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초파리 멜라노가스터에서 학습 유발 시냅스 가소성의 생체 내 광학 칼슘 이미징
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JoVE Journal Neuroscience
In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

초파리 멜라노가스터에서 학습 유발 시냅스 가소성의 생체 내 광학 칼슘 이미징

Full Text
9,753 Views
06:35 min
October 8, 2019

DOI: 10.3791/60288-v

Clare E. Hancock1, Florian Bilz1, André Fiala1

1Department of Molecular Neurobiology of Behavior,University of Göttingen

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for visualizing pre- and postsynaptic calcium in Drosophila to investigate learning and memory. Employing in vivo calcium imaging with synaptically localized sensors, the research combines this with classical olfactory conditioning to explore synaptic plasticity associated with associative learning.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Behavioral Biology
  • Calcium Imaging

Background

  • Drosophila melanogaster serves as a model for studying learning and memory.
  • Understanding synaptic calcium activity can illuminate the physiological processes behind memory formation.
  • Associative learning is fundamental to how memories are encoded and retrieved.
  • The mushroom body in Drosophila is crucial for learning and memory functionalities.

Purpose of Study

  • To visualize calcium activity at synapses during learning processes.
  • To correlate synaptic activity with memory trace formation.
  • To utilize a classical conditioning paradigm to examine synaptic changes.

Methods Used

  • Calcium imaging is performed using genetically encoded calcium indicators in a custom imaging chamber.
  • Drosophila are prepared for imaging following surgical procedures to expose the brain region of interest.
  • The experiment involves a pre-conditioning baseline measurement followed by odor stimulus delivery and post-conditioning measurements.
  • The imaging system includes a multi-photon microscope tuned for specific excitation wavelengths and scanning protocols.
  • Data collection involves measuring calcium transients linked with odor stimuli before and after associative training.

Main Results

  • The study provides insights into synaptic changes associated with olfactory learning.
  • Differences in calcium responses were observed between various genetically altered flies, demonstrating the impact of specific indicators on synaptic activity.
  • Visualizations reveal how olfactory memory is stored and modulated at the cellular level.
  • Results underscore the utility of this method in understanding complex brain structures.

Conclusions

  • This protocol enables real-time visualization of calcium dynamics, contributing to our comprehension of neuronal mechanisms in memory formation.
  • Insights gained through this method can illuminate synaptic plasticity principles and enhance our understanding of learning processes.
  • The results have broad implications for neuroscience, particularly in the context of associative memory storage.

Frequently Asked Questions

What advantages does this imaging method offer?
This method provides real-time observation of calcium activity, allowing for direct correlational studies between synaptic responses and learning.
How are Drosophila prepared for imaging?
Drosophila undergo surgical procedures to expose brain areas and are fixed in an imaging chamber for optimal visualization.
What outcomes can be expected from this protocol?
Outcomes include detailed imaging of calcium transients and insights into synaptic plasticity during learning events.
Can this method be adapted for other models?
While designed for Drosophila, the principles of this imaging technique may be applicable to other model organisms with adaptations.
What are the limitations of this study?
Limitations may include the specificity of the calcium indicators used and potential variations in individual animal responses.

여기에서 우리는 Drosophila 학습 및 기억의 맥락에서 pre-및/또는 후성 칼슘이 구상될 수 있는 프로토콜을 제시합니다. 합성 국소화 된 칼슘 센서를 사용하여 생체 내 칼슘 이미징은 이러한 유형의 연관 학습의 기초가되는 시냅스 가소성이 결정될 수 있도록 고전적인 후각 조절 패러다임과 결합됩니다.

이 기술은 drosophila 멜라노가스터에서 학습 및 메모리 형성의 기본 학습 및 메모리 형성을 위한 생리적 매개 변수로서 시냅스 칼슘 활성의 실시간으로 관찰을 용이하게 한다. 연관 훈련 전후의 냄새에 대한 신경 반응을 비교함으로써 시냅스 활동과 개별 과일 파리의 메모리 추적 형성 사이의 직접적인 상관 관계를 그릴 수 있습니다. 관심의 특정 뉴런이 원하는 GAL4 와 UAS 구조를 운반하는 여성 처녀와 남성 파리를 교차 하는 유전으로 인코딩 된 칼슘 표시기를 표현하는 형질 전환 과일을 생산하기 위해 3 ~ 6 일 후에 여성 자손나이.

이미징을 위한 비행을 준비하려면 미세 한 집게를 사용하여 얼음 마취 비행을 사용자 정의 준비 된 이미징 챔버에 배치하십시오. 해부 현미경을 사용하여 흉부와 다리를 챔버 의 하단에있는 전선과 접촉하고 머리가 평평하게 누워 있습니다. 투명한 접착 테이프로 비행을 고정하고 외과 용 메스 블레이드를 사용하여 머리 주위의 테이프의 창을 잘라 안테나가 덮여 있고 흉부의 앞쪽 부분만 노출됩니다.

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신경과학 문제 152 초파리 멜라노가스터 버섯체 시냅스 가소성 학습 및 기억 후각 연관 학습 고전 조절 광학 칼슘 이미징 2광자 현미경 메모리 엔그램

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