Name: 마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: 학습하세요 마우스 자궁의 자발적 운동성을 정량적으로 평가하는 ex vivo 방법을 통해 생식 기관 수축성과 자궁 이완제 효능을 분석하는 기술을. 이 연구는 월경통 치료제 개발에 활용됩니다.

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이 작품은 내부 IU 기금에 의해 지원되었다. AGO는 연구를 구상했다. XC 및 AGO는 기재된 실험의 설계에 관여하였다.  FL 및 AGO는 데이터를 분석하고 해석했습니다. KLL, JOB, FL은 모든 생체 내 실험을 수행하였다. FL은 MATLAB 스크립트를 작성했습니다. KLL, JOB, 그리고 AGO는 원고를 썼다.  모든 저자는 원고의 최종 버전을 읽고 승인했습니다.

동물을 가진 모든 절차는 인디애나 대학 의과 대학 (인디애나 폴리스, IN)의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 2-5개월 된 F2-129S-C57BL/6 성적으로 성숙한 암컷 마우스를 연구에 사용하였다.
주의 사항: 동물 및 생체 유해 물질로 작업할 때 실험실 코트, 마스크 및 장갑을 착용하여 안전을 보장합니다.
1. 솔루션 준비
<ol><li>포함 크렙스 버퍼를 준비, 130 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl2,1.2 mM NaH2PO4,0.56 mM MgCl2,25 mM NaHCO3,및 5 mM 포도당, pH 7.4. 순환 수조를 사용하여 37°C에서 완충온도를 유지하면서 5% CO2 및 95% O2를 함유하는 압축 가스의 혼합물로 크렙스 완충액을 연속하여 산소화한다. </li>
	<li>2.68 mM KCl, 1.47 mM KH2PO4,136.89 mM NaCl, 8.1 mM Na2HPO 4, pH 7.4를포함하는 덜베코의 인산완충식염수(DPBS)를 준비한다.</li>
</ol>2. 동물 준비
<ol><li>이소플루란 흡입을 사용하여 마우스를 마취 (3%) 폐 가스 청소와 함께. 철수 반사를 평가하여 적절한 마취를 보장하십시오. 뒤쪽 발가락을 꼬집어 움직임이 없음을 확인하여 반사 반응의 손실을 나타냅니다. 깊은 마취가 달성 된 후, 참수에 의해 동물을 안락사. 참고: 이소플루란은 평활근 팽창을 일으킬 수 있습니다. 따라서, 생식 기관 제제는 생체 내 실험을 시작하기 전에 적어도 15-30 분 동안 크렙스 완충제에서 광범위하게 세척되고 배양되어야 한다. 이소플루란은 피부에 닿을 때 자극과 불편함을 유발할 수 있으므로 주의해서 진행하십시오.</li>
	<li>종이 타월이 늘어선 큰 계량 보트에 몸을 놓습니다. 참고: 임신 한 여성 실험실 직원은 태아의 체중을 감소시키고 태아 골격 골화를 감소시키고 자발적 낙태의 위험을 증가시킬 수 있기 때문에 isoflurane을 가진 실험에 관여해서는 안됩니다8,9. CO2 흡입은 마우스를 안락사시키는 대용품으로서 사용될 수 있다.</li>
</ol>3. 에스트로스 사이클 스테이지 의 결정
<ol><li>작은 집게로 클리토리스를 들어 올려 질 오슘에 접근하고 10 μL의 DPBS를 함유 한 마이크로 파이펫 팁을 천천히 질에 삽입하십시오.<ol>
<li>마이크로파이펫 팁이 질 벽에 구멍을 뚫지 않도록 10- 30°의 각도로 오슘을 통해 삽입되었는지 확인합니다. 액체는 삽입 후에도 팁에 계속 표시되어야 합니다. 액체가 보이지 않는 경우에, 끝은 질로 너무 멀리 삽입되고, 질의 paracervical 지역은 천포되었을 지도 모릅니다.</li>
