Name: 수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 s
Description: 배우세요 수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델을 통해 만성 이식 혈관병증을 연구하는 방법을. 이 기법은 새로운 치료제 평가와 이식 생물학 연구에 유용합니다.

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모든 실험은 독일 동물 복지법(TierSchG)의 지침에 따라 수행되었습니다. (AZ: 55.2-1-54-2532.Vet_02-80-2015).
1. 동물 주택
<ol><li>실험의 경우, 수컷 C57BL/6 및 BALB/c 마우스를 C57BL/6 마우스로 20-25g의 무게를 가진 마우스를 기증자 동물로 사용하십시오.</li>
	<li>건강 모니터링을 위한 FELASA 지침에 따라 병원균이 없는 장벽 시설에서 동물과 집을구입한다 12.</li>
	<li>농축 중첩 재료와 표준 Makrolon 케이지에 마우스를 유지합니다. 12 시간의 주야간 주기로 물과 펠릿 식품에 대한 광고 리비텀 액세스를 제공합니다.</li>
	<li>실온을 22±2°C로 유지하고 상대 습도를 55±5%로 유지합니다.</li>
</ol>2. 수령인 준비
<ol><li>첫째, 수령인 동물 (C57BL / 6)을 미다졸람 (5 mg / kg; 5 mg / mL), 메데토 미딘 (0.5 mg / kg; 1 mg / mL) 및 펜타닐 (0.05 mg / kg; 0.05 mg / mL)의 복강 내 주사로 마취하십시오. 참고 : 마취의 정확한 깊이는 5-10 분 안에 도달해야합니다.<ol>
<li>마취의 깊이를 확인하기 위해 반사 신경을 확인하기 위해 집게로 뒷발을 꼬집습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>작은 동물을위한 전기 헤어 클리퍼로 자궁 경부 측면 영역의 모든 머리카락을 잘라 내고 시술 중에 눈이 건조하지 않도록 면봉으로 안과 연고를 바하십시오.</li>
	<li>동물을 현미경 아래 의 가열 패드에 supine 위치에 놓고 피부에 민감한 석고 스트립으로 수술대에 다리를 부드럽게 테이프로 채우십시오.</li>
	<li>머리를 뒤로 젖게 하고 수술장을 알코올로 여러 번 문지하십시오.</li>
	<li>작은 가위로 경막 절개에서 오른쪽 하악하수로 피부를 절개합니다.</li>
	<li>혈관 혈통의 양극성 소작을 통해 하악골선의 오른쪽 하엽을 제거하고 미세시저로 후속 절제하십시오.</li>
	<li>상부 및 하부의 양극성 소작을 통해 오른쪽 sternocleidomastoid 근육을 제거하고 일반적인 경동맥에 대한 액세스를 얻기 위해 미세 시저로 후속 절제.</li>
	<li>일반적인 경동맥을 미세 한 집게로 주변 결합 조직을 분리하여 가능한 한 멀리 경질및 근접으로 동원하십시오.</li>
	<li>일반적인 경동맥의 중간 주위의 각 사이의 최소 거리로 두 개의 7-0 실크 합자를 묶고 합자 사이의 미세 한 미세 미세 로 일반적인 경동맥을 트랜스.</li>
	<li>커프를 통해 근위, 결찰 끝을 전달하고 작은 동맥 클램프로 고정합니다. 참고 : 이 절차에 사용된 커프스는 0.610 mm의 외경과 0.0254 mm의 벽 두께를 가진 폴리이미드 튜브의 마이크로매저로 절단되었습니다. 완성 된 커프스는 커프 프로세스에 사용되는 절반 ~ ~ 2mm의 길이를 가지고 있었고, 전체 실린더와 다른 절반은 고정되어 반 실린더가되었습니다.</li>
	<li>합자에 가깝게 미세 한 미세 매기로 합자를 제거하고 혈관 벽을 손상시키지 않도록주의하면서 30G 바늘로 헤파린 식염수 (50 IU / mL)로 루멘을 플러시하십시오.</li>
	<li>미세 혈관 확장기를 사용하여 오픈 루멘을 해체하고 폴리이미드 튜브 위로 부드럽게 당겨 서커 위에 경동맥 그루터기를 적당히 합니다.</li>
	<li>느슨하게 미리 묶인 7-0 실크 루프로 적의 경동맥을 즉시 수정하십시오. 참고 : 느슨하게 사전 넥타이 4 7-0 실크 루프는 수술 전에 약 1.5 mm의 직경을 통해 커프 스프로시프를 부드럽고 쉽게 만듭니다.</li>
	<li>경동맥의 다른 쪽 끝에서 동일한 절차 (2.10-2.13)를 수행하십시오.</li>
	<li>수령인 동물을 옆으로 설정하고 대동맥 분절이 이식될 때까지 식염수로 수술장을 보습합니다.</li>
</ol>3. 기증자 운영
<ol><li>기증자 마우스(BALB/c)를 수취인 동물과 동일한 방식으로 마취시보합니다.<ol>
<li>충분한 마취를 확인하기 위해 반사 신경을 확인하기 위해 집게로 뒷발을 꼬집습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>작은 동물을위한 전기 헤어 클리퍼로 복부와 흉부 부위의 모든 머리카락을 잘라내고 시술 중에 눈이 마르지 않도록 면봉으로 안과 연고를 바하십시오.</li>
