Name: 키토산 필름에 인간 치주 인대 세포 스페로이드의 형성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: 학습하세요 키토산 필름을 이용한 인간 치주 인대 세포 스페로이드 배양법을 통해 재생의학 연구를 진행하세요. 이 3D 배양 시스템은 자가재생 및 골분화 능력을 향상시켜 치주 질환 치료에 활용됩니다.

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이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC 81700978), 중앙 대학 (1504219050), 상하이 자연 과학 재단 (17ZR1432800), 상하이 의료 탐사 프로젝트 ( 17411972600).

연구 프로토콜은 동지대학교 학교및병원윤리위원회의 승인을 받았습니다. 모든 환자는 서면 에 입각한 동의를 제공했습니다.
1. PDL 세포 격리
<ol><li>PDL 세포 배양을 위한 증식 배지를 만드세요: α-MEM 배지에 10% FCS와 100 U/mL 펜/스트렙을 보충했습니다.</li>
	<li>얼음이 담긴 용기를 준비하여 고립된 세 번째 어금니를 옮김을 옮김을 옮김을 준비합니다.</li>
	<li>오토클레이브를 사용하여 수술 기구를 살균하십시오.</li>
	<li>일반 인체는 동지시대학교 치과병원 과 병원에서 성인(18-28세)으로부터 3번째 어금니를 추출합니다.</li>
	<li>세 번째 어금니를 증식 배지에 넣고 4 °C에서 실험실로 옮니다.</li>
	<li>추출된 치아를 멸균 된 100mm 페트리 접시에 놓고 생물학적 위험 층류 흐름 후드 내에서 작동합니다.</li>
	<li>추출된 치아를 세척하기 위해 10 mL의 PBS를 추가합니다. 세탁 단계를 두 번 반복합니다.</li>
	<li>멸균 메스를 사용하여 PDL을 뿌리에서 부드럽게 분리합니다. 참고 : PDL은 치은 또는 정점 조직에서 오염을 방지하기 위해 뿌리의 중간 세 번째 부분에서 긁어해야합니다.</li>
	<li>멸균 된 메스 블레이드의 도움으로 1-2mm 조각으로 PDL을 다듬습니다.</li>
	<li>PDL 단편을 3-4 mL의 증식 배지로 채워진 T-25 배양 플라스크에 놓습니다.</li>
	<li>가습공기와 함께 5% CO2에서 37°C에서 인큐베이터에서 샘플을 배양하였다.</li>
	<li>PDL 세포의 자성장 후 배양 배지를 변화시큐어가 관찰하였다. 그것은 일반적으로 소요 1-2 PDL 세포의 파생주. 역상 대조 현미경을 통해 PDL 세포의 성장을 관찰하십시오.</li>
	<li>그 후 일주일에 두 번 배양 매체를 변경합니다.</li>
	<li>PDL 세포가 합류에 도달했을 때, 1:4의 비율로 배양 된 세포 (대원 1).</li>
	<li>매일 세포 성장을 관찰하고 일주일에 두 번 배양 배지를 변경합니다.</li>
	<li>세포가 80 % 합류를 달성 한 후 1 :4의 비율로 각 후속 통로를 수행합니다. 세포 파종을 위해 3-5세대 PDL 세포를 사용한다.</li>
</ol>2. 키토산 필름 준비
<ol><li>1% (v/v) 아세트산 용액을 준비하려면 깨끗한 유리 비커에 이중 증류수 495 mL에 5 mL의 아세트산을 추가하십시오.</li>
	<li>1 % w / v 키토산 용액의 제조를 위해 5g의 키토산 분말 (평균 분자량 400 kDa, 85 % 아세틸화)을 측정하고 1 % (v / v) 아세트산 용액의 495 mL를 추가하십시오.</li>
	<li>60°C에서 교반 막대 및 자기 교반 플레이트로 준비된 용액을 24시간 동안 저어줍니다.</li>
	<li>키토산의 완전한 용해를 보장하기 위해 제조된 용액을 오토클레이브한다. 참고: 이 단계에서 실험을 일시 중지할 수 있습니다.</li>
