Name: 마우스 아이에 생물학적 제제의 전달을 위한 캡슐화된 세포 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: 배우세요 알지네이트 미소캡슐을 이용한 마우스 눈 생물학적 제제 전달 기술. 이 방법은 면역 반응을 최소화하면서 지속적인 치료제 방출을 가능하게 하여 안과 질환 연구에 활용됩니다.

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이 연구는 국립 보건원 (R01EY019320), 재향 군인 업무부 (RX000444 및 BX003050), 사우스 캐롤라이나 스마트 스테이트 인다우먼트에 의해 B. R. 수여 보조금에 의해 부분적으로 지원되었습니다.

모든 실험은 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 ARVO 성명서에 따라 수행되었으며 프로토콜 ID 00399에 따라 사우스 캐롤라이나 동물 관리 및 사용 위원회의 의과 대학에 의해 승인되었습니다.
1. 세포 배양
<ol><li>인간 망막 색소 상피 세포(ARPE-19) 세포주를 생성하여 발표된 프로토콜14,,15에따라 선택한 유전자를 안정적으로 발현한다.</li>
	<li>Dulbecco의 수정 된 독수리 매체 (DMEM)에서 세포를 10 % 태아 소 혈청 (FBS)으로 보충하십시오.</li>
	<li>세포를 37°C 및 5%CO2에서배양한다.</li>
	<li>2-3일마다 매번 매체를 교체하십시오.</li>
	<li>표준 조직 배양 절차를 사용하여 70%-80% 합류에 도달한 후에 세포를 통로.</li>
</ol>2. 세포 캡슐화
<ol><li>나트륨 알긴산나트륨을 탈이온화(DI) 물과 혼합하여 최종 농도를 2%v로 만들고 0.2 μm 멸균 주사기 필터로 여과하여 정화합니다.</li>
	<li>10 mM HEPES 완충 식염수 (pH = 7.4)로 트립시니화, 원심 분리 및 세척하여 알긴산 용액과 혼합 될 세포를 준비시다. 혈세포계를 사용하여 세포를 계산하고 알긴산 용액에서 최종 세포 농도를 1 x 106으로 조정합니다. 참고: 캡슐화 과정은 멸균 된 후드 내부에서 실행되어야합니다.</li>
	<li>~ 300 μL 알긴산과 세포 혼합물을 3 mL 주사기에 넣고 주사기 펌프에 부착합니다. 용액은 30 G 무딘 팁 바늘을 통해 멸균 겔링 욕조에 7 mm의 주사기 팁 아래의 멸균 50 mL 비커에 배치되어 바늘을 목욕 분무 거리까지 펌핑한다.</li>
	<li>겔화 목욕은 100 mM 염화 칼슘 (CaCl2)과0.5 % w / v 폴리 L-오르니틴 (PLO)을 포함하는 10 mM HEPES 완충 식염수의 40 mL의 부피를 포함합니다. PLO는 조사자의 필요에 따라 생략하거나 변경할 수 있는 보조 폴리머 코팅이다.</li>
	<li>전압 및 유량을 조정하고 캡슐화 공정 중에 60mm/h 유량 및 6.0 kV 초기 전압을 일정하게 유지하여 ~ 150 μm의 마이크로 캡슐 크기를 생성합니다.</li>
	<li>바늘에 고전압 발생기 바늘 팁의 양극 와이어 (빨간색)의 클립을 연결하고 겔링 욕조에 잠기는 구리 와이어에 접지 클립 (검은 색)을 연결합니다. 알긴산 + 세포 혼합물(1 mL)의 1회 배치는 캡슐화된 세포(약 25,000마이크로캡슐)를 준비하는 데 약 30분이 소요된다.</li>
	<li>세척 액 (1.5 mM CaCl 2, pH = 7.4를 포함하는 10 mM HEPES 완충 식염수)로 세포를 포함하는 형성된 마이크로캡슐을두 번 세척한다. 세탁시 PBS를 사용하지 마십시오.</li>
	<li>캡슐화된 세포를 10% FBS로 배양하여 37°C 및 5%CO2에서가습된 인큐베이터에서 DMEM 매질 보충제를 보충하였다. 참고: 캡슐화 공정 계측기는 그림 1에도시되어 있습니다.</li>
</ol>3. 캡슐화가 세포 생존력에 영향을 미치지 않는다는 확인
<ol><li>캡슐화된 세포를 24시간 동안 배양한 후, 염색을 위해 500 μL(~30 마이크로캡슐)의 작은 샘플을 준비한다.</li>
	<li>세척 용액 (1.5 mM CaCl2를포함하는 10 mM HEPES 완충 식염수)을 사용하여 마이크로 캡슐을 2 x 씻어 내고 살아있는 / 죽은 분석 키트를 사용하여 살아있는 죽은 생존을 위해 얼룩을 지으십시오.</li>
	<li>칼세인 AM(아세톡시메틸)과 에티듐 호모디머-1의 염색 혼합물을 각각 2 μM 및 4 μM의 최종 농도에서 준비한다.</li>
