마우스 생식 기관 자발적 운동성 및 데이터 분석을 위한 MATLAB 기반 자궁 운동 추적 알고리즘을 평가하기 위한 Ex Vivo 방법

우리의 프로토콜은 그대로 자궁의 자발적인 운동성을 평가하기위한 최초의 정량적 전 생체 내 방법을 제공하기 때문에 중요합니다. 이 새로운 접근 방식은 합성 화합물에서 자연적으로 발생하는 치료법의 이완제 잠재력을 테스트하기위한 쉽고 저렴한 대안을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 모든 자궁 내 세포 상호 작용이 실험 전반에 걸쳐 그대로 남아 있다는 것입니다.

자궁의 수축이상은 자궁 이완제 치료에 유용할 수 있는 난종증과 연관된다. 이 방법은 새로운 이완제를 테스트하는 쉬운 방법을 제공합니다. 에스트라스트 사이클 스테이지를 확인한 후 마우스를 척추 위치에 배치하고 사지를 퍼져 복부 골반 부위를 노출시한다.

복부를 70%에탄올로 적시고, 집게를 사용하여 클리토리스보다 우수한 피부를 조심스럽게 들어올립니다. 복막을 노출하기 위해 상복부 영역의 측면 측면에 작은 횡선 절개를 합니다. 자궁 뿔을 손상시키지 않고 위장관을 노출시키기 위해 복막을 조심스럽게 잘라내고, 집게를 사용하여 위장관을 덮는 근막과 지방 조직을 제거합니다.

십이지장, 제주넘, 일리움, cecum, 그리고 오름차순과 횡결 결장제거합니다. 오줌 방광을 찾아 오줌 방광 의 밑에 직접 찾아내는 질을 찾아내는. 음모 뼈의 합류에 음모 대칭을 찾아, 방광에 caudal, 조심스럽게 접근을 얻고 질 추출을위한 경로를 제공하기 위해 중간 섬유 카르티라기누스 조직을 통해 음모 심기의 측면에 절개를 만들기 위해 가위를 사용합니다.

외음부의 항문과 하부 사이에 위치한 회음부를 잘라내고, 집게를 사용하여 직장을 느리게 절인 것을 허용합니다. 질에 포크로 분기 두 자궁 뿔을 식별하고 각 뿔의 끝에 복잡한 oviduct와 난소를 찾을 수 있습니다. 자궁 뿔을 올바르게 식별하는 것은 조직이 손상되지 않도록하는 절차에 중요합니다.

작은 해부 가위를 사용하여 복강 내에서 뿔, oviducts 및 난소에 연결하고 지원하는 인대를 제거하고 질, 자궁, oviducts 및 난소를 제거하십시오. Dulbecco의 PBS의 10 밀리리터를 포함하는 100 밀리미터 페트리 접시에 전체 고립 된 생식 기관을 전송합니다. 집게와 외과 가위를 사용하여 자궁 뿔과 질을 둘러싼 결합 및 지방 조직뿐만 아니라 이미지 품질을 방해 할 수있는 음모 부위의 털을 제거하십시오.

넓은 인대를 제거하여 자궁 뿔의 운동성을 허용하고 세척당 신선한 덜벡코의 PBS로 조직을 두 번 씻은 후 고립된 생식 기관을 35mm 페트리 접시에 산소가 공급된 크렙스 용액 3밀리리터를 함유합니다. 자발적인 운동성 이미징의 경우, 페트리 접시를 실온의 검은 표면에 놓고 15~30분 동안 자발적인 수축이 시작되도록 합니다. 움직임을 관찰할 수 있을 때 모든 유형의 디지털 비디오 장비를 사용하여 축 평면에서 10분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.

다음으로, 시험 화합물로 보충된 산소형 크렙스 버퍼를 함유한 페트리 접시에 제제를 옮기고 같은 방식으로 10분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록한다. 기록 기간이 끝나면 100mm 페트리 접시에 덜벡코PBS의 10 밀리리터로 생식 기관 전체를 세척하고, 시료를 갓 산소로 공급한 크렙스 버퍼의 새로운 페트리 접시로 옮겨 치료의 가역성을 평가한다. 마지막 두 녹음과 동일한 방식으로 약 10 분 동안 자발적인 자궁 운동성을 기록합니다.

그런 다음 자발적인 자궁 운동성에 기계적으로 유도된 변화가 없도록 테스트 화합물에 대한 차량으로 보충된 산소형 크렙스 버퍼로 채워진 다른 35mm 페트리 접시로 제제를 전송한다. 생식 기관 준비는 에피네프린이 없는 경우 패널 A와 C에서 높은 운동성을 나타냈다. 그러나 이 표현형은 하나의 마이크로 뮬러 에피네프린의 존재와 패널 B에 휴면.

여기서, 에피네프린 투여 및 자발적운동성 회복의 샘플 데이터 분석이 도시되고, 생식기관에 대한 호르몬의 효과가 생식기관에 대한 부작용이 시험 전, 도중, 및 검사 후 의외의 조직 기록으로부터 정량화될 수 있는 방법을 보여준다. 그렇지 않으면 자발적인 수축이 관찰되지 않을 것이다 압축하거나 자궁 뿔을 오버 스트레칭하지 않는 것이 중요합니다. 우리의 방법은 또한 자궁의 수축을 증가시킬 수 있는 화합물을 테스트하기 위해 사용될 수 있습니다.

이 절차는 임신의 초기 단계에서 임신 마우스 자궁에 적용될 수 있습니다. 이 실험은 처리량 약물 스크리닝을 위한 6개의 잘 플레이트 형식으로 업그레이드될 가능성이 있습니다.