	<li>동물을 현미경 아래 의 가열 패드에 supine 위치에 놓고 피부에 민감한 석고 스트립으로 수술대에 다리를 부드럽게 테이프로 채우십시오.</li>
	<li>알코올로 수술 장을 여러 번 문지하십시오.</li>
	<li>작은 가위로 중간 선 복부 개복술을 수행하고 열등한 정맥 (IVC)을 노출하기 위해 약간 위쪽으로 내장을 밀어.</li>
	<li>30G 바늘을 사용하여 1 mL의 헤파린식 식염수로 열등한 정맥 (IVC)을 주입하십시오.</li>
	<li>작은 가위로 신장 동맥 아래에 복부 대동맥과 IVC를 잘라 기증자 동물을 추방합니다. 느슨하게 혈액을 흡수하기 위해 복부에 압축을 놓습니다.</li>
	<li>가위로 갈비뼈의 양측 전환에서 흉부 절제술을 수행하고 수술 용 클램프로 앞쪽 흉벽을 두개골로 기울여 매질에 노출시보입니다.</li>
	<li>IVC와 식도를 마이크로시저로 다이어프램 바로 위에 자른다.</li>
	<li>절단 된 IVC / 식도를 들고 집게로 위로 기울어 심장과 폐를 제거한 다음 등쪽 매개체의 흉부 대흉에 액세스하기 위해 기지에서 미세 토저로 절제하십시오.</li>
	<li>주변 조직에서 흉부 대동맥을 주위 결합 조직과 지방을 미세 한 집게로 떼어 내어 주위 조직으로부터 동원하면서 늑간 동맥을 손상시키지 않도록주의하십시오.</li>
	<li>양극성 소작 집게로 흉부 대동맥의 모든 가지를 소작하고 마이크로시저를 사용하여 횡격막과 대동맥 아치 사이의 대동맥 세그먼트를 절제합니다.</li>
	<li>30G 바늘로 헤파린화 된 식염수로 절제 된 대동맥 부분을 씻어 내고 혈관 벽을 손상시키지 않도록주의하면서 남은 혈액이나 혈전을 제거하고 이식편을 받는 동물에게 옮니다. 참고: 대동맥 이식편을 이식 중에 받는 사람 오른쪽에 배치합니다. 수용자 동물에서 접목의 다른 끝을 혼동하는 문제가 있는 경우, 말단 주위의 느슨한 합자가 도움이 될 수 있습니다.</li>
</ol>4. 이식
<ol><li>기증자 대동맥 의 근위쪽 끝을 미세 한 집게로 적당히 경동맥 위에 밀어 붙이고 느슨하게 미리 묶인 7-0 실크 루프로 즉시 고정하십시오.</li>
	<li>접목 길이가 두 커프사이의 거리에 맞을 수 있도록 대동맥 이식의 말단, 자유 끝을 마이크로시저로 다듬습니다.</li>
	<li>대반의 다른 쪽 끝에서 4.1 단계를 다른 커프와 반복하여 해부학을 완료합니다.</li>
	<li>역행 관류를 허용하기 위해 말위 클램프를 제거합니다.</li>
	<li>지혈을 달성 한 후 근위 클램프를 제거하여 해부학을 완료하십시오.</li>
	<li>마지막으로, 6-0 연속 봉합사로 상처를 닫습니다.</li>
</ol>5. 수술 후 치료
<ol><li>수술 후 처음 6시간 동안 마우스를 면밀히 모니터링한 다음 이식 후 첫 72시간 동안 하루에 여러 번 마우스를 모니터링하여 합병증을 즉시 감지합니다.</li>
	<li>수술 후 진통의 경우 이식 된 마우스를 이식 후 직접 피하 (0.05-0.1 mg/kg)로 주입한 다음 72 시간 마다 적절한 장기 진통을 제공합니다.</li>
</ol>6. 대동맥 이식 설명
<ol><li>이식된 동물을 미다졸람(5 mg/kg; 5 mg/mL), 메데토미딘(0.5 mg/kg; 1 mg/mL) 및 펜타닐(0.05 mg/kg; 0.05 mg/mL) 이식 후 4주 후에 이식한 동물을 마취시킵니다.<ol>
<li>충분한 마취를 확인하기 위해 반사 신경을 확인하기 위해 집게로 뒷발을 꼬집습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>작은 동물을위한 전기 헤어 클리퍼와 복부, 흉부 및 자궁 경부의 모든 머리를 클립.</li>
	<li>동물을 현미경 아래 의 가열 패드에 supine 위치에 놓고 피부에 민감한 석고 스트립으로 수술대에 다리를 부드럽게 테이프로 채우십시오.</li>
	<li>알코올로 수술 장을 여러 번 문지하십시오.</li>
	<li>작은 가위로 중간 선 복부 개복술을 수행하고 열등한 정맥 (IVC)을 노출하기 위해 약간 위쪽으로 내장을 밀어.</li>
	<li>30G 바늘을 사용하여 1 mL의 헤파린식 식염수로 열등한 정맥 (IVC)을 주입하십시오.</li>
	<li>작은 가위로 신장 동맥 아래에 복부 대동맥과 IVC를 잘라 기증자 동물을 추방합니다. 느슨하게 혈액을 흡수하기 위해 복부에 압축을 놓습니다.</li>
	<li>이식 시술 중에 만든 피부 절개에 해당하는 작은 가위로 경막 절개에서 오른쪽 하악하수로 피부 절개를 합니다.</li>
	<li>이식된 대동맥 이식편을 말단 및 근위 커프와 함께 식별하고 집게로 주변 조직을 무딘 제거합니다.</li>
	<li>microscisorsors를 사용하여, 두 개의 커프스 끝과 함께 대동맥 이식편을 내파하기 위해 소맷부리와 대동맥 이식편으로 일반적인 경동맥 말단및 근접을 잘라냅니다.</li>
	<li>대동맥 세그먼트를 반으로 자르고 추가 분석을 위해 시편을 보존합니다 (냉동 단면, 파라핀 임베디드 섹션, 스냅 냉동 재료)13,14.</li>
</ol>

