Name: 마우스에서 심근 경색을 연구하는 극저온 손상 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: 배우세요 마우스 심근 극저온 손상 모델을 통해 심근 경색 생성 및 심장 재생 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 균일한 경색 크기를 재현 가능하게 생성하여 약물 및 줄기세포 치료 전략을 평가하는 데 활용됩니다.

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크리스티안 파르만이 기술적인 도움을 주신 것에 대해 감사드립니다. D.W.는 맥스 케이드 재단의 지원을 받았습니다. T.D.는 엘스 크뢰너 기념회(2012_EKES.04)와 도이치 포르충스게마인샤프트(DE2133/2-1_)로부터 보조금을 받았다. S. S. 도이치 포르충제마인샤프트(DFG; SCHR992/3- 1, SCHR992/4-1).

동물은 실험실 동물 자원 연구소에 의해 준비, 실험실 동물의 원칙에 대한 가이드를 준수인도적 치료를받았다, 건강의 국립 연구소에 의해 출판. 모든 동물 프로토콜은 책임있는 지역 당국 (캘리포니아 샌프란시스코 대학 (UCSF) 기관 동물 관리 및 사용위원회)에 의해 승인되었습니다.
1. 동물 관리
<ol><li>약 27g의 체중14주(예: 실험실 동물 연구소)에서 생쥐를 구하십시오. 참고: BALB/c 마우스는 이 문서에 사용됩니다.</li>
	<li>통풍이 잘되는 캐비닛에 마우스를 보관하고 표준 마우스 차우와 오토클레이브 워터 광고 리비텀을 공급하십시오.</li>
</ol>2. 마우스 준비
<ol><li>유도 챔버를 사용하여 이소플루란 (3.5 %)으로 마우스를 마취하십시오.</li>
	<li>헤어 트리머를 사용하여 가슴과 목 의 머리카락을 제거합니다.</li>
	<li>가열 된 패드에 supine 위치에 마우스를 놓고 마우스의 입과 코를 덮는 얼굴 마스크와 마취를 유지합니다.</li>
	<li>뒷발과 꼬리를 꼬집어 반사 신경이 없는지 확인하여 마취의 깊이를 충분히 확인하십시오.</li>
	<li>피하 부프레노르핀을 주입 (0.03 mg/kg) 진통에 대한.</li>
	<li>뒷다리와 앞다리를 펴고 테이프를 사용하여 위치를 고정합니다.</li>
	<li>포비동 요오드를 사용하면 면도 부위를 소독한 다음 80 % 에탄올로 문질러보입니다. 이 단계를 두 번 반복합니다.</li>
	<li>작은 가위를 사용하여 흉골의 아래 쪽 3 분의 1에서 턱까지 중간 선 피부를 절개합니다.</li>
	<li>구부러진 집게를 사용하고 목 주위의 근육을 조심스럽게 분리하여 기관을 노출시하십시오.</li>
	<li>두 번째와 세 번째 연골 반지 사이의 기관 절제술을 수행하기 위해 마이크로 가위를 사용합니다.</li>
	<li>0.5 mL의 조수 부피로 인공 호흡기를 분절110/분의 환기 주파수로 설정합니다.</li>
	<li>안면 마스크를 제거하고 인공호흡기에 연결된 플라스틱 캐뉼라(20G)를 기관에 삽입합니다. 동물을 환기시다. 참고: 양측 폐 환기를 확인하여 환기 캐뉼라가 너무 깊게 삽입되지 않았는지 확인하십시오.</li>
	<li>소작을 사용하여 세 번째와 일곱 번째 갈비뼈 사이의 흉골 기원에서 오른쪽 가슴 근육을 분리하십시오.</li>
	<li>측면 각진 스프링 가위를 사용하여 흉골에 가능한 한 가깝게 네 번째에서 여섯 번째 갈비뼈를 자른다.</li>
	<li>유방동맥을 소작, 출혈이 보이는 경우.</li>
	<li>이소플루란을 2.5%로 감소시.</li>
	<li>가슴 구멍으로 명확한 보기를 얻기 위하여 근본적인 결합 조직을 해부하십시오.</li>
	<li>무딘 포셉을 사용하여 심낭을 열고 심장을 노출시하십시오.</li>
	<li>미니 골드스타인 리트랙터를 사용하여 갈비뼈를 펼치고 가슴 구멍을 열어 두십시오.</li>
	<li>무딘 막대로 흉부 구멍에서 심장을 들어 올립니다.</li>
	<li>가슴 개구부를 줄이고 심장이 뒤로 떨어지는 것을 막기 위해 리트랙터의 장력을 줄입니다.</li>
	<li>냉동 프로브(직경 3mm)를 10s로 미리 식힙니다.</li>
	<li>전방 좌심실 벽에 저온 프로브를 적용하고 좌심실 저온 손상 경색을 생성하기 위해 10 s동안 동결합니다. 참고 : 저온 프로브는 과학적 질문과 필요에 따라 다른 심장 벽에 적용 할 수 있습니다.</li>
	<li>좌심실 벽에서 프로브를 분리하기 위해 실온 식염수로 저온 프로브를 관개합니다.</li>
	<li>리트랙터를 사용하여 가슴 개구부를 확대합니다.</li>
	<li>무딘 막대로 심장을 흉강으로 부드럽게 되돌려 보냅니다.</li>
	<li>리트랙터를 제거하고 6-0 봉합사를 사용하여 단일 매듭으로 스테노토미를 연결하십시오.</li>
	<li>6-0 실행 봉합사를 사용하여 가슴 구멍을 닫습니다. 매듭을 묶기 전에 10 mL 주사기를 사용하여 가슴에서 남은 공기를 배출하십시오.</li>
	<li>꼬리 가장자리에서 피부를 적응시키고 실행 봉합사 (5-0)로 기관 개구부 지점에 봉합하십시오.</li>
	<li>이소플루란을 1.5%로 설정하고 동물이 자발적으로 호흡할 때까지 기다립니다.</li>
	<li>기관 카테터를 제거하고 마취를 유지하기 위해 동물의 입과 코에 얼굴 마스크를 다시 적용합니다.</li>
	<li>기관 절개를 하나 8-0으로 닫습니다. 봉합 사.</li>
	<li>기관을 덮기 위하여 복부 목 근육을 그들의 위치로 다시 재배치하십시오.</li>
	<li>피부 봉합사를 완료합니다.</li>
	<li>마시기 물에 메타미졸을 추가 (50 mg 메타 미졸 당 100 mL) 통증 진통에 대 한 3 일 동안 매일 동물을 모니터링. 참고: 이 모델의 관찰 기간은 8주입니다. 진통제 처방에 관한 기관의 지침을 따라야합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Writing Group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), 38-360 (2016).</li>
