Name: 노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 28 s
Description: 학습하세요 노화 뇌 조직 수집 및 처리 방법을 통해 신경퇴행성 질환의 정확한 진단과 병태생리 메커니즘을 규명하는 기법을. Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜은 고품질 조직 샘플 확보를 위한 체계적인 절차를 제공합니다.

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우리는 이 작품을 닥터 사 미켈라 만지리에게 헌납하고자 합니다. 그녀는 조기에 죽기 전에, 그녀는 임신하고 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로젝트를 시작했다.
우리는 그들의 신체의 가장 고귀한 기관을 기증 하는 연구에 관대 하 게 기여 하는 우리의 두뇌 기증자에 게 감사; 그들없이이 연구는 가능하지 않을 것입니다.
우리는 ABB 프로젝트에서 그녀의 소중한 작품에 대한 발레리아 마르자갈리에 감사드립니다.
저자들은 요하네스 아템스 교수, 파올로 포시아니 박사, 조르지오 지아코네 박사의 소중한 지도와 현명한 조언에 감사드립니다.
프로젝트 전반에 걸쳐 귀중한 도움을 주신 닥터 사 앨리스 시린시오네와 줄리아 보톤 양에게 감사드립니다. 테레 카사니 여사의 지원과 "페데라지오네 알츠하이머 이탈리아"의 협력에 대한 많은 감사. 저자는 마테오 모레티 박사와 안토니오 마르코 마리아 오큘라티 교수, 공중 보건학과, 실험 및 법의학 의학, 파비아 대학에 감사드립니다.

저자는 공개 할 것이 없습니다.

