Name: 항원 펩타이드 및 Fc-III 모방제(DCAF)의 이중 기능 성 컨쥬게이트에 의한 표적 항체 차단 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-17T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 배우세요 DCAF 분자 합성 프로토콜을 통해 항체 중화 기술을 익히세요. 이 방법은 뎅기열 및 중증근무력증 치료에 활용될 수 있는 4G2 항체 차단 효과를 입증합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 칭화 대학 - 게이츠 재단 (아니. OPP1021992), 중국 국립 자연 과학 재단 (번호 21502103, 21877068 및 041301475), 그리고 중국의 국가 핵심 연구 개발 프로그램 (번호 2017YFA0505103).

<ol><li>Rhoades, R. A., Pflanzer, R. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRhoades%2C+RA+%22Human+Physiology+%284th+ed.%29%22">Human Physiology (4th ed.)</a>. , Thomson Learning. (2003).</li>
<li>Halstead, S. B., O’Rourke, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-enhanced+dengue+virus+infection+in+primate+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Antibody-enhanced dengue virus infection in primate leukocytes.</a> Nature. 265, 739-741 (1977).</li>
<li>Gammon, G., Sercarz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+some+T+cells+escape+tolerance+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">How some T cells escape tolerance induction.</a> Nature. 342, 183-185 (1989).</li>
<li>Takada, A., Kawaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-dependent+enhancement+of+viral+infection%3A+molecular+mechanisms+and+in+vivo+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Medical+Virology%22%5BJournal%5D)">Antibody-dependent enhancement of viral infection: molecular mechanisms and in vivo implications.</a> Reviews in Medical Virology. 13, 387-398 (2003).</li>
<li>Boonnak, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Dendritic+Cells+in+Antibody-Dependent+Enhancement+of+Dengue+Virus+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Role of Dendritic Cells in Antibody-Dependent Enhancement of Dengue Virus Infection.</a> Journal of Virology. 82, 3939-3951 (2008).</li>
<li>Gilhus, N. E., Skeie, G. O., Romi, F., Lazaridis, K., Zisimopoulou, P., Tzartos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myasthenia+gravis+-+autoantibody+characteristics+and+their+implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+neurology%22%5BJournal%5D)">Myasthenia gravis - autoantibody characteristics and their implications for therapy.</a> Nature Reviews neurology. 12, 259(2016).</li>
<li>Contifine, B. M., Milani, M., Kaminski, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myasthenia+gravis%3A+past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Myasthenia gravis: past, present, and future.</a> Journal of Clinical Investigation. 116, 2843-2854 (2006).</li>
<li>Webster, D. P., Farrar, J., Rowland-Jones, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+towards+a+dengue+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Progress towards a dengue vaccine.</a> The Lancet Infectious Diseases. 9, 678-687 (2009).</li>
<li>Vikas, K., Kaminski, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+Myasthenia+Gravis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Neurology+and+Neuroscience+Reports%22%5BJournal%5D)">Treatment of Myasthenia Gravis.</a> Current Neurology and Neuroscience Reports. 11, 89-96 (2011).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+dual-functional+conjugate+of+antigenic+peptide+and+Fc-III+mimetics+%28DCAF%29+for+targeted+antibody+blocking%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Development of a dual-functional conjugate of antigenic peptide and Fc-III mimetics (DCAF) for targeted antibody blocking.</a> Chemical Science. 10, 3271-3280 (2019).</li>
<li>Bello, M. S., Rezzonico, R., Righetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+taylor-aris+dispersion+for+measurement+of+a+solute+diffusion+coefficient+in+thin+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Use of taylor-aris dispersion for measurement of a solute diffusion coefficient in thin capillaries.</a> Science. 266, 773-776 (1994).</li>
<li>Fang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+chemical+synthesis+by+ligation+of+peptide+hydrazides%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie.+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Protein chemical synthesis by ligation of peptide hydrazides.</a> Angewandte Chemie. International Edition. 50, 7645-7649 (2011).</li>
<li>Fang, G. M., Wang, J. X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+chemical+synthesis+of+proteins+by+ligation+of+peptide+hydrazides%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie.+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Convergent chemical synthesis of proteins by ligation of peptide hydrazides.</a> Angewandte Chemie. International Edition. 51, 10347-10350 (2012).</li>
<li>Zheng, J. S., Tang, S., Qi, Y. K., Wang, Z. P., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+synthesis+of+proteins+using+peptide+hydrazides+as+thioester+surrogates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Chemical synthesis of proteins using peptide hydrazides as thioester surrogates.</a> Nature Protocols. 8, 2483-2495 (2013).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