<li>de Alencar Neto, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine%2C+Oxygen%2C+Nitrates%2C+and+Mortality+Reducing+Pharmacological+Treatment+for+Acute+Coronary+Syndrome%3A+An+Evidence-based+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Morphine, Oxygen, Nitrates, and Mortality Reducing Pharmacological Treatment for Acute Coronary Syndrome: An Evidence-based Review.</a> Cureus. 10 (1), 2114(2018).</li>
<li>Detry, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+myocardial+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of myocardial ischaemia.</a> European Heart Journal. 17, Suppl G 48-52 (1996).</li>
<li>Ertl, G., Frantz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Healing+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Healing after myocardial infarction.</a> Cardiovascular Research. 66 (1), 22-32 (2005).</li>
<li>Jugdutt, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+remodeling+after+infarction+and+the+extracellular+collagen+matrix%3A+when+is+enough+enough%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Ventricular remodeling after infarction and the extracellular collagen matrix: when is enough enough.</a> Circulation. 108 (11), 1395-1403 (2003).</li>
<li>Velagaleti, R. S., Vasan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+in+the+twenty-first+century%3A+is+it+a+coronary+artery+disease+or+hypertension+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology+Clinics%22%5BJournal%5D)">Heart failure in the twenty-first century: is it a coronary artery disease or hypertension problem.</a> Cardiology Clinics. 25 (4), 487-495 (2007).</li>
<li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2017+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 135 (10), 146-603 (2017).</li>
<li>Morrissey, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+standardized+myocardial+infarction+in+aged+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">A novel method of standardized myocardial infarction in aged rabbits.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (5), 959-967 (2017).</li>
<li>Degabriele, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+appraisal+of+the+mouse+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Critical appraisal of the mouse model of myocardial infarction.</a> Experimental Physiology. 89 (4), 497-505 (2004).</li>
<li>Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Fish, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+in+coronary+artery+anatomy+affects+consistency+of+cardiac+damage+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Variability in coronary artery anatomy affects consistency of cardiac damage after myocardial infarction in mice.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 313 (2), 275-282 (2017).</li>
