12)과같은 생체 내 모델을 통한 약물 스크리닝 적용을 가장 잘 유지한다. 조건. 그러나, 이러한 모델들의 낮은 처리량 특성은 비용, 시간 및 기술적 기술 세트뿐만 아니라 신속하고 높은 처리량약물 스크리닝 애플리케이션에서 그들의 유용성을 제한한다. 이러한 생체내 모델에 대한 대안으로, 하이드로겔8,미세유체 장치 내 배양 또는 '오르간 온 칩' 장치10,14,및 비부착 배양3,8을 이용한 많은 시험관내 3D 모델 비용, 시간 및 필요한 기술 집합 측면에서 진입 장벽이 낮기 때문에 개발되었습니다.
하이드로겔 배양 플랫폼은 매트릭스 조성물, 기계적 특성 및 매트릭스구조(15)에걸쳐 제공되는 미세 제어에 유리하다; 그러나, 그들은 고밀도 세포 배양(14)을억제 할 수 있습니다. 또한, 하이드로겔로부터 의한 수확 세포는 수확 방법15의잠재적으로 유해한 영향으로 인해 하류 분석을 복잡하게 할 수 있다. 반면, 미세유체 장치는 동일한 장치 내에서 출력 검출을 허용하고, 시약의 소비를 최소화하고, 반응 시간을 줄이며, 폐기물을 최소화하며, 생리학적으로 관련된 스케일에서 세포 배양을 가능하게 하는 마이크로스케일 장치이며, 급속 한 확산14. 이러한 특성으로 인해 약물 독성, 효능 및 약물 동태학을 조사하기 위한 유망한 플랫폼이 됩니다. 그러나 효율적이고 정량화 가능하며 재현 가능하며 사용자 친화적인 3D 세포 배양뿐만 아니라 부피가 크고 비용이 많이 드는 펌핑 시스템의 과제는 고처리량 연구에서 미세 유체 응용을 제한했습니다10. 효율적인 검출 설정및 필드 전반에 걸친 잠재적으로 어려운 구현은 또한 미세 유체 시스템10의광범위한 채택을 방해했다.
반대로 회전 믹서(nutators), 초저 부착 플레이트 및 매달려 있는 물방울에서 비부착 조건에서 생성된 스페로이드는 사용자 정의 매트릭스 성분을 포함하지 않습니다. 이러한 방법론은 특히 비 부착 조건이 스페로이드가 복강 내에서 성장하는 조건을 대표하기 때문에 난소암을 연구하는 데 특히 관련이있습니다5. 이러한 비 부착 배양 방법 내에서, 영양기와 매달려 드롭 스페로이드는 초저 부착 플레이트에서 생성 된 스페로이드에 비해 더 높은 압축, 리모델링 및 화학 저항을 나타내는 것으로 나타났습니다, 증가 생리학적 제안 관련성16,17,18,19. 더 작은 우물 크기와 최소한의 필요한 셀 번호에서 높은 처리량 스크리닝을 위한 증가된 용량으로 인해, 매달려 있는 드롭 플레이트의 스페로이드 생성은 약물 스크리닝을 위한 이상적인 플랫폼입니다. 여기에서, 우리는 384 잘 매달려 있는 낙하 판에 있는 조정 가능한 3D 생리학 플랫폼을 제시합니다, 그 구현하기 쉽고 다운스트림 분석에 높게 순종합니다, 난소암과 난소 CSCs의 높은 처리량 약 검열을 위해 이상적 만들기.
우리의 3D 생리학적 플랫폼은 생리적 세포-세포 접촉, 확산 구배, 세포 밀도 및 자연적으로 생성된 ECM 단백질을 포함하여 3D 배양의 모든 장점을 제공하며, 이는 현실적인 약물 반응에 기여할 수 있습니다16, 17,18,19. 추가적으로, 환자 파생된 CSCs를 가진 이 스페로이드를 생성해서, 우리는 많은 기술적인 복제를 동시에 가진 약1에 환자 특정 반응을 결정할 수 있습니다, 참을성 있는 종양 내의 찾아질 수 있는 이질성을 극복하기 위하여 샘플20. 더욱이, 3D 문화는 CSC 인구3,16의 유지관리를 향상시키는 것으로 나타났으며, 따라서 7의 풍부한 CSC 인구를 대표한다. 이는 생존 가능성 및 CSC 비율의 유세포 분석 분석을 포함한 쉬운 다운스트림 분석과 결합되어 CSC 표적화 약물 효능을 최적으로 평가할 수 있습니다. 마지막으로, 이 생리학적 플랫폼은 실험 중 여러 시점의 이미징과 호환되며, 세포 사멸 및 증식 평가, 면역조직화학을 위한 세포 조직 및 형태학, 조건부 ELISA를 위한 수용성 신호 중간, 유세포 분석및 PCR 에 따른 유전자 발현을 가진 세포 표현형.