	<li>키토산 필름을 형성하려면 0.25 mL / cm 2에서 조직 배양 폴리스티렌 (TCPS)접시에 1 % w / v 키토산 용액을 추가하십시오. 예를 들어, 0.5 mL의 1% w/v 키토산 용액을 24 –well 플레이트 중 하나에 추가합니다.</li>
	<li>TCPS 접시를 60°C에서 오븐에서 24시간 동안 건조하여 키토산 필름을 형성한다.</li>
	<li>0.5 N 수산화 나트륨 (NaOH)을 준비하십시오. 한 번에 조금씩 NaOH 10 g을 마그네틱 교반 막대를 사용하여 대량의 이중 증류수로 저은 다음 용액을 희석하여 0.5 L을 만듭니다. 참고: 물에 NaOH를 추가하십시오- 단단한 NaOH에 물을 추가하지 마십시오. NaOH를 만지지 마십시오! 그것은 화학 화상을 일으킬 수 있습니다.</li>
	<li>0.5 N NaOH로 키토산 필름을 중화. 0.5 mL의 0.5 n NaOH 용액을 2시간 동안 24웰 플레이트의 한 웰에 추가합니다.</li>
	<li>이중 증류수로 키토산 필름을 세 번 씻으소서. 참고: 이 단계에서 실험을 일시 중지할 수 있습니다.</li>
	<li>세포 파종 에 앞서, 실온에서 밤새 70 % 알코올에 키토산 코팅 24 웰 플레이트를 살균.</li>
	<li>실온에서 PBS로 키토산 코팅 플레이트를 3회 헹구어 줍니다.</li>
	<li>실온에서 밤새 자외선 하에서 처리하여 키토산 코팅 플레이트를 살균합니다.</li>
</ol>3. 셀 시딩
<ol><li>37°C에 예온 증식 배지 PBS 용액 및 트립신/EDTA 용액.</li>
	<li>T-75 세포 배양 플라스크로부터 상급체를 버린다.</li>
	<li>10 mL의 PBS 용액으로 동수 PDL 세포를 세척하십시오.</li>
	<li>PBS 솔루션을 폐기합니다.</li>
	<li>T-75 세포 배양 플라스크에 트립신/EDTA 용액 1mL를 추가합니다.</li>
	<li>37 °C에서 3 분 동안 트립신 / EDTA 용액으로 세포를 배양하십시오.</li>
	<li>T-75 세포 배양 플라스크에 3 mL의 증식 배지를 추가하여 트립신의 소화 과정을 종료합니다.</li>
	<li>제조된 세포 현탁액을 15 mL 원점 원심분리관으로 옮김.</li>
	<li>300 x g 및 실온에서 5 분 동안 현탁액을 원심 분리합니다.</li>
	<li>15 mL 원점 원심 분리관에서 상급자를 버리고 증식 배지의 500 μL에서 세포 펠릿을 다시 현탁시합니다.</li>
	<li>혈세포계로 PDL 세포를 세다.</li>
	<li>종자 PDL 세포는 0.5 x 104,1 x 104,3 x 104,및 6 x 104 세포 /cm2의 밀도에서.</li>
	<li>가습공기와 함께 5% CO2에서 37°C에서 인큐베이터에서 키토산 필름상에 PDL 세포를 배양하였다.</li>
	<li>그 후 일주일에 두 번 배양 매체를 변경합니다.</li>
	<li>1일, 2일, 3일, 4일 및 5일에는 역상 대조 현미경을 통해 세포 형태를 매일 관찰합니다.</li>
</ol>4. 세포 생존
<ol><li>배양 후 1, 3, 및 6일 후, 상업적 생존/세포 독성 키트를 사용하여 세포의 생존을 결정한다.</li>
	<li>15 mL 튜브에서, 5s에 대한 소용돌이에 의해 PBS에서 2 mM의 칼세인-AM 및 4 mM의 신선한 용액의 2 mL을 준비한다. 참고 : 어둠 속에서 프로세스를 유지합니다.</li>
	<li>배양 배지를 제거하고 PBS에서 스페로이드를 세척합니다.</li>
	<li>2 mM calcein-AM 및 4 mM 에티듐 호모디머를 포함하는 PBS의 인큐베이트 스페로이드를 어둠 속에서 실온에서 30 분 동안 배양한다.</li>
	<li>PBS에서 스페로이드를 두 번 헹구세요. 24웰 플레이트 중 한 우물에서 나온 스페로이드의 경우 매번 2 mL의 PBS를 사용하십시오.</li>
	<li>10x 또는 20배 배율을 사용하여 형광 현미경을 사용하여 샘플을 관찰합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