<li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Left+Anterior+Descending+%28LAD%29+Coronary+Artery+Ligation%3A+An+Improved+and+Simplified+Model+for+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (122), e55353(2017).</li>
<li>Kim, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+closed-chest+model+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (65), e3896(2012).</li>
<li>Antonio, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricle+radio-frequency+ablation+in+the+rat%3A+a+new+model+of+heart+failure+due+to+myocardial+infarction+homogeneous+in+size+and+low+in+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22J+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">Left ventricle radio-frequency ablation in the rat: a new model of heart failure due to myocardial infarction homogeneous in size and low in mortality.</a> J Card Fail. 15 (6), 540-548 (2009).</li>
<li>Ovsepyan, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+myocardial+infarction+in+mice%3A+methodology%2C+monitoring%2C+pathomorphology%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">Modeling myocardial infarction in mice: methodology, monitoring, pathomorphology.</a> Acta Naturae. 3 (1), 107-115 (2011).</li>
<li>Ciulla, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+remodeling+after+experimental+myocardial+cryoinjury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Left ventricular remodeling after experimental myocardial cryoinjury in rats.</a> Journal of Surgical Research. 116 (1), 91-97 (2004).</li>
<li>Grisel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MRL+mouse+repairs+both+cryogenic+and+ischemic+myocardial+infarcts+with+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">The MRL mouse repairs both cryogenic and ischemic myocardial infarcts with scar.</a> Cardiovascular Pathology. 17 (1), 14-22 (2008).</li>
<li>Duerr, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+myocardial+remodeling+between+cryoinfarction+and+reperfused+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Comparison of myocardial remodeling between cryoinfarction and reperfused infarction in mice.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 961298(2011).</li>
<li>Ma, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramyocardial+delivery+of+human+CD133%2B+cells+in+a+SCID+mouse+cryoinjury+model%3A+Bone+marrow+vs.+cord+blood-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Intramyocardial delivery of human CD133+ cells in a SCID mouse cryoinjury model: Bone marrow vs. cord blood-derived cells.</a> Cardiovascular Research. 71 (1), 158-169 (2006).</li>
<li>Takagawa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+infarct+size+measurement+in+the+mouse+chronic+infarction+model%3A+comparison+of+area-+and+length-based+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 102 (6), 2104-2111 (2007).</li>
<li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+a+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: a comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