<ol><li>Rana, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+benefit+of+solid-organ+transplant+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Surgery%22%5BJournal%5D)">Survival benefit of solid-organ transplant in the United States.</a> JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).</li>
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</ol>

저자는 그들이 경쟁 적인 재정적 이익이 없다고 선언합니다.

만성 동종 이식 혈관 병증은 심장의 고체 장기 이식 후 후기 이식 손실의 주요 원인이며 신장 및 폐 동종 이식 가능성이8. 지금까지, CAV의 형성을 방지하기 위해 인과 치료 식이요법이 개발될 수 없었다.
CAV의 병리생리학은 다인성이며 면역학 및 비면역학적 측면을수반한다 16. 이식에 설치류 모형의 사용은 고체 기관 이식에 있는 동종 이식 거부 프로세스의 근본적인 병리생리학이해에서 필수적이고 거부를 방지하는 새로운 치료 접근을 확인하는 것을 도왔습니다17 . CAV는 혈관 평활근 세포로 구성된 신형성층의 형성을 특징으로 하며, 이는 장기기능의후속 악화와 함께 이식된 기관의 혈관및 악성화의 연속적인 협착으로 이어지는 7.
기재된 뮤린 대동맥 이식 모델에서, 동심...

지난 6 년간, 고체 기관 이식은 말기 기관 실패의 처리를 위한 배려의 표준에 실험적인 절차에서 발전했습니다1. 항균제의 개선, 외과 적 기술 및 면역 억제 연대의 발전으로 인해 고체 장기 이식의 초기 성공률은 지난 수십 년 동안 크게 증가했습니다2.
그러나, 장기 이식 생존율은 동일한 방식으로 유의적으로 개선되지 않았다3. CAV의 발달은 장기 생존을 제한하는 주요요인이다4,5,6. 이 병리학은 평활근 세포로 구성된 동심 신생 층의 형성을 특징으로하며, 혈관의 점진적 협착과 이식 된 고체 장기의 연속적인 악성 주입을 초래합니다. 심장 이식 수령인에서, CAV 병변은 환자의 75%까지 에서 진단될 수 있습니다 3 이식 후에 년7.
CAV의 병리생리학은 아직 완전히 이해되지 않았습니다. 수많은 면역학 및 비면역학적 인자와 관련이 있는 것으로 보이며, 후속 내피 활성화 및 기능 장애와 함께 내피 손상을초래하는 8. 지금까지 CAV의 형성 및 잠재적 치료를 연구하기 위해 재현 가능한 작은 동물 모델의 필요성을 강조하면서 CAV의 예방을 위한 인과 적 치료 옵션이 존재하지 않습니다.
뮤린 대동맥 이식 모델의 사용으로, 병변 과 같은 CAV는 이식 후 4 주 볼 수 있습니다. 그 병변은 주로 혈관 평활근 세포로 구성되어 인간의 병리학을 닮습니다. 다양한 형질전환 및 마우스 노크로 인해 이식 관련 병리학에서 마우스 모델을 사용하면 새로운 치료 옵션을 식별하고 발달을 이해할 수있는 독특한 기회를 제공합니다. 그러나 이식된 혈관의 작은 직경으로 인해 마우스 모델의 사용은 일반적으로 긴 학습 곡선 및 초기 높은 합병증 비율9와관련이 있습니다. 비 봉합사 커프 기술의 도입으로, 이 가장 어려운 작업 부분은 촉진 될 수 있으며 해부학의 직경은일정하게 10,11로유지됩니다.

<table><tbody><tr><td>Balb-c Mice (H2-d)</td><td>Charles River</td><td>Strain# 028</td><td>기증자 동물</td></tr><tr><td>양극성 소작 시스템</td><td>ERBE</td><td>ICC 50 / 20195-023</td><td>양극성 소작</td></tr><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>Charles River</td><td>Strain# 027</td><td>수용자 동물</td></tr><tr><td>Halsey 바늘 홀더</td><td>FST</td><td>12501-12</td><td>바늘 홀더</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Forceps</td><td>AESCULAP</td><td>BH111R</td><td>곡선 클램프</td></tr><tr><td>의료 폴리이 미드 튜빙</td><td>Nordson MEDICAL</td><td>141-0031</td><td>커프 재질</td></tr><tr><td>Micro Serrefines</td><td>FST</td><td>18055-04</td><td>마이크로 용기 클립</td></tr><tr><td>마이크로 애드슨 집게 (톱니 모양)</td> <td>FST</td><td>11018-12</td><td>표준 집게</td></tr><tr><td>마이크로 Serrefine 클램프 적용 집게</td><td>FST</td><td>18057-14</td><td>클립 애플리케이터</td></tr><tr><td>에스& T 집게 - SuperGrip 팁(각도 45도)</td><td>에스& T</td><td>00649-11</td><td>파인 펜치</td></tr><tr><td>S & T Vessel 확장 펜치 - 각도 10&deg; (팁 직경 0.2 mm)</td><td>에스& T</td><td>00125-11</td><td>Vesseldilatator</td></tr><tr><td>Schott VisiLED 세트</td><td>Schott</td><td>MC 1500 / S80-55</td><td>광</td></tr><tr><td>입체 현미경</td><td>ZEISS</td><td>SteREO Discovery.V8</td><td>현미경</td></tr><tr><td>학생 미세 가위 / 수술 용 가위 - Sharp-Blunt</td><td>FST</td><td>91460-11 / 14001-12</td><td>표준 Sissors</td></tr><tr><td>Vannas-T &uuml; bingen 스프링 가위 (곡선, 8.5cm)</td><td>FST</td><td>15004-08</td><td>Microsissors (curved)</td></tr><tr><td>Vannas-T&uuml; bingen 스프링 가위 (스트레이트, 8.5 cm)</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td>Microsissors (스트레이트)</td></tr></tbody></table>