		<li>마이크로파이펫 끝으로 질 오슘 근육을 가볍게 잡아당겨 공기가 질에서 빠져나올 수 있도록 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>DPBS 10 μL로 2-3회 위아래로 파이펫팅하여 질 구멍을 천천히 세척하고 유리 슬라이드에 그려진 셀 현탁액을 놓습니다.</li>
	<li>반전된 상 대비 현미경을 사용하여 세포학적 분석을 통해 에스트로스 주기 단계를 결정합니다. 절차는 다른 곳에서 설명 한 대로 수행10,11. 세포 학적 분석을 수행하기 전에 세포 현탁액이 건조되지 않았는지 확인하십시오. 서스펜션은 필요한 경우 신선한 DPBS로 희석될 수 있다.</li>
</ol>4. 마우스 생식 기관 Ddissection
<ol><li>마우스를 척추 위치에 배치하고 사지를 확산하여 복부 골반 부위를 노출시하십시오.</li>
	<li>70% 에탄올로 스프레이하여 복부를 적시고 소독합니다.</li>
	<li>포셉을 사용하여 클리토리스보다 우수한 피부를 조심스럽게 들어 올립니다. 복막을 노출하기 위해 상지까지 하복부 영역의 측면 측면에 작은 횡절개를 합니다 (그림1A). 이 과정에서 외부 플랩이 형성됩니다. 작은 절개가 지속적으로 만들어지면 플랩의 크기가 증가합니다.</li>
	<li>조심스럽게 위장관을 노출하는 각막을 잘라 (그림1B). 자궁 경적 종종 peritoneum 의 밑에 직접 위치 할 수 있다는 것을 주의하는 것이 중요합니다, 그래서 조심스럽게 절개를하고이 자궁 운동성에 영향을 미칠 수 있기 때문에 뿔을 만지지 마십시오.</li>
	<li>집게를 사용하여 위장관을 덮는 근막과 지방 조직을 제거하십시오. 복강에서 다음 위장관 세그먼트를 제거: 십이지장, jejunum, 장, 장, 요양, 오름차순 및 횡결장 (그림1C).</li>
	<li>생식 기관을 찾으려면 먼저 안락사 후 무효로 인해 수축 된 외관을 가질 수있는 오줌 방광 (그림1C, "4")을 식별하십시오. 질은 오줌 방광의 밑에 있을 것입니다.</li>
	<li>음모 뼈의 합류에서 음모 심포지엄을 찾습니다 (방광에 가시적으로).</li>
	<li>가위를 사용하여, 신중하게 간 섬유 판염 조직을 통해 측면에 절개를함으로써 음모 심경을 제거하고 질을 추출하기위한 경로를 제공하고 (그림1D).</li>
	<li>외음부의 항문과 하부 사이에위치한 회음부를 통해 잘라.</li>
	<li>집게를 사용하여 질을 들어 올리고 천천히 직장을 절제하십시오.</li>
	<li>질에 장밋빛 포크로 분기 두 자궁 뿔을 식별합니다. 각 뿔의 끝에 복잡한 난관과 난소를 찾아, 이는 나머지 위장관 세그먼트 아래에 숨길 수 있습니다. 작은 해부 가위를 사용하여 복강 내의 뿔, 난관 및 난소를 연결하고 지지하는 인대를 제거하십시오.</li>
	<li>복강에서 질, 자궁, 난관 및 난소를 포함하는 생식 기관을 제거하십시오.</li>
	<li>단리된 생식 기관(그림1E)을 100 mm 페트리 접시에 DPBS 10 mL로 채워진 다. 자궁 경적을 압축하여 근중세균을 손상시키지 않도록 하십시오.</li>
	<li>집게와 외과 가위를 사용하여 자궁 뿔과 질을 둘러싼 결합 및 지방 조직뿐만 아니라 음부 부위의 모피를 제거하여 이미지 품질을 방해할 수 있습니다. 자궁 경적의 운동성을 허용하기 위해 넓은 인대를 제거하십시오.</li>
	<li>분리된 생식 기관을 신선한 DPBS로 두 번 세척하고 3mL의 산소 로고된 크렙스 용액으로 채워진 35mm 페트리 접시로 옮니다.</li>
</ol>5. 조직 화상 진찰