본 연구는 기존의 2D 단층 세포 배양과 관련된 몇 가지 한계를 극복하기 위해 3D 세포 배양 시스템을 도입하였다. 프로토콜에 따르면, PDL 세포 스페로이드는 키토산 필름상에 세포를 배양함으로써 성공적으로 형성되었다. 우리의 이전 연구는 스페로이드 형성이 PDL 세포의 자기 갱신 및 골성 분화 능력을 증가시키는 것을 보고했다14. TCPS에서 세포를 수확하는 효소를 사용하는 대신, PDL 세포 스페로이드는 단순히 배지를 몇 번14번피펫팅하여 키토산 필름에서 수확할 수 있었다. 따라서, ECM 및 세포간 접합부는 잘 보존될 수 있다.
이 프로토콜의 중요한 단계는 다음과 같습니다: (1) 수술 기구 및 키토산 필름이 세포 배양을 위해 살균되는지 확인; (2) 치은질 또는 정점 조직에서 오염을 피하기 위해 뿌리의 중간 세 번째 부분에서 PDL을 긁어; (3) PDL 세포의 성공적인 스페로이드 형성을...

치주염은 주로 치석 1에의해 초기화되며 치주 인대 (PDL), 폐포 뼈 및 시멘트를 포함한 치주 조직의 손상을 특징으로합니다. 치주염에 대한 현재의 치료법은 일반적으로 활성 질환의 진행을 예방하는 데 성공적이지만 손실 된 치주 조직의 재생은 임상 적 과제로 남아 있습니다. 최근, 현재 치료2,3,4의 단점을 극복하기 위해 치주조직 재생을 위한 세포기반 접근법에서 중요한 진전이 이루어지고 있다.
우리의 이전 체계적인 검토는 PDL 세포가 치주재생을 위한 중대한 잠재력을 보였다는 것을 밝혔습니다 5. 종래, PDL 세포는 조직 배양 폴리스티렌(TCPS)과 같은 2차원(2D) 기판에 배양된다. 그러나, PDL 세포의 특징적인 변화는 시험관내 배양 동안 관찰되었다 6. 이러한 현상은 아마도 2D TCPS가 생체 내 3차원(3D) 미세환경7과다르기 때문일 것이다. 2D 기질에서 배양된 세포에 비해, 3D 미세환경에서 성장한 세포는생체내 세포8과 더 유사성을 나타낸다. 따라서, 3D 세포 배양 모델은 기존의 2D 단층 세포 배양에 대한 유망한 대안을 제공한다.
기존의 3D 배양 방법은 3D 생체 재료로 세포를 캡슐화하는 것입니다. 3D 생체 재료에 캡슐화 된 세포와 비교하여, 세포 스페로이드는 이물질이 없는 세포의 응집체이기 때문에 생체 내상황을 더 밀접하게 모방9,10,11, 12. 세포 스페로이드는 섬유넥틴 및 라미닌(13)을 포함하는 세포외 매트릭스(ECM) 성분의보존을 통해 MSC 생체활동을 촉진한 것으로 보고된다. 종래의 PDL 세포 배양 모델을 개선하기 위해, 우리는 최근에 키토산필름(14)에PDL 세포의 스페로이드 형성을 기반으로 하는 3D PDL 세포 배양 방법을 개발하였다. 스페로이드 형성은 PDL세포(14)의자가 재생 및 골성 분화 용량을 증가시킵니다. 여기서, 키토산 필름에 기초한 상세한 PDL 세포 스페로이드 배양 프로토콜을 제시한다. PDL 세포 스페로이드의 3D 배양 시스템은 기존의 TCPS 세포 배양과 관련된 몇 가지 단점을 극복하고, 따라서 향후 치주 조직 재생을 위한 향상된 치료 효능을 가진 PDL 세포를 생산하는데 적합할 수 있다.