WHO에 따르면 현재 약 5천만 명이 치매를 앓고 있으며, 이는 2050년까지 3배로 증가할 것으로 예상됩니다. 알츠하이머 병은 치매의 주요 원인이며 뇌혈관 질환 및 기타 노화 관련 신경 퇴행성 질환이 뒤따릅니다. 2017년 WHO는 치매에 대한 인식을 제고하고 글로벌 실천 계획을 장려하기 위해 글로벌 치매 천문대를개발했다. 각 개인은 자신의 뇌 노화 궤적을 가지고, 따라서 치료에 대한 검색은 신경 퇴행성 질환의 발병의 복잡성으로 인해 도전 적 수 있습니다. 아마도, 각 사람은 개인화 된 접근 방식을 필요로 하는 뇌 조직에 기록 된 그녀 또는 자신의 병인을 소유. 따라서, 뇌 조직의 연구는 신경 변성의 메커니즘을 이해하는 열쇠가 될 것입니다.
신경 과학의 역사를 돌이켜 보면, 우리는 인간의 뇌를 직접 검사하지 않고는 가장 인상적이고 획기적인 발견이 결코 일어나지 않았을 것이라는 것을 깨닫습니다. 시간이 지남에 걸쳐, 연구 할 뇌 조직의 소스는 원유 해부에서 변경되었습니다, 임의의 '기회 만남', 어떤 경우에는 불법 거래, 조직 뇌 수집 및 전략적 현대 뇌 은행에. 많은 윤리적 측면의 고려는 과거의 뇌 컬렉션에서 현대 뇌 은행을 차별화 주요 요인 중 하나입니다. 최초의 실제 현대 브레인 뱅크 (BBs)는 20세기 후반에 제정되었다. 니콜라스 코셀리스와 월리스 투르텔로트는 현대 브레인 뱅킹의 선구자로 간주될 수 있습니다. 영국에서 Corsellis는 다양한 정신 및 신경 장애2에영향을 받은 1000개 이상의 잘 문서화된 뇌를 보유한 컬렉션을 조립했습니다. 또한, Corsellis는 생화학 적 테스트를 위해 얼음에 신선한 뇌 조직을 보존 할 필요성을 밝히는 데 도움이3. 한편, 미국에서 월리스 Tourtelotte는 잠재적 인 뇌 기증자의 권유를 용이하게하고 수집 된 뇌가 완전한 의료 및 신경 역사를 동반할 수 있도록 선행 뇌 기증 프로그램을도입4,,5. 뇌 수집과 현대 BB의 역사적인 개요를 보려면 Carlos 외를 참조하십시오. 6.
그렇다면 왜 우리는 여전히 인간의 뇌가 필요한가? 뇌 질환은 신경 병리학 검사 후 명확한 진단을 받을 수 있습니다. 신경 병리학은 임상 진단에 도전하고, 임상 현상의 정확한 해석및 새로운 syndromic 변이체의 조직학 기지의 발견에 열쇠입니다. 실제로, 진단은 병리학적인 그림에 근거하여 재정의될 수 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 부검 속도 혁신적인 신경 이미징 기술의 최근 개발으로 인해 지난 수십 년 동안 감소 했다. 뇌 이미징을 통해 뇌의 형태학적, 기능적 및 대사 적 변화뿐만 아니라 단백질 오접기 정도는 생체 내에서평가될 수 있습니다. 그러나, 생체 내 신경 이미징 및 기타 바이오마커 연구에서는 미묘한 세포 및 분자 변화를 감지할 수 없기 때문에 병리학적 그림의 "추정"만 줄 수 있습니다. 분자 이미징의 발전과 새로운 바이오마커, 표적 분자 및7 추적자 7(예: 아밀로이드, TAU, microglial 추적자)은 임상 평가 및 바이오마커 테스트에서 얻은 데이터의 해석에 인간의 뇌를 더욱 필수 불가결하게 만듭니다. 또한, 오믹스 기술 (유전체학, 에피소드학, 전사학, 메타볼로믹스, 프로테오믹스, 리피도믹스 등 신선하고 냉동된 뇌 조직에서 수행되며, 질병 메커니즘을 이해하고 위험 유전자, 새로운 진단 및 예후 마커, 잠재적 약물 표적22,,,,21,,20,,,,,8,,,9,10,,11,12,13,14,15,16, 16, 18, 18,18, 29, 18, 201, 201, 291, 18, 18, 18,201,201, 201, 201,18,201, 201, 201, 20.,23
이러한 목적을 위해, 현대 BBs 는 과학 공동체3,,24에사용할 수 있도록 잘 특징, 고품질의 뇌 조직을 보관합니다. BB에 의해 공급되는 두뇌는 완전한 임상 역사를 동반해야 합니다. BB의 활동은 다음과 같습니다 : (1) 뇌 기증 프로그램에 병과 건강한 개인의 인식 및 모집; 이상적인 조건은 완전한 임상, 생활양식 및 사회 역사, 및 biomarker 단면도를 얻기 위하여 일생 내내 기증자의 다분야 후속을 달성하는 것입니다; 실제로, 인지 예비 및 두뇌 구조는 생활 양식과 사회 교육 요인에 따라 달라 집니다25,,26,그래서 이러한 정보는 손에 총 데이터를 풍부하. (2) 기증자의 죽음 에 따라 뇌 (뇌, 소뇌 및 뇌 줄기로 구성) 및 관련 조직 (예를 들어, 척수, 두개골 신경 및 신경망 등)의 취득, 모든 표준화 된 법적 및 윤리적 규정을 관찰하면서. (3) 표준화된 수술 프로토콜에 정의된 바와 같이 뇌의 적절한 처리(해부, 고정, 동결)는 고품질 조직을 확보하고 다분야 연구에서 향후 사용할 수 있도록 한다. (4) 최종 명확한 진단을 제공하는 상세한 신경 병리학 특성. (5)연구커뮤니티(27,,28)에조직물질의 저장 및 유통.