여기서 프로토콜은 도 1에도시된 NCL 접근법을 사용하여 DCAF1의 반합성 및 검출에 대해 설명한다. 간략하게, DCAF1의 두 단편은 각각 화학적으로 합성되고 재조합적으로 발현되는; 그런 다음, 전체 길이 DCAF1 분자가 조립, 변형 및 정제된다. 히드라진 유래 Fc-III 단편 합성의 경우, 고용량이 히드라진 생성에 부정적인 영향을 미치고 제품의 낮은 수율을 유도하기 때문에 저용량 2-Cl 수지를 사용하는 것은 매우 중요하다. 링커 및 항원 부분은 두 가지 이유로 SUMO 태그로 발현됩니다: 첫째, 스모 태그는 융합 단백질의 용해도를 향상시킬 수 있습니다; 둘째, 스모 프로테아제는 형태 인식 프로테아제로서, 방출된 제품이 추가 결찰 반응을 위해 Cys 잔류물로 시작할 수 있게 합니다. 단백질 발현 및 정제에서 가장 중요한 단계 중 하나는 스모 프로테아제 분열입니다. 스모 태그 융합 단백질의 농도는 적절한 범위로 조정되어야 합니다. 너무 높거나 너무 낮은 농도는 소화 후...

항체는 병원성 박테리아 및 바이러스의 중화에 대한 체액 면역 반응에 중요한 역할을 한다1. 그러나, 일부 항체는 자가면역 질환인 중증근무증에서 DENV 감염 및 과민반응성 항체 동안 ADE 효과에서 교차 반응성 항체와 같은 유기체에 유해한 영향을 나타낸다2,3. ADE 효과는 DENV와 Fc 수용체 제시 세포를 연결하는 다리를 만드는 교차 반응성 항체에 의해 매개되는반면,중증근무력증은 아세틸콜린 수용체를 공격하는 과도한 항체에 의해 유발됩니다. 근육 조직에 있는 세포 세포 접합 사이6,7. 부분적으로 효과적인 접근법이 이 질병을 취급하기 위하여 개발되었더라도8,9,의심할 여지없이 이러한 유해한 항체의 직접적인 제거는 내정간섭을 위한 진전을 만들 것입니다.
최근에는 이중 작용기가 있는 DCAF 분자가 표적 항체 차단10을위해 개발되었다. DCAF는 3부분으로 구성된 긴 펩티드이다: 1) 코그네이트 항체를 특이하게 인식할 수 있는 항원 부분, 2) Fc-III 또는 Fc-III-4C 태그는 Fc 수용체 또는 보체 성분 단백질중 하나를 억제하기 위해 항체의 Fc 영역에 강하게 결합한다. , 3) 이들 두 기능성그룹(10)을접합하는 긴 α-헬리칼 링커. Moesin FERM 도메인에서 설계된 링커 부품은 로세타 소프트웨어에 의해 최적화되어 DCAF 분자의 항원 부분과 Fc-III 부품이 IgG의 팹 및 Fc 영역에 동시에 결합할 수 있도록 합니다. 4개의 DCAF 분자가 4개의 상이한 항체를 표적으로 하기 위해 합성되었고, 그 중DCAF1은 4G2 항체를 제거하는데 사용되었으며, 이는 DENV 감염 동안 교차 반응성 항체가 ADE 효과에 기여한다; 및 DACF4는 중증 근무력증10에서mab35 항체를 차단하여 아세틸콜린 수용체의 구조를 위해 설계되었습니다.
본 연구에서, 예로서 DCAF1을 촬영, 우리는 DCAF 분자의 합성 및 DCAF와 그의 동체 항체 사이의 상호 작용의 검출을위한 프로토콜을 보여 주었다. DCAF1은 NCL 접근법11,12,13,14에의해 반합성되며, 이는 Fc-III 펩타이드 및 발현된 링커-항원 부분의 히드라진 유도체를 함께 접합한다. NCL 접근법은 이러한 두 방법 모두 낮은 수율 및 높은 비용으로 이어지기 때문에 DCAF1 합성을 위한 완전 화학적 합성 및 완전 재조합 발현에 비해 상당한 이점이 있다. 현재의 접근 방식은 전체 길이 DCAF를 얻는 가장 비용 효율적인 방법일 뿐만 아니라 링커 부품의 형태를 기본 형태와 유사하게 유지할 수 있습니다. 상이한 DCAF 분자는 항원 부품을 제외한 유사한 서열을 갖기 때문에, DCAF1 과 4G2 항체 사이의 DCAF1 합성 및 상호작용 분석법을 위한 우리의 방법은 그들의 코그네이트 항체를 표적화하기 위해 다른 DCAF 분자에도 적용될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>2-클로로트리틸 수지</td><td>톈진 난카이 HECHENG S& T</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1- [비스 (디메틸 아미노) 메틸렌] -1H-1,2,3- 트리아졸로 - [4,5-b] 피리디늄 헥사 플루오로 포스페이트 3- 산화물</td><td>GL Biochem</td><td>00703</td><td></td></tr><tr><td>2- (6- 클로로 -1H- 벤조 트리아졸 -1- 일) -1,1,3,3- 테트라 메틸 아미늄 헥사 플루오로 포스페이</td>트 <td>GL Biochem</td><td>00706</td><td></td></tr><tr><td>2,2 &prime; -Azobis [2- (2- 이미 다졸린 -2- 일) 프로판] 디 하이드로 클로라이드</td><td>J & K Scientific</td><td>503236</td><td></td></tr><tr><td>4G2 항체</td><td>Thermo</td><td>MA5-24387</td><td></td></tr><tr><td>4-메르캅토페닐아세트산</td><td>Alfa Aesar</td><td>H27658</td><td></td></tr><tr><td>96웰 마이크로타이터 플레이트</td><td>NEST</td><td>701001</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Thermo-Fisher</td><td>A955</td><td>MS 등급</td></tr><tr><td>AgOAc</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>30164324</td><td></td></tr><tr><td>안티 GST 항체</td><td>Abclonal</td><td>AE001</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 IgG, HRP 관련 항체</td><td>세포 신호 기술</td><td>7076P2</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>베이징 DINGGUO CHANGSHENG BOITECHNOL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD 분광계</td><td>응용 Photophysics Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>투석 백</td><td>Sbjbio</td><td>SBJ132636</td><td></td></tr><tr><td>디클로로 