Name: 성체 얼룩말 기피 텔렌세팔론에서 플라스미드 DNA의 생체 내 전달을 위한 전기 개공 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: 배우세요 성체 얼룩말 뇌에서 전기 개공을 이용한 단일 ependymoglial 세포 표지 기법. 이 방법은 장기 모니터링과 세포 자율적 신호 경로 조작을 가능하게 하여 신경 재생 및 세포 생물학 연구에 활용됩니다.

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원고의 편집제임스 콥티에 특별한 감사. 우리는 또한 SFB 870및 SPP "Olfaction의 통합 분석"과 SPP 1738 "신경계 발달, 가소성 및 질병에서 비 코딩 RNA의 새로운 역할", SPP1757에 의해 독일 연구 재단 (DFG)에서 JN에 자금을 감사하게 인정합니다. " Glial 이질성", 시스템 신경학에 대한 뮌헨 클러스터의 프레임 워크 내에서 우수 전략 (EXC 2145 SyNergy – ID 390857198).

이 프로토콜에 사용된 모든 동물은 표준 축산 조건하에서 보관되었으며, EU 및 상부 바이에른 정부의 취급 지침 및 규정에 따라 실험이 수행되었습니다(AZ 55.2-1-54-2532-0916).
1. 전기 포공용 플라스미드 혼합물 의 준비
<ol><li>멸균수에 관심 있는 플라스미드를 희석하고 빠른 녹색 얼룩 스톡 용액 [1 mg/mL]을 추가합니다. 플라스미드의 최종 농도가 1 μg/μL인지 확인하십시오.</li>
	<li>일단 준비되면, 위아래로 여러 번 또는 손가락으로 두드리는 하여 플라스미드 용액을 섞는다. 사용 전까지 실온(RT)에 보관하십시오. 참고: 동일한 세포에 두 플라스미드의 공동 전기화를 위해, 혼합물에 사용되는 각 개별 플라스미드의 농도가 80%-90% 공동 전기화 효율을 얻기 위해 1:1의 몰 비율로 0.8 ng/μL 이상인지 확인한다.</li>
</ol>2. 주입 및 전기 증식 절차 준비
<ol><li>바늘 당기기의 주입에 필요한 유리 모세혈관(외경 1mm, 내경 0.58mm)을 준비한다.</li>
	<li>올바른 양의 플라스미드를 주입하려면(위 참조) 68.5°C의 온도에서 두 개의 가볍고 두 개의 무거운 무게로 모세관을 당깁니다(풀러 사양에 대한 재료 표 참조). 참고: 다른 풀러를 사용하는 경우 모세관을 보정하여 적절한 양의 전기 천자 혼합물을 전달합니다.</li>
	<li>사출 장치를 200 hPa의 사출 압력(Pi 노브를 돌려) 및 0 hPa의 일정한 압력으로 수동으로 설정합니다. 수동으로 분사 시간을 수동 모드로 설정하고 풋 페달로 압력을 제어합니다.</li>
	<li>전기 개출 장치를 54-57V(각각 1s 간격으로 25ms)에서 5개의 펄스로 "LV 모드"로 설정합니다. 전극을 장치에 연결합니다.</li>
	<li>깨끗한 물고기 물로 하나의 어항을 준비, 여기서 물고기는 전기 천공 절차 후 마취에서 깨어날 것이다. 물고기가 완전히 깨어날 때까지 전체 복구 기간 동안 에어 펌프에 부착 된 공기 돌을 유지하여 물을 aerate.</li>
	<li>일반 부엌 스폰지를 가지고 주사 및 전기 증시 동안에 물고기를 개최 스폰지에 세로 컷을합니다 (이전 출판물참조 3). 참고: 부엌 스폰지는 정기적으로 세척하거나 잠재적 인 독성 화학 물질을 제거하기 위해 교환해야합니다.</li>
	<li>소량의 고전도성 다목적 초음파 젤을 주입 및 전기 화 기 설정 옆에 놓습니다. 참고: 이것은 적절한 전기 전도도를 보장하고, 결과적으로, 전체 텔렌세판론에 걸쳐 전기 세포의 분포를 보장합니다.</li>
</ol>3. 제브라피시 마취
<ol><li>마취 전에 증류수에서 0.2 % MS222로 마취의 재고 용액을 준비하고 Tris-HCl 버퍼로 pH를 7로 조정하십시오. 생선물을 사용하여 이 스톡을 1:10(즉, 0.02% MS222)로 희석합니다.</li>