모든 BB는 냉동 및 포르말린 고정 파라핀 임베디드 조직을 모두 저장합니다. 각 BB에는 자체 프로토콜이 있습니다. 생물 의학 연구소 (뉴저지)29및 뇌혈관병리학의Deramecourt의 연구 와 같은 특정 연구를 제외하고, 세계에서 가장 큰 BB는 단순히 뇌관, 소뇌 및 중위 (처상 평면)를 따라 뇌간을 잘라. 절반은 생화학 연구를 위해 신선하게 해부되고 냉동되고, 다른 절반은 조직 병리학 적 평가를 위해 포르말린에 고정되어 있습니다. 따라서 생화학 및 조직 병리학 분석은 각 반구에서 별도로 수행됩니다. 어느 쪽이 고정또는 동결(측면)에 대한 결정은 단수 은행31,,32,,33,,34,,35에따라 달라집니다. 많은 신경 질환이 비대칭적이기 때문에 BB는 신선한 뇌를 자르기위한 독특한 프로토콜을 제공합니다 : 뇌간과 각 반구의 인접 한 섹션은 교대로 고정되고 얼어 붙습니다. 한 반구의 고정 된 슬라이스는 다른 반구의 고정 된 조각에 해당합니다. 이 방법을 통해 뇌 조직의 사용이 최적화되고, 모든 냉동 물질의 완전한 조직학적 특성화는 두 반구의 모든 영역에서 조직학적 및 생화학 적 정보를 얻고 비교할 수 있는 가능성으로 달성될 수 있다.
우리의 두뇌 은행 프로젝트의 프레임은 아비아테그라소의 마을입니다. 아비아테그라소는 이탈리아 북부 밀라노시에서 남서쪽으로 약 22km 떨어진 작은 마을입니다. 인구는 약 32,600명입니다. 골기-첸치(GC) 재단의본고장입니다. GC재단은 대형 재활 노인병원(ASP 골기-레다엘리)의 일원이며, 노인의 노화와 관리에 관한 연구에 중점을 둔 연구소입니다. 특히, 그것은 정신 노화, 그것에 영향을 미치는 사회적, 행동 요인, 그리고 생물학 및 병리학 기본 연령 의존 신경 인지 장애 (NCDs)를 공부에 초점을 맞추고 있습니다. 2009년 GC재단은 1,321명의 참가자(1644명의 적격 과목 중 80.3%)와 함께 새로운 종로 연구를 시작했습니다. 1935년에서 1939년 사이에 태어난 백인 민족은 같은 작은 지역에 살고 있습니다. 연구 결과는 InveCe.Ab에게 불렸습니다(Invecchiamento Cerebrale Abbiategrasso;영어로: 두뇌 노화 Abbiategrasso, ClinicalTrials.gov, NCT01345110) 현재 진행 중입니다. InveCe.Ab는 치매의 발생률, 유병률 및 자연사를 평가하기 위해 최대 균질성 및 최소한의 가변성을 가진 코호트를 획득할 계획이며, 행동, 심리사회적, 임상 및 생물학적변수(36)를포함한 가능한 위험 또는 보호 요인과 함께. 코호트의 특성은 도 1 및 표 1에표시됩니다. 역학 데이터는 유럽 인구37,,38 및 InveCe.Ab 참가자의 치매 추세와 일치하며, 정상적인 노화에서 신경 인지 장애까지의 궤적을 연구하는 좋은 모델을 나타내는 균질한 유전 적 및 환경적 특성을 가지고 있습니다. 실제로, 동질적인 인구는 적당한 통계적인 힘에 도달하기 위하여 더 적은 과목을 요구합니다. InveCe.Ab 방법론은 이미 다른 곳에서 보고되었습니다36 하지만 혈액 샘플링 (신진 대사 패널, 포함 하 여 평가의 동일한 세트를 사용 하 여 정기적인 검사를 통해 다차원 접근 (매 2-3 년) 밑줄하는 것이 중요 하다 호모시스테인과 비타민, DNA 추출을 프로파일화하여 아폴리포프로틴 E(APOE) 및 인식과 노화와 관련된 기타 유전다형성, 인류측정(체중, 신장 및 허리), 걷기 테스트(이중 작업 테스트), 라이프스타일 평가 인터뷰(지중해 식단 준수, 신체 활동 및 인지 참여 수준) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움, 일반 심리학 평가) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회요인(사회적 참여, 외로움) 및 사회적 이러한 종방향 데이터를 사후 신경 병리학 데이터와 비교하는 것은 연구에 매우 중요합니다. 따라서 우리 팀과 특히 미켈라 만지리 박사는 위에서 언급한 신경 병리학적 접근법을 구상했습니다. 이후 2014 그리고 두 번째 후속 기간 동안, InveCe.Ab 참가자는 그들의 두뇌를 기증 하도록 요청 했다, 따라서 Abbiategrasso 뇌 은행 (ABB)의탄생에 대 한 가져. ABB의 핵심 기부자는 InveCe.Ab 참가자이지만 ABB는 이제 다른 자원 봉사 기부자에게 열려 있습니다. 그(것)들은 ASP 골기-Redaelli에서 환자입니다, ABB 프로젝트에 관하여 배우고 같은 지리적 지역 (Abbiategrasso 및 주변)에 속하는 다른 신경학상 질병 또는 성인 자원봉사자로 고통받는 몇몇 환자에 가정합니다. 모든 기부자는 동일한 평가 프로토콜을 받습니다.
저자는 정상적인 노화의 개별 궤적과 NCD에 가능한 진행을 추적하고, 정확하게 관리, 처리 및 이러한 기증자에서 획득 된 뇌를 특성화하는 방법을 제안한다 세로로 따랐다. 또한, 우리의 목표는 뇌의 복지에 관한 정기적인 신경 학적 평가, 세미나 및 교육 활동에 개인을 만나고 참여시키고 연구 목적으로 뇌 기증에 대한 인식을 높이는 것입니다.