<ol><li>산소화된 크렙스 버퍼에 생식기관을 함유한 페트리 접시를 검은 표면에 놓습니다. 접시를 실온에서 유지합니다. 참고: 적외선 온난화 패드를 사용하여 37°C에서 조직을 유지할 수 있습니다.</li>
	<li>자발적인 수축이 시작될 수 있도록 15-30분 간 허용하십시오. 모든 유형의 디지털 비디오 장비를 사용하여 축 평면에서 10 분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록하십시오.</li>
	<li>시험 화합물로 보충된 산소화 된 크렙스 완충제를 함유한 페트리 접시로 제제를 옮김. 디지털 비디오 장비의 모든 유형을 사용하여 축 평면에서 약 10 분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.</li>
	<li>치료의 가역성을 평가하기 위해 DPBS의 10mL로 100mm 페트리 접시에 전체 생식 기관을 세척합니다.</li>
	<li>갓 산소를 공급받은 크렙스 버퍼로 페트리 접시에 준비를 옮김. 디지털 비디오 장비의 모든 유형을 사용하여 축 평면에서 약 10 분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.</li>
	<li>자발적인 자궁 운동성에 기계적으로 유도된 변화가 없도록 시험 화합물을 위한 비히클과 함께 보충된 산소화 된 Krebs 버퍼로 채워진 다른 35 mm 페트리 접시로 준비를 옮김. 이것은 중요한 제어입니다.</li>
	<li>비디오 푸티지를 컴퓨터 하드 드라이브로 전송합니다.</li>
</ol>6. 데이터 분석
<ol><li>컨트롤, 처리 및 세척 에피소드가 포함된 원본 비디오 푸티지의 비디오 편집 소프트웨어를 사용하여 클립을 만듭니다.</li>
	<li>MATLAB 소프트웨어와 제공된 스크립트(온라인 보충 자료 참조)를 사용하여 자발적인 자궁 운동성을 정량화합니다. 참고: 스크립트가 완벽하게 작동하려면 MATLAB용 컴퓨터 비전 도구 상자 추가 기능을 설치해야 합니다.<ol>
<li>MATLAB 스크립트를 열고 편집기 탭으로 이동한 다음 실행 을클릭합니다.</li>
		<li>첫 번째 비디오 파일을 선택하고 열기를 클릭합니다.</li>
		<li>팝업 대화 상자에 비디오 파일에 대한 레이블을 입력하고 확인을 클릭합니다.</li>
		<li>경적 이동 속도를 계산하는 데 필요한 시간 간격(들)을 입력합니다(Δ 유클리드 거리 /Δs).</li>
		<li>마우스 커서를 사용하여 비디오의 첫 번째 프레임에서 두 점을 선택합니다. 팝업 창에서 선택한 포인트를 추적에 사용해야 하는지 확인하라는 요청이 표시됩니다. 시작을 클릭하여 팝업 창에 표시되는 실시간 추적 프로세스를 시작합니다. 또는 점 재선택을 클릭하여 두 점을 다시 선택합니다.</li>
		<li>팝업 창에서 추적 프로세스의 정확도를 모니터링합니다.</li>
		<li>새 팝업 창에서 속도 대 시간 산란도표 및 거리 와 시간 분산도를 관찰합니다. FILE |을 선택하여 두 그림을 저장합니다. 데이터를 문서화하려면 동일한 창에서 와 같이 저장합니다.</li>
		<li>MATLAB 스크립트가 있는 동일한 디렉토리에서 MATLAB에서 자동으로 만든 PointTrackerData라는폴더를 찾습니다. 두 개의 별도 워크시트 탭에서 비디오에서 수집된 데이터 요소가 포함된 label_Data라는 Excel 파일을 식별합니다. 참고 : 모든 대체 모션 추적 소프트웨어는 자발적인 자궁 운동성을 정량화하는 데 사용할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>적절한 소프트웨어(예: Excel 또는 SigmaPlot 13)를 사용하여 통계 분석을 수행합니다.</li>
</ol>

