마우스에서 심근 경색을 연구하는 극저온 손상 모델

이러한 방법은 심근 경색의 생성과 줄기세포 이식 후 심장 회복을 조사하는 데 사용할 수 있는 우수한 플랫폼을 연구할 수 있는 방법이다. 이 절차의 주요 장점은 빠르고 쉽고 재현 가능한 방식으로 균일한 경색 크기를 생성하는 데 사용할 수 있다는 것입니다. 약리학, 또는 조직 공학된 기지를 둔 전략과 같은 새로운 실험 내정간섭은, 이 모형에서 시험될 수 있습니다.

그리고 성공적으로 옵션을 더 큰 동물 모델에서 확인할 수 있습니다 테스트. 마취 된 27 그램, 14 주 된 마우스에서 통증 반사에 대한 반응의 부족을 확인한 후, 모발 트리머를 사용하여 동물의 가슴과 목의 털을 제거하고 가열 패드에 마우스를 척추 위치에 놓습니다. 힌지 및 앞다리를 스프레드 이글 위치에 테이프로 지정하고 순차적인 포비도요오드와 80% 에탄올 스크럽을 사용하여 노출된 피부를 소독시합니다.

흉골의 하부 3분의 1에서 턱까지 중간선 피부 절개를 하고 곡선 포셉을 사용하여 목 주위의 근육을 조심스럽게 분리하여 기관진을 노출시합니다. 마이크로 가위를 사용하여 두 번째 연골 고리와 세 번째 연골 링 사이의 기관 절제술을 수행합니다. 그리고 0.5 밀리리터의 조수 부피와 분당 110의 환기 주파수로 인공호흡기를 설정합니다.

그런 다음 인공호흡기에 연결된 플라스틱 20 게이지 캐뉼라를 기관지에 삽입합니다. 다음으로, 소터를 사용하여 오른쪽 가슴 근육을 세 번째 갈비뼈와 일곱 번째 갈비뼈 사이의 흉골 기원에서 분리하십시오. 그리고 측면 각진 스프링 가위를 사용하여 흉골에 가능한 한 가까운 네 번째에서 6 개의 갈비뼈를 자른다.

근본적인 결합 조직을 해부하여 흉부 구멍에 명확한 시야를 확보하고 필요에 따라 출혈을 막기 위해 유방 동맥을 소작합니다. 미니 골드 얼룩 리트랙터를 삽입하여 갈비뼈를 퍼뜨리고 가슴 구멍을 열어 두십시오. 그리고 무딘 집게를 사용하여 심낭을 열어 심장을 노출시합니다.

무딘 막대를 사용하여 흉부 구멍에서 심장을 들어 올리고 리트랙터의 긴장을 감소시키고 가슴 개구부를 줄이고 심장이 복강으로 다시 떨어지는 것을 유지하십시오. 직경 3mm의 저온 프로브를 10초 동안 미리 냉각하고, 좌심실 벽에 저온 프로브를 10초 간 적용하여 좌심실, 저온 부상 경색을 생성합니다. 좌심실 벽에서 저온 프로브를 실온 식염수 관개로 분리하고 리트랙터로 가슴 구멍을 다시 확장합니다.

막대를 사용하여 심장을 흉부 구멍으로 부드럽게 되돌리고 재굴기를 제거하십시오. 6-0 봉합사를 사용하여 스터노절제술을 하나의 매듭으로 연결합니다. 그리고 실행 6-0 봉합사를 사용하여 가슴 구멍을 닫습니다.

10 밀리리터 주사기를 사용하여 매듭을 묶기 전에 가슴에서 남은 공기를 대피시키고 5-0 봉합사를 사용하여 조직을 기관 개구부 지점까지 닫기 전에 caudal 가장자리에서 피부를 조정하십시오. 이소플루란을 감소시키고 동물이 자발적으로 호흡을 한 후 기관 카테터를 제거하고 기관 절개를 8-0으로 닫습니다. 봉합 사. 복부 목 근육을 기관지 위에 해부학적 위치로 다시 교체하고 피부 봉합사를 완료하십시오.

그런 다음, 8 주 동안 매일 동물 모니터링과 3 일 동안 통증 진통제를 위해 식수에 메타미졸을 추가합니다. 극저온 부상 심장 에코카디그래피는 56일 의 실험 종점까지 수술 후 7일째부터 관찰되는 기능 장애를 통해 배출 분획 분수 및 분수 부위 변화를 현저히 감소시다. 압력 볼륨 루프 분석에 의해 평가된 바와 같이, 극저온절은 뇌졸중 부피, 뇌졸중 작업, 심장 출력 및 사전 부하 조정 최대 전력의 감소로 반사되는 손상된 좌심실 기능으로 이어집니다.

형광 전압에 민감한 염색 된 마음의 전 생체 광학 매핑은 부상의 경계에서 전기 전도의 막힘을 보여 주며, 이는 현지 전기 분리를 나타냅니다. 매슨의 삼색으로 조직 학적 염색은 부상의 사이트에 교교 섬유 조직 형성을 밝혀. 경색 크기는 경색 흉터 영역 또는 중간 선 흉터 길이를 측정하여 계산할 수 있습니다.

또한, 심근세포 마커 및 콜라겐-I에 대한 면역형광 염색-부상 부위의 섬유성 리모델링 및 심근세포의 손실을 확인한다. 각 동물의 극저온 문제와 동일한 접촉 지속 시간을 유지하는 것이 중요하며, 각 동물은 서로 다른 지속 시간이 위화감없는 경색 크기로 이어질 수 있습니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행되면 20 분 안에 수행 할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 극저온 부상 모델을 수행하는 방법을 잘 이해해야 합니다. 당신의 실험과 행운을 빕니다.