	<li>캡슐화된 세포에 염색 혼합물 2 mL를 넣고 실온(RT)에서 어둠 속에서 30-45분 동안 배양한다.</li>
	<li>신중한 포부로 염색 용액을 흡인하고 세척 용액으로 마이크로 캡슐을 2 x 씻어 내세요. 형광 현미경 시스템을 사용하여 캡슐화된 세포를 관찰하고 이미지화합니다. 참고: 캡슐화 문서는 그림 2에나와 있습니다.</li>
</ol>4. 캡슐이 생물학적 제제의 전달 및 전달에 적합한 크기임을 확인
<ol><li>마우스 눈에 있는 Intravitreal 주사는 전형적으로 2.5 μL 해밀턴 주사기에 붙어 있는 27 G 무딘 끝 바늘 (210 μm의 내경)로 수행됩니다.</li>
	<li>100 ~200 μm에 이르는 캡슐을 생성하고, 혈청이 없는 매체로 희석한 다음, 조심스럽게 해밀턴 주사기로 끌어올리십시오. 알긴산 캡슐이 PBS에서 용해될 것이기 때문에 PBS는 적합한 차량이 아닙니다.</li>
	<li>캡슐을 함유한 1 μL 방울을 현미경 슬라이드에 천천히 꺼내고 직립 된 밝은 필드 현미경을 사용하여 무결성을 결정하십시오.</li>
	<li>그에 따라 전압 및 유량을 조정하여 캡슐 크기(단계 2.3 참조)를 조정합니다. 더 작은 마이크로 캡슐은 전압을 증가시키고 유량8을약간 감소시킴으로써 비선형 방식으로 생산됩니다. 우리의 손에, 직경 150 μm의 캡슐이 가장 적합한 것으로 판명되었습니다. 캡슐 크기의 조정은 또한 다른 파라미터를 변경하는 동안 알긴산 농도를 일정하게 유지하는 것에 달려 있습니다.</li>
	<li>원하는 생물학적 제제의 분비량을 결정하기 위해 혈청 이없는 배지에서 적절한 크기의 캡슐에 별도의 세포 세트를 유지한다. 민감한 ELISA 또는 서쪽 블로팅을 사용하여 상급제에서 생물학적 제제의 농도를 결정하십시오.</li>
	<li>치료의 알려진 PK/PD(약동학/약력학)에 따라 주입해야 하는 캡슐의 필요한 양을 결정합니다. 우리의 손에, 10 마우스 눈 당 캡슐은 가장 효과적인 것으로 판명.</li>
</ol>5. 마우스 유리체로 캡슐 전달
<ol><li>해부 현미경을 사용하여 인트라비트 주사를 수행합니다. 수술 시 사용되는 수술 설정 및 재료는 그림 3을 참조하십시오. intravitreous 주사에 대한 자세한 프로토콜은 다른 곳에서 찾을 수 있습니다16.</li>
	<li>자일라진과 케타민 (20 mg/kg 및 80 mg/kg) 또는 특정 기관의 동물 관리 및 사용 위원회에서 승인 한 다른 선호 하는 마 필적의 복 강 주사에 의해 마우스를 마 세. 발가락 핀치17을사용하여 마취의 적절한 깊이를 확인합니다.</li>
	<li>페닐에프린 HCL로 마우스 동공을 넓히다 (2.5%) 및 아트로핀 황산염 (1%) 유리체 챔버의 좋은 가시성을 허용하고 시술 중에 수분을 유지하기 위해 눈에 윤활유 아이 젤을 적용합니다.</li>
	<li>가이드 구멍으로 26G 바늘로 팔다리에 공막구멍을 뚫고 1) 바늘이 눈과 테이블이 있는 45° 각도에 있고 2) 경정맥이 렌즈에 구멍을 뚫지 않도록 위쪽으로 향하게 됩니다.</li>
	<li>육안으로 검사를 통해 45° 각도로 해밀턴 주사기에 부착된 27G 무딘 팁 바늘을 사용하여 캡슐을 조심스럽게 주입하여 바늘로 렌즈를 만지지 않도록 하십시오. 렌즈의 부상은 백내장 형성으로 이어질 것입니다. 캡슐은 해부 현미경을 사용하여 유리체에서 볼 수 있어야합니다(도 4A).</li>
	<li>바늘의 철회 후, 덱사메타손 안과 항생제 연고 이외에 항생제 연고 네오마이신 및 폴리믹신 B 황산염으로 주사 부위를 치료하십시오.</li>
	<li>고니오테르 하이프로멜로스 데멀센트 안과 용액 적용 (2.5%) 회복 기간 동안 각막이 건조하지 않도록 두 눈으로.</li>
	<li>37°C에서 유지된 가열 패드에 마우스를 놓고 완전히 깨어날 때까지 모니터합니다.</li>
	<li>캡슐화된 ARPE-19 세포의 성공적인 주입은 광학 적인 일관성 단층 촬영 또는 다른 방법에 의해 눈을 이미징 할 때 약간의 파편으로 마우스의 유리체 챔버에서 손상되지 않은 캡슐의 존재를 밝혀야합니다(그림 4B).</li>
	<li>주입 된 마우스 눈, 수술로 인해 회복의 몇 일 후, 지금 손에 실험 패러다임에 대한 준비가되어 있습니다. 참고: 눈에 있는 캡슐의 외과 적 설치 및 문서화는 각각 그림 3및 그림 4에묘사됩니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 경쟁적인 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