<table><tbody><tr><td>50ml polypropilene conical tube 30x115mm</td><td>BD</td><td>405253</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GFAP</td><td>Dako</td><td>Z0334</td><td>policlonal primary 항체 (anti-rabbit); 희석 = 1:1000</td></tr><tr><td>Anti-NeuN (A60)</td><td>Chemicon</td><td>MAB377</td><td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000</td></tr><tr><td>Anti-phospho TAU (AT8)</td><td>ThermoScientific</td><td>MN1020</td><td>monoclonal primary antibody ( 안티 마우스); 희석 = 1:200</td></tr><tr><td>Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)</td><td>CosmoBio</td><td>TIP-PTD-P02</td><td>policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; 전처리 : 구연산염 완충액 0.01M pH 6 Anti-&alpha로 전자레인지에서 2분-1분-2분 동안 3단계</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>단클론 1차 항체(anti-mouse); 희석 = 1:500; 전처리: 1) 구연산염 완충기 0.01M PH 6를 가진 2 분 1 분 2 분 동안 마이크로파에 있는 3단계; 2) H2O에서 70 % 포름산 10 분</td></tr><tr><td>동안 안티 -&beta; 아밀로이드 (4G8)</td><td>BioLegend</td><td></td><td>800703 단클론 1차 항체 (항-마우스); 희석 = 1:1000; 전처리 : 10분 동안 H2O에 70% 포름산</td></tr><tr><td>도마</td><td>BD</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 고포도당</td><td>Carlo Erba</td><td></td><td>FA30WL0101500 매체</td></tr><tr><td>5d 블레이드가 있는 전기 톱</td><td>CEA</td><td>06.06.14/06.00.16</td><td></td></tr><tr><td>전극 pH 측정 표면 12mm</td><td>CEA</td><td>70064.250 HHH</td><td></td></tr><tr><td>전극 pH 바늘</td><td>Fisher Scientific</td><td>11796338</td><td></td></tr><tr><td>EnVision+System-HRP</td><td>Dako</td><td>K4001</td><td>2차 항체(항-마우스); 희석 1:2</td></tr><tr><td>EnVision+System-HRP</td><td>Dako</td><td>K4003</td><td>2차 항체(항토끼); 희석 1:2</td></tr><tr><td>에틸에테르</td><td>SMI</td><td>8401530</td><td></td></tr><tr><td>깃털 안전 트리밍 나이프 블레이드 14cm</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>11749798</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Carlo Erba</td><td>FA30WS1810500</td><td>중간 보충제; 희석 = 20%</td></tr><tr><td>집게 15cm 외과 또는 해부학</td><td>Uvex</td><td>500XG</td><td></td></tr><tr><td>장갑</td><td>CEA</td><td>01.28.14</td><td></td></tr><tr><td>접착제</td><td>Arcobaleno</td><td>2624000800002</td><td></td></tr><tr><td>헤드 서포터</td><td>Lacor</td><td>60456</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민 (100X)</td><td>Carlo Erba</td><td>FA30WX0550100</td><td>매체 보충제; 희석 = 1%</td></tr><tr><td>측정 테이프</td><td>CEABIS</td><td>CEATA34</td><td></td></tr><tr><td>Non adsorbable monofilament black polyamide</td><td>UHU Bostik</td><td>8000053131470</td><td></td></tr><tr><td>Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td><td>Life Technologies</td><td>11140050</td><td>매체 보충제; 희석 = 1%</td></tr><tr><td>펜/스트렙 용액 (100X)</td><td>Carlo Erba</td><td>FA30WL0022100</td><td>중간 보충제; 희석 = 1%</td></tr><tr><td>척추 바늘 quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm</td><td>CEA</td><td>03.06.16</td><td></td></tr><tr><td>n&deg가 있는 멸균 메스; 21 블레이드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술용 세면대</td><td>Olcelli Farmaceutica</td><td>A930857255</td><td></td></tr><tr><td>수술용 망치 및 수술용 시젤</td><td>CEA</td><td>79.68.88</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>CEA</td><td>27.08.45/79.68.64</td><td></td></tr><tr><td></td><td>깃털</td><td>M130RC</td><td></td></tr></tbody></table>