메탄</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>80047360</td><td></td></tr><tr><td>diethyl ether</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>10009318</td><td></td></tr><tr><td>DNA 젤 추출 키트</td><td>Beyotime</td><td>D0056</td><td></td></tr><tr><td>Fusion Lumos 질량 분석기</td><td>Thermo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GSH Sepharose</td><td>GE Lifesciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guanidine hydrochloride</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td></td><td></td>30095516</tr><tr><td>히드라진 수화물</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>80070418</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>10011018</td><td></td></tr><tr><td>이미다졸</td><td>SIGMA</td><td>12399-100G</td><td></td></tr><tr><td>이소 프로필 베타 -D-Thiogalactoside</td><td>SIGMA</td><td>5502-5G</td><td></td></tr><tr><td>kanamycin</td><td>Beyotime</td><td>ST101</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Thermo-Fisher</td><td>A456</td><td>MS 등급</td></tr><tr><td>N, N-디이소프로필에틸아민</td><td>GL Biochem</td><td>90600</td><td></td></tr><tr><td>N, N-디메틸포름아미드</td><td>시노팜 화학 시약</td><td>8100771933</td><td></td></tr><tr><td>NcoI</td><td>Thermo</td><td>ER0571</td><td></td></tr><tr><td>PBS 완충액</td><td>Solarbio</td><td>P1022</td><td></td></tr><tr><td>펩타이드 BEH C18 컬럼</td><td>186003625</td><td></td><td></td></tr><tr><td>piperidine</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>80104216</td><td></td></tr><tr><td>플라스미드 추출 키트</td><td>Sangon Biotech</td><td>B611253-0002</td><td></td></tr><tr><td>QIAexpress 키트</td><td>QIAGEN</td><td>32149</td><td></td></tr><tr><td>Rapid DNA Ligation Kit</td><td>Beyotime</td><td>D7002</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 인산이 수소 이수화물</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>20040718</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 수산화물</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>10019762</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 아질산염</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>10020018</td><td></td></tr><tr><td>나트륨&nbsp; 염화물</td><td>Sinopharm 화학 시약</td><td>10019318</td><td></td></tr><tr><td>표준 Fmoc-protected 아미노산</td><td>GL Biochem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>살균 냄비</td><td>Tomy</td><td>SX-700</td><td></td></tr><tr><td>SUMO 프로테아제</td><td>Thermo Fisher</td><td>12588018</td><td></td></tr><tr><td>정지 용액</td><td>Biolegend</td><td></td> SUMO-링커 항원을 발현할 수 있는 전체 유전자 염기서열을 423001 <td></td></tr><tr><td></td><td>Taihe Biotechnology Compay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TMB 시약</td><td>Biolegend</td><td>421101</td><td></td></tr><tr><td>Trifluoroacetic acid</td><td>SIGMA</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilane</td><td>GL Biochem</td><td>91100</td><td></td></tr><tr><td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride</td><td>Aladdin</td><td>T107252-5g</td><td></td></tr><tr><td>tryptone</td><td></td><td>OXOID LP0042</td><td></td></tr><tr><td>트윈 20</td><td>Solarbio</td><td>T8220</td><td></td></tr><tr><td>Ultimate 3000 HPLC</td><td>열</td><td></td><td></td></tr><tr><td>진공 펌프</td><td>YUHUA</td><td>SHZ-95B</td><td></td></tr><tr><td>XhoI</td><td>열</td><td>IVGN0086</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>OXOID</td><td>LP0021</td><td></td></tr></tbody></table>