이 세포 캡슐화 기술은 상대적으로 빠르고 수행하기 쉽습니다. 그러나 정확한 다운스트림 결과를 얻으려면 특정 지점을 염두에 두어야 합니다. 세포는 캡슐화 하기 전에 페트리 접시에 배양에서 유지 되어야 하 고 적절 한 합류에서 개최. 캡슐화는 가능하면 조절 된 공기 흐름이있는 적절한 환기 후드에서 수행해야합니다. 공기 전류가 너무 강하면 캡슐 형성에 영향을 미칠 수 있으며, 특히 장기 실험에서 영향을 미칠 수 있습니다. 멸균 기구 및 용액은 캡슐 내의 세포를 장기적으로 유지 보수하는 데 매우 중요합니다.
현재, 살아있는 죽은 염색 캡슐 내에서 세포의 생존을 결정 하기 위해 확인 도구로 사용 됩니다. 캡슐 당 및 현재 조건 하에 세포의 수 (즉, 일반적으로 캡슐 당 12-20 세포) 또한 시각적으로 결정 됩니다. 캡슐화된 셀 일괄 처리의 각 배치의 실행 가능성은 이 방법으로 모니터링됩니다. 세포의 생존 가능성을 추가로 결정하기 위해 캡슐화된 세포는 용해되고 다시 배양됩니다. 이것은 또...