수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

강력한 면역 억제 프로토콜의 도입으로 급성 거부 에피소드의 예방 및 치료에서 뚜렷한 발전이 가능합니다. 그러나, 이식 된 고체 장기의 장기 결과에 있는 사소한 개선만 지난 십년간 내내 관찰될 수 있었습니다. 이러한 맥락에서, 만성 동종 이식 혈관 병증 (CAV)은 여전히 심장, 신장 및 폐 이식에서 후기 장기 실패의 주요 원인을 나타냅니다.
지금까지 CAV 발달의 근본적인 병인은 불분명하게 남아, 효과적인 처리 전략이 현재 누락되는 이유를 설명하고 근본적인 병리생리학을 공부하기 위하여 관련 실험 적인 모형을 위한 필요를 강조하 CAV 형성. 다음 프로토콜은 변형된 비봉합사 커프 기술을 사용하여 뮤린 이종 자궁 경부 대동맥 이식 모델을 기술한다. 이 기술에서는 흉부 대동맥의 세그먼트가 오른쪽 일반적인 경동맥에 편치됩니다. 비 봉합소 커프 기술을 사용하여 쉽게 배우고 재현 할 수있는 모델을 확립하여 봉합 된 혈관 미세 해부학의 가능한 이질성을 최소화 할 수 있습니다.

완전 MHC-미스매치 이식 모델에서, 동심 신생층은 이식 후 4주 후에 볼 수있다(도 2). 이 층은 주로 SM22(성숙한 혈관 평활근 세포에 대한 선택적 마커)에 대한 면역조직학적 염색으로서 혈관 평활근 세포로 구성된다. 앞서 언급한 바와 같이, 이들 혈관 평활근 세포는 만성 동종 이식 혈관병증에서 보이는 병변에 대한 병변에 대한 병리현상이다. 추가 분석을 위해 대동맥 세그먼트는 Elastica van Gieson 염색으로 단면화되고 염색되어야 합니다. 여기서, 신인티마 층은 투니카 매체로부터 투니카 인티마를 분할하는 내부 탄성 멤브레인의 탄성 섬유로 쉽게 분화될 수 있다.
이 모델에서 잠재적인 치료 효과를 평가하기 위해, neointima-media 비뿐만 아니라 광단 단면적 좁히는, 그 단면 샘플13,<sup class="xre...

여기서, 우리는 자궁 경부 뮤린 모델에서 비 봉합술 커프 기술을 사용하여 마우스에서 이종성 대동맥 이식의 프로토콜을 제시한다. 이 모형은 만성 동종 이식 혈관병증 (CAV)의 근본적인 병리를 공부하기 위하여 이용될 수 있고 그것의 대형을 방지하기 위하여 새로운 치료에이전트를 평가하는 것을 도울 수 있습니다.

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...