	<li>몸과 아가미의 움직임이 가라 앉을 때까지이 작업 솔루션에 그들을 유지 하 여 물고기를 마 세 게 (일반적으로 몇 분 동안).</li>
</ol>4. 플라스미드 용액 주입
<ol><li>마이크로 로더 팁을 사용하여 10 μL의 플라스미드 용액으로 준비된 유리 모세관을 채웁니다. 모세관 내부에 기포가 형성되는 것을 피하십시오.</li>
	<li>사출 장치에서 메뉴/변세관 을 누릅니다. 바늘을 삽입하고 바늘 홀더에 고정하십시오.</li>
	<li>3.2x 또는 4x배배의 배율의 입체 현미경으로 미세한 집게를 사용하여 모세관 의 끝만 자른다. 변속 모세관 모드에서 주입 모드로 사출 장치를 전환한 다음 풋 페달로 압력을 가하여 플라스미드 용액이 바늘에서 쉽게 실행되고 방해가 되지 않도록 합니다.</li>
	<li>축산 탱크에서 마취 용액이있는 용기 (플라스틱 상자)로 물고기를 옮니다. 아가미의 움직임이 가라 앉을 때까지 몇 분 동안 기다립니다.</li>
	<li>등쪽쪽을 위로 향하여 미리 젖은 스폰지에 생선을 넣습니다. 절차의 정확성을 보장하기 위해 입체 현미경에서 다음 의 모든 주입 단계를 수행합니다.</li>
	<li>40mm 절삭날과 0.5mm 두께의 스테인레스 스틸에서 해부 마이크로 나이프를 사용하여, 말렌세팔론의 후방에 물고기 두개골에 작은 구멍을 만들(그림 1B),광학 tectum와 국경 바로 옆에. 참고: 이 단계는 구멍이 뇌 손상을 피하기 위해 두개골만 관통하는 매우 작고 피상적이어야하기 때문에 신중하게 수행해야합니다.</li>
	<li>필요에 따라 물고기를 기울이고 구멍을 통해 모세관 팁의 침투를 용이하게하기 위해 올바른 각도로 두개골을 향해 유리 모세관의 끝을 방향.</li>
	<li>두개골의 구멍을 통해 모세관의 끝을 조심스럽게 삽입하여 텔렌스뇌실 심실에 도달할 때까지 하십시오(그림 1B참조). 이것은 등쪽 ependymal 세포 층을 통해 침투를 요구할 것이다. 특히 모세관을 너무 깊게 삽입하지 않도록 주의하여 뇌 조직과의 접촉을 피하십시오. 등등 ependymal 층을 관통 한 직후 심실 내부에 남아있는 반구 사이에 정확하게 모세관을 유지합니다. 참고: 이것은 매우 섬세한 단계입니다. 이 절차의 정확도는 황동24와같은 착색 돌연변이 라인을 사용하여 향상되어 주입 시 유리 모세관 위치를 더 잘 시각화 할 수 있습니다.</li>
	<li>심실 내부의 모세관 팁을 사용하여 약 10 s의 풋 페달에 압력을 가하여 플라스미드 용액을 주입하십시오. 참고: 바늘 풀러, 모세 혈관 또는 인젝터를 변경하는 경우 항상 1 μL의 플라스미드 용액을 제공하기 위해 시스템을 보정해야합니다. 캘리브레이션은 광유(예를 들어, 파라핀 오일)로 추방된 플라스미드 액적의 직경을 측정하고 이어서 액적의 부피를 계산함으로써 수행될 수 있다. 10 s의 주입 후, 미네랄 오일로 추방 된 플라스미드 액체의 ~ 1 μL이 있어야합니다.</li>
	<li>심실 전체에 걸쳐 액체의 확산을 관찰하여 이전 단계의 성공을 확인합니다.</li>
</ol>5. 전기 천공
<ol><li>스폰지에 들고 있는 동안 주입 셋업에서 물고기를 제거합니다.</li>
	<li>초음파 젤에 전극 끝의 내부면을 담급전시.</li>
	<li>소량의 초음파 젤로 생선 텔렌스팔론을 덮습니다.</li>
	<li>물고기 머리를 전극 사이에 놓고, 포지티브 전극을 물고기 머리의 복부쪽에 놓고 등쪽(그림1C)에음극을 놓고 스폰지에 물고기의 몸을 유지합니다. 이것은 심실 영역에 위치한 전기 ependymoglia에 필요한 전류의 흐름의 방향을 설정합니다.</li>
	<li>전극을 텔레렌팔론에 대해 부드럽고 정밀하게 누릅니다(그림1C). 풋 페달로 전류를 관리합니다. 5개의 펄스가 모두 완료될 때까지 전극을 제자리에 고정합니다.</li>
</ol>6. 물고기 복구
<ol><li>물고기가 깨어날 때까지 이전에 준비된 지속적으로 포번수 탱크에서 물고기를 회복시키십시오. 리도카인 젤은 아마도 개발 된 통증을 완화하기 위해 두개골에 적용 할 수 있습니다.</li>
</ol>