세포 기반 치료법은 의학에서 널리 적용된 혁신적인 생물학적 기술을 나타냅니다. 최근에는 퇴행성 신경질환, 안구질환, 암 치료에 성공적으로 적용되고 있다. 세포 치료는 세포 보충에서 약 납품에 의하여 광범위한 필드를 커버하고, 이 프로토콜은 후자에 집중합니다. 생분해성 알긴산 마이크로캡슐(MC)은 전달 시스템으로서 효과를 보였으며, 생물의학 분야에서 널리 사용되고 있습니다. 알긴산은 간단한 겔화 공정, 생분해성, 우수한 생체 적합성 및 생체내조건 하에서 의 안정성1,2,,3,,4로인해 마이크로 캡슐화에 사용되어 왔다.
전기 분무 방법은, 마이크로 캡슐화 기술로, 알긴산 (염기 중합체) 및 폴리-l-오르니틴 (이차 코팅 폴리머)를 사용하여 펩티드와 단백질을 캡슐화하는 데 성공적으로 활용되었습니다. 두 폴리머 는 자연적으로 발견되고 생체 적합성5,,6,,7에사용됩니다. 그러나, 세포 기반 치료법의 주요 과제는 면역억제약물에 의한 부작용을 피하기 위해 숙주 면역계의 억제이다. 알긴산 마이크로캡슐의 투과성은 숙주 면역반응으로부터그들을 마스킹하는 동안 세포 내로 영양분, 폐기물 및 치료 인자를 확산시키는 세포 캡슐화에 적합한 특성으로 간주된다8,9,,10.
눈에서, 캡슐화된 세포는 망막색소변성증 또는 노화관련 황반변성의 치료를 위해 생물학적 제제(즉, 성장인자11,,12 및 성장 인자 길항제13)의지속적인 전달을 위한 임상 시험에서 사용되어 왔다. 보체 억제제 와 같은 그밖표적은 또한 전임상 조정에서 현재 탐구되고 있습니다.

<table><tbody><tr><td>3 mL 주사기</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1" 무딘 바늘</td><td>SAI 주입 기술</td><td>B30-100</td><td></td></tr><tr><td>알긴산 나트륨 염, 갈조류</td><td>Sigma</td><td>A0682</td><td></td></tr><tr><td>아트로핀 황산염 점안액 (1%)Akorn</td><td></td> <td>NDC 17478-215-15</td><td>동공 확장용</td></tr><tr><td>BD 1 mL 주사기 26 G x 3/8 (0.45 mm x 10 mm)</td><td>Becton, Dickinson and 회사</td><td>DG518105 500029609 REF 309625</td><td>마</td></tr>취 중 눈을 윤활하기 위해 가이드 구멍 <tr><td>염화칼슘, 무수, 과립</td><td>Sigma</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>GenTeal Tears</td><td>Alcon</td><td>NDC 0078-0429-47</td><td></td></tr>을 생성하는 <tr><td>Goniotaire: Hypromellose (2.5%) Ophthalmolic Demulcent Solution (Sterile)</td><td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td><td>NDC 59390-182-13</td><td>마취 중 눈 윤활</td></tr><tr><td>Hamilton 바늘 / 주사기 팁 : 27 G, 소형 허브 RN NDL, custum 길이 (12 mm), 포인트 스타일 3, 6 / PK</td><td>캡슐</td><td>의 유리체 내 전달을위한</td>Hamilton <td>7803-01</td></tr><tr><td>Hamilton 주사기 : 2.5 &micro; L, 모델 62 RN SYR, NDL 별도 판매</td> 캡슐<td>의 유리체내 전달을 위한</td><td>Hamilton</td><td>7632-01</td></tr><tr><td>HEPES 완충액, 1M</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP299100</td><td></td></tr><tr><td>고전압 발생기</td><td>ESD EMC Technology</td><td>ES813-D20</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 생존력/세포독성 키트</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>L-오르니틴 염산염, 99%</td><td>Alfa Aesar</td><td>A12111</td><td></td></tr><tr><td>네오마이신 및 폴리믹신 B 황산염 및 덱사메타손 안과 연고</td><td>SANDOZ</td><td>NDC 61314-631-36</td><td>유리체강내 주사 후 감염 방지용 항생제</td></tr><tr><td>페놀레프린 염산염 점안액(2.5%)</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-201-15</td><td>동공 확장용</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>시그마</td><td>S-5886</td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기 필터, 0.2 &mu; m</td><td>VWR</td><td>28143-312</td><td></td></tr><tr><td>주사기 펌프</td><td>GRASEBY</td><td>MS16A</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 아이에 생물학적 제제의 전달을 위한 캡슐화된 세포 기술

