Name: 모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 학습 및 기억 능력 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: 학습하세요 모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 공간 학습 및 기억 능력 평가 방법입니다. 수지침 치료가 인지 기능에 미치는 영향을 분석하여 신경과학 연구에 활용할 수 있습니다.

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후일링 티안과 닝 딩은 공동 첫 번째 저자입니다. 지강 리와 징장은 공동 저자입니다. 이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (그랜트 번호 81804178, 81473774, 및 81503654)에서 보조금에 의해 지원되었다. 본 명세서에 기술된 프로토콜 및 결과는 "수동 침술의 참여는 알츠하이머 병의 SAMP8 마우스 모델에서 행동과 대뇌 혈류를 조절한다"는 기사에서 유래했다.

이 프로토콜은 중국 의학 대학의 동물 윤리위원회에 의해 승인되었으며, 중국의 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 모든 지침에 따라. 실험 절차 도중 우발적인 죽음 상황이 없었고, 이 연구에서 안락사될 필요가 없는 동물도 없었습니다.
1. 준비
<ol><li>구매 30 남성 SAMP8 마우스와 10 남성 SAMR1 마우스 (나이: 8 개월).</li>
	<li>24°C의 온도와 12시간 의 어두운/빛 주기에서 개별 환기 케이지에 마우스를 개별적으로 보관하십시오.</li>
	<li>표준 펠릿 다이어트 사용 가능한 광고 리비툼으로 마우스를 공급하고 멸균 식수를 제공합니다.</li>
	<li>모든 마우스를 실험 전 5일 동안 환경에 적응시다.</li>
</ol>2. 동물의 그룹화
<ol><li>무작위로 30 SAMP8 마우스를 세 그룹 (n = 10 / 그룹)으로 나눕니다 : AD 그룹, 수동 침술 (MA) 그룹 및 의학 (M) 그룹.</li>
	<li>10개의 SAMR1 마우스를 정상 대조군(N) 군6으로사용한다.</li>
</ol>3. 도네페질 염산염 정제의 관리
<ol><li>도네페질 염산염 정제(5 mg/정제)를 분쇄하고 증류수 50 mL에 녹입니다.</li>
	<li>MA 치료 및 MWM 검사가 수행되는 날을 포함하여 전체 실험 동안 하루에 한 번경구 을 사용하여 마우스에 1 mg / kg의 용량으로 3.1 단계로 준비 된 약을 전달하십시오.</li>
</ol>4. 수동 침술의 관리
<ol><li>마우스 백에 MA 군의 마우스를 고정시.</li>
	<li>일회용 멸균 침술 바늘 (0.25 mm x 13mm)을 사용하고 20 분 동안 코쪽으로 바이후이 (GV20)와 인탕 (GV29)5에 MA의 평평한 가시 방법을 적용하십시오.</li>
	<li>MA 치료 및 MWM 검사가 수행되는 날을 포함하여 전체 실험 동안 매번 ~ 15s마다 약 180 r /min의 속도로 90 ° 이내의 조작을 양방향으로 돌이킵니다.</li>
</ol>5. MWM 테스트
참고: 15일 연속 치료 후 24시간에서, 4개의 그룹에서 마우스를 MWM 시험으로 대상화하였다. 가시적인 플랫폼 평가판, 숨겨진 플랫폼 평가판, 프로브 재판 및 반전 시험을 순서대로 수행합니다.
<ol><li>MWM 테스트를 준비합니다.<ol>
<li>MWM 장치와 신호 수집 및 처리 시스템을 방음 유지하도록 설계된 실험실에 배치합니다.</li>
		<li>MWM 장치 중간에 불투명 한 천으로 둘러싸인 원형 흰색 탱크 (직경 = 90cm, 높이 = 50cm)를 넣습니다.</li>
		<li>비디오 카메라를 MWM 장치의 천장에 고정하고 자동화된 추적 시스템을 사용하여 비디오 레코더에 연결하여 데이터를 수집합니다.</li>
		<li>물 미로 탱크를 두 개의 상호 수직 선을 사용하여 동일한 4개의 동일한 영역으로 나누어 북쪽(N), 남쪽(S), 동쪽(E) 및 서쪽(W)으로 표시합니다. 풀 영역을 개념적으로 동일한 크기의 네 개의 사분면(NE, NW, SW 및 SE)으로 나눕니다.</li>
		<li>마우스 의 시야 내에서 각 사분면의 벽에 서로 다른 모양의 시각적 단서를 시각적 참조(예: 사각형, 삼각형 및 원)로 배치합니다. 참고: 말단 신호는 플랫폼을 찾기 위한 동물의 탐색 참조 지점입니다. 따라서 테스트 중에 이동하지 마십시오. 연구원의 위치는 잠재적인 말단 단서이며 MWM에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서, 연구원은 동물이 시험을 능력을 발휘하기 위하여 기다리는 동안 마우스의 시야에서 머물러야 합니다.</li>
		<li>원형 탱크를 30cm 깊이로 물로 채우고 전기 히터로 22 ± 2 °C에서 유지하십시오.</li>
		<li>약 150g의 분유로 물을 불투명하게 만듭니다.</li>
	</ol></li>
	<li>표시되는 플랫폼 평가판을 수행합니다.<ol>
<li>플라스틱 원형 플랫폼(직경 = 9.5cm, 높이 = 28cm)을 임의의 사분면에 수면 위에 1cm 위에 놓습니다.</li>
		<li>플랫폼에 검은 깃발을 놓습니다.</li>
		<li>탱크 벽을 마주보고있는 네 개의 시작 위치 중 하나에서 수위에서 물에 각 마우스를 부드럽게 해제합니다. 마우스를 물에 떨어뜨리지 마십시오.</li>
		<li>마우스가 물에 방출되는 즉시 컴퓨터 추적 프로그램을 활성화합니다.</li>
		<li>플랫폼을 검색하기 위해 각 마우스 60s를 제공합니다. 각 평가판이 끝나면 각 마우스를 플랫폼에 놓고 10-30초에 마우스를 계속 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>컴퓨터에서 마우스의 수영 궤적을 관찰하고 마우스가 플랫폼을 탈출 대기 시간으로 찾는 데 걸린 시간을 기록하고 수영 속도를 분석합니다.</li>