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이러한 전기 개공 프로토콜은 개별 에펜디모글리아 세포를 라벨링하는 신뢰할 수 있는 생체 내 방법이다. 프로토콜은 뉴런 또는 올리고엔드로시트와 같은 다른 세포 유형에 라벨을 붙이기 위해 추가적인 적응이 필요할 수 있다. 성공적인 라벨링을 달성하기 위해, 다른 프로모터를 함유하는 플라스미드를 사용할 수 있다. 치킨 베타 액틴 프로모터, eF1alpha, CMV 및 유비퀴틴 프로모터는 이전에 에펜디모글리아 및 그들의자손(23)에서상이한 트랜스유전자의 발현을 유도하는 데 사용되어 왔다. 그러나, 이식 유전자 발현의 상이한 역학은 계정으로 취해야 하는 관찰되었다. 예를 들어, CMV 프로모터 구동 이식유전자 발현은 매우 빠르며(24시간 후에 발현이 보일 수 있음), eF1alpha는 더 오래 걸린다. 라벨링 외에도, 전기천공 프로토콜은 Cre 재조합 또는 CRISPR Cas9 기술22를사용하여 유전자 편집의 빠르고 간단한 플랫폼으로서 사용될 수 있다. ...

Zebrafish는 찔린 상처 부상 후 뇌 재생을 검사하는 우수한 동물 모델입니다. 포유류에 비해, 진화 사다리에, 제브라피시와 같은 덜 진화 된 종은 일반적으로 구성 신경 발생의 높은 비율을 보여주고 성인 신경 줄기 세포 거주의 넓은 영역, 전반에 걸쳐 새로운 뉴런의 일정한 생성으로 이어지는 성인 생활에서 대부분의 뇌 영역. 이 기능은 포유류 1에 비해 제브라피시의 상당히 높은 재생 능력과 상관 관계가 나타납니다1,제브라피쉬는 효율적으로 연구대부분의뇌 손상 모델에서 새로운 뉴런을 생성하는 놀라운 잠재력을 가지고2, 3,4,5,6,7,8. 여기에서, 얼룩말 말살론은 성인기에 있는 눈에 띄는 신경 발생을 가진 두뇌 지역이기 때문에, 공부됩니다. 이러한 성인 신경발생 영역은 성인 포유류뇌의신경발생 영역과 상동성이며9,10,11.
얼룩말기 말뇌에 풍부한 신경 영역은 세포 또는 ependymoglia 세포 같이 방사형 신경교의 존재 때문에 존재합니다. Ependymoglial 세포는 상주 성체 신경 줄기 세포역할을 하며 뇌의 손상및 재생 모두에서 새로운 뉴런의 생성을 담당하고 있으며3,5. 계보 추적 실험은 심실 ependymoglia가 상해에 반응한다는 것을 보여주었습니다, 그 때 증식하고 병변사이트5로이동하는 새로운 neuroblasts를 생성합니다. zebrafish 말뇌파의 적중특성으로 인해, ependymoglial 세포는 심실 표면을 일렬로 세우고 심실 벽을 건설합니다. 등쪽 심실 벽은 등쪽 에펜디멀 세포층에 의해 형성된다(도1A). 중요한 것은, 제브라피쉬 ependymoglia는 포유류 방사형 글리아 및 형형 세포 둘 다의 특성을 구현합니다. 긴 방사형 과정은 방사형 신경교 세포의 전형적인 특징이며, 반면 세포 확장 및 단단한 접합부 (뿐만 아니라 심실 위치)는 ependymal 세포12,13,14의전형적인 특징이다. 따라서, 이들 세포는 에펜디모글리아 세포라고 한다.
재생 중에 단일 ependymoglial 세포의 생체 내 거동을 따르려면, 그들은 안정적으로 표지 될 필요가있다. 형광 현미경 검사법에 대한 생체 내 세포 표지의 다양한 방법은 내인성 리포터 또는 친유성염료(15)와같은 이전에 기술되어 왔다. 이러한 방법은 전기 천공과는 달리 더 오랜 시간이 필요할 수 있으며 종종 단일 세포 라벨링 또는 영구 장기 추적의 가능성을 제공하지 않습니다. 전기 천공은, 그러나 (단 하나 세포 표지 이외에) 호스트 세포로 새로운 DNA를 소개의 가능성을 제안합니다. 더욱이, 세포 내로의 DNA 전달의 다른 방법에 비해, 전기천공은16,17,18,19중가장 효율적인 방법 중 하나인 것으로 입증되었다.
여기서 제시된 것은 성체 얼룩말기 말뇌골론에서 단일 에펜디모글리아 세포에 라벨을 붙이기 위한 목적으로 정제된 전기 개루 프로토콜이다. 이 프로토콜은 장기간20에 걸쳐 이를 따르거나 세포 자율 방식으로 특정 경로를 조작하기 위해 단일 ependymoglial 세포의 라벨링을허용한다 21,22.

