초적혈구 멜라노가스터의생존능력을 배아에서 성인으로 평가하는 직접적이고 간단한 방법

이 분석의 주요 장점은 음식 유리병으로 옮기기 위해 배아 헹이 필요 없이 기술적 오류로 인한 손실을 피하기 때문에 단순함과 정확성입니다. 이 프로토콜에는 전문적인 기술 기술이 필요하지 않습니다. 그러나 적절한 타이밍과 신중한 물 전달은 정확성과 재현성에 중요합니다.

이 절차를 시연하는 것은 안토니오 록웰, 내 실험실에서 최근에 졸업 박사 과정 학생이 될 것입니다. 시술을 시작하기 전에 35mm 페트리 접시에 포도 향을 부어 반으로 가득 차서 한 시간 동안 한천을 고체할 수 있습니다. 한천이 고화되면 작은 플라스틱 칼을 사용하여 접시 바깥쪽 주변의 한천 표면을 부드럽게 긁어 내며 접시 의 중간에 긁힘이 없도록 합니다.

그런 다음 소량의 갓 준비된 효모 페이스트를 접시 중앙에 놓고 접시를 배아 컬렉션 미니 케이지에 넣습니다. 배아 수집을 위해, 24 시간 동안 수집 케이지 안에 있는 2명의 처녀 Drosophila 암컷 및 1개의 젊은 남성. 다음 날, 배아를 찾기 위해 한천 판의 바닥을 검사합니다.

배아가 놓인 경우, 한천판을 습한 챔버로 옮기고 탈수를 피하기 위해 뚜껑으로 접시를 덮습니다. 며칠 간의 누워서 점수를 매겨야 한다면, 새로운 한천 판을 컬렉션 케이지에 넣습니다. 현미경을 사용하여 부화배와 L1 애벌레의 수를 결정하고, 모든 배아가 부화하고 L1 애벌레로 발전할 때까지 실온에서 습한 챔버로 배아를 반환한다.

48 시간 후에, 부화배와 L1 애벌레의 수를 계산하고 조심스럽게 페트리 접시에서 포도 화서의 디스크를 제거하기 위해 주걱을 사용하여 디스크를 수용 할 수있을만큼 큰 음식 유리병에 음식에 디스크 L1 측면을 배치합니다. 그런 다음 페트리 접시를 조심스럽게 검사하여 남은 애벌레를 검사합니다. L2와 L3 애벌레가 음식에 그들의 방법을 만드는 관찰될 수 있다는 것을 확인하기 위하여 매일 대략 같은 시간에 매일 음식 유리병을 감시합니다.

더 이상 성인이 관찰되지 않고 후속 세대를 계산하지 않도록 계속, 강아지와 성인 Drosophila의 수를 기록합니다. 그런 다음 치 스퀘어 분석을 수행합니다. null 가설은 성인의 수가 원래 기록되고 음식 유리병으로 옮겨지는 부화 배아및 L1의 수와 같을 수 있도록 100%의 생존가능성을 가정합니다.

한천이 유리병의 측면에 놓일 때, 많은 배아와 애벌레가 포도 한천 디스크 탈수로 인해 성인에게 성숙하지 않습니다. 포도 한천이 유리병 내부에 직접 접촉하여 유리병 내부에 얼굴을 아래로 두면, 한천이 유리병 내부의 인스턴트 식품의 수분과 접촉하면서 수분을 공급하기 때문에 자손의 6% 미만이 전형적으로 손실됩니다. 야생형 및 돌연변이 자손 발달을 비교하는 대표적인 실험에서, 돌연변이 자손의 약 91%가 야생형 파리의 자손의 94%에 비해 이 방법을 사용하여 성년으로 성숙하였다.

식기 디스크 배아 쪽을 음식 병으로 옮은 다음 빈 페트리 접시를 확인하여 옮겨지지 않은 남은 애벌레를 확인하십시오. 또 다른 중요한 단계는 탈수방지를 위해 배아 컬렉션 미니 케이지에서 포도 한천 판을 제거한 후 48시간 이상 식품 유리병에 한 천 디스크를 옮기는 것입니다.