		<li>수건으로 각 마우스를 건조하고 전기 히터로 따뜻하게. 동물이 과열되지 않도록 적절한 열원을 사용하십시오. 참고: 각 마우스를 4개의 다른 시작 사분면 각각에 풀에 놓고, 이후의 각 시험과 함께 플랫폼을 다른 위치로 이동합니다. 각 마우스를 사용하는 두 시험 사이의 간격은 15-20 분입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>숨겨진 플랫폼 평가판/장소 탐색 테스트를 수행합니다.<ol>
<li>SE 사분면에 플래그없이 동일한 플랫폼을 배치합니다.</li>
		<li>네 개의 사분면(NE, NW, SW, N)에서 4개의 시험을 위해 풀 벽을 마주보고 있는 각 사분면에서 마우스를 무작위로 풀에 놓습니다. 두 번의 시험 사이에 15-20분의 시간 간격을 사용하십시오.</li>
		<li>숨겨진 플랫폼을 검색하기 위해 각 마우스 60s를 제공합니다.</li>
		<li>후속 분석을 위해 마우스가 플랫폼으로 올라간 후 각 시험의 이스케이프 대기 시간을 기록합니다.</li>
		<li>수건으로 각 마우스를 건조하고 전기 히터로 따뜻하게. 참고: 2일부터 6일까지 숨겨진 플랫폼 평가판을 실시합니다. 마우스가 60s에서 플랫폼을 찾을 수없는 경우, 플랫폼까지 올라 가서 각 시험의 끝에 10-30s에 머물 수 있도록 마우스를 리드. 플랫폼과 일정한 위치에서 시각적 단서를 통해 5일 동안 각 마우스에 대해 하루에 4회 시험을 수행합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>프로브 시험을 수행합니다. 참고: 새로운 시작 위치에서 풀에 있는 각 마우스를 찾아 마우스의 공간 탐색 능력을 관찰합니다.<ol>
<li>플랫폼을 제거합니다.</li>
		<li>60s에 대해 한 번 풀에서 탱크 벽을 향한 각 마우스를 찾습니다.</li>
		<li>미로에서 수영 거리, 수영 속도 및 플랫폼 크로스 오버 번호를 기록합니다.</li>
		<li>각 마우스를 수건으로 말리고 시험 후 따뜻함을 제공합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>반전 시험을 수행합니다. 참고: 8-11일부터 반전 시험을 수행합니다.<ol>
<li>SE 사분면 대신 NW 사분면 중간에 플랫폼을 배치합니다.</li>
		<li>숨겨진 플랫폼 평가판 섹션에 자세히 설명된 대로 5.3.2 -5.3.5 단계를 따르십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>6. 통계분석
<ol><li>통계 분석을 수행하려면 통계 소프트웨어(예: SPSS 20.0)를 사용합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Vorhees, C. V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+water+mazes+for+assessing+spatial+and+egocentric+learning+and+memory+in+rodent+basic+research+and+regulatory+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology+Teratology%22%5BJournal%5D)">Value of water mazes for assessing spatial and egocentric learning and memory in rodent basic research and regulatory studies.</a> Neurotoxicology Teratology. 45, 75-90 (2014).</li>
<li>Vorhees, C. V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morris+water+maze%3A+procedures+for+assessing+spatial+and+related+forms+of+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocol%22%5BJournal%5D)">Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory.</a> Nature Protocol. 1 (2), 848-858 (2006).</li>
<li>The state of the art of dementia research: New frontiers; World Alzheimer Report 2018. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Alzheimer%27s+Disease+International%22">Alzheimer's Disease International</a>. 9, 1-46 (2018).</li>
<li>Vorhees, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neonatal+%28%2B%29-methamphetamine+on+path+integration+and+spatial+learning+in+rats%3A+effects+of+dose+and+rearing+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of neonatal (+)-methamphetamine on path integration and spatial learning in rats: effects of dose and rearing conditions.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 26 (6), 599-610 (2008).</li>
<li>Ding, N., Jiang, J., Xu, A., Tang, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+acupuncture+regulates+behavior+and+cerebral+blood+flow+in+the+SAMP8+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Manual acupuncture regulates behavior and cerebral blood flow in the SAMP8 mouse model of Alzheimer's disease.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 37(2019).</li>