<table><tbody><tr><td>Reagent/Material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7258-25G</td><td>플라스미드 착색용</td></tr><tr><td>MS222</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040-25G</td><td>MS222는 RT(최대 2주)로 보관해야 하며 광 초음파 젤로부터 보호해야 합니다</td></tr><tr><td></td><td>. SignaGel, Parker laboratories INC.</td><td>15-60</td><td>전극 젤</td></tr><tr><td><강한>장비</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>공기 펌프</td><td>TetraTec APS 50, 10l-60l</td><td></td><td>애완동물 가게에서 구입할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>BTX 핀셋 전극</td><td>플래티넘 핀셋, BTX 하버드 장치</td><td>45-0486</td><td>1mm 직경</td></tr>의 <tr><td>전기천공법 장치</td><td>BTX ECM830 구형파 전기천공법 시스템, BTX 하버드 장치</td><td>45-0662</td><td></td></tr><tr><td>주입 장치</td><td>FemtoJet 4i, Eppendorf</td><td>5252000013</td><td></td></tr><tr><td>Standard Wall Borosillicate 유리 모세관</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0766</td><td>모델 번호: G100-4</td></tr><tr><td>마이크로로더 팁</td><td>Eppendorf</td><td>5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Micro-knife</td><td>Fine Science Tools</td><td>10056-12</td><td></td></tr><tr><td>조이스틱 마이크로매니퓰레이터</td><td>Narishige Japan</td><td>MN - 151</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>FemtoJet 4i, Eppendorf</td><td>5252000013</td><td>바늘 홀더는 주입 장치</td></tr><tr><td>바늘 당기는 장치와</td> 함께 제공됩니다. <td>Narishige Japan</td><td>모델 번호: PC-10</td><td>PC-10은 2017년 Narishige에 의해 중단되었으며 PC-100</td></tr><tr><td>Petri 접시</td>로 대체되었습니다. <td>Greiner Bio-One International</td><td>633161</td><td></td></tr></tbody></table>

성체 얼룩말 기피 텔렌세팔론에서 플라스미드 dna의 생체 내 전달을 위한 전기 개공 방법

Electroporation Method for In Vivo Delivery of Plasmid DNA in the Adult Zebrafish Telencephalon