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

지속적으로 고령화 인구에서, 신경 퇴행성 질환의 보급은 상승 할 것으로 예상된다. 질병 메커니즘을 이해하는 것은 예방 및 치료 조치를 찾는 열쇠입니다. 이를 달성하는 가장 효과적인 방법은 병과 건강한 뇌 조직의 직접 검사를 통해서입니다. 저자는 선행 두뇌 기증 프로그램에 등록된 개별에 의해 기증된 좋은 질 두뇌 조직을 얻고, 가공하고, 특성화하고 저장하는 프로토콜을 제시합니다. 기부 프로그램에는 사람들에게 대면 공감접근법, 보완적인 임상, 생물학적, 사회적, 라이프스타일 정보, 시간이 지남에 따라 연쇄 다차원 평가가 포함되어 정상적인 노화와 인지 기능 저하의 개별 궤적을 추적합니다. 많은 신경 질환은 비대칭이기 때문에, 우리의 두뇌 은행은 신선한 표본을 슬라이스하기위한 독특한 프로토콜을 제공합니다. 두 반구의 뇌 섹션은 교대로 얼어 붙거나 (-80 °C에서) 또는 포르말린에 고정; 한 반구의 고정 된 슬라이스는 다른 반구의 고정 된 조각에 해당합니다. 이 접근법으로, 모든 냉동 물질의 완전한 조직학적 특성을 얻을 수 있고, 오믹스 연구는 두 반구에서 조직학적으로 잘 정의된 조직에 수행될 수 있으므로 신경 퇴행성 질환 메커니즘에 대한 보다 완전한 평가를 제공할 수 있다. 이러한 질병의 정확하고 명확한 진단은 종종 병인을 해석하는 데 필요한 중요한 병인 단서를 추가하는 신경 병리학 평가와 임상 증후군을 결합하여 달성 될 수 있습니다. 이 방법은 제한된 지리적 영역만 을 커버하기 때문에 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 들며 제한될 수 있습니다. 그 한계에 관계없이, 그것이 제공하는 특성의 높은 정도는 보람이 될 수 있습니다. 우리의 궁극적 인 목표는 최초의 이탈리아 뇌 은행을 설립하는 것입니다, 신경 병리학적으로 검증 된 역학 연구의 중요성을 강조하면서.

이 프로토콜은 뇌 기증 프로그램과 뇌의 적절한 특성을 통해 개별 뇌 노화 궤적을 추적하는 방법을 설명합니다. 두뇌 기증자는 연쇄 다차원 평가를 포함하여 장기 종방향 연구 결과에 관여합니다. 이 프로토콜에는 뇌 처리에 대한 자세한 설명과 정확한 진단 방법론이 포함되어 있습니다.