항원 펩타이드 및 fc-iii 모방제(dcaf)의 이중 기능 성 컨쥬게이트에 의한 표적 항체 차단

Targeted Antibody Blocking by a Dual-Functional Conjugate of Antigenic Peptide and Fc-III Mimetics (DCAF)

유기체에서 유해한 항체의 제거는 뎅기열 출혈열 및 자기 면역 질병과 같은 항체 관련 질병의 개입을 위한 귀중한 접근입니다. 상이한 에피토프를 가진 수천 개의 항체가 혈액에서 순환하기 때문에, 항원 펩타이드 및 Fc-III 모방제(DCAF)의 이중 기능적 컨쥬게이트를 제외한 보편적인 방법은 없으며, 특이적인 유해 항체를 표적으로 하는 것으로 보고되었다. DCAF 분자의 발달은 뎅기열 바이러스 (DENV) 감염 모델에서 항체 의존성 향상 (ADE) 효과를 제거하고 아세틸 콜린을 향상시키는 것으로 입증 된 표적 치료의 진행에 상당한 기여를합니다. 중증 근무모델의 수용체 활성. 여기서, 우리는 뎅기열 바이러스 감염 동안 ADE 효과를 감쇠시키기 위해 4G2 항체를 선택적으로 차단할 수 있는 DCAF 분자(DCAF1)의 합성을 위한 프로토콜을 설명하고, ELISA 분석에 의한 DCAF1 to 4G2 항체의 결합을 예시한다. 본 방법에서, DCAF1은 Fc-III 펩타이드의 히드라진 유도체의 컨쥬레이션에 의해 합성되고 재조합이 네이티브 화학 적 결찰(NCL)을 통해 항원 서열로 긴 α-나선을 발현한다. 이 프로토콜은 그들의 코그네이트 항체를 표적으로 하기 위한 DCAF1 및 그밖 DCAF 분자에 성공적으로 적용되었습니다.

이 문서에서 네이티브 화학 적 결찰에 의한 합성 경로에 대한 순서도는 그림 1에나와 있습니다. 도 2-6은 Fc-III 펩타이드의 화학적 합성 히드라진 유도체의 크로마토그램(A) 및 질량 스펙트럼(B)을 나타내며, 재조합 발현 링커 및 항원 부분, NCL 반응으로부터 정제된 생성물, 정제된 탈황 반응및 정제된 최종 제품 DCAF1로부터의 제품. 크로마토그램은 모든 제품의 정제물이 90% 이상임을 보여주고 질량 스펙트럼은 각 반응 후 제품의 분자량을 나타냅니다. 각 제품의 정확한 분자량을 반영하는 도면 3-6에도디톤볼루션 분자량이 표시됩니다. 도 7은 ELISA 분석(A) 및 항원 펩타이드, Fc-III 및 DCAF1의 결과를 경쟁적으로 억제하는 4G2 항체 결합을 나타낸다. 항원 펩티드와 DCAF1 모두...

