Name: 피부 심근세포를 이용한 심장 기능의 체외 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 배우세요 심장 질환 병태생리를 밝히는 피부 심근세포 추출 및 기능 평가 방법을. 작은 생검으로 심근세포 기능과 칼슘 민감도를 측정하여 심장 기능을 체외에서 정밀 분석할 수 있습니다.

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저자는 과학 기술 (FCT), 유럽 연합( EU), 쿼드로 드 Referência 에스트라테기코 나시오날 (QREN), 푼도 유럽 유 데센볼비멘토 지역 (FEDER) 및 Programa Operacional Factores 드 Competitividade (경쟁) UnIC (UID / IC / 00051/ 2013) 연구 단위에 대한 포르투갈어 재단에 감사드립니다. 이 프로젝트는 경쟁 2020 - 프로비타 오페라 경쟁 E Internacionaléação (POCI), 프로젝트 DOCNET (NORTE-01-0145-FEDER-000003) 포르투갈 2020 파트너십 계약에 의해 지원 , 포르투갈 2020 파트너십을 통해 FEDER에 의해 지원됩니다 유럽 지역 개발 기금(ERDF)을 통해 리스본의 지역 운영 프로그램인 2020년 유럽 구조 및 투자 펀드가 지원하는 프로젝트 NETDIAMOND(POCI-01-0145-FEDER-016385)를 통해. Patrícia 로드리게스FCT (SFRH / BD / 96026/2013)에 의해 투자되었고 주앙 알메이다 - 코엘호는 유니버시다데 두 포르투 / FMUP 및 FSE - 펀도 사회 유럽u에 의해, NORTE 2020-Programa Operacional 지역 도 노르테, (NORTE-08-5369-FSE-000024-Programas Doutorais).

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</ol>

저자는 이해상충이 없습니다.

