신경 근육 질환의 마우스 모델의 행동 현상형에 대한 저렴한 걸음걸이 분석

발자국 분석은 마우스의 운동 이상을 정량화하는 연구원을 위한 걸음걸이 분석 프로그램을 디지털화하는 저비용 대안입니다. 그것의 속도 때문에, 단순성 및 세로 잠재력, 이 방법은 신경 퇴행성 질환, 신경 근육 질병 또는 뇌졸중의 모델을 포함하여 마우스 모델의 행동 표현에 이상적입니다. 절차를 시연하는 것은 버지니아 베르트만, 내 실험실에서 연구 기술자가 될 것입니다.

실험을 시작하기 전에, 완전히 깨어 있는 쥐를 30분 동안 분석실로 최소 5분 동안 경보하였다. 터널의 길이와 너비보다 약간 넓고 긴 용지 조각 위에 터널을 배치합니다. 마우스 ID 및 테스트 날짜로 용지를 표시합니다.

필요에 따라 동기 부여를 위해 목표 챔버에 해바라기 씨앗을 추가하고 테스트 할 첫 번째 마우스를 단단히 스크러프. 약 0.5센티미터 직경의 테이퍼 브러시 팁을 사용하여 모든 발가락의 밑면과 각 포우의 중앙전체를 무독성 세척 가능한 물 기반 페인트 색상으로 페인트합니다. 뒷발을 대조적으로 무독성 세탁 가능한 물 기반 페인트 색상으로 코팅합니다.

깨끗한 축축한 천을 사용하여 마우스가 신체의 다른 부분에 있는 페인트를 제거하여 데이터 수집을 방해할 수 있는 얼룩을 방지합니다. 그런 다음 터널의 시작 부분에 마우스를 배치합니다. 마우스가 골챔버로 걸어들어오도록 한 후 동물을 회수하여 물 약해진 천으로 발을 부드럽게 청소합니다.

그런 다음 마우스를 홈 케이지로 되돌리고 다음 동물을 테스트하기 전에 소독제로 테스트 영역과 터널을 닦아냅니다. 정확한 점수를 위해 얼룩이 없는 명확한 발자국으로 일관되게 간격이 있는 단계를 선택하기 전에 발자국이 완전히 건조되도록 합니다. 충분한 점수 매기기 데이터를 생성하려면 각 발에서 적어도 두 단계 연속 단계가 있어야 합니다.

마우스가 보행 속도를 변경했기 때문에 정상적인 걸음걸이를 나타낼 가능성이 거의 없으므로 종이에 첫 번째 및 마지막 발자국을 포함하지 마십시오. 보폭 길이를 동일한 발에 의해 생성된 두 개의 순차적 발자국 사이의 거리로 정의하려면 연필을 사용하여 앞다리 발자국의 앞발 영역 주위에 2~4밀리미터 원을 한 걸음 씩 끌어들이고 눈자를 사용하여 원 사이에 선을 그립니다. 각 원의 중간에서 두 개의 인쇄 사이의 거리를 오른쪽으로 두 번 또는 왼쪽으로 두 번 의 앞을 적절히 대적하고 득점할 수 있는 각 단계에 대한 측정값을 반복합니다.

그런 다음 각 사지에 대해 기록된 모든 보폭 거리를 실험적으로 적절히 코호트 내에서 개별 점수를 평균화합니다. 보폭폭을 좌우 앞다리 또는 뒷다리 사이의 거리로 정의하려면, 길들이기및 중간 뒷다리의 한 뒷다리의 원발 영역에서 선을 측정하여, 반대로 뒷다리의 보폭에 대한 선과 수직으로 교차한다. 득점할 수 있는 모든 뒷다리 인쇄에 대해 이 측정을 반복하고 측정값을 평균화합니다.

발가락 스프레드를 단일 앞다리 또는 뒷다리 발자국에서 첫 번째 발가락과 마지막 발가락 사이의 거리로 정의하려면 캘리퍼를 사용하여 첫 번째 발가락 인쇄의 끝과 마지막 발가락 인쇄의 끝 사이의 거리를 측정합니다. 그런 다음 득점할 수 있는 모든 뒷다리 인쇄에 대한 측정을 반복하고 측정값을 평균합니다. 동물의 충분한 수와 함께,이 절차는 시간이 지남에 따라 동일한 변형 내에서 마우스 유전자형 사이의 걸음걸이 차이를 감지 할 수있다.

예를 들어, 여기에 X-연결된 척추 및 bulbar 근육 위축의 마우스 모델을 사용하여 수집 된 발자국 이미지의 대표적인 흔적, 낮은 운동 뉴런과 골격 근육에 영향을 미치는 신경 퇴행성 질환이 표시됩니다. 증상 전 및 증상 후 형질 전환 및 쓰레기 메이트 제어 수컷 마우스의 걸음걸이 분석은 질병 발병 전에 형질전환 마우스가 쓰레기 메이트 비 트랜스제닉 컨트롤에 비해 유사한 보폭, 보폭 및 발가락 확산을 나타낸다는 것을 밝힙니다. 그러나 질병 발병 후, 형질 전환 동물은 상당히 짧은 보폭 길이를 나타낸다.

유사한 세로 분석은 어느 나이 시험든지에 보폭에 있는 다름이 없음을 밝혔습니다. 증상 후 형질전환마우스는 또한 나이 일치 하는 쓰레기 메이트 컨트롤 보다 상당히 좁은 뒷발가락 확산. 발에 페인트를 적절히 적용하면 최상의 결과를 얻을 수 있습니다.

명확한 비얼룩짐 발자국으로 일관되게 간격을 둔 단계만 점수를 매겨야 합니다. 이 기술은 보폭의 사소한 변화를 감지할 만큼 민감합니다. 그리고 그것의 비 침습적 인 접근으로 인해, 그것은 그들의 수명 기간 표현성 프리젠 테이션 및 치료 내정간섭에 걸쳐 단의 시험을 허용합니다.