전기 개출은 세포막에 일시적인 기공을 생성하고 투과성을 증가시켜 다른 분자가 세포에 도입 될 수 있도록 하는 형질전환 방법입니다. 이 논문에서, 전기 천공은 성인 얼룩말 말살기의 심실 영역을 일렬로 세워 ependymoglial 세포에 플라스미드를 소개하는 데 사용됩니다. 이들 세포의 일부분은 줄기 세포 특성을 보여주고 제브라피시 뇌에서 새로운 뉴런을 생성한다. 그러므로, 그들의 행동을 공부하는 것은 신경 발생과 재생에 있는 그들의 역할을 결정하기 위하여 필수적입니다. 전기 개공을 통해 플라스미드를 도입하면 단일 에펜디모글리아 셀의 장기 라벨링 및 추적이 가능합니다. 또한 Cre recombinase 또는 Cas9와 같은 플라스미드는 단일 ependymoglial 세포로 전달될 수 있어 유전자 재조합 또는 유전자 편집을 가능하게 하고 제어된 천연 에서 세포의 자율 적인 유전자 기능을 평가할 수 있는 독특한 기회를 제공합니다. 환경. 마지막으로, 이 상세한, 단계별 전기 천공 프로토콜은 다수의 단일 ependymoglial 세포에 플라스미드의 성공적인 도입을 얻기 위해 사용된다.

기재된 전기천공 방법은 플라스미드 DNA를 에펜디모글리아 세포내로 전달할 수 있으며, 이는 얼룩말 말살기 및 등쪽 에펜디알 세포층 바로 아래에 표면적으로 위치한다(도1A).
전기 천공의 결과가 양성인 경우, 표지된 단일 에펜디모글리아 세포(도 2A, B의적혈구)는 다른 에펜디모글리아 세포 들 사이에서 관찰될 수 있다(도 2A, B에서백색). 전기 천공 과정의 효율에 따라, 더 높은(도 2A)이하(도 2B)회교 신경통 세포의 수가 표지될 수 있다. 그럼에도 불구하고 이 프로토콜은 이전에 게시된20개보다더 ...

여기서 제시된 것은 성체 제브라피쉬 텔렌세팔론에서 플라스미드 DNA 전달 및 에펜디모글리아 세포 라벨링을 위한 전기개공 방법이다. 이 프로토콜은 개별 ependymoglial 세포를 구상하고 추적하는 빠르고 효율적인 방법이며 광범위한 유전 조작에 전기 증시인을 적용할 수있는 새로운 가능성을 열어줍니다.

성체 얼룩말 기피 텔렌세팔론에서 플라스미드 DNA의 생체 내 전달을 위한 전기 개공 방법

Electroporation is a transfection method in which an electrical field is applied to cells to create temporary pores in a cell membrane and increase its ...