<table><tbody><tr><td>&알파;-MEM</td><td>Gibco</td><td>11900-073</td><td></td></tr><tr><td>아세트산&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>64197</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크 25 cm2</td><td>Corning</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크 75 cm2</td><td>Corning</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>Chitosan</td><td>Heppe Medical&nbsp; Chitosan GmbH</td><td>/</td><td>분자량 500 kDa, 탈아세틸화 정도 85%</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit</td><td>분자&nbsp; 프로브</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1310732</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>KeyGen Biotech&nbsp;</td><td></td><td></td>KGB5001</tr><tr><td>펜/스트렙</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>트립신/EDTA&nbsp;</td><td>키젠 바이오텍&nbsp;</td><td></td><td></td>KGM25200</tr><tr><td>15 mL 코니컬 원심분리기 튜브</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr></tbody></table>

키토산 필름에 인간 치주 인대 세포 스페로이드의 형성

Formation of Human Periodontal Ligament Cell Spheroids on Chitosan Films

치주 인대 (PDL) 세포는 치주 조직 재생에 대한 큰 약속을 보유하고. 종래, PDL 세포는 조직 배양 폴리스티렌(TCPS)과 같은 2차원(2D) 기판에 배양된다. 그러나, PDL 세포의 특징적인 변화는 시험관 내 배양 동안 관찰되었다. 이러한 현상은 아마도 2D TCPS가 생체 내 3차원(3D) 미세 환경과 다르기 때문일 것이다. 2D 기질에서 배양된 세포에 비해, 3D 미세환경에서 자란 세포는 생체내 세포와 더 유사성을 나타낸다. 따라서, 3D 세포 배양 모델은 기존의 2D 단층 세포 배양에 대한 유망한 대안을 제공한다. 기존의 PDL 세포 배양 모델을 개선하기 위해, 우리는 최근에 키토산 필름에 PDL 세포의 스페로이드 형성을 기반으로 하는 3D 세포 배양 방법을 개발했습니다. 여기에서, 우리는 키토산 필름에 근거를 둔 상세한 세포 스페로이드 배양 프로토콜을 제시합니다. PDL 세포 스페로이드의 3D 배양 시스템은 기존의 2D 단층 세포 배양과 관련된 몇 가지 한계를 극복하고, 따라서 향후 치주 조직 재생을 위한 향상된 치료 효능을 가진 PDL 세포를 생산하는데 적합할 수 있다.

본 프로토콜을 사용하여, 생존 가능한 PDL 세포 스페로이드가 성공적으로 형성되었다. 도 1은 부착된 세포 대신에 부유세포 또는 스페로이드가 주로 키토산 막에서 관찰되었다는 것을 보여주었다. 0.5 x 104 세포/cm2의파종 밀도의 경우, 부착된 PDL 세포는 1일째와 3일에 때때로 발견되었고, PDL 세포 스페로이드는 거의 관찰되지 않았다. 반대로, 3 x 104 및 6 x 104 세포/cm2의파종 밀도에 대해, PDL 세포 스페로이드의 다양한 크기는 1 일째부터 발견되었다. PDL 세포 스페로이드 형성은 3일 후 모든 파종 밀도로부터 관찰되었다. 도1에 나타낸 바와 같이, 3 x 104 세포/cm2는 PDL 세포 파종 밀도에서 PDL 세포 파종...

여기에서, 우리는 키토산 필름에 의하여 인간 치주 인대 (PDL) 세포 스페로이드를 배양하는 프로토콜을 제시합니다. 3차원(3D) 세포 스페로이드의 배양은 기존의 조직 배양 폴리스티렌(TCPS) 배양 시스템에 대한 대안을 제공한다.

Periodontal ligament (PDL) cells hold great promise for periodontal tissue regeneration. Conventionally, PDL cells are cultured on two-dimensional (2D) ...