나는 뮌헨에 있는 LMU의 일반, 내장 및 이식 수술의 부의 연구 실험실에서 마틴 Ryll입니다. 오늘 우리는 수정 된 비 봉합소 커프 기술을 사용하여 뮤린 이성애 대동맥 이식 모델을 보여줄 것입니다. 첫째, 미다졸람, 메데토미딘 및 펜타닐의 복막 내 주사로 수령인 동물을 마취시킵니다.작은 동물을 위한 전기 머리 클리퍼로 자궁 경부 측지의 모든 머리를 잘라내고 절차 도중 눈이 건조되는 것을 방지하기 위하여 면 봉면으로 안과 연고를 적용합니다. 현미경 아래 가열 패드에 척추 위치에 동물을 배치하고 부드럽게 피부 민감한 석고 스트립과 수술대에 다리를 테이프. 머리를 뒤로 기울여 술로 수술장을 여러 번 문질러 보세요.작은 가위로 오른쪽 하악하악에 경정맥 절개에서 피부 절개를 합니다. 혈관 페디클의 양극성 소와 마이크로 가위를 가진 후속 절제를 통해 하안 선의 오른쪽 하부 엽을 제거합니다. 상부 및 하부의 양극성 소와 일반적인 경동맥에 접근하기 위해 마이크로 가위를 가진 후속 절제를 통해 오른쪽 sternocleidomastoid 근육을 제거합니다.주변 결합 조직을 미세 한 집게로 분리하여 가능한 한 멀리 분해되고 근교로 일반적인 경동맥을 동원하십시오. 일반적인 경동맥 의 중간 주위에 서로 사이의 최소한의 거리로 두 7-0 실크 합자를 묶고 합자 사이의 미세 한 마이크로 가위와 일반적인 경동맥을 transect. 근위 결찰 끝을 커프스를 통과하고 작은 동맥 클램프로 고정합니다.가능한 한 합자에 가까운 미세 마이크로 가위로 합자를 제거하고 혈관 벽을 손상시키지 않도록주의하면서 30 게이지 바늘로 헤파리네이드 식염수로 루멘을 플러시하십시오. 미세한 혈관 확장제를 사용하여 열린 루멘을 불구속 시키고 폴리아미드 튜브 위로 부드럽게 당겨 서 커프스 위에 경동맥 그루터기를 반전시십시오. 느슨하게 미리 묶인 7-0 실크 루프로 반전된 경동맥을 즉시 수정합니다.다른 커프와 경동맥의 다른 쪽 끝에서 동일한 절차를 수행합니다. 소맷부리 끝을 커프스를 통과하고 작은 동맥 클램프로 고정합니다. 가능한 한 합자에 가까운 미세 마이크로 가위로 합자를 제거하고 혈관 벽을 손상시키지 않도록주의하면서 30 게이지 바늘로 헤파리네이드 식염수로 루멘을 플러시하십시오.미세한 혈관 확장제를 사용하여 열린 루멘을 불구속 시키고 폴리아미드 튜브 위로 부드럽게 당겨 서 커프스 위에 경동맥 그루터기를 반전시십시오. 느슨하게 미리 묶인 7-0 실크 루프로 반전된 경동맥을 즉시 수정합니다. 수령인 동물을 따로 놓고 대동맥 세그먼트가 식염수로 상위 2/3을 수분을 공급합니다.기증자 마우스를 받는 동물과 동일한 방식으로 마취합니다. 복부와 흉부 부위의 모든 모발을 작은 동물용 전기 모발 클리퍼로 잘라내고 면 봉면으로 안과 연고를 발라 시술 중에 눈이 건조되는 것을 방지합니다. 현미경 아래 가열 패드에 척추 위치에 동물을 배치하고 부드럽게 피부 민감한 석고 스트립과 수술대에 다리를 테이프.술로 수술장을 여러 번 문질러보시다. 작은 가위로 중간라인 복부 복강경절제술을 수행하고 창자를 약간 위로 밀어 열등한 정맥 카바를 노출시하십시오. 30 게이지 바늘을 사용하여 헤파린화 식염수의 1 cc로 IVC를 주입하십시오.