피부 심근세포체를 사용하여 심장 기능의 체외 평가는 생리학적(예를 들어, 스트레치) 및 병리학적 문맥(예를 들어, 허혈)에서 심근세포 수준에서 발생하는 수정을 명확히 하는 중요한 기술을 나타냅니다. 이 방법론은 해동 된 샘플에서 얻은 심근세포에서 기능을 평가하기 위해 최소한의 심근을 요구하는 것과 같은 몇 가지 장점이 있습니다. 광범위한 종(마우스13,쥐1,14,15,토끼16,돼지17,개18,기니피그19 및 인간20)으로부터심근세포및 상이한 심장 위치를 사용하여 아리아, 좌우 심실 또는 경색 심장의 특정 부위를 포함한다. 또한 이 기술은 기본 구성에서 규제 및 수축 구조의 기능을 측정하는 동시에 Ca2+ 및 에너지(ATP)의 특정 농도를 제공할 수 있습니다.
이 기술의 단순성에도 불구하고 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 샘플 수집을 포함하여 처음부터 각 단계의 품질을 보장하는 것이 필수적입니다. 미오필라멘트 단백질은프로테아제(21)에취약하다. 따라서 수집 직후 액체 질소에 샘플을 보관해야 합니다. 이전에 동결되지 않은 신선한 샘플은 훨씬 더 높은 힘을 개발하므로 동일한 프로토콜에서 신선하고 냉동된 샘플에서 수행되는 측정을 혼합하는 것이 좋습니다. 두 번째로 가장 중요한 단계는 심근세포의 추출입니다. 이 절차 동안 대부분의 경우 얼음 샘플을 유지하는 것이 중요합니다. 프로테아제 억제제 칵테일은추출/투과화(22)동안 단백질 분해의 위험을 감소시키는 데 사용될 수 있다. 셋째, 이 단계를 무시했을 때 품질 이내 세포가 감소했다고 지적했기 때문에 정확한 메스 움직임을 사용하여 샘플을 작은 조각으로 절단해야 합니다. 또 다른 중요한 단계는 트리톤을 씻어내고 (세포를 퍼미컬화하지만 그 접착을 촉진) 가능한 한 많은 세포를 유지하는 것 사이의 적절한 균형을 갖기 어렵기 때문에 심근세포를 세척하는 것입니다. 먼저 각 샘플, 종 또는 프로토콜에 대한 추출 및 세척 수를 시도하는 것이 중요합니다. 예를 들어, 우리의 손에, 우리는 ZSF1 비만 쥐 조직 추출은 "지방" 양상을 가지고 있음을 지적, 접착제 동안 이러한 세포를 더 미끄러운 만든 하지만 측정하기 더 어렵지 않다. 우리가 이 문제를 우회하는 방법은 동물 당 세포의 합리적인 수를 가지고 더 많은 실험을 수행하여이었다. 또한, 접착제좋은 세포를 선택하는 것이 중요합니다, 즉 좋은 줄무늬와 합리적인 길이. 심근 세포에는 이러한 기능이 없는 경우 주로 바늘 끝에서 분리되거나 힘이 없음을 일으킵니다. 또한 세포를 바늘에 붙이는 접착제 의 시간과 효능을 고려하여 심근세포 부착에 올바른 접착제를 사용하는 것도 중요합니다. 우리의 손에, 실리콘 접착제(재료의 테이블)빠른 (10-15 분) 충분히 강한 치료. 마지막으로, 마지막 중요한 단계는 세포를 붙인 후 5 분 심근세포를 조심스럽게 들어 올리고 (커버 슬립에 세포를 붙이는 것을 피하기 위해) 우물로 이동하기 전에 (현미경 단계에 의해 끌리는 세포를 피하기 위해)와 관련이 있습니다. 표 7은 이 기술과 관련된 문제 해결, 그 근본 원인 및 빈번한 문제를 극복할 수 있는 가능한 해결 방법을 요약합니다.
이 방법의 주요 제한은 myofilaments활성화 /비활성화 얼마나 빨리 와 같은 myofilament 수축과 관련된 모든 질문에 대답 할 수 없다는 것입니다. 생체 내 설정에서 막 탈극성, 세포내 Ca2+ 증가 및 근안세포에 대한 확산은 심근세포가 수축하는 반면, 피부심근세포Ca2+ 확산에서 근막에 대한 확산은 세포가 Ca2+ 용액에 침수될 때 즉시 발생합니다. Ca2+ 확산의 이 빠른 속도는 근필라멘트 활성화/비활성화분석(23)을편향시킬 것이다.
이러한 실험은 온도, 용액 pH, 기계적 변속(느슨한 재스트레칭 대 느슨함) 및 세포 부착 절차(핀 넥타이 대 접착제)를 포함한 다양한 요인에 의해 영향을받습니다.
기술의 미래 진행은 투과성 심근세포보다는 그대로 기능적 연구를 수행하는 것을 포함한다. 이 기술은 심근세포가 갓 분리된 것에 의존하는 단점이 있습니다(이전에는 동결되지 않음). 이 방법론과 직접적인 관련이 없는 또 다른 중요한 문제는 샘플 냉동 저장의 최대 기간과 관련이 있는 데 큰 영향을 미칠 수 있습니다. 구체적으로, 저장 시간 전반에 걸쳐 근안의 분해 정도를 확립하는 것이 필수적이다(즉, 추출된 심근세포로부터 파생된 양질의 기능데이터를 보장하기 위해 냉동 시료를 얼마나 오래 저장할 수 있는지).