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<li>Amy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sub-chronic+donepezil+on+brain+Abeta+and+cognition+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effects of sub-chronic donepezil on brain Abeta and cognition in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Psychopharmacology. 230, 279-289 (2013).</li>
<li>Garthe, A., Kempermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+old+test+for+new+neurons%3A+refining+the+Morris+water+maze+to+study+the+functional+relevance+of+adult+hippocampal+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An old test for new neurons: refining the Morris water maze to study the functional relevance of adult hippocampal neurogenesis.</a> Frontiers in Neuroscience. 7, 63(2013).</li>
<li>Schoenfeld, R., Schiffelholz, T., Beyer, C., Leplow, B., Foreman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variants+of+the+Morris+water+maze+task+to+comparatively+assess+human+and+rodent+place+navigation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Variants of the Morris water maze task to comparatively assess human and rodent place navigation.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 139, 117-127 (2017).</li>
<li>Otnass, M. K., Brun, V. H., Moser, M., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretraining+prevents+spatial+learning+impairment+after+saturation+of+hippocampal+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pretraining prevents spatial learning impairment after saturation of hippocampal long-term potentiation.</a> Journal of Neuroscience. 19 (24), 49(1999).</li>
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<li>Vorhees, C. V., Skelton, M. R., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+effects+of+neonatal+methamphetamine+exposure+on+spatial+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Age-dependent effects of neonatal methamphetamine exposure on spatial learning.</a> Behavioural Pharmacology. 18 (5-6), 549-562 (2007).</li>
<li>Iivonen, H., Nurminen, L., Harri, M., Tanila, H., Puoliväli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermia+in+mice+tested+in+Morris+water+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothermia in mice tested in Morris water maze.</a> Behaviour Brain Research. 141 (2), 207-213 (2003).</li>
<li>Lin, S. Y., et al. Ozone inhibits APP/Aβ production and improves cognition in an APP/PS1 transgenic mouse model. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLin%2C+SY+%22Neuroscience%22">Neuroscience</a>. , (2019).</li>
<li>Zuo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preoperative+vitamin-rich+carbohydrate+loading+alleviates+postoperative+cognitive+dysfunction+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Preoperative vitamin-rich carbohydrate loading alleviates postoperative cognitive dysfunction in aged rats.</a> Behavioural Brain Research. 373, 112107(2019).</li>
</ol>