항원 펩타이드 및 Fc-III 모방제(DCAF)의 이중 기능성 컨쥬게이트 개발은 유해한 항체의 제거를 위한 새로운 것입니다. 여기서, 우리는 뎅기열 바이러스 감염 동안 항체 의존성 증강 효과를 제거하기 위해 4G2 항체를 선택적으로 차단할 수 있는 DCAF1 분자의 합성을 위한 상세한 프로토콜을 기술한다.

항원 펩타이드 및 Fc-III 모방제(DCAF)의 이중 기능 성 컨쥬게이트에 의한 표적 항체 차단

Elimination of harmful antibodies from organisms is a valuable approach for the intervention of antibody-associated diseases, such as Dengue hemorrhagic ...

이것은 표적으로 한 항체 중화와 DCAF 분자를 합성하는 방법에 관하여 중요한 질문에 대답하는 것을 돕도록 봉사할 수 있습니다. 이 기술은 높은 생산성으로 DCAF 분자를 합성하는 가장 간단한 방법을 제공합니다. 세계는 DCAF 분자가 뎅기열 과 근상증과 같은 질병을 다루는 항체에 잠재적인 내정간섭이 있다는 것을 결정합니다.이 방법은 톱니상 항체를 표적으로 하기 위하여 상이한 전형체를 가진 그밖 DCAF 분자에 적용될 수 있다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 수석 기술자 인 Xue Bai가 될 것입니다. 2-염소 수지를 펩타이드 합성 용기의 상단에서 2-염소 수지유래 수지로 변환하려면 2-염소 수지의 0.25 밀리몰에 DMF 5 밀리리터를 추가합니다.캡을 다시 켜고 15초 동안 부드럽게 용기를 흔들어 철판에 배출합니다. DMF 세척을 두 번 더 반복합니다. 그런 다음 배에 DCM 5 밀리리터를 넣고 캡을 다시 켜고 15초 동안 부드럽게 용기를 흔들어 철판에 배출합니다.DCM 세척을 두 번 더 반복한 다음 DMF 세척을 세 번 더 반복합니다. 다음으로 DCM에 DMF의 50% 부피 농도의 6밀리리터를 추가하여 30분 동안 수지를 팽창시키고 배수합니다. 이제 수드라진과 DMF의 5%의 부피 농도의 6밀리리터를 반응 용기로 이송합니다.셰이커에 120 RPM과 섭씨 30도에서 30분간 30분간 놓고 진공 펌프로 용액을 배출합니다. Fc-III 펩타이드의 수드라진 유도체를 정화하려면 HPLC 시스템을 사용하여 분당 1밀리리터의 유속으로 30분 그라데이션 용출으로 펩티드를 정화합니다. 원고에 따른 단백질 정제 후, 밀리리터 SUMO 태그 단백질 당 1 밀리그램의 새로운 튜브 2 밀리리터, SUMO 프로테아제 1밀리리터, 10X SUMO 프로테아제 버퍼 1밀리리터, 이중 증류수 6밀리리터를 추가하여 반응 용액을 준비합니다.4섭씨에서 12~16시간 동안 혼합물을 배양합니다. 그런 다음 혼합물을 8 개의 1.5 밀리리터 Eppendorf 튜브로 알리쿼트하고 혼합물을 섭씨 4도에서 10 분 동안 15, 000 배 G에서 원심 분리합니다. 파이펫을 사용하여 하단의 골재를 폐기한 다음 10 밀리리터 클리어 슈퍼나티에 넣고 50 밀리플러 PBS에 50% 니켈 NTA 비드 슬러리 0.5 밀리리터를 추가합니다.튜브를 회전 셰이커에 200 RPM과 섭씨 4도에 놓고 60분간 부드럽게 섞습니다. 다음으로, 리사데와 니켈 NTA 혼합물을

targeted-antibody-blocking-dual-functional-conjugate-antigenic

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

exosomes에있는 HIV-1 Nef의의 분비를 기본 메커니즘을 해부하는 방법이 설명되어 있습니다. 네프 단백질 형질 전환에서 파생 된 특정 짧은 펩티드의 구조, 기능 및 네프의 분비 수정 지역의 바인딩 파트너를 결정하는 데 악용되었다. 이러한 절차는 많은 역학적 연구에서 일반적으로 관련이 있습니다.