이것은 키토산 필름에 의한 치주 인대 세포 구체 구체를 배양하는 상세한 프로토콜입니다. 종래의 배양 시스템과 비교하여, 스페로이드 배양 시스템은 자가 재생 및 골성 분화 능력이 증가하여 치주 인대 세포를 생성합니다. 먼저 원고에서 지시한 대로 1%의 중량형 키토산 용액을 준비합니다.24웰 조직 배양 폴리스티렌 플레이트의 각 웰에 키토산 용액 0.5 밀리리터를 넣습니다. 치토산 필름을 형성하기 위해 24 시간 동안 60섭씨 60도에서 오븐에서 접시를 건조하십시오. 키토산 필름을 중화하기 위해 24웰 플레이트의 각 웰에 0.5 일반 수산화나트륨을 넣고 실온에서 2시간 동안 배양한다.그런 다음, 두 번 증류수로 키토산 필름을 세 번 씻는다. 키토산 코팅 24웰 플레이트를 실온에서 하룻밤 사이에 70% 알코올로 살균합니다. PBS로 플레이트를 세 번 헹구고 밤새 자외선 아래에 둡니다.세포 파종, 전웜 증식 배지, PBS 용액 및 트립신 EDTA 용액이 섭씨 37도까지 떨어지기 전에. 세포 배양플라스크에서 상체를 버리고 PBS의 10 밀리리터와 함께 컨물수 치주 인대 또는 PDL 세포를 세척하십시오. PBS를 폐기하고 플라스크에 트립신 EDTA 솔루션 1밀리리터를 추가합니다.플라스크를 섭씨 37도에서 3분간 배양한 다음 3밀리리터의 증식 배지를 추가하여 트립신 소화를 종료합니다. 세포 현탁액을 15 밀리리터 원물 튜브로 옮긴 다음 원심분리기를 300배g에서 5분간 분리합니다. 상체를 버리고 증식 배지의 500 마이크로 리터에서 세포를 다시 중단하십시오.혈종계로 세포를 계산하고 평방 센티미터 당 5, 10, 30 및 60,000 개의 세포에서 접시에 씨앗을 넣습니다. PDL 세포를 5%의 이산화탄소와 가습공기로 섭씨 37도에서 배양하여 배양 배지를 일주일에 두 번 변화시다. 역상 대비 현미경을 통해 5 일 동안 매일 세포 형태를 관찰하십시오.실행 가능한 PDL 세포 스페로이드는 이 프로토콜을 사용하여 성공적으로 형성됩니다. 스페로이드는 1일과 3일에 낮은 파종 밀도를 위해 거의 관찰되지 않습니다. 그러나 두 개의 높은 밀도에서, 스페로이드의 다양한 크기는 첫날부터 존재한다.최적의 파종 밀도는 균일한 스페로이드를 초래하기 때문에 30,000 세포 제곱미터입니다. 문화의 5 일 후, 더 큰 스페로이드는 모든 파종 밀도에 대해 관찰된다. 생존 가능성 분석은 PDL 세포의 대다수가 1 일, 3 및 6 일에 살아 있다는 것을 보여줍니다, 그러나 죽은 세포의 수는 6 일째에 증가합니다.이 프로토콜의 한 가지 제한은 스페로이드 형성 후 세포의 증식감소입니다. 따라서 스페로이드 형성 후 세포의 증식을 촉진하는 추가 연구가 필요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

소설의 제조, FDA 승인 재료의 유연한 박막 수술 접착제, 키토산, 녹색을 indocyanine이 설명되어 있습니다. 저전력 적외선 레이저로 간단한 인증 과정을 통해 collagenous 조직이 접착제의 결합이 입증되어 있습니다.

키토산 기반, 레이저 활성화 박막 외과 접착제, &#39;SurgiLux&#39;: 준비 및 데모

현재 줄기 세포 치료에서 주요 장애물은 호스트 조직으로 이들 세포를 전달하는 가장 효과적인 방법을 결정합니다. 지방 파생 줄기 세포들이 multipotency을 유지할 수 있도록하면서 여기에서, 우리는 효과적이고 접근 간단 키토산 기반의 전달 방법을 설명합니다.