저자는 잠재적 이해 상충을 선언하지 않습니다.

비엘 워터 미로와 신시내티 물 미로를 포함한 많은 물 미로가 적어도 한 세기 동안 주변에 있었지만 MWM만이 공간 학습 및 기억 능력을 효과적이고 객관적으로 평가하는 데 널리 사용되어 왔습니다. 장점9. MWM을 광범위하게 사용했음에도 불구하고 절차가 항상 최적으로 사용되는 것은 아닙니다. MWM 실험은 일반적으로 시간이 오래 걸리며 많은 변수 요인의 영향을 받습니다. 고려해야 할 공간 학습 및 메모리 능력의 변화를 감지하는 데 도움이 몇 가지 효과적이고 신뢰할 수있는 측면이 있습니다.
4개의 다른 MWM 시험이 수행되었다. 눈에 보이는 플랫폼 시험은 MWM의 첫 날에 사용되었습니다. 동물이 플랫폼에 직접 수영 할 수 있다면, 그것은 동물의 수영 능력과 비전이 정상 이었다는 것을 나타냈다10. Otnass는 가시적 인 플랫폼 시험을 먼저11을 실시해야한다고 제안했습니다. 이 연구에서 가시적인 플랫폼 시험의 결과는 4개의 그룹이 동일한 학습 수준에서 시작되었다는 것을 의미했습니다. 거기에서, 연속적인 실험을 시작할 수 있었습니다. 숨겨진 플랫폼 시험은 학습 및 기억 능력을 획득하는 마우스의 능력을 평가하는 데 사용되었다. 프로브 재판은 숨겨진 플랫폼 재판이 끝난 후 7 일, 24 시간 동안 수행되어 작업 기억을 평가했습니다. 마지막으로, 반전 재판은 작업 메모리를 평가하는 데 사용되었다2. MWM의 4개의 다른 예심에 있는 변경은 AD 모형 마우스가 낮은 학습 및 기억 능력을 가지고 있고 MA가 AD5에긍정적인 효력이 있었다는 것을 표시했습니다.
풀 및 플랫폼1의크기에 대한 특정 표준은 없습니다. 대부분의 MWM 연구에서는 214cm 직경의 수영장이 사용됩니다. Vorhees와 윌리엄스는 동일한 프로토콜을 사용하면 쥐가 210cm 풀보다 122cm 풀에서 더 빨리 배울 수 있음을 보여주었습니다. 학습 곡선의 가파른 경사면은 122cm 직경의 수영장이 쥐가12를탐색하기가 매우 쉽다는 것을 나타냅니다. 현재 프로토콜에서는 AD 마우스의 노년및 약한 키를 고려하여, 직경 90cm 풀 및 9.5cm 직경 플랫폼을 사용하였다. 예비 실험의 결과는 마우스가 더 큰 직경 풀에 있는 플랫폼을 찾는 더 어려움이 있었다는 것을 표시했습니다. 따라서 큰 풀의 테스트는 그룹 간의 실제 차이를 나타내지 않습니다. 실험 동물은 더 작은 플랫폼4와더 큰 수영장에서 플랫폼을 찾는 데 어려움을 겪었습니다. 따라서, 풀과 플랫폼의 크기는 실험 동물의 실험 요건 및 상태에 따라 예비 실험에서 최적화되어야 한다.
MWM 테스트4를수행하기 위해 20-24 °C범위의 온도에서 물을 권장합니다. 노인 실험동물은냉수(13)에서저조한 수행을 보였으며, 이는 체온조절(14)의 명확한 연령 의존적 손실을 나타낸다. 본 연구에서, 온도 조절기는 20-24°C에서 물의 온도를 유지하기 위해 풀의 바닥에 배치되었다. 연구 결과는 4개의 단 중 수영 속도에 있는 유의한 다름을 보여주지않았습니다 5.
MWM은 인지 기능을 평가하는 강력한 기술이며 현재 연구에 널리 사용됩니다. 그러나, 풀 및플랫폼(15,16)의크기를 포함하는 MWM 테스트를 수행하기 위한 정의된, 표준, 일관된 장비는 없다. 실험실마다 MWM에 대한 사양이 다릅니다. 따라서, 연구원은 그들의 개별적인 실험 적인 요구 사항에 따라 적절 한 실험 장치를 선택, 연구자 들 사이 혼란을 일으킬 수 있는. 예비 실험도 필요합니다. MWM 같은 기본 실험에 더 많은 연구를 실시 해야. 현재, 실험 적 도구로서의 MWM의 유연성은 목적된 연구에 따라 기본 프로토콜을 선택하는 능력에있다. 따라서, 이 시험은 더 깊이 있는 인지 기능을 평가하기 위하여 적용될 수 있습니다.

현재, MWM 실험은 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하기 위해 가장 널리 사용되고 표준 행동 실험이되고있다1. 그것은 처음에 영국 심리학자 리처드 G. 모리스에 의해 설계 되었으며 지속적으로 개선 되었습니다. 최소한의 훈련, 종 간 유틸리티, 체중 차이에 대한 무감각, MWM의 반복 테스트 능력과 같은 많은 장점은 인지 기능을 평가하는 가장 좋은 방법입니다2. 알츠하이머 병 (AD)은 주로 메모리 처리 및 인지 기능의 감소를 특징으로하는 주요 의료 문제입니다3. MWM은 AD 모델 동물의 학습 및 기억 능력과 내정간섭 방법의 효과를 평가하는 데 필수적인 실험 수단이다. MWM 실험은 일반적으로 시간이 많이 소요되며(6-11일) 많은 가변 인자를수반합니다 4. 물 미로 실험에 대 한 많은 기사가 있지만, 실제로, 연구원은 일관 된 프로토콜 부족. 따라서 직관적이고 엄격한 프로토콜 프로세스 비디오가 특히 중요합니다. 이전 실험을 예로5로사용하여 MWM의 모든 단계를 설명합니다. MWM을 사용하여, 이전 연구는 침술이 AD 모형 마우스5,6,7의현상을 구호할 수 있었다는 것을 건의했습니다 .
본 명세서에서, 최근 연구에서 사용된 MWM 프로토콜5는 연구자들이 AD 모델 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하기 위한 간단하고 가시적인 방법을 제공하기 위해 기술된다.

