Name: 마우스 횡문근에서 분리 된 원발성 종양 세포에서 종양 구체 유도 및 치료 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: 학습하세요 마우스 횡문근육종 원발성 세포 분리 및 종양 구체 형성 방법을. 이 기법은 종양 미세환경을 모방하여 약물 스크리닝 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 엘리슨 의료 재단 보조금 AG-NS-0843-11, 그리고 NCI 암 센터 지원 교부금 P30CA030199 A.S. 내에서 NIH 파일럿 교부금에 의해 지원되었다.

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
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<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
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<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
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<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
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<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
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<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
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저자는 공개 할 것이 없다.

종양 이질성 세포 집단으로부터의 TPC의 격리 및 특성화: 종양 투종 분석법, FACS 격리 및 종양구 형성 분석법에서 여러 가지 방법이 채택되었다. 종양 투동성 분석은 1971년에 처음 기술되었으며, 줄기 세포 연구에 사용되었으며, 이후 암 생물학29,30에만적용되었다. 이 방법은 연겔배양물(31)에서제약 없이 확장되는 암 줄기세포 본질적 성질을 기반으로 한다. 이 방법은 개발 이래 종양 세포 이질성 연구, 호르몬 치료의 세포 성장에 미치는 영향, 및 종양 내성 연구31을포함한 여러 목적으로 암 연구에 널리 사용되어 왔다. 현재까지, 이 분석제는 아직도 다중 유형의암32에대한 종양 발신 세포의 식별을 위해 사용된다.
FACS 격리는 관심있는 세포의...

암은 이질적인 질병입니다. 게다가, 종양의 동일 모형은 다른 환자에 있는 다른 유전 돌연변이를 제출할 수 있고, 환자 내의 종양은 세포의 다중 인구에 의해 구성됩니다1. 이질성은 암을 시작하고 전파하는 세포의 식별에 도전을 제시합니다, 그러나 그들의 특성은 능률적인 처리의 발달을 위해 필수적입니다. 종양 발달에 기여하는 세포의 희소한 인구인 종양 전파 세포 (TPC)의 개념은 이전에 광범위하게 검토되었습니다2. TPC가 여러 유형의 암을 특징으로한다는 사실에도 불구하고, 신뢰할 수있는 격리를위한 마커의 식별은 여러 종양 유형3,4,5및6에 대한 도전으로 남아 있습니다. , 7명 , 8개 , 따라서,분자 마커에 의존하지 않고 오히려 TPC 기능적 특성 (높은 자기 재생 및 낮은 부착 조건에서 성장하는 능력)에 의존하지 않는 방법, 종양 권 형성 분석법으로 알려진, 널리 적용 될 수있다 대부분의 종양에서 TPC의 식별. 중요한 것은, 이러한 분석또한 TPC의 확장을 위해 사용될 수 있으며, 따라서 암 내성1,10에대한 암 약물 스크리닝 및 연구에 직접 적용될 수 있다.
Rhabdomyo육종 (RMS)은 어린 아이들(11)에서가장 흔한 연조직 육종의 드문 형태입니다. Althoug RMS는 근생 마커의 발현의 평가를 통해 조직학적으로 확인될 수 있으며, 기원의 RMS 세포는 종양 발달 자극의 다중 종양 아류형 및 높은 이질성으로 인해 단명하게 특징지어지지 않았다. 실제로, 최근 연구는 RMS가 근생 또는 비 myogenic 기원인지에 대한 중요한 과학적 토론을 생성했다, RMS는 컨텍스트에 따라 다른 세포 유형에서 파생 될 수 있음을 시사12,13, 14세 , 15세 , 16세 , 17. RMS 세포주에 대한 수많은 연구는 종양 발달에 관여하는 경로의 식별과 높은 자기 갱신 인구와 관련된 마커의 특성화에 대한 종양 권 형성 분석을 사용하여 수행되었습니다. 18세 , 19세 , 20개 , 21.
그러나, 기원의 RMS 세포를 확인하기 위한 종양구 형성 분석법의 잠재력에도 불구하고, 1차 RMS 세포에 사용될 수 있는 신뢰할 수 있는 방법은 아직 기술되지 않았다. 이러한 맥락에서, 우리 그룹으로부터의 최근 연구는 듀첸 근이영양증(DMD) 마우스모델(22)에서기원의 RMS 세포의 식별을 위한 최적화된 종양권 형성 분석기를 채택하였다. 근육 조직에서 분리된 여러 개의 종양 전 세포 유형은 부착이 낮은 조건에서 성장하는 능력에 대해 테스트되어 영양 실맥에서 RMS의 기원 세포로 근육 줄기 세포를 식별할 수 있습니다. 여기서 설명된 것은 마우스 RMS 발달을 담당하는 극히 드문 세포 집단의 식별을 위해 성공적으로 채택된 종양구 형성분석(그림 1)에대한 재현가능하고 신뢰할 수 있는 프로토콜이다.