이 문서에서는 ACS 및 관련 약리학 및 치료 선택권을 조사하기 위하여 마우스 극저온 상해 모형을 기술합니다.
가장 중요한 단계는 심장 조직에 저온 프로브를 적용하는 것입니다. 최적의 경색 크기를 얻고 재현 가능한 결과를 보장하기 위해 접촉 기간을 엄격하게 제어해야 합니다. 심근의 장기간 냉각은 대형 경색 또는 심실 천반으로 이어질 것입니다. 대조적으로, 단축된 냉각 시간은 제한된 epicardial 병변을 생성하고 모든 상주 세포를 제거하지 않습니다. 따라서, 이것은 재생 세포 이식을 공부할 때 혼란스러울 수 있습니다.
다른 극저온 절색방법(20)에비해, 본 문서에 설명된 개방흉도 접근법은 경색이 심장의 상이한 위치에 자유롭게 유도될 수 있다는 장점이 있다. 더욱이, 이 접근법은 경색 경계가 보이고, 세포 이식 부위가 그에 따라 선택될 수 있기 때문에 치료 세포 주입 또는 패치 적용을 ...

급성 관상 동맥 증후군 (ACS)은 서방 세계1,2에서사망의 주요 원인입니다. 관상 동맥의 급성 폐색은 영향을받는 심장 조직의 허혈성 캐스케이드 및 괴사의 활성화로 이어진다3. 손상된 심근은 점차 적으로 비 수축성 흉터 조직으로 대체되며, 이는 임상적으로 심부전으로 매니페스트4,5. ACS의 처리에 있는 최근 어드밴스에도 불구하고, ACS 와 ACS 관련 심부전의 보급은 상승하고, 치료 선택권은 제한됩니다6,7. 따라서 ACS와 그 합병증을 연구하기 위한 동물 모델을 개발하는 것은 엄청난 관심사입니다.
현재까지 ACS 및 ACS 유도 심근 리모델링을 연구하기 위해 가장 널리 사용되는 동물 모델은 좌측 내림차순 관상 동맥(LAD)의 결찰이다. LAD의 결찰은 ACS 동안 인간의 심근 조직과 유사한 심근의 급성 허혈을 유도합니다.  그러나, 일치하지 않는 경색 크기는 LAD 결찰의 아킬레스건 발 뒤꿈치 남아있다. LAD의 외과적 변이 및 해부학적 가변성은 일관되지 않은 경색 크기로 이어지고 이 절차의 재현성 및 복제성을 저해하는8,9,10. 또한, LAD 결찰은 높은 수술 후 사망률을 가지고 있다. 재현성을 향상시키고 사망률을 줄이기 위한 최근의 노력에도 불구하고11,12,많은 수의 동물이 여전히 리모델링 방지 요법을 제대로 평가할 필요가 있다.
ACS의 대체 모델은 무선 주파수13,열14 또는 극저온 상해15,16,17,18을포함하여 최근 몇 년 동안 제안되고 연구되었다. 현재 의 극저온 손상 방법은 액체 질소에 미리 냉각된 금속 막대를 적용하여 피험자의 심장 조직을 손상시키는15,16. 그러나 이 절차는 충분한 경색 크기를 생성하기 위해 여러 번 반복되어야 합니다. 조직에 비해 막대의 높은 전도도 및 낮은 열 용량으로 인해 프로브가 빠르게 따뜻해지고 조직이 이질적으로 냉각됩니다(따라서 경색)됩니다. 이러한 한계를 극복하기 위해, 우리는 휴대용 액체 질소 전달 시스템을 활용하는 극저온 절색 모델을 설명하기 위해 여기에 기술한다. 이 모델은 재현 가능하고 수행하기 쉬우며 빠르고 안정적으로 확립할 수 있습니다. 관상 동맥 해부학의 독립적인 재현가능한 경색 병변은 결국 심장 실패로 이끌어 내는 생성됩니다. 이 방법은 신규한 치료 적 약리학 및 조직 공학 기반 전략의 평가를 위한 리모델링 공정을 연구하는 데 특히 적합하다.