이 프로토콜은 그들의 장기 적인 감시를 가능하게 하는 zebrafish telencephalon에 있는 개별 ependymoglial 세포의 표시를 허용합니다, 세포 자율적인 방식으로 특정 통로의 조작. 이 기술의 주요 장점은 세포 자율 방식으로 유전자 편집 및 신호 경로 조작뿐만 아니라 빠르고 효율적인 방법으로 단일 세포 라벨링을 허용한다는 것입니다. 이 방법은 기본적인 세포 생물학 질문, 예를 들어 세포 절제, 상피 항상성의 유지 및 세포 분열의 대칭에 관하여 조사를 허용합니다.먼저 바늘 을 당기는 장치를 사용하여 유리 모세 혈관을 준비하십시오. 마이크로 로더 팁을 사용하여 제조 된 유리 모세관을 플라스미드 용액 10 마이크로 리터로 채웁니다. 그런 다음 메뉴 변경 모세관"주사 장치에 바늘을 바늘 홀더에로드 할 수 있도록.그런 다음 주입 장치를 변경 모세관에서 주입 모드로 전환합니다. 그런 다음, 4배 배율의 스테레오현미경을 사용하고, 포셉을 찾아모세관의 끝만 자른다. 그런 다음 발 페달에 압력을 가하여 플라스미드 용액이 방해없이 바늘에서 쉽게 실행되는지 확인합니다.바늘이 준비되면 축산 탱크에서 제브라피시를 마취 용액용기로 옮기습니다. 아가미의 움직임이 가라앉을 때까지 몇 분 간 기다립니다. 스테레오 현미경 아래 미리 젖은 스폰지에 진정 된 물고기 등쪽을 누르고, 조심스럽게 석양 텍소의 경계 옆에, 텔렌스 팔론의 후면 측에서 물고기 두개골에 작은 구멍을 만들 수있는 40 밀리미터 절삭 가장자리와 0.5 밀리미터 두께와 스테인레스 스틸 해부 마이크로 나이프를 사용합니다.필요에 따라 물고기를 기울이고 유리 모세관의 끝을 올바른 각도로 두개골쪽으로 방향을 지정하여 구멍을 통해 모세관 팁의 침투를 용이하게합니다. 이어서, 매우 신중하게 등대 연골 세포 층을 통해 구멍에 모세관의 끝을 삽입하고, 텔렌세팔리 심실에 도달 할 때까지, 약 10 초 동안 발 페달에 압력을 적용하여 플라스미드 용액의 약 1 마이크로 리터를 전달합니다. 전달의 성공은 심실 전체에 녹색 액체의 확산을 관찰함으로써 확인할 수 있습니다.소량의 초음파 젤로 생선 텔뇌스팔론을 덮습니다. 플라스미드 주입 동물의 전기 포이팅을 위해 주사 설정에서 스폰지를 제거하고 전자 팁의 내부 면을 초음파 젤에 담급하십시오. 머리의 복부 측에 양극과 등쪽의 음극을 가진 물고기 머리를 전극 사이에 배치합니다.그런 다음, 여전히 물고기의 몸을 스폰지에 들고있는 동안, 전극을 부드럽고 정확하게 텔렌스팔론에 대고 발 페달로 전류를 관리하여 5 개의 펄스가 모두 끝날 때까지 전극을 제자리에 유지합니다. 전기포이션이 성공하면 플라스미드 표지된 단일 ependymoglial 세포가 비 플라스미드 라벨eemoglial 세포 사이에서 관찰될 수 있다. 전기 포기 과정의 효율에 따라, ependymoglial 세포의 더 높거나 낮은 수는 표지될 수 있습니다.그럼에도 불구하고, 입증된 프로토콜은 이전에 발표된 프로토콜보다 더 많은 수의 표지된 셀을 산출합니다. 라벨이 붙은 세포의 가장 높은 밀도는 주입된 플라스미드 액체가 반구 사이에 분포하는 방식으로 인해 두 반구의 내부 심실 측에서 주로 나타나는 경향이 있습니다. 이 비디오에서, 제브라피시 텔뇌스팔론의 한 반구는 무선 프로세스를 가진 ependymoglial 세포가 측에서 관찰될 때 마젠타에 있는 3D로 제시됩니다.핵을 라벨링하는 또 다른 플라스미드와의 공동 전기화를 통해, 에펜디모글리아세포의 세포 분열을 관찰할 수 있다. 실패한 전기기화는 매우 낮은 수 또는 에펜디모글리아질 세포에 표시되지 않습니다. 그러나 등쪽 연피 세포는 표지될 가능성이 가장 높습니다.그들의 소마는 cuboid에서 더 크고 ependymoglial 세포 층의 측면 보기에서 분명하게 무선 길쭉한 프로세스를 소유하지 않습니다. tdTomato-mem 표지된 세포는 ependymoglia의 층 위에 있는 가장 확률이 높은 ependymal 세포입니다. 대조적으로, 개별 에펜드미오글리올 세포에 플라스미드를 발현하는 tdTomato-mem의 도입은 초기 세포 라벨링 이외에 tdTomato-mem 발현을 초래한다.기억해야 할 가장 중요한 것은 모세관의 끝만 잘라내고 주입하는 동안 연피 층을 관통하여 액체가 심실 전체에 퍼지도록 하는 것입니다. 이 기술은 생체 내 이미징을 통해 단일 ependymoglial 세포의 장기 모니터링을 가능하게하고, 따라서 뇌 재생뿐만 아니라 생체 내 유전 링크에서 자신의 역할을 확립.

electroporation-method-for-vivo-delivery-plasmid-dna-adult-zebrafish

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

현재 비디오는 개발 zebrafish의 forebrain에서 개별 신경 전구 세포에 대한 라이브 영상을 수행할 수 electroporation과 공촛점 현미경의 조합을 활용하는 방법을 보여줍니다.

개발 Zebrafish Forebrain에 Clonally 관련 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상

유전자 조작의 시간적 및 공간적 해상도는 그들이 교란 수있는 생물 학적 현상의 스펙트럼을 결정합니다. 여기 temporally과 공간 개별...