<table><tbody><tr><td>Accutase 세포 해리 시약</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>부착 세포 분리 및 종양 해리</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td> 부착 <td>세포 및 현탁 세포용 Celigo Microwell 플레이트 기반 이미지 세포분석기</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase, Type II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td>조직 소화 효소</td></tr><tr><td>Dispase II, 프로테아제</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td>조직 소화 효소</td></tr><tr><td>DMEM 고포도당 매체</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>종양 세포 매체의 구성 요소</td></tr><tr><td>DMEM/F12 매체</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>종양 매체의 구성 요소</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>S312500</td><td>FACS 완충액 EGF</td></tr><tr><td>재조합 마우스 단백질</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>종양 매체</td></tr><tr><td>의 구성 요소FACSAria II 유세포 분석</td><td>BD Biosciences</td><td>650033</td><td>형광 활성화 세포 분류기</td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-11</td><td>종양 세포 배지의 구성</td></tr> 요소 <tr><td>Fluriso (Isofluornae) 마취제</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>동물용 마취제</td></tr><tr><td>FxCycle Violet Stain</td><td>Life Technologies</td><td>F10347</td><td>살아있는 세포와 죽은 세포 구별</td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210072</td><td>FACS 완충액 구성 요소</td></tr><tr><td>Ham's F10 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11550043</td><td>FACS 완충액 구성 요소</td></tr><tr><td>Horse Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16050114</td><td>세포 분리 배지 구성 요소</td></tr><tr><td>Lipofectamine 3000 형질주입 시약</td><td>ThermoFisher</td><td>L3000015</td><td>형질주입 시약</td></tr><tr><td>Matrigel 멤브레인 매트릭스</td><td>Corning</td><td>CB40234</td><td>이식된 세포에 지원을 제공합니다</td></tr><tr><td>N-2 Supplemtns (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>종양 배지의 구성 요소</td></tr><tr><td>Neomycin-Polymyxin B Sulfates-Bacitracin 아연 안과 연고</td><td>MWI Vet 공급</td><td>701008</td><td>Eyes 연고</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>FACS 완충액의 구성 요소 및 세포 세척에 사용됩니다</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>GFP 플라스미드</td></tr><tr><td>페니실린 - 연쇄상 구근</td><td>생명 과학 15140163</td><td></td><td>종양권 및 종양 세포 매체</td></tr><tr><td>재조합 인간 및 베타의 구성 요소; FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>종양 매체의 구성 요소</td></tr><tr><td>재조합 마우스 Flt-3 리간드 단백질</td><td>R& D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>재조합 단백질</td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>살아있는 세포와 죽은 세포 구별</td></tr></tbody></table>

마우스 횡문근에서 분리 된 원발성 종양 세포에서 종양 구체 유도 및 치료

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

횡문근육종 (RMS)은 어린이에게 가장 흔한 연조직 육종입니다. 상당한 노력이 RMS와 관련되었던 일반적인 돌연변이의 확인을 가능하게 하고 다른 RMS 특수형의 차별을 허용했더라도, 중요한 도전은 예후를 더 향상시키기 위하여 새로운 처리의 발달을 위해 아직도 존재합니다. myogenic 마커의 발현에 의해 확인되더라도, 기원의 세포가 아직도 제대로 이해되지 않는 때문에 RMS가 myogenic 또는 비 myogenic 기원이 있는지 여부에 대한 중요한 논쟁이 아직도 있습니다. 본 연구에서는, 마우스 RMS에 대한 종양구법 분석법에 대해 신뢰할 수 있는 방법이 제공된다. 분석법은 종양 세포의 기능적 특성에 기초하고 종양 성 기능을 가진 종양에 있는 희소한 인구의 확인을 허용합니다. 또한 재조합 단백질을 테스트하고, 형질전환 프로토콜을 종양 권 분석실험과 통합하고, 종양 발달 및 성장에 관여하는 후보 유전자를 평가하기 위한 절차도 기술되어 있다. 추가로 기재된 종양이식이식은 생체내에서종양발생 기능을 검증하기 위해 수용자 마우스로 이식하는 절차이다. 전반적으로, 기술된 방법은 다른 문맥에서 발생하는 RMS에 적용될 수 있는 희소한 RMS 종양성 집단의 신뢰할 수 있는 식별 및 시험을 허용한다. 마지막으로, 프로토콜은 약물 스크리닝 및 치료제의 향후 개발을 위한 플랫폼으로 활용될 수 있다.