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

눈의 후방 극의 질병에 대한 개발 중인 많은 현재 치료법은 생물학적 제제입니다. 이 약은 빈번하게 관리될 필요가 있습니다, 일반적으로 intravitreal 주사를 통해. 선택의 생물학적을 발현하는 캡슐화된 세포는 국소 단백질 생산 및 방출을 위한 도구가 되고 있다(예를 들어, 장기 약물 전달을 통해). 또한 캡슐화 시스템은 세포 안팎으로 영양분, 폐기물 및 치료 요인을 확산시키는 투과성 물질을 활용합니다. 이것은 숙주 면역 반응에서 세포를 마스킹하는 동안 발생, 숙주 면역 계통의 억제에 대한 필요성을 피하고. 이 프로토콜은 마이크로 캡슐화 기술로 전기 분무 방법과 결합된 마이크로 캡슐화에서 중합체로서 알긴산의 사용을 설명합니다. ARPE-19 세포, 자발적으로 발생 하는 인간 RPE 세포 주, 그것의 수명 기능 으로 인해 장기 세포 치료 실험에 사용 되었습니다., 그리고 캡슐 화 및 마우스 눈에 캡슐전달에 대 한 여기 사용 됩니다. 원고는 세포 미세 캡슐화, 품질 관리 및 안구 전달에 대한 단계를 요약합니다.

ARPE-19 세포는 캡슐을 눈에 이식할 때 캡슐화 및 장기 생존을 가능하게 하는 것으로 나타난 자발적인 불멸의 인간 RPE 세포주입니다. 알긴산 캡슐화 도구는 그림 1에나와 있습니다. 본 연구에서, 알긴산캡슐에 캡슐화시, 알긴산 캡슐의 세포가 밝은 필드 이미징에 의해 확인되었다는 것이 입증되었다(도2A). 살아있는 죽은 세포는 캡슐 내부의 세포에서 수행되었고, 캡슐화 후 90%의 생존가능성을 입증하였다(도2B). 캡슐 내부의 세포의 장기적인 생존을 보장하기 위해, 캡슐을 구연산나트륨에 용해시키고 세포를 다시 도금하였다(그림2C). 독립적인 실험에서 안정된 형질감염 ARPE-19 세포가 원하는 생물학적 제제를 발현및 분비한 것을 확인한후,세포를 안전하게 캡슐화하기 위한 파라미...

여기에 제시된 것은 설치류 눈에 생물학적 제제의 장기 전달을 위한 불멸화된 세포의 미세 캡슐화에서 중합체로서 알긴산을 사용하기 위한 프로토콜이다.

