Name: 환자 유래 췌장 선암 조직형 모델의 격리 및 특성 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 학습하세요 환자 유래 췌장 선암 오가노이드 격리 및 배양 방법을 통해 종양 이형성과 약물 반응을 연구하는 기법입니다. 이 모델은 개인 맞춤형 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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우리는 UC 샌디에고 무어 암 센터 생물 저장소 및 조직 기술 공유 자원의 지원에 감사드립니다, 로위 실험실의 구성원, 수술의 UC 샌디에고 부서, 외과 종양학의 부문. AML은 NIH CA155620, SU2C CRUK 루스트가르텐 재단 췌장암 드림 팀 상(SU2C-AACR-DT-20-16)과 췌장암 치료 기금에 대한 기부자들의 후원을 받고 있습니다.

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2018%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li>
<li>Khorana, A. A., Mangu, P. B., Katz, M. H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+Curable+Pancreatic+Cancer%3A+American+Society+of+Clinical+Oncology+Clinical+Practice+Guideline+Update+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology+Practice%22%5BJournal%5D)">Potentially Curable Pancreatic Cancer: American Society of Clinical Oncology Clinical Practice Guideline Update Summary.</a> Journal of Oncology Practice. 13 (6), 388-391 (2017).</li>
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<li>Von Hoff, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+survival+in+pancreatic+cancer+with+nab-paclitaxel+plus+gemcitabine%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Increased survival in pancreatic cancer with nab-paclitaxel plus gemcitabine.</a> New England Journal of Medicine. 369 (18), 1691-1703 (2013).</li>
<li>Conroy, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FOLFIRINOX+versus+gemcitabine+for+metastatic+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">FOLFIRINOX versus gemcitabine for metastatic pancreatic cancer.</a> New England Journal of Medicine. 364 (19), 1817-1825 (2011).</li>
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<li>Tiriac, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+Profiling+Identifies+Common+Responders+to+Chemotherapy+in+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Organoid Profiling Identifies Common Responders to Chemotherapy in Pancreatic Cancer.</a> Cancer Discovery. 8 (9), 1112-1129 (2018).</li>
<li>Tiriac, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+creation+of+pancreatic+cancer+organoids+by+means+of+EUS-guided+fine-needle+biopsy+sampling+for+personalized+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Successful creation of pancreatic cancer organoids by means of EUS-guided fine-needle biopsy sampling for personalized cancer treatment.</a> Gastrointestinal Endoscopy. , (2018).</li>
<li>Seino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Pancreatic+Tumor+Organoids+Reveal+Loss+of+Stem+Cell+Niche+Factor+Dependence+during+Disease+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human Pancreatic Tumor Organoids Reveal Loss of Stem Cell Niche Factor Dependence during Disease Progression.</a> Cell Stem Cell. 22 (3), 454-467 (2018).</li>
<li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ductal+pancreatic+cancer+modeling+and+drug+screening+using+human+pluripotent+stem+cell-+and+patient-derived+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).</li>
<li>Walsh, A. J., Castellanos, J. A., Nagathihalli, N. S., Merchant, N. B., Skala, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Imaging+of+Drug-Induced+Metabolism+Changes+in+Murine+and+Human+Pancreatic+Cancer+Organoids+Reveals+Heterogeneous+Drug+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Optical Imaging of Drug-Induced Metabolism Changes in Murine and Human Pancreatic Cancer Organoids Reveals Heterogeneous Drug Response.</a> Pancreas. 45 (6), 863-869 (2016).</li>
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<li>Neal, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+Modeling+of+the+Tumor+Immune+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid Modeling of the Tumor Immune Microenvironment.</a> Cell. 175 (7), 1972-1988 (2018).</li>
<li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

여기에서는 환자 유래 PDAC 오르가노이드를 분리, 확장 및 특성화하기 위한 현재 프로토콜을 제시합니다. 오르가노이드 문화를 확립하는 우리의 현재 성공률은 70 % 이상입니다; 따라서 이러한 방법은 아직 완성되지 않았으며 시간이 지남에 따라 개선되고 진화할 것으로 예상됩니다. PDAC는 낮은 신생물 세포성을 가지고 있기 때문에 샘플 크기에 중요한 고려 사항을 주어야합니다. 따라서, 작은 견본은 몇몇 종양 세포를 포함하고, 단지 오르가노이드의 소수를 생성할 것입니다. 추가적으로, 많은 환자는 외과 적 개입15의앞에 화학요법 및/또는 화학방사선 기지를 둔 neoadjuvant 처리를 수신합니다. 치료가 특정 환자에게 효과적이면, 종양 조직은 생존 세포가 결여될 수 있다. 화학-순진한 환자 샘플의 취득은 이 방법의 초기 최적화를 위해 바람직하지만, 이것이 항상 가능한 것은 아니다. 흥미롭게도 우리는 샘플이 24 시간 이내에 처리되는 한 종양 조직의 외과 적 제거 후 허혈 시간이 성공적인 오르...