종양구 검출 세포 격리는 종양 조직에 존재하는 세포 집단의 최대 이질성을 얻기 위해 최적화되었다. 첫째, 단리조직이 형태학적으로 이질적인 영역을 제시한 이후, 균일한 희귀 세포 집단을 분리할 가능성을 높이기 위해, 샘플링은 종양의 여러 부위로부터 수행되었다(도1A,왼쪽의 첫 번째 패널). 둘째, 수확된 시료의 기계적 해리는 다진 조직 크기에서 균질성을 유지하면서 수행되었으며, 샘플 전반에 걸쳐 존재할 수 있는 상이한 저항에도불구하고(도 1A,왼쪽에서 제3 및 제4 패널) ). 시작 물질 (종양 공격성, 마우스의 연령 및 유전자형, 종양 위치)에 따라, 격리 과정의 기계적 스트레스로부터 세포의 회복은 3-7 일(그림 1A,오른쪽의 마지막 패널)에 이르기까지 다양 할 수 있습니다....

이 프로토콜은 마우스 횡문근 육종 1차 세포의 분리, 종양구 형성 및 치료, 및 종양구배양으로부터 시작되는 동종 이식이식에 대한 재현가능한 방법을 설명한다.

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

Rhabdomyosarcoma는 조직 형태와 근생 마커의 발현에 의해 조직학적으로 특징짓는 연조직 육종의 드문 형태이다. 그러나, 이러한 종양의 다른 특수형의 존재와 그것의 형성에 기여하는 자극의 이질성을 감안할 때, 기원의 세포의 식별은 매우 도전적이었습니다. 여기서 우리는 생쥐로부터 새로 수확한 종양 조직에서 시작하여 rhabdomyosarcomas의 기원세포의 식별을 위한 재현 가능하고 신뢰할 수 있는 방법을 설명하고 이 분석법은 종양권 형성 분석이다.종양권 형성 분석의 주요 장점은 종양 유래 세포에 존재하는 것으로 알려진 세포 특성에 의존하며 특정 세포 집단의 팽창 및 농축에도 사용될 수 있다는 것입니다. 더욱이, 그것의 스페로이드 구조는 종양 환경을 모방, 따라서 그(것)들은 약 검열 연구 결과로 이용될 수 있습니다. 이 방법은 분자 마커의 사전 지식이 필요하지 않기 때문에 종양의 다른 유형에 적용 될 수있는 잠재력을 가지고 있지만 문화 조건의 최적화를 필요로 할 수 있습니다.종양권은 특히 종양 내의 희귀 세포 집단을 식별하려고 시도하는 경우 형성하는 데 시간이 걸릴 수 있습니다. 따라서 실험 결과에 부정적인 영향을 줄 수 있기 때문에 매일 하위 문화 판을 보는 것이 좋습니다. 섭씨 37도의 인큐베이터에서 5밀리리터의 격리 미디어가 있는 10센티미터 플레이트를 데우기 시작합니다.종양 조직의 500 ~ 1, 000 밀리그램의 무게를 측정하고 접시에 놓습니다. 종양 조직으로 접시를 멸균 배양 후드에 가져와 면도날로 다진다. 최적의 소화를 위해 다진 조각의 크기가 균일한지 확인하십시오.다진 조직 및 세포 격리 매체를 15밀리리터 원심분리기 튜브로 이송합니다. 또 다른 4 밀리리터의 미디어로 접시를 씻고 튜브에 추가합니다. 콜라게나제 용액 의 밀리리터 당 700 단위를 튜브에 추가하고 1 1/2 시간 동안 섭씨 37도에서 흔들리는 수조에 배양하십시오.인큐베이션 후 실온에서 5분 동안 300배 g로 조직을 회전시합니다. 펠릿을 방해하지 않고 슈퍼나탄을 흡인한 다음, 펠릿을 10밀리리터의 두 번째 소화 용액으로 재복제하고 흔들리는 수조에서 30분 동안 배양합니다. 두 번째 소화 후, 파이펫 은 위아래로 셀 서스펜션을 하고 50 밀리리터 원심 분리 튜브에 70 마이크로 미터 나일론 필터를 통과합니다.그런 다음 10 밀리리터의 세포 격리 매체로 필터를 세척하고 5 분 동안 300 배 g에서 조직을 회전시하십시오. 상

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Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

이 프로토콜은 절연, 강화하고, 이소성 소닉 헤지 호그 경로 활동과 돌연변이 생쥐에서 파생된 medulloblastoma 종양의 줄기 세포의 유지 보수를 설명합니다.