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

이 기술은 약물, 단백질 또는 세포와 같은 모든 콘텐츠를 조직이나 동물의 특정 위치에 전달하는 신뢰할 수있는 방법입니다. 당신은 배달을 추적하고 당신이 원하는 실험에 맞게 내용의 릴리스를 조정할 수 있습니다. 상처 치유에서 안구 및 심장 질환에 이르기까지 수많은 질병을 치료하는 데 사용할 수 있습니다.이 방법의 주요 장점은 면역 반응을 일으키지 않고 표적 부위에 알기네이트 마이크로 캡슐을 사용하여 치료 세포를 전달하고 장기간 신선한 분비 치료법의 지속적인 전달을 유지하는 능력입니다. 원고 의 지시에 따라 망막 상피 세포를 배양하여 시작합니다. 표준 조직 배양 절차를 사용하여 70~80%의 합류에 도달하면 세포를 통과시합니다.세포를 캡슐화하기 위해, 알기네이트 나트륨을 1제수와 혼합하여 2%의 최종 농도를 부피에 넣고 0.2 마이크로미터 멸균 주사기 필터로 여과를 통해 혼합물을 정화한다. 트립시네이드, 원심분리기, 10밀리머 HEPES 완충식식염으로 세포를 세척한다. 혈류계를 사용하여 세포를 계산하고 최종 세포 농도를 alginate 용액의 1 밀리리터당 백만으로 조정합니다.알기네이트와 세포 혼합물의 300 마이크로리터 알리쿼트를 3밀리리터 주사기에 적재하고 주사기 펌프에 부착합니다. 원고 의 방향에 따라 젤링 목욕을 준비하고 7 밀리미터 바늘의 주사기 팁 아래에 멸균 된 50 밀리리터 비커에 넣어 목욕 스프레이 거리. 전압을 8킬로볼트로 조정하고 유속량을 시간당 30밀리미터로 조정하여 약 150마이크로미터 크기의 마이크로캡슐을 생성합니다.검은 색 접지 클립을 겔링 욕조에 반쯤 잠긴 구리 와이어에 연결하고 빨간색 양극 와이어클립을 바늘에 연결합니다. 알기네이트및 세포 혼합물의 각 밀리리터 배치에서 캡슐화된 세포를 준비하는 데 약 30분이 걸립니다. 형성되면, 세척 용액으로 마이크로 캡슐을 두 번 세척하고 10 % FBS가 37섭씨 37도 및 5 %의 CO2에서 가습 인큐베이터에서 DMEM 미디어를 보충하여 배양하십시오.24 시간 인큐베이션 후, 세척 용액에 두 번 세척하여 염색을위한 마이크로 캡슐의 500 마이크로 리터 샘플을 준비합니다. 라이브/데드 분석 키트를 사용하여 생존가능성을 위해 염색하십시오. 마이크로 캡슐의 크기가 적절하게 크기가 되도록 혈청이 없는 매체에서 희석하십시오.2.5 마이크로리터 해밀턴 주사기로 조심스럽게 흡인합니다. 마이크로리터 1개를 현미경 슬라이드에 천천히 배출하고 수직 브라이트필드 현미경을 사용하여 마이크로캡슐의 무결성을 결정합니다. 적절하게 마취된 마우스에서 안구 윤활유를 바르면 안구 용액을 유지하고 26 게이지 3/8 인치 베브링 주사기 바늘을 사용하여 림푸스 바로 아래에 초기 눈 구멍을 확립하십시오.렌즈 천포를 피하기 위해 45도 각도로 비강 방향에서 눈에 접근해야 합니다. 다음으로, 전체 바늘 팁이 안내구멍 생성을 위해 눈에 삽입되어 있는지 확인하지만 너무 멀리 여행하지 말고 측두망망에 구멍을 뚫지 않도록주의하십시오. 이 작업이 완료되면 천천히 바늘을 철회하십시오.마이크로 조작기 내에서 캡슐 용액으로 채워진 27 게이지 무딘 팁 2.5 마이크로 리터 해밀턴 주사기를 배치하고 바늘을 초기 가이드 구멍으로 정렬하십시오. 동물의 머리를 안정된 자세로 잡고 의도적으로 바늘을 눈으로 움직입니다. 유리체 내에서 올바른 바늘 위치를 보장하기 위해, 바늘 끝이 렌즈 뒤에 시각화 될 때까지 주사기를 삽입.그런 다음 25~30초 동안 캡슐 용액을 천천히 주입합니다. 그리고 완료되면, 점차 눈에 부상을 최소화하기 위해 무딘 팁 주사기를 철회. 필요한 경우 원고 방향에 따라 전압및 유량을 조정하여 캡슐 크기를 조정합니다.알지네이트에 있는 세포의 캡슐화는 브라이트필드 화상 진찰및 LIVE/DEAD 분석으로 확인되었습니다 세포의 90%가 가능한 포스트 캡슐화이었다는 것을 보여주었습니다. 세포의 장기 생존가능성은 구연산 나트륨에 있는 캡슐을 용해하고 투약함으로써 보장되었다. 인트라비탈 주사는 유리체에서 캡슐의 시각화를 허용하는 육안으로 수행되었다.이 절차를 시도할 때 PBS는 형성된 알기네이트 마이크로 캡슐을 용해하기 때문에 PBS를 세척 단계에 사용하지 마십시오. 개발 후, 우리의 실험실은 심부전과 고혈압의 형태를 취급하기 위하여 전달 시스템으로 이용됩니다. 이 기술은 다른 심장 혈관 및 신경 질환의 미래 치료를위한 유망한 도구로 간주됩니다.

encapsulated-cell-technology-for-delivery-biologics-to-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

방법은 생쥐에서 인간의 retinoblastoma 종양을 전파하기 위해 설명되어 있습니다. 종양 세포에 직접 면역 결함 생쥐의 눈을에 주입하고 있습니다. 이차 종양이 성공적으로 직접적으로 인간의 종양과 교양 tumorspheres에서 수확을 모두 세포를 사용하여 설립되었습니다.