<table><tbody><tr><td>0.25% 트립신-EDTA</td><td>Gibco ILT25200056</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10mL 혈청학 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>10,000cSt Si oil</td><td>Millipore Sigma</td><td>63148-62-9</td><td>스페로이드 어레이 몰드를 코팅하여 Histogel과 같은 조직 처리 젤을 금형에서 쉽게 제거할 수 있도록 하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>100 mm 조직 배양 접시</td><td>Thermo Scientific</td><td>130182</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 코니컬 튜브</td><td>Celltreat</td><td>FL4021</td><td></td></tr><tr><td>1x DMEM for Serum Free Medium</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>1x F12 for Serum Free Medium</td><td>Gibco</td><td>11765-054</td><td></td></tr><tr><td>1x phosphate buffered Saline (PBS)</td><td>Gibco</td><td>ILT10010023</td><td></td></tr><tr><td>4',6- 디아미디노-2-페닐린돌(DAPI)</td><td>써모 피셔</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>40 &마이크로; m 필터</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies Inc.</td><td>1449</td><td>단백질 분해 효소와 콜라겐 분해 효소로 구성된 부드러운 세포 분리 효소.</td></tr><tr><td>ACK Lysing</td><td>Buffer Thermo Scientific</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>alamarBlue</td><td>Invitrogen</td><td>DAL1025</td><td>Resazurin 염료는 resazurin을 형광성이 높은 resorufin으로 환원시키는 능력을 기반으로 세포의 생존력과 증식을 측정하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR 분석 키트</td><td>Stem Cell Tech</td><td>1700</td><td>키트는 암 줄기 세포의 지표인 알데히드 탈수소효소를 많이 발현하는 줄기 및 전구 세포를 식별합니다. 이 키트는 ALDEFLUOR 시약, DEAB, 염산, 디메틸설폭사이드 및 ALDEFLUOR 분석 버퍼로 구성되어 있습니다.</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR Diethylaminobenzaldehyde (DEAB)</td><td>Stem Cell Tech</td><td>1705</td><td>Diethylaminobenzaldehyde (DEAB)는 비특이적 ALDH 염색을 결정하는 데 사용되는 ALDH 동위원임 억제제입니다.</td></tr><tr><td>Andor iXon x3 CCD 카메라</td><td>Oxford</td> <td>Instruments-Antibiotics</td><td></td></tr> <tr><td>and Antimycotics</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>APC-isotype IgG2b</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-092-217</td><td>IgG2b 항체의 비특이적 염색을 정량화하기 위한 Isotype control.</td></tr><tr><td>B27 보충제</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>basic 섬유아세포 성장 인자</td><td>줄기 세포 기술</td><td>78003.1</td><td></td></tr><tr><td>BD Lo-Dose U-100 인슐린 주사기</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-79</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy HT Microplate Reader</td><td>BioTek</td><td>7091000</td><td></td></tr><tr><td>CD133-APC</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-113-184</td><td>암 줄기세포 마커인 CD133을 표적으로 하는 형광 항체.</td></tr><tr><td>cellSens Dimension Software</td>: <td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cisplatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4394</td><td>DNA를 파괴하는 알킬화제로 기능하는 백금 기반 화학요법제.</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>표피 성장 인자</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td></td></tr><tr><td>EVOS XL 코어 세포 이미징 시스템</td><td>Life Technologies</td><td>AME3300</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum - premium (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4375</td><td></td></tr><tr><td>Hemacyometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Histogel</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>염색 시 검체 주위의 변색을 방지하면서 겔 내에서 검체를 관통하고 유지할 수 있는 조직 처리 젤.</td></tr><tr><td>인간 지방 유래 중간엽 줄기 세포</td><td>Lonza</td><td>PT-5006</td><td></td></tr><tr><td>인간 미세혈관 내피 세포</td><td>Lonza</td><td>CC2543</td><td></td></tr><tr><td>인슐린-트랜스페린-셀레늄 보충제</td><td>Gibco</td><td>51500-056</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead viability Kit</td><td>Invitrogen</td><td>L3224</td><td>살아있는 세포(calcein-AM) 및 죽은 세포(Ethidium Homodimer-1)의 형광 기반 검출을 위한 키트.</td></tr><tr><td>MEM 비필수 아미노산</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>MetaMorph 7.8 소프트웨어</td><td>분자 장치</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>올림푸스 IX81 도립 컨포칼 현미경</td><td>올림푸스</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>올림푸스 IX83 연구용 도립 현미경</td><td>올림푸스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라필름 M</td><td>토마스 사이언티픽</td><td>7315D35</td><td>열가소성 폴리머 스트립은 매달린 드롭 플레이트에서 액적 증발을 제한하는 동시에 가스 교환을 허용합니다.</td></tr><tr><td>Perfecta 3D 384 Well Hanging Drop Plates</td><td>3D Biomatrix</td><td>HDP1384-8</td><td>Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>phalloidin AlexaFluor488</td>을 통해 사용 가능 <td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Phalloidin은 고정 세포에서 F-actin을 형광 라벨링하는 펩타이드입니다.</td></tr><tr><td>ProJet 3500 HD Max</td><td>3D</td><td></td> <td>Systems-3D 프린터</td></tr><tr><td>멸균 DI 물</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Azo 염료는 살아있는 세포의 손상되지 않은 막이 아닌 죽은 세포의 손상된 막을 통과하는 능력에 따라 살아있는 세포와 죽은 세포를 구별하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>VisiJet M3 Crystal</td><td>3D</td> <td>Systems-3D</td> <td>프린팅을 위한 생체 적합성 고분자 재료입니다.</td></tr><tr><td>요코가와 CSU-X1 컨포칼 스캐너 유닛</td><td>요코가와</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