췌장 덕트 선암(PDAC)은 대부분의 환자에서 늦은 진단, 효과적인 치료법의 부족, 그리고 10% 미만으로 남아 있는 5년 전체 생존율이 낮은 치명적인질환이다. 환자의 20%만이 치료외과적 개입에 적합한 국부성 질환으로 진단된다2,3. 나머지 환자는 전형적으로 소수의 환자4,5에서효과적인 화학치료제의 조합으로 치료된다. 이러한 긴급한 임상 적 요구를 해결하기 위해 연구자들은 조기 발견 전략과 보다 효과적인 치료법 개발에 적극적으로 노력하고 있습니다. 중요한 발견의 임상 번역을 가속화하기 위하여는, 과학자는 유전으로 조작한 마우스 모형, 참을성 있는 파생된 이종이식, 단층 세포 선 및, 가장 최근에, organoid 모형6를채택하고 있습니다.
변형되지 않은 전구세포의 증식을 자극하는 성장인자 및 Wnt-리간드를 이용한 3차원 상피 오르가노이드 배양은 마우스장(7)에 대해 최초로 기술되었고 정상 인간 췌장 조직에 신속하게 적응시켰다8. 일반적인 덕트 조직 이외에, organoid 방법론은 인간 PDAC8의격리, 확장 및 연구를 허용합니다. 중요한 것은, 이 방법은 수술 표본에서 오르가노이드의 확립뿐만 아니라 미세 및 코어 바늘 생검을 지원하여 연구원이 질병의 모든 단계를 연구 할 수있도록9,10. 흥미롭게도, 환자 유래 오르가노이드는 잘 기재된 종양 전사체 아류형을 재입증하고 정밀 의학 플랫폼9,11의개발을 가능하게 할 수 있다.
PDAC를 위한 현재 organoid 프로토콜은 화학 순진한 환자에게서 참을성 있는 견본의 70% 이상 의 성공적인 확장을 가능하게합니다 9. 여기에서 우리는 환자 유래 PDAC 오르가노이드를 분리, 확장 및 특성화하기 위해 실험실에서 사용하는 표준 방법을 제시합니다. 다른 PDAC 조직적 방법론은12,13에 기술되었지만 이들 방법의 비교는 철저히 수행되지 않았다. 이 기술은 비교적 새롭고 빠르게 발전하기 때문에 이러한 프로토콜은 계속 진화하고 개선될 것으로 기대합니다. 그러나 조직 취급 및 오르가노이드 문화의 원리는 계속 유용할 것입니다.