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

마우스 망막 신경절 세포 Transfection로 생체내에 Electroporation

이득 또는 기능 연구의 손실 중 하나를 수행하기위한 목적으로 murine 망막 세포에 플라스미드 DNA의 결합을위한...

개발 마우스 망막의 생체내 Electroporation에

이 수술 기법은 마우스 눈의 subretinal 공간으로 유전자 치료 벡터와 줄기 세포의 주입을 보여줍니다.

마우스 눈에 유전자 치료 벡터와 줄기 세포의 Subretinal 주입

이 비디오는 세균성 안구내염(세균이 눈의 유리체강으로 침입하여 발생하는 안구 내 감염)을 모방한 마우스 모델을 생성하는 방법을 설명합니다. 이 마우스 모델은 질병 메커니즘을 연구하고 이에 대한 치료법을 평가하는 데 도움이 됩니다.

세균성 안구내염 마우스 모델: 세균성 안구내염을 마우스의 눈에 유리체강내 주입하여 세균성 안구내염을 생성하는 방법

이 비디오는 쥐의 뇌로 항체를 전달하는 CED(convection-enhanced delivery) 기술을 보여줍니다. 마취된 마우스의 두개골이 노출되고 항체 전달을 위해 대상 부위에 버 구멍이 생성됩니다. 항체가 포함된 계단식 카테터를 표적 부위에 삽입하고 주입 펌프를 통해 압력 구배를 생성하여 제어된 속도로 항체를 전달합니다.

Convection-Enhanced Delivery of Antibodies into a Mouse Brain(쥐 뇌로의 항체 전달)

망막하 주사는 쥐의 눈에 있는 망막 색소 상피에 효과적인 유전자 전달을 위한 수술 기술입니다.  여기에서는 실험용 마우스에서 망막 색소 상피에 바이러스 벡터를 망막하 주입하는 쉽고 복제 가능한 방법을 설명합니다.

마우스 망막 색소 상피의 유전자 치료에 대한 바이러스 벡터의 윤부 접근 - 망막 주입

여기를 사용 하 여 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (HR-SD-10 월) subretinal 공간으로 유전자 치료 대리인의 납품을 지원, 그 영역 범위를 평가 하 고 포토 리셉터 활력을 특성화 새로운 접근 방식을 설명 합니다.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

우리는 여기에서 세균성 내과염의 마우스 모형에 있는 intravitreal 주입 및 후속 세균량의 방법을 기술합니다. 이 프로토콜은 숙주 면역 반응 및 세균 및 숙주 유전자 발현을 측정하기 위해 확장될 수 있다.

세균 성 내분염의 마우스 모형에 있는 감염 매개변수의 인트라비탈 주입 및 양

우리는 경내 주입 후 눈에 리포좀의 스파티오 측두분포를 비침습적으로 연구하기 위해 광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사(CLM)의 사용을 위한 프로토콜을 제시한다.

광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사를 사용하여 안구 약물 전달 시스템의 생체 내 측두 체 이미징

동결 보존 후 hESC 유래 광수용체 전구 세포의 제조 및 rd10 마우스에서 이러한 세포의 망막하 전달에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

rd10 마우스에서 인간 배아 줄기 세포 유래 광수용체 전구체의 망막하 전달

배우세요 알지네이트 미소캡슐을 이용한 마우스 눈 생물학적 제제 전달 기술. 이 방법은 면역 반응을 최소화하면서 지속적인 치료제 방출을 가능하게 하여 안과 질환 연구에 활용됩니다.

마우스 아이에 생물학적 제제의 전달을 위한 캡슐화된 세포 기술

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