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<li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452(2017).</li>
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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

여기에서, 우리는 난소, oviducts, 자궁 뿔 및 질을 포함하는 전체 설치류 생식 기관의 자발적인 수축성을 평가하기 위한 방법을 기술했습니다. 우리는 자발적인 자궁 운동성13에페닐레프린의 이완 효과를 입증하기 위해 유사한 방법을 사용했지만, 과거에는 데이터의 정량적 분석을 제공할 수 없었습니다. 이 작품에서는 MATLAB 모션 트래킹 모듈을 사용하여 정량적 운동성 데이터 분석을 위한 알고리즘을 개발했습니다. 이것은 약이 자궁 경활한 근육을 이완하거나 수축하는지 여부에 관계없이 자궁 수축을 조절하는 새로운 약물을 테스트하기위한 유용한 기술입니다. 이 모델의 주요 장점은 생식 기관이 손상되지 않고 모든 본질적인 자궁 내 세포 상호 작용을 보존한다는 것입니다. 특히,이 프로토콜은 특별한 장비를 필요로하지 않습니다. 자궁 격리는 간단한 돋보기로 수행 할 수 있으며 정교한 비디오 녹화 장비에 대한 요구 사항은 없습니다. 고해상도 디지털 카메라를 이미징에 사용할 수 없는 경우 개인 용 휴대 ...