<table><tbody><tr><td>침술 바늘</td><td>베이징 Zhongyan Taihe Medical Instrument Limited Company</td><td>511526</td><td></td></tr><tr><td>데스크탑 컴퓨터</td><td>Chengdu Techman Software Limited Liability Company Lenovo</td><td>T4700D</td><td></td></tr><tr><td>Donepezil Hydrochloride Tablet</td><td>Eisai China</td><td>H20050978</td><td>Aricept</td></tr><tr><td>마우스</td><td>Zhi Shan (Beijing) Academy of Medical Science</td><td>SCXK2014-0003</td><td></td></tr><tr><td>Mirros 물 미로 장치</td><td>Chengdu Techman Software Limited Liability Company</td><td>WMT-100S</td><td></td></tr><tr><td>마우스 가방</td><td>집에서 만든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>신호 수집 및 처리 시스템</td><td>Chengdu Techman Software Limited Liability Company</td><td>BL-420N</td><td></td></tr></tbody></table>

모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 학습 및 기억 능력 분석

Analysis of Learning and Memory Ability in an Alzheimer's Disease Mouse Model using the Morris Water Maze

모리스 물 미로 (MWM) 실험은 실험 동물이 수영하고 물에 숨겨진 플랫폼을 찾는 법을 배워야강제로. 그것은 널리 학습과 동물의 메모리를 평가하기 위해 과학 연구에서 사용된다. MWM 테스트의 광범위한 사용으로 인해, 시각적 실험 프로토콜은 연구자에 필수적이다. 이 원고는 MWM 테스트의 프로토콜을 소개하기 위해 최신 연구를 사용합니다. 알츠하이머 병 (AD)은 기억력과 인지 기능의 점진적 인 손실을 특징으로합니다. AD에 사용되는 대안및 보완 치료는 수동 침술 (MA)입니다. AD 모델 마우스의 학습 및 기억 능력을 평가하기 위해 MWM 테스트를 실시하였다. MWM의 가시적 플랫폼 시험, 숨겨진 플랫폼 시험, 프로브 시험 및 반전 시험을 사용하여 공간 학습 및 메모리 능력을 평가했습니다. 가시적인 플랫폼 시험에서, 다른 그룹에서 마우스의 수영 속도 및 탈출 대기 시간은 크게 다르지 않았다. 숨겨진 플랫폼과 반전 시험에서 AD 그룹은 긴 탈출 대기 시간을 보였습니다. 이스케이프 레이턴시MA 처리 후 현저히 감소하였다. 낮은 플랫폼 크로스오버 수 및 프로브 시험에서 SW 사분면에서의 시간 비율은 MA 처리 후 증가하였다(p&0.05 또는 p&lt; 0.01). MWM 테스트의 결과는 MA가 AD 모델 마우스의 공간 학습 및 기억 능력을 효과적으로 향상시킬 수 있음을 시사합니다. 엄격한 실험 작업을 통해 결과의 신뢰성을 보장했습니다.