<table><tbody><tr><td>12채널 피펫(p20, p100 또는 p200) 및 팁</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>12웰 플레이트</td><td>Olympus</td><td>25-106</td><td></td></tr><tr><td>15 ml LoBind 코니컬 튜브</td><td>Eppendorf</td><td>EP0030122208</td><td></td></tr><tr><td>15 ml 튜브 Rotator 및/또는 Nutator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37 &deg; C CO2 인큐베이터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37 &deg; C 수조</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>384 웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>4588</td><td>초저 부착물, 검은색 및 광학적으로 투명</td></tr><tr><td>함 A 83-01</td><td>TOCRIS</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>ADV DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>동물 무조합 인간 EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>자동 세포 계수기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>B27 보충제</td><td>ThermoFisher</td><td>17504044</td><td></td></tr>세포 <tr><td>회수 솔루션</td><td>Corning</td><td>354253</td><td>4°C에서 기저막 추출물을 해중합하는 시약; C</td></tr><tr><td>CellTiterGlow</td><td>Promega</td><td>G7570</td><td>발광 세포 생존 시약</td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>시그마</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>컴퓨터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CryoStor CS10</td><td>StemCELL Tech</td><td>07930</td><td>세포 동결 용액</td></tr><tr><td>Cultrex R-spondin1 (Rspo1) 세포</td><td>Trevigen</td><td>3710-001-K</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ATCC</td><td>30-2002</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>약물 프린터</td><td>Tecan</td><td>D300e</td><td>이것은 우리가 실험실에서 사용하는 약물 프린터입니다.</td></tr><tr>데이터 <td>분석을 위한</td><td>Excel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Extra Fine Graefe Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11150-10</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ThermoFisher</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>G-418</td><td>ThermoFisher</td><td>10131035</td><td></td></tr><tr><td>Gastrin I (human)</td><td>TOCRIS</td><td>3006</td><td></td></tr><tr><td>Gentle Collagenase/hyaluronidase</td><td>STEMCELL Tech</td><td>7919</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>ThermoFisher</td><td>35050061</td><td>글루타민 솔루션</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td></td><td></td><td>데이터 분석용</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>ThermoFisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>층류 조직 배양 후드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>발광계</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Wnt-3A 발현 세포</td><td>ATCC</td><td>CRL-2647</td><td></td></tr><tr><td>MACS 조직 저장 솔루션</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Matrix</td><td>Corning</td><td>356230</td><td>기저막 추출물 (BME), 성장 인자 감소</td></tr><tr><td>Mr. Frosty 동결 컨테이너</td><td>ThermoFisher</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>N-아세틸시스테인</td><td>Sigma</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>Sigma</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>p1000 피펫(팁</td><td></td><td></td><td></td>포함</tr>) <tr><td>p200 피펫(팁</td><td></td><td></td><td></td>포함</tr>) <tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010049</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>ThermoFisher</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>primocin</td><td>InvivoGen</td><td>ant-pm-2</td><td></td></tr><tr><td>Rapid-Flow Filter Units (0.2 &micro; m)</td> <td>ThermoFisher</td><td>121-0020</td><td></td></tr><tr><td>재조합 인간 FGF-10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 Noggin</td><td>Peprotech</td><td>250-38</td><td></td></tr><tr><td>멸균 일회용 메스, # 10 블레이드</td><td>VWR</td><td>89176-380</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 원심 분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 접시 10cm</td><td>Olympus</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>TRIZol</td><td>ThermoFisher</td><td>15596018</td><td>산 페놀 용액</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>ThermoFisher</td><td>12605010</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>시그마</td><td>Y0503</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>ThermoFisher</td><td>R25001</td><td></td></tr></tbody></table>

환자 유래 췌장 선암 조직형 모델의 격리 및 특성 분석

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

췌장 덕트 선암 (PDAC)은 가장 치명적인 악성 종양 사이에 있습니다. 최근에는 이 질병의 3차원(3D) 모델링을 가능하게 하는 차세대 오르가노이드 배양 방법이 기술되고 있다. 환자 유래 오르가노이드(PDO) 모델은 수술 표본뿐만 아니라 작은 생검에서 분리될 수 있으며 배양에서 빠르게 형성될 수 있다. 중요한 것은, organoid 모형은 환자의 종양에서 검출된 병원성 유전 변경을 보존하고 환자의 처리 반응의 예측, 따라서 번역 연구를 가능하게 합니다. 여기서, 우리는 3D, 매트릭스 임베디드, 오르가노이드 모델을 연구하기 위해 조직 배양 워크플로우를 적응시키기 위한 포괄적인 프로토콜을 제공합니다. 우리는 1 차적인 PDAC 오르가노이드를 격리하고 전파하기 위한 방법 그리고 고려사항을 상세히 설명합니다. 또한 맞춤형 오르가노이드 미디어가 실험실에서 어떻게 준비되고 품질이 조절되는지 설명합니다. 마지막으로, 우리는 핵산 (DNA와 RNA)의 격리와 같은 오르가노이드 모형의 하류 특성화를 위한 실험 (DNA와 RNA), 및 약 시험을 기술합니다. 중요한 것은 우리는 연구 실험실에서 유기적 방법론을 구현하기위한 중요한 고려 사항을 제공합니다.

PDAC에서 오르가노이드를 분리하는 것과 관련된 문제를 설명하기 위해, 우리는 작은 세포내 종양 샘플로부터 환자 유래 오르가노이드 배양물의 확립을 보여준다. 초기 도금 후 그림 1과같이 웰당 몇 개의 오르가노이드만 보였습니다. 오가노이드는 2주 동안 더 크게 성장할 수 있었고, 초기 및 후기 통로 1의 대표적인 사진에 나타난 바와 같이 보다 견고한 문화를 확립하기 위해 우리의 프로토콜에 따라 통과되었다(그림1). 2.13단계에서 설명한 바와 같이, 후기 1차 분리기에서 관찰된 더 큰 낭포성 오르가노이드는 오르가노이드와 얼음-차가운 BME를 혼합하는 동안 더 작은 조각으로 쉽게 분해되었다는 점에 유의하는 것이 중요하다.
약리화 프로토콜의 결과를 입증하기 위해, 우리는 이 프로토콜에 기재된 바와 같이 확립되고 빠르게 성장하는 대표적인 PDAC 오르가노이드로부터 단일 세포를 준비...