줄기 세포 - 로드된 키토산 Microspheres의 배달을 위해 콜라겐 히드로겔을 구축

우리는 3 차원 구조물이 인간의 운동 조절 혈청으로 처리되고 콜라겐 함량, 기능 및 세포 생화학을 분석 한 인대 조직 모델을 제시합니다.

운동 조건의 혈청을 이용한 인대 구조의 치료 : Translational Tissue Engineering Model

여기는 키토 산 기반의 주 사용 hydrogels 동적 것 화학을 사용 하 여 손쉬운 준비에 설명 합니다. 하이드로 겔의 기계적 강도 및 3D 세포 배양에서의 응용 프로그램을 조정 하는 방법은 제시 하는.

주 사용 Hydrogels 키토 산 기반 및 3D 세포 배양에서의 응용의 준비

여기, 우리 자기 연골 같은 조직으로 dedifferentiated 인간의 관절 chondrocytes의 분화를 촉진 하는 펩 티 드 건설 기계 조립에 3D 문화 시스템을 얻기 위해 프로토콜을 제시.

3 차원 펩 티 드 건설 기계에 포유류 세포 배양

우리 불멸 하 게 종양 및 섬유 세포 bioprintable alginate/젤라틴 bioink에 포함 된 구성 된 이기종 유 방 암 모델 개발. 모델이 비보에 종양 microenvironment tumorigenesis 운전 메커니즘에 대 한 통찰력을 양보 하는 다세포 종양 spheroids의 형성을 촉진 한다.

셀 회전 타원 체 형성을 유발 하는 모델 시스템에 3D 생체 외에서 Bioprintable Alginate/젤라틴 하이드로 겔

이 프로토콜은 미세중력에서 아멜로모세포 유사 세포의 배양 및 3D 성장을 통해 길쭉하고 분극된 형태와 에나멜 특이적 단백질 발현을 유지하는 방법을 제시합니다. 미세 중력에서 치주 공학 구조물 및 폐 기관의 배양을위한 배양 조건도 설명됩니다.

미세중력에서 치과 및 호흡기 세포와 장기의 전파

본 프로토콜은 키토산-제니핀 마이크로겔의 제조를 위한 비에멀젼 기반 방법을 기술한다. 이러한 마이크로겔의 크기는 정밀하게 조절할 수 있으며, pH 의존적 팽윤을 표시하고, 생체내에서 분해되며, 시간이 지남에 따라 지속적으로 방출되는 치료 분자로 로딩될 수 있어 조직 공학 응용에 매우 적합합니다.

조직 공학 응용 분야를 위한 크기 조절 및 무유제 키토산-제니핀 마이크로젤 제조

이 연구에서는 첫 번째 상악 어금니 주위에서 14일 동안 Porphyromonas gingivalis에서 추출한 지질다당류의 유지 합자와 반복 주사의 조합을 통해 치주염 유도의 쥐 모델을 제시합니다. 결찰 및 LPS 주사 기술은 치조골 손실과 염증을 유발하는 근막염 유도에 효과적이었습니다.

쥐 모델에서 합자와 지질다당류 주입의 조합을 통한 치주염 유도

본 연구는 중력을 이용하여 저접착 조건에서 세포를 스페로이드로 응집한 후 생성된 스페로이드를 미니 생물반응기에서 배양하여 연골세포 스페로이드를 생산하는 방법을 설명합니다.

Generating Spheroids from Various Chondrocytes using Low-Adhesive Conditions under Gravity and Homemade Mini-Bioreactors

본 연구는 생쥐에서 치주염을 유발하기 위한 변형된 6-0 나일론 결찰 방법을 설명하며, 이는 재현성이 높으며 연구자들이 치주 질환의 발병에서 병리학적 결과에 이르기까지 치주염을 연구할 수 있는 대안을 제시합니다.

두 번째 상부 대구치에서 나일론 결찰에 의해 유발된 진행성 치주염의 쥐 모델

학습하세요 키토산 필름을 이용한 인간 치주 인대 세포 스페로이드 배양법을 통해 재생의학 연구를 진행하세요. 이 3D 배양 시스템은 자가재생 및 골분화 능력을 향상시켜 치주 질환 치료에 활용됩니다.

키토산 필름에 인간 치주 인대 세포 스페로이드의 형성

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