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

신경인지 장애 보급이 지속적으로 증가함에 따라, 우리의 목표는 정확한 진단을 달성하고 신경 퇴행성 메커니즘에 빛을 비추기 위해 양질의 뇌 조직 샘플을 획득, 특성화 및 저장하는 것입니다. 뇌 비대칭을 고려할 때, 당사의 샘플링 방법론은 반구 모두에서 조직학적으로 잘 정의된 조직에 대한 모든 메타 연구를 수행할 수 있게 하며 많은 데이터는 딥 러닝을 통해 수집되고 상관관계가 있을 수 있습니다. 여러 병리학에 의한 뇌 손상에 대한 첨가제 효과는 자주 관찰됩니다.명확한 진단은 질병 병인을 발견하기 위하여 신경 병리학 사실 인정과 임상 증후군을 결합하고, 가능한 치료가 필요합니다. 새로운 절단 절차와 매크로 섹션 관리는 까다롭지만 좋은 결과를 달성하는 데도 필수적입니다. 훈련되고 단단한 팀은 이 어려움을 극복하는 데 매우 중요합니다.우리의 프로토콜에는 포유류 손재주가 필요한 일련의 단계가 포함되어 있으므로 시각적 데모는 이러한 기술을 습득하고자하는 연구자를위한 설명 텍스트보다 더 유용 할 수 있습니다. 탄태법을 확인한 후, 날카로운 메스를 사용하여 한쪽면의 마스토이드 공정 끝에서 다른 쪽으로 관상 판에 모발 피부와 피하 조직을 통해 두피 절개를 하고 정점을 통과한다. 두개골에서 두피의 두 주름을 조심스럽게 분리하고 노란색 슈퍼 궤도 지방이 보일 때까지 절개를 계속합니다.두피를 앞쪽으로 반사하고 조직의 다른 부분을 후방으로 당깁니다. 메스와 집게를 사용하여 두개골의 각 측면에 있는 측두근의 작은 샘플을 수확하여 한 표본을 4% 포름알데히드에 넣고 다른 샘플을 섭씨 4도에 넣습니다. 전동 톱을 사용하여 정면측의 V 컷에서 두개골을 자르고 두개골캡을 제거합니다.수막을 절단 한 후, 고정을 위해 두라의 한 조각을 수확하고 다른 하나는 동결. 코퍼스 캘러섬을 통해 10 밀리리터 주사기에 부착된 20 게이지 3.5 인치 바늘을 삽입하여 세 번째 심실에 도달하고 플런저를 철회하여 뇌척수액의 약 10 밀리리터를 얻습니다. 유체의 외관 색상과 탁도를 평가하고 pH를 측정합니다.뇌를 들어 올리고 두 시신경 인fundibulum, 내부 경동맥 및 세 번째, 네 번째, 다섯 번째 및 여섯 번째 두개골 신경을 모두 잘라 두 전두엽을 부드럽게 당깁니다. 분단을 잘라 후방 포사에 도달하고 척추 동맥과 낮은 두개골 신경을 잘라. 그런 다음 메둘라의 가장 많은 소들 부분을 잘라 조심스럽게 전체 뇌를 제거하기 위해 foramen 매그넘을 통해 가능한 한 깊은 메스를 삽입합니다.메스를 사용하여 메켈의 동굴 위에 뼈에 나타나고 고정 및 동결을 위해 양쪽에서 개서리안 신경절을 수집합니다. 외과 말렛과 끌을 사용하여 뼈 셀라 포란카를 골절하고 4 % 포름알데히드에 고정하기 위해 뇌하수체를 제거하십시오. 두개골과 전체 뇌를 거시적인 변화및 혈관 변화에서 검사합니다.측정 테이프를 사용하여 뇌의 횡방향 및 전방 자세 직경을 측정하고 뇌의 무게를 측정합니다. 해부학 적 변이체, 병변 또는 혈관 협착증의 존재에 대한 거시적 평가를 위해 윌리스의 원을 신중하게 검색합니다. 개별적으로 조직을 계량하기 전에 뇌원, 소뇌 및 뇌간을 분리하고 검사합니다.1-2, 2~ 4센티미터의 렙토멘딩 조각을 대공에서 제거하고 완전한 고혈당 DMEM 배양 배지에서 샘플을 섭씨 4도에서 보존한다. 4%포름알데히드에 고정을 위해 송과선선수확을 하고 각 쌍의 고정 및 동결을 위해 후각 전구와 시신경을 제거합니다. 뇌경, 소뇌, 뇌간을 얼음 위에 섭씨 4도에 놓습니다.관심있는 모든 조직이 수확되었을 때 뼈를 다시 부착하고 수술 바늘을 사용하고 흡수할 수없는 봉합사를 사용하여 두피를 다시 바느질하십시오. 뇌방제의 경우 해부 칼을 사용하여 뇌간을 축시 절단하고 우수한 콜리큘러스를 통해 로스트랄 중뇌의 수준에서 첫 번째 컷을 만들어 실질적인 니그라를 노출시키는 두 조각을 얻습니다. 뇌간을 10, 8밀리미터 슬라이스로 잘라내어 4차 심실의 우수한 여백 근처의 로스트랄 폰을 통과하는 컷을 포함하여 메딜라 외피를 관찰하고, 4구실의 열등한 저자극을 통해 네 번째 심실의 열등한 저자극을 통해 저세포를 통해 저자극제의 저자극을 통해 저세포를 포함한 저자극을 얻을 수 있다.