<table><tbody><tr><td>10 ml 주사기</td><td>Thermo Scientific</td><td>03-377-23</td><td></td></tr><tr><td>5-0 프롤렌 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 프롤렌 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>8706H</td><td></td></tr><tr><td>8-0 Ethilon 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Absorption Spears</td><td>Fine Science Tools</td><td>18105-01</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>재고 번호 000651</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen 눈과 코 연고</td><td>Bayer</td><td>1578675</td><td>눈 연고</td></tr><tr><td>Betadine Solution Betadine</td><td>Purdue Pharma</td><td>NDC:67618-152</td><td></td></tr><tr><td>둔기 펜치</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>18025-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenex</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>NDC 코드:&nbsp; 12496-0757-1, 12496-0757-5</td><td>부프레노르핀</td></tr><tr><td>극저온 시스템 3mm</td><td>Brymill 극저온 시스템</td><td>Cry-AC-3 B-800</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 70%</td><td>Th. Geyer</td><td>2270</td><td></td></tr><tr><td>집게 곡선</td><td>S& T</td><td>00284</td><td></td></tr><tr><td>집게 미세</td><td>과학 도구</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>집게 표준</td><td>미세 과학 도구</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>총 해부학 프로브</td><td>미세 과학 도구</td><td>10088-15</td><td></td></tr><tr><td>이발기</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>고온 소작 키트</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>ISOFLURANE</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>029405</td><td></td></tr><tr><td>IV 카테터 20G</td><td>B. Braun</td><td>603028</td><td></td></tr><tr><td>Mini-Goldstein 견인</td>기 <td>미세 과학 도구</td><td>17002-02</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>B.Braun</td><td>PZN 06063042&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 예술. 번호: 3570160</td><td>식염</td></tr>수 <tr><td>바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-14</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더, 곡선형</td><td>하버드 장치</td><td>72-0146</td><td></td></tr><tr><td>Novaminsulfon</td><td>Ratiopharm</td><td>PZN 03530402</td><td>Metamizole</td></tr><tr><td>운영 보드&nbsp;</td><td>Braintree Scientific</td><td>39OP</td><td></td></tr><tr><td>교체 가능한 세밀한 팁</td><td>Bovie</td><td>H101</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>세밀한 과학 도구</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>작은 동물 인공호흡기</td><td>Kent Scientific</td><td>RV-01</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위 - 옆면에 각도</td> 조절 세<td>밀한 과학 도구</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>수술용 현미경</td><td>Leica&nbsp;</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Transpore 수술 테이프</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 스프링 가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>기화기&nbsp;</td><td>켄트 사이언티픽</td><td>VetFlo-1205S</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에서 심근 경색을 연구하는 극저온 손상 모델

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

동물 모델의 사용은 급성 관상 동맥 증후군과 그 합병증에 대한 새로운 치료 전략을 개발하는 데 필수적입니다. 이 문서에서는 높은 재현성과 복제성을 가진 정확한 경색 크기를 생성하는 뮤린 저온 상해 경색 모델을 보여줍니다. 간단히 말해서, 동물의 삽관과 흉기 절제술 후 심장이 흉부에서 들어 올려지습니다. 핸드헬드 액체 질소 전달 시스템의 프로브가 심근 벽에 적용되어 저온 손상을 유발합니다. 심실 기능 및 전기 전도 가 손상된 심초음파 또는 광학 매핑으로 모니터링할 수 있습니다. 경색 된 영역의 경막 심근 리모델링은 콜라겐 증착 및 심근 세포의 손실을 특징으로합니다. 다른 모델(예: LAD-결찰)과 비교하여, 이 모델은 핸드헬드 액체 질소 전달 시스템을 활용하여 보다 균일한 경색 크기를 생성합니다.