주요 여성 기관으로서 자궁은 태아의 영양을 위해 생식에 매우 중요하며필수적입니다 1. 자궁은 3 개의 층으로 구성됩니다 : 회막, 근막 및 자궁 내막. myometrium는 자궁의 중요한 수축층이고 태아 납품에 있는 중요한 역할을 합니다. 자궁 내막은 자궁 구멍을 안감하는 가장 안쪽 층이고 태아 이식을 위해 필수적입니다. 생식 연령의 임신하지 않은 여성에서 자궁 내막 층은 월경 주기의 시작 부분에 매달 흘린다. 근막은 자궁에서 괴사 자궁 내막 조직을 지우는 데 필요한 자발적인 근심 수축을 유지함으로써이흘리기 과정에서 보조합니다 1.
불행 하 게도, 증가 근심 수축 월 경 질 등 부정적인 부작용귀 착될 수 있습니다., 또는 고통 스러운 생리 경련. 이것은 특히 젊은 여성과 nulliparous 여성2에서 볼 수 있습니다. 그러나, 월경기는 모든 여성을 위해 다르며 근심 수축의 강도에 따라 다릅니다. 강한 수축은 종종 심한 경련의 감각과연관3. 근위축성은 자궁초음파를 사용하여 가시화될 수 있으며 자궁내막파로 인식되기도 합니다. 자궁내막 슬루핑을 겪고 있는 자궁에서 생리 중 프로스타글란딘의 향상된 방출4은 근심시험 과수축성 증가에 기여하여 자궁 근육의 허혈 및 저산소증을 초래하고, 따라서 증가시키는 것으로 여겨진다. 통증3.
심한 월경불순은 일부 여성의 일상 적인 활동을 방해 할 수 있으며 여성의 3 ~ 33 %는 매우 심한 통증을 가지고 있으며, 이는 여성이 각 생리 주기5일 동안 침대에 누워있을 수 있습니다. 월경불협은 연령, 국적,경제상태에관계없이 생식연령여성의 부인과이병의 주요 원인5. 월경불순의 추정 된 보급은 생식 연령5의여성에서 45 %에서 93 %까지 높고 가변적입니다.  월경불경 관련 통증은 여성의 일상 생활에 영향을 미치며 청소년의 학업 성적 저하, 수면의 질 저하, 일상 활동의 제한 및 기분 변화5.
가혹한 월경불위를 경험하는 많은 여자는 그들의 고통을 구호하기 위하여 창구 판매 약물에 의지합니다. 이러한 창구 판매 약물은 프로스타글란딘의 형성을 방지하는 사이클로옥시게나제 (COX) 억제제를 함유하고있습니다6. 그러나 COX 억제제는 불리한 심혈관 사건과 관련이 있으며, 월경불경을 가진 여성의 약 18%는이러한 억제제 7에 반응하지 않습니다. 따라서 생리통을 줄이기 위해 새로운 약물이 필요합니다. 자궁의 수축성 이상이 월경불허의 발병기전에 기여하기 때문에 한 가지 가능한 전략은 자궁 이완제의 사용일 수 있습니다.
그것은 자연스럽 게 발생 하는 자발적인 심근 파 같은 수축의 모델에서 잠재적인 이완 제 약물의 효과 정량화 하는 것이 도움이. 그러나, 지금까지, 온전한 자궁에서 근육 이완 약물을 시험하기 위한 효율적인 생체 내 생체 내 방법은 설명되지 않았다. 현재, 아이소메트릭 장력 측정은 이완제 약물 효과를 평가하는 데 사용됩니다. 이러한 측정 동안, 자궁 근육 스트립은 조직 목욕에서 예압하에 일정한 길이로 유지되며 자궁 근육 수축의 힘은 이완제 약물의 존재 또는 부재 에서 옥시토신 자극 전후로 기록됩니다. 이 방법은 매우 유용하지만, 그것은 비싼 장비가 필요합니다. 또한, 등각부종 수축은 자연그대로 자궁에서 자연적으로 발생하는 자발적인 근심파와 유사한 수축과 유사하지 않습니다. 유일하게, 설치류에 있는 자궁 근심파는 전체 생식 기관 (난소, 난관, 자궁 및 질)가 완충액에서 유지될 때 자궁 혼 운동성으로 구상될 수 있습니다. 여기서, 우리는 산소화 된 크렙스 버퍼를 포함하는 페트리 접시에 배치 된 그대로 마우스 자궁의 자발적인 운동성을 모니터링하기위한 생체 내 방법을 제시한다. 또한 MATLAB 모션 트래커를 활용한 운동성 정량화 알고리즘에 대해서도 설명합니다. 이 새로운 접근 방식은 자연적으로 발생하는 치료법과 합성 화합물의 이완 잠재력을 테스트하기 위한 쉽고 저렴한 대안을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>에피네프린 염산염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; E4642&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 PBS</td><td>Fisher Sceintific&nbsp;</td><td>17-512Q</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 200 PROOF</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>시그마-알드리치</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 &middot; 2H2O</td><td>시그마-알드리치</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0751</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp; &middot; 6H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893-2374</td><td></td></tr><tr><td>해부 Extra-Fine-Pointed Precision Splinter</td><td>Forceps Fisher Sceintific</td><td>13-812-42</td><td></td></tr><tr><td>곡선 경화 파인 아이리스 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>14091-09</td><td></td></tr><tr><td>해부 고성능 모듈러 스테레오현미경</td><td>Leica</td><td>MZ6&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>액티브 쿨링 시스템이 있는 디지털 5 메가픽셀 컬러 현미경 카메라</td><td>Leica</td><td>&nbsp; DFC425 C</td><td></td></tr><tr><td>스테레오마스터 현미경 광섬유 광원</td><td>Fisher Sceintific&nbsp;</td><td>12-562-21</td><td></td></tr><tr><td>무게 보트</td><td>Fisher Sceintific&nbsp;</td><td></td><td></td>WB30304</tr><tr><td>컨버터 Astound 표준 수술 가운&nbsp;</td><td>카디널 헬스&nbsp;</td><td>9515</td><td>작은, 중간 또는 큰</td></tr><tr><td>장갑</td><td>McKesson Corporation</td><td>20-1080</td><td>작은, 중간 또는 큰 장갑; 파우더-프리 멸균 라텍스 또는 니트릴 수술용 장갑</td></tr><tr><td>&nbsp; 페트리 디쉬</td><td>Corning Falcon</td><td>351029</td><td>100 mm</td></tr><tr><td>&nbsp; 페트리 디쉬</td><td>Corning Falcon</td><td>353001</td><td>35 mm</td></tr><tr><td>95% O2- 5% CO2 가스 혼합물</td><td>Praxair</td><td>&nbsp; MM OXCD5-K</td><td></td></tr><tr><td>귀고리 마스크</td><td>Valumax International</td><td>5430E-PP</td><td></td></tr><tr><td>DSLR 24.2MP 카메라</td><td>Canon</td><td>EOS Rebel T6i</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>N/A</td><td>버전 2019 이상</td></tr></tbody></table>

마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 matlab 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 ex vivo 방법