기증자 동물을 exsanguinatesorsors로 신장 동맥 아래 복부 대동맥과 IVC를 잘라. 느슨하게 혈액을 흡수하기 위해 복부에 압축을 배치합니다. 가위로 갈비뼈의 양자 전환을 통해 흉부 절제술을 수행하고 외과 용 클램프로 전방 가슴 벽을 벼랑이 기울여 내시경을 노출시하십시오.IVC와 식도를 마이크로 가위로 다이어프램 바로 위에 자른다. 절단 된 IVC와 식도를 들고 집게로 위쪽으로 그들을 적시고 흉부 대오르막과 등쪽 거산에 액세스 할 수 있도록 기지에서 마이크로 가위로 그들을 흥분시켜 심장과 폐를 제거합니다. 주변 결합 조직과 지방을 미세 한 포셉으로 떼어 내어 주변 조직에서 흉부 대동맥을 동원하여 늑간 동맥을 손상시키지 않도록주의하십시오.양극성 소작 집게로 흉부 대동맥의 모든 가지를 소작하고 마이크로 가위를 사용하여 다이어프램과 대동맥 아치 사이의 대동맥 세그먼트를 소비합니다. 남은 혈전이나 혈전을 제거하고 이식편을 받는 동물에게 이식편을 옮기는 혈관 벽을 손상시키지 않도록 주의하면서 30 게이지 바늘로 분리된 대동맥 세그먼트를 세척한다. 기증자 대동맥 세그먼트의 근접 세그먼트를 미세 한 집게로 거꾸로 된 경동맥 위에 밀어 내고 느슨하게 미리 묶인 7-0 실크 루프로 즉시 고정하십시오.접목 길이가 두 커프사이의 거리에 맞게 되도록 대동맥 이식편의 말단 프리 엔드를 마이크로 가위로 다듬습니다. 기증자 대동맥 세그먼트의 단층 을 미세 한 집게로 거꾸로 된 경동맥 위에 말단 커프 위에 당기고 느슨하게 미리 묶인 7-0 실크 루프로 즉시 고정하십시오. 역행 관류를 허용하기 위해 먼저 탈단 클램프를 제거합니다.hemostasis를 달성한 후에는 근위 클램프를 제거하여 해부학을 완료합니다. 마지막으로, 6-0 연속 봉합사로 상처를 닫습니다. 28 일 후, 동물을 희생하고 이식편은 조직학적 얼룩을 위해 보존됩니다.대동맥 섹션의 이 Van-Gieson의 얼룩에서 와 같이, 완전히 MHC는 발브/c 기증자에서 흑인 6명의 수신자에 완전히 접목된 대동맥을 불일치시키는 것은 빛나는 협착의 결과로 중요한 신자극 증식을 개발했습니다. 한편, 흑인 6명의 기증자에서 흑인 6명의 수혜자에 이르는 시너지 성 대동맥 이식은 작은 신자극성 증식만을 개발했다. 녹색 형광에 도시된 바와 같이, 혈관 평활근 세포에 대한 염동성 염색은 주로 혈관 의 매끄러운 근육 세포로 구성되어 있음을 보여줍니다.뮤린 대동맥 이식은 늦은 이식 실패의 일반적인 원인인 만성 이식 혈관병증을 위한 모형 역할을 합니다. 치열 교정 복부 모델에 비해, 우리의 수정 된 커프 기술은 높은 성공률로 이어지는 덜 미세 수술 요구입니다. 또한, 커프의 일정한 직경으로 인해 다른 미세 수술 이식 모델에서 볼 수 있듯이 혈관 해부학의 변이를 무시할 수 있습니다.더욱이, 따뜻한 허혈시간은 대동맥 세그먼트가 심어지기 전에 먼저 수용자 동물이 준비됨에 따라 실험군 전체에 걸쳐 일정하게 유지됩니다. 우리의 수정 된 모델은 다른 실험실이 뮤린 대동맥 이식을 확립하는 데 도움이될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