암 줄기 세포를 표적으로 하는 반대로 신 생물 성 약 검열을 위한 생리학 환자 파생된 3d spheroids

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

이 프로토콜에서는 생리학적으로 대표적인 미세 환경에서 항암 치료제의 높은 처리량 스크리닝을 허용하기 위해 384 웰 매달려 있는 액적 내에서 종양 스페로이드 생성 절차를 설명합니다. 우리는 환자 유래 암 줄기 세포 스페로이드의 형성뿐만 아니라, 약물 치료 다음 철저한 분석을 위해 이러한 스페로이드의 조작을 설명합니다. 구체적으로, 우리는 스페로이드 형태, 증식, 생존력, 약물 독성, 세포 표현형 및 세포 국소화 데이터의 수집을 설명합니다. 이 프로토콜은 384웰 매달려 있는 드롭 플랫폼을 사용하여 쉽게 구현할 수 있는 분석 기술에 중점을 두어 처리량이 높은 약물 스크리닝에 이상적입니다. 우리는 난소암 연구와 암 줄기 세포 연구에서이 모델의 중요성을 강조하는 동안, 384 웰 플랫폼은 다른 암 유형 및 질병 모델의 연구에 적합, 많은 분야에 플랫폼의 유용성을 확장. 이 플랫폼은 쉽게 구현된 생리학적 대표 3D 배양을 통해 맞춤화된 약물 스크리닝의 속도와 스크리닝 결과의 품질을 개선함으로써 새로운 치료법 및 환자 별 개발에 도움이 될 것으로 예측됩니다. 치료 전략을 수립하여 광범위한 임상 적 영향을 미칩니다.

세포주 또는 환자 유래 CSC로 형성된 스페로이드는 매달려 있는 액적 내에서 다양한작은 세포 수로 형성될 수 있다(도 2A). 스페로이드는 우물 당 10 개의 세포로 안정적으로 형성되어 희귀 한 환자 샘플을 보존 할 수 있습니다. 이 스페로이드 내의 세포는 생리적인 세포 세포 접촉 및 확산 비율을 허용하는 생체 내에 있을 것과 같이 3 차원에서 그밖 세포에 의해 포위됩니다. 스페로이드 내의 종양 세포는 시간이 지남에 따라 크기가 확장되는 스페로이드를 일으키는 원인이 되는 증식합니다 (그림2B). 더 공격적인 환자 세포 또는 세포주가 그들의 대응보다 빨리 증가함에 따라, 각 견본의 증식 능력을 정량화하고 약물 처리가 각 견본의 증식에 어떻게 영향을 미치는지 검토하는 것이 중요합니다. 이를 위해, resazurin 계 형광 분석과 같은 대사 활성 분석술은, 384 웰 생리학적 플랫폼으로 쉽게 수행될 수 있으며, 그 결과는 <s...