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

월경기, 또는 고통스러운 경련은, 여성의 월성과 관련된 가장 흔한 증상이며, 그 심각성은 여성의 일상 생활을 방해 할 수 있습니다. 여기에서, 우리는 자궁 수축을 감소시키는 새로운 약 시험을 위한 중요한 역할을 할 것입니다 쉽고 저렴한 방법을 제시합니다. 이 방법은 산소화 된 Krebs 버퍼를 포함하는 페트리 접시에서 생체 내 생체를 유지 했을 때 자발적인 운동성을 나타내는 전체 마우스 생식 기관의 독특한 능력을 활용합니다. 이 자발적인 운동성은 자궁내막파로 불리는 인간 자궁의 파도와 같은 근심 활성과 유사합니다. 이 방법의 효과를 입증하기 위해 잘 알려진 자궁 이완제 약물 인 피네프린을 사용했습니다. 우리는 전체 마우스 생식 기관의 자발적인 운동성이 이 페트리 접시 모델에서 1 μM 에피네프린에 의해 신속하고 가역적으로 억제될 수 있음을 입증합니다. 자궁 운동성의 변화를 문서화하는 것은 일반 스마트 폰 이나 정교한 디지털 카메라를 사용하여 쉽게 수행 할 수 있습니다. 우리는 모션 트래킹이 자궁 경적 운동의 속도를 측정하여 자발적인 자궁 운동성 변화를 정량화할 수 있도록 MATLAB 기반 알고리즘을 개발했습니다. 이 ex vivo 접근법의 주요 장점은 생식 기관이 전체 실험 전반에 걸쳐 그대로 유지되어 모든 본질적인 자궁 내 세포 상호 작용을 보존한다는 것입니다. 이 접근의 중요한 한계는 자궁의 10-20%까지 자발적인 운동성을 전시할 수 없다는 것입니다. 지금까지, 이것은 페트리 접시 모델에서 자발적인 자궁 운동성을 평가하기 위한 최초의 정량적 생체 내 방법이다.

도 1은 본 프로토콜에 기재된 전체 생식관 격리 절차 동안 촬영된 대표적인 이미지를 나타낸다. 비디오 품질을 저하시킬 수 있는 모피로 버퍼를 오염시키는 것을 방지하기 위해 마우스 본체를 70% 에탄올로 적십시켰습니다. 프로토콜의 해부 섹션에 대한 주요 벤치 마크는 오줌 방광을 찾는 것입니다. 자궁과 질은 오줌 방광에 열등하게 위치할 것입니다.
프로토콜을 테스트하기 위해, 우리는 에피네프린으로 전체 생식 기관을 치료했습니다. 피 네 프 린 은 자 두 근 이완을 일으키는 원인이 되는 잘 알려져 있다. 이 호르몬은 내 생 부 신 수 질에서 생산 하 고 포유류에서 스트레스 호르몬 역. 우리는 실험에서 1 μM 에피네프린을 사용했습니다. 이는 최대 반응을 유발하는 것으로 알려진 포화농도(12)이다. 4개의 실험의 시리즈를 수행하였다. 모든 시험에서, 1 μM 피네프린가 자발적으로 자궁 운동성을...

자궁 수축은 여성의 복지에 중요합니다. 그러나 병리학적으로 수축성이 증가하면 월경불순, 특히 젊은 여성에게 발생할 수 있습니다. 여기에서, 우리는 월경경 치료에 사용될 수 있는 평활근 이완제의 효능의 빠른 평가를 허용하는 간단한 생체 내 준비를 기술한다.