여기, 우리는 두 번 시드를 부분적으로 유도 만능 줄기 세포로 쥐에 이식을위한 기능적인 조직 설계 혈관 이식을 생성하는 프로토콜을 제시 (PiPSC은) - 탈세 포화 선박 발판 생물 반응기에서 유래 내피 세포 - 평활근 세포 및 PiPSC 산출했다.

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

우리는 orthotopic 대동맥 이식 모델 마우스에 슬리브 기술을 사용 하 여 현재. 혈관 질환의 연구에 사용할 수 있는 매우 빠른 문 합 방법 이다.

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

마우스 자궁 경부 이성애 심장 이식을 위한 커프 기술에 대한 내부 튜브 접근법을 도입하여 커프스 위에 혈관을 상회합니다. 우리는 두 경험이 풍부한 외과 의사 사이의 협력이 수술 시간을 현저하게 단축한다는 것을 발견했습니다.

뮤린 심장 이식을 위한 커프 기술의 최적화

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

여기에서는 커프 기법을 사용하여 조직 공학 혈관 이식편을 마우스 경동맥에 이식하기 위한 프로토콜을 제시하여 혈관 조직 재생 메커니즘을 조사하는 데 적합한 동물 모델을 제공합니다.

커프 기법을 통한 마우스 경동맥에 조직 공학 혈관 이식편 이식

이 프로토콜은 마우스에서 커프가 없고 봉합 기반인 경추 이종성 심장 이식 기법을 제시하여, 이물질 간섭이 최소화된 생리학적 조건에서 기증자 특이적 면역 관용을 평가하기 위해 두 번째 이종성 심장 이식편을 신뢰성 있게 배치할 수 있도록 설계되었습니다.

마우스의 기증자 특이적 면역 내성을 평가하기 위한 2차 이종성 심장 이식을 위한 커프스 없는 봉합선 기반 자궁경부 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

배우세요 수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델을 통해 만성 이식 혈관병증을 연구하는 방법을. 이 기법은 새로운 치료제 평가와 이식 생물학 연구에 유용합니다.

수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델

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