극저온 상해 경색 모델은 ACS 및 그 합병증을 연구하기에 적합합니다. 낮은 사망률과 효율적인 수술 후 회복이 이 모델에서 볼 수 있습니다. 극저온 손상은 심근 손상을 유발하여 심장 기능 감소, 전기 분리 및 교란 리모델링으로 이어집니다.
심초음파는 생체 내에서 비침습적으로 심장 기능을 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. 극저온 손상 된 심장에서, 심초음파는 크게 감소 된 배출 분획 및 분수 영역 변화를 보여줍니다(그림 1a-c). 기능장애는 수술 후 7일째부터 56일간의 관찰종점까지 이어진다.
상세한 심장 기능은 압력 체적 루프 (PV 루프) 분석을 통해 침략적으로 평가될 수 있습니다. 1.2 Fr 전도도 카테터가 좌심실로 도입되고 좌심실 압력이 좌심실 부피에 대해 플롯됩니다. 스트로크 볼륨, 스트로크 작업, 심장 출력 및 예부하 조정 된 최대...

이 문서는 마우스에서 심근 극저온 손상 후 심장 리모델링을 연구하는 모델을 보여줍니다.

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

이러한 방법은 심근 경색의 생성과 줄기세포 이식 후 심장 회복을 조사하는 데 사용할 수 있는 우수한 플랫폼을 연구할 수 있는 방법이다. 이 절차의 주요 장점은 빠르고 쉽고 재현 가능한 방식으로 균일한 경색 크기를 생성하는 데 사용할 수 있다는 것입니다. 약리학, 또는 조직 공학된 기지를 둔 전략과 같은 새로운 실험 내정간섭은, 이 모형에서 시험될 수 있습니다.그리고 성공적으로 옵션을 더 큰 동물 모델에서 확인할 수 있습니다 테스트. 마취 된 27 그램, 14 주 된 마우스에서 통증 반사에 대한 반응의 부족을 확인한 후, 모발 트리머를 사용하여 동물의 가슴과 목의 털을 제거하고 가열 패드에 마우스를 척추 위치에 놓습니다. 힌지 및 앞다리를 스프레드 이글 위치에 테이프로 지정하고 순차적인 포비도요오드와 80% 에탄올 스크럽을 사용하여 노출된 피부를 소독시합니다.흉골의 하부 3분의 1에서 턱까지 중간선 피부 절개를 하고 곡선 포셉을 사용하여 목 주위의 근육을 조심스럽게 분리하여 기관진을 노출시합니다. 마이크로 가위를 사용하여 두 번째 연골 고리와 세 번째 연골 링 사이의 기관 절제술을 수행합니다. 그리고 0.5 밀리리터의 조수 부피와 분당 110의 환기 주파수로 인공호흡기를 설정합니다.그런 다음 인공호흡기에 연결된 플라스틱 20 게이지 캐뉼라를 기관지에 삽입합니다. 다음으로, 소터를 사용하여 오른쪽 가슴 근육을 세 번째 갈비뼈와 일곱 번째 갈비뼈 사이의 흉골 기원에서 분리하십시오. 그리고 측면 각진 스프링 가위를 사용하여 흉골에 가능한 한 가까운 네 번째에서 6 개의 갈비뼈를 자른다.근본적인 결합 조직을 해부하여 흉부 구멍에 명확한 시야를 확보하고 필요에 따라 출혈을 막기 위해 유방 동맥을 소작합니다. 미니 골드 얼룩 리트랙터를 삽입하여 갈비뼈를 퍼뜨리고 가슴 구멍을 열어 두십시오. 그리고 무딘 집게를 사용하여 심낭을 열어 심장을 노출시합니다.무딘 막대를 사용하여 흉부 구멍에서 심장을 들어 올리고 리트랙터의 긴장을 감소시키고 가슴 개구부를 줄이고 심장이 복강으로 다시 떨어지는 것을 유지하십시오. 직경 3mm의 저온 프로브를 10초 동안 미리 냉각하고, 좌심실 벽에 저온 프로브를 10초 간 적용하여 좌심실, 저온 부상 경색을 생성합니다. 좌심실 벽에서 저온 프로브를 실온 식염수 관개로 분리하고 리트랙터로 가슴 구멍을 다시 확장합니다.막대를 사용하여 심장을 흉부 구멍으로 부드럽게 되돌리고 재굴기를 제거하십시오. 6-0

a-cryoinjury-model-to-study-myocardial-infarction-in-the-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 동영상은 심근 국소 빈혈의 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 연구하기위한 빠르고 안정적​​인 모델을 사용하는 방법을 보여줍니다.