이 프로토콜의 시간 축 다이어그램은 그림 1에나와 있습니다.
<img alt="타임라인이 있는 Morris Water Maze 다이어그램; 가시, 숨김, 탐침 및 반전 시험; MA 치료." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60055/60055fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1: 스터디 프로토콜의 시간 축 다이어그램. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60055/60055fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
시간 축은 이 실험이 총 21일 동안 지속되었다는 것을 보여줍니다. 치료는 전체 실험 동안 마우스에 적용되었고 MWM 시험은 15일 의 치료 후에 시작되었다. 가시플랫폼, 숨겨진 플랫폼, 프로브, 반전 시험이 순서대로 진행되었습니다.
Ding 등5에서 이전에 게시 된 결과는 MWM 도 2의전형적인 결과로 제시됩니다.
<img alt="탈출 대기 시간, 수영 속도, 프로브 시험 결과를 보여주는 가시적이고 숨겨진 플랫폼 시험 막대 및 선 그래프." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60055/60055fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 도 2: 모리스 물 미로 시험의 전형적인 결과(n=10). (A)가시 플랫폼 시험에서 다른 그룹 들 사이에서 쥐의 탈출 대기 시간 및 수영 속도의 변화. (B)숨겨진 플랫폼과 반전 시험에서 다른 그룹 중 쥐의 탈출 대기 시간의 변화. p-값은 대조군과 비교하여 *p&lt; 0.05 및 **p&lt; 0.01입니다. 기호 ##는 AD 그룹과 비교하여 p&lt; 0.01을 나타냅니다. (C)플랫폼 크로스오버 수의 변화와 프로브 시험에서 상이한 실험군 들 사이에서 북서부 사분면에서 쥐가 보낸 시간의 백분율이다. 각 그룹에서 가시플랫폼, 숨겨진 플랫폼 및 반전 시험의 결과가 도시된다(n=10, 평균 ±SD). 이 그림은 딩 외5에서수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60055/60055fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
그림 2A는 가시플랫폼 평가판의 결과를 나타낸다. MWM 의 첫날에 그룹 간의 탈출 대기 시간 또는 수영 속도에서 통계적 차이는 관찰되지 않았다. 도 2B는 2-6 일 및 8-11 일로부터 숨겨진 플랫폼 및 반전 시험의 결과를 나타낸다. AD 그룹의 이스케이프 레이턴시(escape late)는 시험 의 날마다 높은 수준에 머물렀다. 다른 세 그룹의 탈출 대기 시간은 점차 감소하였다. 3일-6일 및 8-11일로부터의 탈출 대기 시간은 대조군(p&lt; 0.01)보다 AD 군에서 더 길어졌다. MA 및 약물 군에서 마우스의 탈출 대기는 각각 2-6일 및 8-11일에 AD 군에서 마우스의 그보다 짧하였다(p&lt; 0.01). 도 2C는 프로브 시험의 결과를 나타낸다. AD 군에서 의 플랫폼 크로스오버 마우스 수는 대조군(p&lt; 0.01)보다 통계적으로 낮았다. MA 그룹의 플랫폼 크로스오버 수는 AD 그룹(p&lt; 0.05)보다 높았다. AD 군에서 마우스에 의한 SW 사분면에서 소요된 시간의 비율은 대조군(p&lt; 0.01)보다 현저히 낮았다. MA 그룹의 SW 사분면에서 소요된 시간의 비율은 AD 그룹(p&lt; 0.01)보다 높았습니다.

본 명세서에서, 알츠하이머병 모델 마우스의 학습 및 기억 능력을 평가하고 이를 치료하기 위한 수동 침술의 효과를 평가하기 위한 모리스 수질 미로 시험을 수행하는 프로토콜이 기재되어 있다.

A Morris water maze (MWM) experiment forces experimental animals to swim and learn to find a platform hidden in the water. It is widely used in scientific ...