이 프로토콜은 약물 을 평가하기 위해 증식, 세포 독성 테스트, 유세포 분석, 면역 형광 염색 및 공초점 이미징의 정량화를 포함한 환자 유래 스페로이드 생성 및 하류 분석을 설명합니다. 반대로 신생물 치료제로 후보자의 잠재력. 이 프로토콜은 각 환자 및 질병 단계에 대한 특정 약물을 식별하여 정밀 의학을 지원합니다.

암 줄기 세포를 표적으로 하는 반대로 신 생물 성 약 검열을 위한 생리학 환자 파생된 3D Spheroids

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

당사의 프로토콜은 3D 세포 배양을 위한 간단한 방법을 제공하며 다운스트림 분석에 매우 적합합니다. 이것은 이기종 환자 견본 및 그들의 특정 약 반응의 평가를 용이하게 합니다. 이 기술의 장점은 스페로이드가 작은 세포 수에서 형성될 수 있다는 것입니다, 부족한 1차 샘플의 보존을 모두 허용하고, 환자 특정 약물 반응을 위한 높은 처리량 검열.매달려 있는 낙하 모델은 3D 약물 확산을 통해 생리환경을 조성하고 종양 단계에 대응하는 반응을 한다. 이것은 표적으로 한 치료 및 환자 특정 처리의 발달을 허용합니다. 이 방법은 난소암, 이질성 및 화학 요법의 발달을 연구하는 데 이상적입니다.그러나, 그것은 또한 다른 암 및 약물 내성 세포 인구를 공부 하기 위해 사용할 수 있습니다. 스페로이드를 도금할 때는 정확한 볼륨을 피펫하는 것이 중요합니다. 이렇게 하면 스페로이드 간의 일관성이 보장됩니다.스페로이드와 각각의 물방울은 본질적으로 깨지기 쉽고 적절한 처리없이 쉽게 손실되므로 매달려 있는 드롭 플레이트를 적절하게 플레이트, 유지 및 분석하는 방법을 보여줍니다. 이 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 대학원생 마이클 Bregenzer 될 것입니다. 6웰 플레이트의 각 우물을 4~5밀리리터의 오토클레이온 워터로 채우고 뚜껑과 접시 바닥 사이에 매달려 있는 드롭 플레이트를 끼우는 것으로 시작합니다.매달려 있는 낙하판의 테두리 주위에 800~1,000마이크로리터의 물을 첨가하여 습한 환경을 제공하고 증발을 최소화합니다. 다음으로 트립신으로 분리한 다음 FBS를 함유하는 배지의 6~8밀리리터를 추가하여 2D 성장세포를 수집합니다. 10 밀리리터 세로지피트로 세포를 흡인하고 15 밀리리터 원판 튜브에 보관하십시오.혈세포계를 사용하여 세포를 계산합니다. 원고 방향에 따라 셀 서스펜션을 준비하고 파이펫과 부드럽게 섞어 균일한 분포를 보장합니다. 파이펫 끝을 45도 각도로 우물에 놓고 각 매달려 있는 각 매달려 있는 양면에 서스펜션 20 마이크로리터를 놓습니다.6웰 플레이트뚜껑을 다시 놓고 신축성 있는 열가소성 스트립을 사용하여 가장자리를 밀봉합니다. 표준 이산화탄소 가습 인큐베이터에서 배양하고 각 스페로이드 함유 우물에 세포 배양 배지의 2 ~3 마이크로 리터를 추가하여 2 ~ 3 일마다 매달려 방울을 공급합니다. 세포의 증식 및 생존가능성을 정량화하기 위해, 증식 분석을 위해 지정된 우물에 여과된 레사쥐린 기반 용액의 2마이크

physiologic-patient-derived-3d-spheroids-for-anti-neoplastic-drug

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

수성 2상 시스템을 사용하여 고처리량 96웰 플레이트 형식으로 암세포 스페로이드를 로봇 프린팅하기 위한 프로토콜이 제시됩니다.

약물 테스트를위한 수성 2 단계 시스템으로 암 세포 타원체의 로봇 생산

전임상 시험에서 인간 대상 시험으로 전환되는 새로운 약물 표적을 식별하는 것은 과학적인 우선 순위입니다. 이를 위해 여기에서는 유전자 고갈이 암 세포주 스페로이드에 미치는 영향을 조사하기 위한 기능적 유전체학 접근 방식을 설명하며, 이는 생체 내에서 인간 암을 보다 적절하게 모델링합니다.