췌장 덕트 선암의 환자 유래 오르가노이드 배양은 높은 충실도를 가진 상피 종양 세포 구획을 나타내는 급속하게 확립된 3차원 모형, 이 치명적인 악성에 번역 연구를 가능하게 합니다. 여기에서, 우리는 이 모형을 사용하여 관련 생물학 생물학 생물학 적인 생물학 적인 생물학 적인 생물학 적인 생물학 을 능력을 발휘하기 위하여 오르가노이드를 설치하고 전파하기 위하여 상세한 방법을 제공합니다.

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

환자 유래 오르가노이드 모델은 이 질병의 유전적 및 현상이 있는 이질성을 반영하기 때문에 췌장암을 연구할 수 있는 강력하고 신속한 도구이기 때문에 이 방법이 중요합니다. 이 기술의 주요 장점은 오르가노이드가 제한된 양의 암에서 높은 성공률로 격리 될 수 있으며 다운스트림 분석을위한 시험관 에서 빠르게 확장 될 수 있다는 것입니다. 세포 독성 약물에 대한 오르가노이드의 반응을 연구하면 종양이 치료에 내성이 되는 이유를 이해하고 보다 효과적인 치료 전략을 정의하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 절차를 시작하려면 인큐베이터에서 준비된 12웰 플레이트를 회수합니다. 멸균 셀 리프터를 사용하면 지하 멤브레인 추출물 돔을 부드럽게 들어 올려 우물 바닥을 긁지 않도록하면서 전체 매체에 떠 있습니다. P1000 파이펫을 사용하여 BME 돔과 미디어를 15밀리리터 원피스 튜브로 조심스럽게 이송합니다.모든 오르가노이드 함유에 대해이 단계를 잘 반복하십시오. 차가운 기저 질의 1 밀리리터로 수확된 각 우물을 부드럽게 씻고 이 세척을 오르가노이드가 함유된 튜브로 옮춥춥시다. 용액과 오르가노이드를 P1000 파이펫과 철저히 혼합하고 5분 동안 200배 g로 회전합니다.현탁액및 오르가노이드 펠릿에 오르가노이드를 함유하는 BME층이 튜브 의 바닥에 나타납니다. BME 및 오르가노이드 층의 손실을 피하기 위해 상체를 조심스럽게 제거하십시오. 튜브를 얼음 위에 놓습니다.튜브에 얼음 차가운 세포 복구 용액 10 밀리리터를 추가하고 반전으로 철저히 섞습니다. 반전으로 3분간격으로 섞으면서 30분 간 얼음에 배양합니다. 그 후 원심분리기는 5분간 200배 g로 합니다.BME 층이 사라져야하는 동안 오르가노이드 펠릿은 명백해야합니다. BME 층의 크기가 감소하지만 여전히 보이는 경우 섭씨 4도에서 추가로 30 분 동안 배양하고 원심 분리를 반복하십시오. BME가 폴리머화되면, 오르가노이드 펠릿을 남기면서 세포 회수 용액을 제거한다.오르가노이드를 10 밀리리터의 기초 매체로 씻어 반전과 혼합하여 씻으세요. 원심분리기는 5분 동안 200배 g로, 상류체를 제거하고, 적어도 5분 동안 얼음 위에 오르가노이드 펠릿을 장착한 튜브를 놓습니다. 선택적으로, 단일 세포 준비를 원하는 경우에, 오르가노이드에 DNAse I 용액의 30 마이크로 리터로 보충 트립신의 3 밀리리터를 추가합니다.37도에서 이 효소 반응을 최대 10분 동안 2분간격으로 부드럽게 반전할

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암 연구

우리는 모린 유래 췌장 선암 세포주를 직접 네이티브 종양 부위로 유도하는 초음파 유도 이식프로토콜을 설명합니다. 이 접근법은 주사 후 2-4주 이내에 초음파 스캐닝에 의해 검출가능한 췌장 종양을 초래하고, 외과 정형외과 이식에 비해 각막벽에 종양 세포 파종을 현저히 감소시켰다.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

이 프로토콜은 정형 외과 췌장 종양의 외과 생성 및 갓 단송된 뮤린 췌장 종양의 급속한 소화를 기술합니다. 소화 후, 실행 가능한 면역 세포 집단은 유세포 세포 분석에 의한 세포내 사이토카인 검출을 위한 T 세포의 생체내 자극을 포함하는 추가하류 분석을 위해 사용될 수 있다.