마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

우리의 프로토콜은 그대로 자궁의 자발적인 운동성을 평가하기위한 최초의 정량적 전 생체 내 방법을 제공하기 때문에 중요합니다. 이 새로운 접근 방식은 합성 화합물에서 자연적으로 발생하는 치료법의 이완제 잠재력을 테스트하기위한 쉽고 저렴한 대안을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 모든 자궁 내 세포 상호 작용이 실험 전반에 걸쳐 그대로 남아 있다는 것입니다.자궁의 수축이상은 자궁 이완제 치료에 유용할 수 있는 난종증과 연관된다. 이 방법은 새로운 이완제를 테스트하는 쉬운 방법을 제공합니다. 에스트라스트 사이클 스테이지를 확인한 후 마우스를 척추 위치에 배치하고 사지를 퍼져 복부 골반 부위를 노출시한다.복부를 70%에탄올로 적시고, 집게를 사용하여 클리토리스보다 우수한 피부를 조심스럽게 들어올립니다. 복막을 노출하기 위해 상복부 영역의 측면 측면에 작은 횡선 절개를 합니다. 자궁 뿔을 손상시키지 않고 위장관을 노출시키기 위해 복막을 조심스럽게 잘라내고, 집게를 사용하여 위장관을 덮는 근막과 지방 조직을 제거합니다.십이지장, 제주넘, 일리움, cecum, 그리고 오름차순과 횡결 결장제거합니다. 오줌 방광을 찾아 오줌 방광 의 밑에 직접 찾아내는 질을 찾아내는. 음모 뼈의 합류에 음모 대칭을 찾아, 방광에 caudal, 조심스럽게 접근을 얻고 질 추출을위한 경로를 제공하기 위해 중간 섬유 카르티라기누스 조직을 통해 음모 심기의 측면에 절개를 만들기 위해 가위를 사용합니다.외음부의 항문과 하부 사이에 위치한 회음부를 잘라내고, 집게를 사용하여 직장을 느리게 절인 것을 허용합니다. 질에 포크로 분기 두 자궁 뿔을 식별하고 각 뿔의 끝에 복잡한 oviduct와 난소를 찾을 수 있습니다. 자궁 뿔을 올바르게 식별하는 것은 조직이 손상되지 않도록하는 절차에 중요합니다.작은 해부 가위를 사용하여 복강 내에서 뿔, oviducts 및 난소에 연결하고 지원하는 인대를 제거하고 질, 자궁, oviducts 및 난소를 제거하십시오. Dulbecco의 PBS의 10 밀리리터를 포함하는 100 밀리미터 페트리 접시에 전체 고립 된 생식 기관을 전송합니다. 집게와 외과 가위를 사용하여 자궁 뿔과 질을 둘러싼 결합 및 지방 조직뿐만 아니라 이미지 품질을 방해 할 수있는 음모 부위의 털을 제거하십시오.넓은 인대를 제거하여 자궁 뿔의 운동성을 허용하고 세척당 신선한 덜벡코의 PBS로 조직을 두 번 씻은 후 고립된 생식 기관을 35mm 페트리 접시에 산소가 공급된 크렙스 용액 3밀리리터를 함유합니다. 자발적인 운동성 이미징의 경우, 페트리 접시를 실온의 검은 표면에 놓고 15~30분 동안 자발적인 수축이 시작되도록 합니다. 움직임을 관찰할 수 있을 때 모든 유형의 디지털 비디오 장비를 사용하여 축 평면에서 10분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.다음으로, 시험 화합물로 보충된 산소형 크렙스 버퍼를 함유한 페트리 접시에 제제를 옮기고 같은 방식으로 10분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록한다. 기록 기간이 끝나면 100mm 페트리 접시에 덜벡코PBS의 10 밀리리터로 생식 기관 전체를 세척하고, 시료를 갓 산소로 공급한 크렙스 버퍼의 새로운 페트리 접시로 옮겨 치료의 가역성을 평가한다. 마지막 두 녹음과 동일한 방식으로 약 10 분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.그런 다음 자발적인 자궁 운동성에 기계적으로 유도된 변화가 없도록 테스트 화합물에 대한 차량으로 보충된 산소형 크렙스 버퍼로 채워진 다른 35mm 페트리 접시로 제제를 전송한다. 생식 기관 준비는 에피네프린이 없는 경우 패널 A와 C에서 높은 운동성을 나타냈다. 그러나 이 표현형은 하나의 마이크로 뮬러 에피네프린의 존재와 패널 B에 휴면.여기서, 에피네프린 투여 및 자발적운동성 회복의 샘플 데이터 분석이 도시되고, 생식기관에 대한 호르몬의 효과가 생식기관에 대한 부작용이 시험 전, 도중, 및 검사 후 의외의 조직 기록으로부터 정량화될 수 있는 방법을 보여준다. 그렇지 않으면 자발적인 수축이 관찰되지 않을 것이다 압축하거나 자궁 뿔을 오버 스트레칭하지 않는 것이 중요합니다. 우리의 방법은 또한 자궁의 수축을 증가시킬 수 있는 화합물을 테스트하기 위해 사용될 수 있습니다.이 절차는 임신의 초기 단계에서 임신 마우스 자궁에 적용될 수 있습니다. 이 실험은 처리량 약물 스크리닝을 위한 6개의 잘 플레이트 형식으로 업그레이드될 가능성이 있습니다.

ex-vivo-method-for-assessing-mouse-reproductive-tract-spontaneous

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

단핵구는 선천성 면역의 핵심 조절자이며 말초 단핵 식세포 시스템의 재생과 염증의 경우에 중요한 역할을 합니다. 이 원고는 단핵구 동원 메커니즘을 연구하기 위해 마우스 칼바리아 골수를 실시간으로 이미징하는 절차를 설명합니다.