모든 슬라이스를 뇌간용 BS로 로스트랄 코골 방식으로 라벨을 붙인 다음 아랍어 숫자로 표시됩니다. 마지막 뇌간 섹션 후에, 아랍어 숫자 다음에 척수에 대한 지정 SC를 사용합니다. 처진 평면의 소뇌를 잘라 두 소뇌 반구를 vermis의 수준에서 분리하고 각 반구에서 5 개의 조각을 얻기 위해 처진 단면을 수행합니다.vermis의 모든 조각을 오른쪽 및 왼쪽 소뇌에 대한 CBR 또는 CBL로 지정하고 아랍어 숫자를 사용하여 각 섹션을 식별합니다. 다음으로, 뇌의 두 반구를 궁정 평면의 코퍼스 캘로섬을 통해 분리한 후 전두엽 측두엽, 전방 수축기, 전방 교양, 전방 교양, 경미한, 기저 조직 의 핵을 통해 광학 치아즘과 매밀러 체사이의 관상 동맥 평면을 따라 단독으로 반구를 슬라이스합니다. 약 1센티미터 정도 의 두 번째 절단을 만들며 유방병대 몸을 지나기 위해 기저 신경망, 전방 시상, 편도체를 노출시하십시오.각 반구에 대해 15~21센티미터 의 슬라이스를 얻을 때까지 전방 및 후방 영역을 해부하기 위해 계속 슬라이스합니다. 슬라이스를 평평한 표면에 배치하여 정면에서 후두극까지 전방 후방 방향으로 원래 위치를 따라 가며, 이전 슬라이드가 위쪽으로 향하는 부분이 연속됩니다. 모든 슬라이스가 배치되면 이전에 획득한 섹션과 해마, 정수리 및 후수 섹션을 포함하여 조직 병리학에 대해 고정할 주요 섹션을 선택하고 슬라이스가 고정또는 동결되어야 하는지 여부를 나타내는 라벨을 포함하는 아랍어 숫자로 슬라이스를 라벨로 표시합니다.모든 조직이 단면화되고 레이블이 지정되면 고정 또는 동결 전에 각 일련의 섹션에 대한 이미지를 가져옵니다. 시료를 동결하려면 미리 냉동 된 알루미늄 트레이에 예약 된 대체 조직 섹션을 배치하고 평평하게 유지하기 위해 연동 알루미늄 플레이트로 섹션을 덮습니다. 그런 다음 액체 질소로 슬라이스를 3분 동안 얼리어린 시료를 해당 식별 코드와 슬라이스 번호로 표시된 비닐 봉지 내부에 넣고 80°C의 적절한 극저온 상자에 보관합니다.샘플을 수정하려면 예약 된 대체 조직 섹션을 거즈의 개별 조각에 배치하고 섭씨 4도 의 차가운 방에서 5 일 동안 10 %인산염 완충 포어틴 용액에 슬라이스를 배치합니다. 수확된 27개의 두뇌 중 24개는 명확한 임상 병리학 진단을 가진 완전한 신경 병리학 특성증을 수신했습니다. 36명의 두뇌 기증자의 일련의 예비 정량적 뇌전도 분석은 일반적인 노인 경증 신경인식 무질서보다는 주요 신경 인식 무질서에서 주요 알파 리듬 비율이 현저하게 낮다는 것을 나타냅니다.여기서 비대칭 병리학의 예는 왼쪽에 비해 오른쪽 관상 섹션에서 관찰된 심한 심실 팽창과 함께 명백한 매크로로 명백한 위축으로 표시됩니다. 또 다른 케이스는 오른쪽 반구의 경색을 표시하고, 다른 표본은 오른쪽 유방 병신체의 명확한 위축을 보여줍니다. 매크로 섹션은 반구 내의 모엘린 손실 또는 면역 반응성 분포를 식별하기 위해 염색될 수 있습니다.이 견본은 후성 유전학및 환경 요인 때문에 다른 기간에 있는 알츠하이머 병의 임상 개시가 있던 쌍둥이에서 입니다. 그럼에도 불구 하 고, 현미경 분석 높은 알 츠 하이 머 병 병 병 및 아 밀 로이드 혈관 증을 나타내는 매우 유사한 신경 병 증 그림을 밝혀. 그러나 이 두 환자에서는 알츠하이머 병의 동일한 임상 진단이 신경 병리학적 특징과 정확히 일치하지 않았으며, 이는 다중 병인에서 치매 듀오를 드러냈다.사실, 첫 번째 경우는 자이루스 단일 거짓말과 실질적인 니그라에 루이 시체를 제시했다. 그리고 두 번째 케이스는 편도체및 미성년자 핵에 있는 Lewy neurites와 관련되었던 Lewy 바디를 보여주었습니다. 슬라이스의 사진은 현미경 분석 중에 해부학 적 영역을 정확하게 식별하기 위해 신중하게 입니다.단하나 슬라이스의 고정 및 동결은 또한 조직 미세 구조 Omics 유전자 활성화 및 단백질 분포의 지형을 보존하고 조직 병리학과 이 데이터를 상관연관하는 데 중요합니다. 잘 특징적인 조직에서 세포 배양, 또한 질병 병인에 대한 조사. 기득권 뇌 조직으로 항상 적절한 개인 보호 장비를 착용하는 것은 잠재적으로 전염성이 있는 것으로 간주되며 날카로운 계측기 및 액체 질소와 같은 위험한 도구의 사용이 필요하기 때문입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