기능 유전체학에게 검사를 활용하여 암 세포 회전 타원체 문화에 잠재적으로 소설 약 표적을 식별하는

우리는 치료 평가 우리 셀 라인에 머리와 목 편평 상피 세포 암에 대 한 실험적인 치료 regimens의 현재 표준 테스트를 가능 하 게 한 회전 타원 체를 기반으로, 3 차원 생체 외에서 모델의 진화 설명 민감성 및 미래에 인간의 표본에서 1 차 셀에 저항.

머리와 목 편평 상피 세포 암에 대 한 회전 타원 체 기반 3D 셀 문화 모델에서 테스트 하는 치료

다양 한 질병의 표시 더 순수 관련 모델 개발 및 구현에 약물 발견 프로그램 되. 여기에 설명 된 새로운 모델 시스템 spheroids를 경작 하 고 종양학 신약에 대 한 검색 하는 높은 처리량 1536-잘 접시 기반 시스템에서 상영 될 수 방법을 3 차원 종양을 보여 줍니다.

마약 검사에 대 한 높은 처리량 3 차원 종양 Spheroids의 생성

이 프로토콜에 대 한 3 차원 구조적된 암 세포 (spheroids)에서 실시간으로 immunotherapeutic 리디렉션된 T-셀 (자동차 T-세포) 세포 독성을 평가 하기 위해 설계 되었습니다.

자동차 T 세포에 의해 회전 타원 체 살인 분석 결과

광학 일관성 단층 촬영 (10 월), 3 차원 영상 기술, 모니터링 하 고 다세포 종양 spheroids의 성장 활동 특성 사용 되었다. 접근, 및 내장 광 감쇠 대비에 따라 spheroids에서 레이블 없는 죽은 조직 검출 복을 사용 하 여 종양 spheroids의 정확한 체적 정량화 시연 했다.

경도 형태 및 생리 적인 광학 일관성 단층 촬영을 사용 하 여 3 차원 종양 Spheroids의 모니터링

종양 세포와 기질 섬유아세포의 이질적 상호작용에 기초한 새로운 3차원 스페로이드 모델이 확립된다. 여기에서, 우리는 spheroids의 대형을 구상하기 위하여 종양 세포 및 기질 섬유아세포, 시간 경과 화상 진찰 및 공초점 현미경 검사법의 공동 배양제시합니다. 이 3차원 모델은 종양-기질 상호 작용을 연구하고 암 치료제를 테스트하는 적절한 플랫폼을 제공합니다.

종양-기질 상호 작용 및 약물 발견을 연구하기 위한 새로운 기질 섬유아세포 변조 3D 종양 스페로이드 모델

이 프로토콜은 Caco2 결장 아데노암종 세포에서 3차원 스페로이드를 생성하고 성장시키는 새로운 견고하고 재현 가능한 배양 시스템을 제공합니다. 결과는 화학요법에 대한 반응을 포함하여 암 줄기 세포 생물학을 공부하는 이 접근의 적합성을 위한 개념증명을 제공합니다.

대장암 줄기세포를 연구하는 스페로이드의 3차원 모델

현재 프로토콜은 원발성 암세포에서 3D 종양 배양 모델을 생성하고 세포 생존력 분석 및 현미경 검사를 사용하여 약물에 대한 민감도를 평가하는 것을 설명합니다.

환자 유래 종양 샘플에서 3차원 스페로이드 설정 및 약물에 대한 민감도 평가

이 글에서는 3차원 종양 스페로이드를 구성하기 위한 표준화된 방법을 보여줍니다. 자동화된 이미징 시스템을 사용한 스페로이드 관찰 및 이미지 기반 딥러닝 분석을 위한 전략도 설명합니다.

약물 평가 연구를 위한 3D 종양 스페로이드 생성

여기에서는 항종양 항체의 중요한 암세포 사멸 기전인 ADCC 기전을 조절하는 화합물을 확인하는 방법을 제시합니다. NK 세포의 세포독성 효과는 트라스투주맙이 있는 유방암 세포 스페로이드에서 측정됩니다. 이미지 분석은 스페로이드에서 살아있는 킬러와 죽은 킬러와 표적 세포를 식별합니다.

종양 스페로이드 모델에서 항체 의존성 세포 독성 정량화: 약물 발견을 위한 응용

학습하세요 환자 유래 3D 스피로이드를 이용한 항암제 선별 방법을. 교수형 드롭 모델로 암 줄기 세포를 표적화하고 화학요법 내성을 연구하여 정밀의학 기반 맞춤형 치료법을 개발합니다.

암 줄기 세포를 표적으로 하는 반대로 신 생물 성 약 검열을 위한 생리학 환자 파생된 3D Spheroids

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