마우스 골수 단핵구를 추적<em&gt; 생체</em

이 원고는 임신 중 자궁 내 압력을 측정하기 위해 마우스에 텔레미터를 이식하는 프로토콜을 제공합니다.

자궁 원격 측정은 마우스 수축 압력을 측정하는<em&gt; 생체</em

이 프로토콜은 생쥐의 임신 중 모계 혈관 구조의 변화를 평가하는 기술을 설명합니다. 입체학적 방법을 사용하여 탈피나선동맥의 리모델링을 정량적으로 평가하고 결과는 면역조직화학을 사용하여 정성적으로 확인했습니다.

마우스 자궁에서 임신 기간 동안 산모의 혈관 재 평가

마우스 널리 임신 생물학을 공부 하는 데 사용 됩니다. 그러나, 임신 종료는 이러한 연구는 경도 조사 하는 걸로 하 고 동물의 큰 숫자의 사용을 필요로 필요 합니다. 따라서 조기 발견에 대 한 높은 주파수 초음파의 비-침략 적 기법 및 임신 마우스에서 후 이식 이벤트 모니터링 설명 합니다.

마우스에서 초기 임신 특성에 대 한 3 차원 높은-주파수 초음파의 새로운 사용

정액 액 화는 정액 젤에서 해방 될 정자에 대 한 필요 합니다. 이 연구는 여성 재생산 지역 포스트 성교에서 정액을 수집 하 고 정액 액 화 시간을 측정 하기 위한 절차를 제공 합니다.

후에 쥐에 있는 정액 액의 측정 및 여성 재생산 지역에서 정액 짝짓기의 컬렉션

여기, 선물이 붙일 레이블된 인간의 자궁내 막 조각 쥐에 투입의 라이브 이미징에 대 한 프로토콜. 메서드를 모니터링을 통해 endometriotic 병 변 크기에 선택의 약의 효과 실시간으로 형광 기자에 의해 방출 되는 형광의 정량화를 공부 하 고 수 있습니다.

궁의 분리 마우스 모델에서 병 변 크기의 비 침 투 적인 모니터링

정자는 성공적으로 난 모 세포를 비료를 통해 이동 해야 합니다. 여기에서, 우리는 C에서 정자 이동 측정에 대 한 분석을 설명 합니다 .  이 분석은 결합 후 자 궁 내 정자 분포에 대 한 정량적 데이터 뿐만 아니라 속도, 방향 속도 및 반전 주파수를 제공 할 수 있습니다.

정자 지도 및 운동 성 아닌 간 남녀 양성 생식 기관에서 측정

이 프로토콜은 전체 및 조직학적 변화와 상관관계가 있는 초음파 영상을 사용하여 자궁내막암의 유도성 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 형태학적 변화의 진행을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

임신 확립은 복잡한 배아와 자궁 누화를 포함하는 역동적인 과정입니다. 이러한 과정에 대한 산모의 자궁 환경의 정확한 기여는 여전히 활발한 조사 영역으로 남아 있습니다. 여기에서는 이러한 연구 질문을 해결하기 위해 생체 내 동물 모델을 설계하는 데 도움이 되는 자세한 프로토콜이 제공됩니다.

난소 절제된 마우스 모델에서 임신 확립에 대한 자궁 기여도를 연구하는 방법

이 연구는 임상적으로 중요한 자궁내막증의 하위 유형인 자궁내막종을 시뮬레이션하도록 특별히 설계된 새로운 마우스 모델을 소개합니다. 이 모델은 C57BL/6J 마우스를 활용하여 자궁내막종 관련 불임의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 밝히는 것을 목표로 하며, 현재 생식 의학의 지식 격차를 해소할 수 있는 정교한 도구를 제공합니다.

자궁내막종과 관련된 불임을 연구하기 위한 실험적 마우스 모델 수립

학습하세요 마우스 자궁의 자발적 운동성을 정량적으로 평가하는 ex vivo 방법을 통해 생식 기관 수축성과 자궁 이완제 효능을 분석하는 기술을. 이 연구는 월경통 치료제 개발에 활용됩니다.

마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법

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