브레인 은행 및 생물 학적 물질의 체계적인 샘플링 불편 stereology의 기초를 제공하고 각 표본에서 얻은 잠재적인 데이터를 극대화할 수 있습니다.

브레인 은행 : 귀하의 연구 표본의 대부분을 만들기

이 비디오는 고정된 사후 인간 뇌를 대칭적으로 해부하고 추가 분석을 위해 더 작은 조직 블록을 준비하는 단계별 절차를 보여줍니다.

인간 사후 뇌의 대칭 이반구 절편(Symmetric Bihemispheric Sectioning of the Human Postmortem Brain)

우리는 정량 실시간 PCR 및 / 또는 전체를 게놈 microarrays를 사용하여 후속 유전자 발현 분석을위한 부상을 쥐의 뇌의 냉동 섹션에서 hippocampal 뉴런 또는 단일 뉴런의 풍부한 인구를 얻기 위해 레이저 캡처 microdissection (LCM)를 사용하는 방법에 대해 설명합니다.

외상성 뇌 손상 후 뉴런 또는 유전자 발현 분석을위한 단일 뉴런의 강화 인구의 레이저 캡처 Microdissection

MRI 스캔(인간), 3D 이미징 소프트웨어 및 면역조직학적 분석을 사용하여 뇌의 외측심실의 변화를 문서화합니다. 그런 다음 노화 또는 질병으로 인해 인간 뇌에서 발생하는 외심실 부피 변화의 종단 3D 매핑과 뇌실 주위 세포 변화의 특성화를 마우스에서 모델링합니다.

인간과 마우스의 뇌실 주위 조직의 측면 심실 및 조직 학적 특성의 3D 모델링

조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다.

인간의 건강과 병리학 적 뇌 조건을 연구에 절단 대칭 Bihemispheric 사후 뇌

인간의 뇌 조직에서 분리 된 뇌 모세 혈관 장벽 기능 생리 및 병 태 생리 조건에서 공부 하는 전 임상 모델으로 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 신선한 인간의 뇌 조직에서 뇌 모세 혈관을 분리 하는 최적화 된 프로토콜을 제시.

신선한 인간의 뇌 조직에서 뇌 모세 혈관의 절연

매트릭스 보조 레이저 탈 착/이온화 기반 이미징 질량 분석기 (MALDI-IMS)와 분자 이미징 생물 학적 샘플에서 여러 analytes의 동시 매핑을 수 있습니다. 여기, 선물이 Alzheimer의 질병과 MALDI IMS를 사용 하 여 대뇌 아 밀 로이드 angiopathy 샘플의 뇌 조직에 감지 및 아 밀 로이드 β 단백질의 시각화에 대 한 프로토콜.

매트릭스 보조 레이저 탈 착/이온화 질량 분석 이미징와 인간의 뇌에서 아 밀 로이드 β 예금의 시각화

다발성 경화증은 치료법이없는 염증성 탈수성 질환입니다. 뇌 조직의 분석은 질병의 발병 기전을 이해하는 중요한 단서를 제공합니다. 여기에서 우리는 클리블랜드 클리닉에서 운영하는 독특한 신속한 부검 프로그램을 통해 수집 된 MS 뇌 조직의 방법론 및 하류 분석에 대해 논의합니다.

다발성 경화증을 가진 개별을 위한 포괄적인 부검 프로그램

이 절차는 저렴하고 일반적으로 사용할 수있는 도구를 사용하여 고품질의 단백질과 RNA를 얻기 위해 이산 냉동 뇌 영역의 수집을 설명합니다.

다운스트림 분석을 위한 냉동 설치류 뇌 영역 모음

본 프로토콜은 알츠하이머병의 APP/PS1 트랜스제닉 마우스 모델에서 아밀로이드-베타 부하를 정량화하기 위해 시상 마우스 뇌 절편의 전체 영역 또는 관심 영역 분석을 수행하는 절차를 설명하고 비교한다.

마우스 뇌 절편에 대한 아밀로이드-베타 부하의 전체 대 하위 지역 정량화

현대 신경과학은 실험실 설치류와 인간을 포함한 여러 종 간의 차이를 탐구해야 합니다. 하지만 큰 뇌를 가진 포유류가 관련될 때는 기술적 어려움이 발생합니다. 이 접근법은 매우 다양한 포유류 내 신경 집단의 종간 변이를 다루며, 진화적 패턴을 밝히기 위해 지도화할 수 있는 유사한 결과를 도출합니다.

서로 다른 포유류 뇌에서의 정량적 세포 계수 연구를 위한 비교적 접근법

학습하세요 노화 뇌 조직 수집 및 처리 방법을 통해 신경퇴행성 질환의 정확한 진단과 병태생리 메커니즘을 규명하는 기법을. Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜은 고품질 조직 샘플 확보를 위한 체계적인 절차를 제공합니다.

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

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