절연, 강화하고, Medulloblastoma의 줄기 세포의 유지 보수

방법은 생쥐에서 인간의 retinoblastoma 종양을 전파하기 위해 설명되어 있습니다. 종양 세포에 직접 면역 결함 생쥐의 눈을에 주입하고 있습니다. 이차 종양이 성공적으로 직접적으로 인간의 종양과 교양 tumorspheres에서 수확을 모두 세포를 사용하여 설립되었습니다.

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

이 비디오 프로토콜은 neurosphere 분석 문화 방법을 사용하여 수술 resected 인간 glioblastoma의 mutliforme (GBM) 종양 조직에서 세포처럼 고립과 줄기의 확장을 보여줍니다.

분리 및 Neurosphere 분석을 사용하여 인간 Glioblastoma의 Multiforme 종양 세포의 확장

뼈 육종 암 줄기 세포의 존재 (CSC 추가)는 최근에 발병에 연결되어있다. 이 글에서, 우리는 비 접착 조건에서 성장하는 암줄 기세포의 능력을 사용하여 기존의 골육종 (OS)의 인간 생체 검사에서 얻은 기본 세포 배양에서 암줄 기세포의 분리를 제시한다.

암의 설립은 인간 기존의 골육종에서 세포 배양 줄기

다음 프로토콜 환자 파생 된 연 조직 육 종 (STS)의 주 문화는의 설립에 집중 한다. 이 모델 분자 배경 및 약리 프로필 이러한 드문 악성 종양의 더 나은 이해를 우리를 도울 수 및 STS 관리를 개선 하기 위한 추가 연구에 대 한 출발점을 대표할 수 있었다.

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

우리는 형광 활성화 세포 선별에 의한 인간 육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 자극하는 세포의 분리를 위한 상세한 프로토콜을 설명하고, 인간 백혈구 항원-1(HLA-1)을 음성 마커로 사용하고, 추가검증및 이러한 HLA-1 음성 종양 을 자극 하는 세포의 특성.

육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 발하는 세포의 격리 및 특성화

이 방법론의 목적은 유세포분석및 서양세포분석과 서양계의 기능성 분석및 현상형 특성화를 사용하여, 구형 프로토콜을 사용하여 암 세포주 및 원발성 인간 종양 샘플에서 암 줄기세포(CSC)를 식별하는 것입니다. 얼룩.

부인과 및 유방암 종양에서 암 줄기 세포 구체 획득

이 프로토콜에서, 우리는 테스트 (네오) 보조 요법을위한 연조직 육종의 불완전한 수술 절제술의 마우스 모델을 설명합니다.

시험을 위해 불완전하게 절제술된 연조직 육종의 마우스 모델(Neo) 보조 요법

뼈 전이 모델은 균일하게 또는 100% 발생률로 전이가 발생하지 않습니다. 직접 골내 종양 세포 주사는 폐 색전술을 초래할 수 있습니다. 우리는 고형 종양 이식편을 뼈에 이식하여 원발성 뼈 종양 및 뼈 전이를 모델링하여 재현 가능한 생착 및 성장을 유도하는 기술을 제시합니다.

원발성 뼈 종양 및 뼈에 이식된 고형 종양을 통한 뼈 전이 모델링

여기에 제시된 프로토콜은 횡문근육종 마우스 모델에서 온도에 민감한 리포솜에서 약물 방출을 유발하기 위해 자기 공명 유도 고강도 집속 초음파에 의해 생성된 제어된 온열요법을 사용하는 프로토콜입니다.

자기 공명 유도 고강도 집속 초음파 생성 온열요법: 쥐 횡문근육종 모델에서 실현 가능한 치료 방법

현재 프로토콜은 원발성 암세포에서 3D 종양 배양 모델을 생성하고 세포 생존력 분석 및 현미경 검사를 사용하여 약물에 대한 민감도를 평가하는 것을 설명합니다.

환자 유래 종양 샘플에서 3차원 스페로이드 설정 및 약물에 대한 민감도 평가

학습하세요 마우스 횡문근육종 원발성 세포 분리 및 종양 구체 형성 방법을. 이 기법은 종양 미세환경을 모방하여 약물 스크리닝 연구에 활용할 수 있습니다.

마우스 횡문근에서 분리 된 원발성 종양 세포에서 종양 구체 유도 및 치료

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