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조건부 성인 zebrafish의 망막에서 대상 단백질의 표현을 분해하는 방법은 intravitreally 안티 센스 morpholinos를 주입하여 망막에 그들을 electroporating 포함하는, 설명되어 있습니다. 그 결과 단백질은 재생이나 그대로 망막에있는 단백질의 역할을 테스트 수 며칠에 대한 무너뜨렸다입니다.

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우리는 조건부 성인 zebrafish 지느러미 재생 중에 대상 단백질의 표현을 분해하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 마이크로 주사와 상처 치유, 아체 형성 및 재생 파생물을 포함하여 지느러미 재생의 다양한 단계에서 단백질의 역할을 테스트하고 있습니다 지느러미 조직,에 안티 센스 oligonucleotide의 morpholinos를 electroporating을 포함한다.

생성중 성인 Zebrafish 테일 핀으로 Morpholinos의 생체내 Electroporation에

이 비디오는 성체 제브라피쉬의 뇌실막세포로 DNA를 전달하는 기술인 생체 내 전기천공법에 대해 설명합니다.

생체 내 Electroporation: 제브라피시를 transfection하는 현장 특정적 방법

이 비디오는 성인 제브라피쉬의 등쪽 근육에 화합물을 전달하기 위한 근육 주사 기술에 대해 설명합니다.

근육주사(IM) 주사: 성체 제브라피쉬의 등쪽 근육으로 복합 전달

이 문서에서는, 우리는 안티센스 모르의 올리고 뉴클레오티드를 이용하여 성인 제브라 피쉬 telencephalon의 심실 세포에서 유전자 발현을 조작하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성인 척추 뇌 기능 연구에 사용할 수있는 효율적이고 빠른 프로토콜로이 방법을 제시한다.

모르 올리고 뉴클레오티드의 Cerebroventricular 미세 주입을 사용하여 성인 Zebrafish의 두뇌에서 유전자 발현의 미세 조작

제브라피시 성체 신경 발생 및 재생의 세포 및 분자 메커니즘을 밝히기 위해 우리는 제브라피시 성체 텔렌스팔론에서 기계적 손상을 일으키는 침습적 수술과 면역조직화학 또는 현장 교잡화에 의한 찌른 반구의 변화를 모니터링하는 프로토콜을 개발했습니다.

Zebrafish의 성인 Telencephalon의 자상 부상 : 척추 동물의 뇌 신경 발생과 재생을 조사하는 방법

선물이 zebrafish 태아 transfection 라이브 셀 이미징 뿐만 아니라 성인 zebrafish 두뇌에서 1 차 셀을 준비 하는 프로토콜의 기본 셀 문화를 준비 하기 위한 효율적이 고 사용 하기 쉬운 프로토콜.

문화와 Zebrafish 기본 세포의 Transfection

여기 우리 성인 zebrafish (Danio rerio) DNA 기반 백신의 예방 접종에 대 한 프로토콜 설명 및 성공적인 예방 접종 이벤트의 유효성 검사를 보여 줍니다. 이 메서드는 다양 한 감염 모델 백신 후보자의 전 임상 검사에 적합 합니다.

DNA 기반 백신의 임상 검사에 대 한 성인 Zebrafish의 예방접종

성체 제브라피시에서 새로운 복강내(IP) 주사 방법에 대해 설명합니다. 독소루비신(doxorubicin)과 같은 독성 화합물을 취급할 때 이 절차는 이전에 보고된 두 가지 IP 방법보다 더 효과적입니다. 이 기술은 제브라피시 모델에 대한 경험이 제한된 연구원들이 쉽게 채택할 수 있도록 설계되었습니다.

성체 제브라피시의 복강 내 주사 기법으로 신체 손상 및 관련 폐사율을 최소화합니다.

배우세요 성체 얼룩말 뇌에서 전기 개공을 이용한 단일 ependymoglial 세포 표지 기법. 이 방법은 장기 모니터링과 세포 자율적 신호 경로 조작을 가능하게 하여 신경 재생 및 세포 생물학 연구에 활용됩니다.

성체 얼룩말 기피 텔렌세팔론에서 플라스미드 DNA의 생체 내 전달을 위한 전기 개공 방법

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