내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델

수많은 유전자 조작 및 / 또는 유전자, 단백질, 세포 및 / 또는 biomaterials의 intramyocardial 주사는 급성 국소 빈혈 / reperfusion 부상과 생쥐의 만성 리모델링의 연구에 시간의 차원에 따라 겹쳐있다. 이 동영상은 국소 빈혈 / reperfusion에 대한 microsurgical 절차, 영구적인 관상 동맥 내고, 그리고 intramyocardial 사출 공부를 보여줍니다.

경색의 Murine 모델에서 관상 동맥 내고과 Intramyocardial 사출

외과 외상은 염증 반응을 유도합니다. 크린 시토킨 및 내생 리간드는 국소 빈혈과 reperfusion에 따라 심근 경색 크기를 조절하는 것으로 알려져 있습니다. 우리는 thoracotomy의 영향을 최소화하기 위해 매달려 가중치를 사용하여 murine 국소 빈혈과 reperfusion의 수정된 폐쇄 가슴 모델을 제시.

심근 국소 빈혈 및 Reperfusion의 Murine 폐쇄 가슴 모델

우리는 재현성을 높이기 위해 좌전 하행 동맥 (LAD)에 결찰의 위치에서 더 명확 수 있습니다 마우스 모델에서 심근 경색 (MI)을 시뮬레이션하기 위해 실험 허혈 / 재관류 (I / R) 손상을 유발하는 수술 방법을 소개합니다 마우스에있는 MI 실험.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

이 프로토콜은 출생 후 1일차 마우스의 좌심실에서 심근경색의 외과적 유도에 의한 재현성이 높은 심장 재생 모델을 설명합니다. 이 방법은 저체온 마취 유도와 좌측 전방 하행 관상 동맥 결찰을 포함합니다.

신생아 쥐의 심근 경색, 심장 재생의 모델

쥐 심근허혈/재관류 수술 중 폐색 합자의 올바른 배치는 일반적으로 심근 창백의 육안 관찰에 의해 확인됩니다. 본 명세서에서는 관찰된 심근 창백함을 보충하기 위해 허혈 및 재관류를 심전도로 확인하는 방법이 수컷 C57Bl/6 마우스에서 입증되었습니다.

표면 패드 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류 손상의 확인

여기서 우리는 마우스에서 좌측 전방 의 관상 동맥의 영구적 인 결찰을 달성하는 방법을 보여주는 외과 적 절차를 설명합니다. 이 모형은 심근 경색의 병리생리학 및 수반되는 생물학 프로세스를 조사하기 위하여 높은 관련성입니다.

왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰을 사용하는 뮤린 심근 경색 모델

적절한 마취 하에 쥐의 심장은 늑간 공간을 통해 외부화되었고, 대부분의 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 좌측 전방 하행 동맥(LAD)을 결찰하여 심근경색을 성공적으로 유도했습니다.

생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

여기에 제시된 것은 생쥐에서 왼쪽 관상 동맥의 영구 결찰을위한 수술 절차입니다. 이 모델은 심근 경색 후 병태생리학 및 관련 염증 반응을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

좌측 관상동맥 결찰술: 심근경색의 외과적 쥐 모델

배우세요 마우스 심근 극저온 손상 모델을 통해 심근 경색 생성 및 심장 재생 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 균일한 경색 크기를 재현 가능하게 생성하여 약물 및 줄기세포 치료 전략을 평가하는 데 활용됩니다.

마우스에서 심근 경색을 연구하는 극저온 손상 모델

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