모리스 워터 미로 또는 MWM 실험은 동물의 공간 학습 및 기억 능력을 평가하기 위해 가장 널리 사용되는 고전적인 행동 실험이되었습니다. MWM에 대 한 많은 기사가 있지만, 실제로, 연구원은 여전히 혼란 느낀다. 따라서 이 직관적이고 엄격한 작동 프로세스 비디오는 특히 중요합니다.우리는 이전에 침술이 AD 모형 마우스의 현상을 구호할 수 있다는 것을 건의한 MWM 기지를 둔 연구 결과를 수행했습니다. 본 교신에서는 최근 연구에서 사용되는 MWM의 동작 프로토콜을 도입하여 연구자들이 AD 모델 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 간단하고 눈에 보이는 방법을 제공합니다. MWM은 인지 기능을 평가하는 강력한 기술이며 연구에서 널리 사용됩니다.그러나 풀 및 플랫폼 크기와 같은 작업을 수행할 정의되거나 표준 매개 변수가 없습니다. 따라서 이 방법의 실제 데모는 매우 중요합니다. 원고 의 지시에 따라 모리스 워터 미로 또는 MWM 테스트를 설정하여 시작합니다.MWM 장치와 신호 수집 및 처리 시스템은 방음 장치를 유지하도록 설계된 실험실에 있어야 합니다. 불투명한 천으로 둘러싸인 원형 흰색 탱크는 MWM 장치의 중간에 배치되어야합니다. 비디오 카메라는 장치의 천장에 고정하고 자동화된 추적 시스템을 갖춘 비디오 레코더에 연결해야 합니다.물 미로 탱크를 북쪽, 남쪽, 동쪽 및 서쪽에 표시된 라인을 사용하여 4 개의 동등한 지역으로 나누어 수영장 영역을 개념적으로 4 사분면으로 나눕니다. 그런 다음 마우스의 시야 내에서 각 사분면의 벽에 고유한 시각적 신호를 놓습니다. 원형 탱크를 30센티미터 깊이의 물로 채우고 150그램의 분유를 물에 추가하여 불투명하게 만듭니다.가시 플랫폼 시험을 수행하려면 플라스틱 원형 플랫폼을 임의로 사분면에 물 표면 위에 1센티미터 를 놓고 검은 색 깃발을 놓습니다. 각 마우스를 탱크 벽을 향한 네 개의 시작 위치 중 하나에서 물에 부드럽게 놓습니다. 마우스가 물에 방출되는 즉시 컴퓨터 추적 프로그램을 활성화하고 각 마우스에게 60초를 제공하여 플랫폼에 도달합니다.각 시험이 끝나면 플랫폼에 마우스를 놓고 10~30초 동안 그곳에 머무를 수 있습니다. 컴퓨터에서 마우스의 수영 궤적을 관찰한다. 마우스가 플랫폼을 탈출 대기 시간으로 찾는 데 걸린 시간을 기록하고 마우스의 수영 속도를 분석합니다.그런 다음 수건으로 마우스를 말리고 전기 히터로 데우십시오. 플랫폼을 이동하고 마우스당 네 번의 시험을 수행하여 다른 사분면에서 마우스를 시작합니다. 각 평가판 사이에 마우스를 15~20분 동안 복구할 수 있습니다.히든 플랫폼 평가판을 수행하려면 동남 사분면에 플래그없이 동일한 플랫폼을 배치합니다. 그런 다음 마우스를 네 사분면 중 하나에 무작위로 배치하고 숨겨진 플랫폼을 찾기 위해 60 초 를 제공합니다. 마우스가 60초 만에 플랫폼을 찾을 수 없는 경우 플랫폼으로 안내하여 10~30초 동안 그곳에 머무를 수 있도록 합니다.각 시험의 탈출 대기 시간을 기록합니다. 수건으로 마우스를 건조하고 전기 히터로 따뜻하게 유지합니다. 각 시험 사이에 15~20분씩 마우스당 4번의 시험을 수행하여 매번 다른 사분면으로 마우스를 시작합니다.플랫폼과 일정한 위치에서 시각적 신호로 5일 연속 시험을 반복합니다. 프로브 시험을 수행하려면 플랫폼을 제거하고 북서쪽 사분면의 탱크 벽을 향한 물에 마우스를 놓습니다. 수영 거리, 속도 및 플랫폼 크로스오버 번호를 기록합니다.완료되면 마우스를 말리고 따뜻하게 유지하십시오. 역 시험을 수행하려면 북서부 사분면에 플랫폼을 배치하고 숨겨진 플랫폼 시험을 반복합니다. 이 프로토콜은 알츠하이머 병을 가진 마우스의 학습과 기억에 수동 침술 또는 MA의 효과를 조사하는 데 사용되었다.MA 그룹의 경우, 치료는 MWM 테스트 15 일 전에 시작되었으며 11 일 동안 계속되었습니다. MWM 첫날에 보이는 플랫폼 테스트 동안, 그룹 중 탈출 대기 시간 또는 수영 속도에서 통계적 차이가 관찰되지 않았다. 숨겨진 플랫폼과 반전 재판 동안, 알츠하이머 병 또는 AD 그룹의 탈출 대기 시간이 높은 유지, 다른 세 그룹의 대기 시간이 점차 감소하는 동안.중요한 것은 MA 그룹의 탈출 대기 시간이 AD 그룹보다 짧다는 것입니다. 프로브 시험 동안, MA 그룹에서 마우스의 플랫폼 크로스 오버 수는 대조군의 것보다 낮았지만, AD 그룹의 것보다 상당히 높았다. 더욱이, MA 마우스가 이전에 플랫폼이 있던 사분면에서 보낸 시간의 백분율은 대조군보다 적었지만 AD보다 더 큰 약물 그룹과 유사했습니다. 마우스가 60초 만에 플랫폼을 찾을 수 없는 경우 연구원은 플랫폼을 안내하고 10~30초 동안 그곳에 머무를 수 있도록 해야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.풀 및 플랫폼 크기의 치수에 대한 구체적인 표준은 없습니다. 이러한 매개 변수는 실험 요구 사항 및 실험 동물의 상태에 따라 예비 실험에 최적화되어야 합니다. 대부분의 연구는 MWM 과 같은 기본적인 실험에 실시될 필요가 있습니다.현재, 실험 도구로MWM의 유연성은 제안된 연구에 따라 기본 프로토콜을 선택하는 능력에만 존재하며, 따라서 이 시험은 인지 기능을 보다 심층적으로 평가하기 위해 적용될 수 있다.

analysis-learning-memory-ability-an-alzheimer-s-disease-mouse-model

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

모리스 물 미로는 행동 작업에 해마의 참여를 문서화하는 데 사용하는 잘 접수 도구입니다.