기능 모티브과 바인딩 파트너 펩타이드 기반의 식별

여기에서 저자는 도트-블롯 하이브리드화를 통해 정제된 단클론 항체와 펩타이드 스캐닝을 사용하여 선형 항원 항원결정기를 정의하는 간단하고 효율적인 프로토콜을 제시합니다. 그런 다음 식별된 항원결정기를 치료 및 진단 응용 분야에 사용할 수 있습니다.

펩타이드 모노클로 날 항체 인식 선형 B 세포 에피토프의 확인을 스캔 보조

바이러스 성 파생 된 펩 티 드 항 체 어원이 같은 말 (ACs)에 결합 된 증가 된 종양 세포 축적과 분자 페이로드를 제공의 가능성으로 인해 기세를 얻고입니다. 펩 티 드 활용, AC 및 페이로드 세포내 축적, 및 종양을 대상으로 평가 하는 일반적인 방법을 활용 하 고,이 프로토콜 연구원 주요 초기 개발 단계에서 도움이 됩니다.

세포 축적을 증가 하 고 종양을 대상으로 개선에 대 한 바이러스 성 파생 된 펩 티 드 항 체 어원이 같은 말의 초기 평가 수정

항 체에 의해 그 대상 인플루엔자 바이러스 조류 Fc 중재 effector 기능 활성화를 측정 하는 방법을 설명 합니다. 이 분석 결과 또한 Fc 중재 면역 유도의 단일 클론 항 체 또는 polyclonal 세라 다른 바이러스 표면 glycoproteins를 대상으로 능력을 평가 하기 위해 적응 수 있습니다.

독감 조류 특정 항 체에 의해 유도 된 Fc 중재 Effector 기능을 평가 하는 방법

여기, 우리 제시에 bispecific 항 체 GPC3-S-팹 생산 프로토콜 대장균. 순화 GPC3-S-팹 GPC3 긍정적인 간 암 세포에 대 한 강력한 세포 독성을 있다.

GPC3 대상으로 Bispecific 항 체, GPC3-S-팹, 강력한 세포 독성을

항 체에 신의 cyclopropene 파생 통합 tetrazine 베어링 분자 생성 항 체 약물 어원이 같은 말의 사이트별, 신속 하 고 효율적인 결합 수 있습니다.

빠른 Bioorthogonal 반응을 통해 변화 항 체 의약품의 세대에 대 한 정식이 아닌 아미노산의 유전자 인코딩

여기서 우리는 마우스 종양 제노이식 모델에서 항체의 생체 내 국소화를 연구하는 프로토콜을 제시한다.

표적 항원 특이적 치료 항체의 종양 및 조직 분포 분석

인간 자연 킬러 세포에서 치료 항체에 의한 FcγRIIIa 구동 이벤트를 연구하기 위한 프로토콜이 여기에 설명되어 있다. 이 인공 자극 플랫폼은 결합에 관여하는 항체의 FcγRIIa 및 Fc 부분에 의해 매개되는 디그라니션, 케모킨/사이토카인 생성, 시그널링 경로 와 같은 다운스트림 이펙터 기능의 심문을 허용합니다.

치료 항체의 존재에 FcγRIIIa 참여에 의해 구동 인간 자연 킬러 세포 이벤트의 평가

당사는 생체 내 수지상 세포 표적화를 위한 내분균 수용체 특이적 항체에 대한 모델 항원 배부안의 화학적 결합을 위한 프로토콜을 기술한다. 이 프로토콜은 항체의 정제, 항원의 화학적 융합, 공자의 정제 및 효율적인 유도의 검증을 포함한다.

체외 및 비보에서 마우스 수지상 세포를 대상으로 하는 전체 길이 단백질을 가진 정제 된 DEC-205 지향 항체의 화학 적 융합

nanomole 친화력과 HIV - 1Ba - L gp120에 대한 몇 가지 2' - 플루오로 RNA의 aptamers는 RNA 라이브러리에서에 의해 고립...

siRNA 전달을위한 셀 타입의 특정 안티 HIV gp120 aptamers의 개발

배우세요 DCAF 분자 합성 프로토콜을 통해 항체 중화 기술을 익히세요. 이 방법은 뎅기열 및 중증근무력증 치료에 활용될 수 있는 4G2 항체 차단 효과를 입증합니다.

항원 펩타이드 및 Fc-III 모방제(DCAF)의 이중 기능 성 컨쥬게이트에 의한 표적 항체 차단

더 많은 동영상 탐색