종양 침투 T 세포 독성의 정형 외 췌장 종양 및 Ex 생체 특성의 생성

시험관 내 스크리닝을 위해 환자 유래 제노이식(PDX)을 사용하여 오가노이드를 생성하여 생체내/생체 외 모델의 쌍을 매칭하는 방법을 설명합니다. PDX 종양은 기계적 또는 효소적으로 작은 조각으로 수확/처리되었으며, 원래 PDX에 대해 처리, 냉동 보존 및 특징인 종양 오르가노이드를 성장시키는 영리한 방법.

암 약리학 연구를 위한 PDX 및 PDX 유래 오르가노이드의 생체내/생체외 환자 유래 모델 쌍 생성

이 프로토콜은 유기형 절편 배양(OTSC)의 준비에 대해 설명합니다. 이 기술은 온전한 다세포 조직의 체외 배양을 용이하게 합니다. OTSC는 다세포 환경에서 약물에 대한 각각의 반응을 테스트하는 데 즉시 사용할 수 있습니다.

원발성 췌장암 및 전이에서 종양 미세환경의 전임상 모델로서의 유기형 절편 배양

이 프로토콜은 종양 내 이질성을 포착하기 위해 다중 매개변수, 단일 오가노이드 약물 반응을 정량화하고 시각화하기 위한 중간 및 고처리량 오가노이드 약물 스크리닝 및 현미경에 구애받지 않는 자동 이미지 분석 소프트웨어를 위한 반자동 방법을 설명합니다.

벌크 및 단일 오가노이드 분석을 위한 광시야 라이브 셀 이미징을 사용한 다중 파라미터 종양 오가노이드 약물 스크리닝

환자 유래 유방 종양 절제술 또는 정상 유방 조직에서 인간 유방 오가노이드를 확립하기 위한 자세한 프로토콜이 여기에 제공됩니다. 이 프로토콜은 인간 환자 유래 유방 오가노이드의 배양, 동결 및 해동에 대한 포괄적인 단계별 지침을 제공합니다.

환자 유래 유방 오가노이드의 확립 및 배양

종양 오가노이드는 암 연구와 개인 맞춤형 의학에 대한 접근 방식에 혁명을 일으켰습니다. 이는 임상적으로 관련성이 높은 종양 모델을 나타내며 이를 통해 연구자들은 임상에서 종양보다 한 발 앞서 나갈 수 있습니다. 이 프로토콜은 신선한 췌장 종양 조직 샘플과 췌장 선암 기원의 환자 유래 이종이식에서 종양 오가노이드를 확립합니다.

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

본 프로토콜은 췌관 선암종(PDAC)과 정상 췌관 상피세포를 유도만능줄기세포(iPSC)로 재프로그래밍하는 방법을 설명합니다. 당사는 렌티바이러스 준비부터 안정적인 iPSC 라인 구축에 이르기까지 최적화되고 상세한 단계별 절차를 제공합니다.

췌관 선암을 다능성으로 재프로그래밍

여기에서는 신선한 흑색종 조직에서 분리된 세포 현탁액을 배양하여 흑색종 환자 유래 오가노이드를 생성하는 프로토콜을 제시합니다. 이러한 오가노이드는 in vitro 에서 환자 특이적 종양을 충실하게 재현하여 종양 면역억제 메커니즘, 약물 스크리닝, 약물 내성 메커니즘 및 암 감시 접근법을 탐구하기 위한 혁신적인 접근 방식을 제공합니다.

흑색종 환자 유래 오가노이드 모델을 통한 치료 기회 발굴

전립선암 이질성과 치료 저항성은 여전히 과제로 남아 있습니다. 우리는 주요 부모 종양 특성을 보존하는 환자 유래 오가노이드(PDO)를 생성하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 표준화된 모델은 약물 스크리닝 및 정밀 의학 발전을 지원합니다.

환자 유래 전립선암 오가노이드의 확립 및 유지: 상세한 실험 프로토콜

학습하세요 환자 유래 췌장 선암 오가노이드 격리 및 배양 방법을 통해 종양 이형성과 약물 반응을 연구하는 기법입니다. 이 모델은 개인 맞춤형 치료 전략 개발에 활용됩니다.

환자 유래 췌장 선암 조직형 모델의 격리 및 특성 분석

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