모리스 워터 메이즈 실험

레쉴리 III의 미로가 자극 aversive 또는 Visual 단서에 의존하지 않는 경로 학습 작업입니다. 그것은 따라서 특히 노화 생쥐의하거나 어디에 스트레스가 고려, 학습 및 메모리를 평가하기위한 매우 매력적인 옵션입니다.

마우스에 레쉴리 III 메이즈를 사용하여 낮은 스트레스 루트 학습

모리스 워터 미로는 hippocampal 종속적인 학습과 기억을 테스트하는 행동 작업입니다. 이것은 널리 설치류 모델에서 신경 생물학, 신경 약리학과 neurocognitive 장애의 연구에 사용되었습니다.

알츠하이머병 모델 마우스에서 학습 및 메모리 적자에 대한 모리스 워터 메이즈 테스트

이 비디오에서는 설치류의 작업 기억을 연구하는 데 사용되는 탐색 작업인 플랫폼 재배치를 사용한 Morris 물 미로 테스트에 대해 설명합니다.

플랫폼 재배치를 통한 물 미로: 작업 기억을 평가하는 방법

이 프로토콜의 목표는 설치류의 공간 인지를 조사하는 것입니다. double-H water maze는 새로운 테스트로, 학습, 통합 및 기억의 다양한 구성 요소와 기억 시스템의 상호 작용을 설명하는 데 특히 유용합니다.

더블 H 미로 : 설치류의 강력한 행동 학습에 대한 테스트 및 메모리

이 원고는 일반적으로 사용되는 알츠하이머병의 마우스 모델과 함께 사용하도록 맞춤화된 Morris water maze(MWM) 프로토콜을 설명합니다. MWM은 형질전환 마우스 모델에 널리 사용됩니다. 마우스 모델의 배경 변형률에 민감한 절차의 구현은 그룹 차이를 감지하는 데 필수적입니다.

모리스 물 미로 테스트 : 마우스 스트레인 및 테스트 환경을위한 최적화

신규 모델의 병적 알츠하이머 병 (AD)과 입력 조건을 조사하기 위해, 세 가지 동작 태스크 모터 제어,인지 행동 모두를 평가하는 것이 기재되어있다. 이러한 작업은 빔 도보 작업, 실린더 작업 및 모리스 물 미로를 포함한다.

뇌졸중과 알츠하이머 병의 유전자 변형 쥐 모델에서 모터 및 해마 종속 공간 학습 및 참조 메모리 평가

여기서 우리는 수영을 필요로하지 않는 마우스 특유의인지 검사 프로토콜을 제시합니다. 이 테스트는 통제 된 피질 충격 유발 외상성 뇌 손상 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 데 사용할 수 있습니다.

방사형 워터 트레드 미로를 이용한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억 장애의 평가

이 공간 메모리 손상, 신경 병리학 변화, 신경 아 밀 로이드 베타 단백질 (Aβ) 부담의 평가 의해 쥐에 있는 Alzheimer의 질병을 모방 하는 프로토콜 이며 neurofibrillary tangles 집계, Aβ25-35의 주입에 의해 유도 된 결합 알루미늄 trichloride와 재조합 인간 성장 인자 β1 변환.

합성 아 밀 로이드 베타 단백질의 Intracerebroventricular 주입에 의해 쥐 동물 모델에서 Alzheimer의 질병의 귀중 한 모방의 설립

혈관 인지 장애 및 치매에 대한 마우스 모델을 만들기 위해 비대칭 양측 총경동맥 협착증의 바늘 방법이 제안됩니다. 이는 이전에 확립된 모델에 비해 장기적인 결과를 가져오며 실시간 MRI와 호환됩니다. 절차를 보여주는 시각적 표현은 수술을 마스터하기 위한 지침을 제공합니다.

A Mouse Model for Vascular Cognitive Impairment and Dementia Based on Needle-guided Asymmetric Bilateral Common Carotid Artery Stenosis(바늘 유도 비대칭 양측 공통 경동맥 협착증에 기반한 혈관 인지 장애 및 치매에 대한 마우스 모델)

학습하세요 모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 공간 학습 및 기억 능력 평가 방법입니다. 수지침 치료가 인지 기능에 미치는 영향을 분석하여 신경과학 연구에 활용할 수 있습니다.

모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 학습 및 기억 능력 분석

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