전통적으로 심근 기계적 특성에 대한 평가는 주로 유두 근육 및 trabeculae1,2와같은 다세포제제에서시도되었습니다. 다세포 심장 근육 스트립은 방향 및 힘 생성의 알 수없는 패턴을 가진 수축 심근 세포를 포함하는 세포의 이질적인 인구, 전기 활동 및 스트레스 / 변형 분포뿐만 아니라 주변 결합 조직 매트릭스3,4을포함한다. 콜라겐없이 준비하고 단일 심근 세포를 포함하는 것은 매우 정확하고 제어 된 방식으로 sarcomere 길이와 크로스 브리지 수축 특성의 측정을 허용할것이다5,6. 따라서, 지난 4년 동안, 단일 심근세포6,7의기계적, 수축 및 이완 특성을 조사할 수 있도록 여러 가지 방법론이 개발되었다. 이들 세포의 수축 기능은 사코메 길이 및 크로스 브리지 사이클링 운동학3에크게 의존한다. 따라서, 단 하나 고립 된 심장 세포에서 근육 기능을 직접 조사하는 것이 바람직하다, 그것은 사메레 길이 및 성능뿐만 아니라 크로스 브리지 기능 및 수축 특성을 평가 할 수 있다는 점을 고려. 그러나, μN 수준에서 힘 측정을 기록하는 동안 합리적인 광학 sarcomere 해상도로 기능성 심근세포를 분리하고 부착하는 것은 여전히 도전적이고진화3,6이다. 다른 과제는 갓 수거된 생검에서 심근세포를 분리하기 위해 설치해야 하는 물류입니다. 인간 생검 수집의 예측 불가능성은, 예를 들면, 실험의 타당성을 위태롭게 할 수 있습니다.
더욱이, 과학적 절차에 대한 동물 실험의 교체, 감소 및 정제에 관한 윤리적 관심사 (3R의 원칙)는 세포 및 조직 수준, 바람직하게는 인간의 생검 또는 작은 동물 샘플에서 연구 변화를 촉진했다. 실제로 복잡성의 작은 수준에서 시험관 내 심장 기능을 평가하는 방법론의 점진적 개선은 전신에 결과의 적절한 통합을 허용하고 임상 시나리오7로변환할 수 있습니다. 전부, 심근구를 추출하기 위해 -80°C에 저장된 샘플을 사용하는 것이 매력적인 대안일 수 있다.
심근 조직은 작은 조각으로 절단하고 박격포와 봉제와 균질화된다. 이러한 균질화의 결과는 다양한 정도의 사콜렘말 손상을 가진 피부 뭉닝 및 분리된 세포의 현탁액으로, 이 때 근근증이 입욕 매체에 노출되고 모든 세포 성분이 씻겨나난다. 사콜마에서 멀리 떨어져 있는 근시릴과 같은 구조물은 보존되어 있습니다. 따라서, 근시릴라 장치와 관련된 사컴레 단축 및 기능성 특성은 그대로 유지되며8,9를기록할 수 있다.
심근세포 력 측정 시스템은 심근세포 길이를 조정하는 데 사용되는 전자기 모터와 동급성 심근세포 수축을 측정하는 힘 트랜스듀서로 구성됩니다. 투과, 또는 피부, 심근세포는 편안한 용액 ([Ca2+] < 10 nM)을 포함하는 실험 챔버에 배치되고 실리콘 접착2 얇은 바늘 : 하나는 모터에 부착되고 다른 하나는 힘 트랜스듀서에 부착됩니다. 광학 시스템은 심근세포 형태와 사코프레 길이를 결정하는 데 사용됩니다. 실험 프로토콜은 종종 상이한 Ca2+ 농도를 포함하는 완충액의 일련의 힘 기록, 액틴-미오신 크로스 브리지 운동제의 결정 및 미리 정의된 sarcomere 길이에서 장착된 심근세포의 수동 장력측정(그림 1)으로구성된다. 액체 질소에서 동결된 심근 샘플로부터 의 분리(그리고 이후 -80°C에 저장됨)는 단단 면적당 최대 Ca2+활성화(활성) 힘을 측정하기 위한 세포 역학 및 단백질 생화학을 활용하는 기술입니다(T 활성, kN∙m-2), Ca 2+ 독립(T 활성, kN+m-2), Ca 2+-독립(T 활성, kN+m-2), Ca 2+ 독립(T 활성, kN+m-2), Ca 2+ 독립(T활성,kN+m-2), Ca2+독립(패시브) 장력(T패시브,kN+m-2), 근안회카2+민감도(pCa50),근안회(nHill), 힘 재개발(ktr) 및 T활성,T패시브,pCa50,nHill 및 ktr의 사코머 길이 종속성.
이 프로토콜의 목표는 다른 종에서 냉동 된 샘플에서 분리 된 단일 피부 심근 세포의 기능적 기계적 특성을 평가하는 신뢰할 수있는 절차로 심근 세포 력 측정 시스템의 잠재력을 설명하고 요약하는 것입니다.

<table><tbody><tr><td>아세톤</td><td>시그마</td><td>34580</td><td></td></tr><tr><td>아데노신 5'-트리포스페이트 디소듐 염 수화물(Na2ATP)</td><td>시그마</td><td>A2383</td><td></td></tr><tr><td>탄산칼슘(CaCO3)</td><td>Merck</td><td>1.02067.0500</td><td></td></tr><tr><td>이미다졸</td><td>VWR</td><td>24720.157</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 육수화물(MgCl2.6H2O)</td><td>머크</td><td>1.05833.0250</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 용액 (MgCl2 1M)</td><td>Sigma</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Bis(2-hydroxyethyl)타우린 (BES)</td><td>Sigma</td><td>B9879</td><td></td></tr><tr><td>포스포크레아틴 디소듐 염 수화물(Na2PCr)</td><td>Sigma</td><td>P7936</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨(KCl)</td><td>Merck</td><td>1.04936.1000</td><td></td></tr><tr><td>수산화칼륨(KOH)</td><td>Merck</td><td>8.14353.1000</td><td></td></tr><tr><td>프로피온산 (C3H6O2)</td> <td>Merck</td><td>8.00605.0500</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 스퀴즈 튜브</td><td>Marineland</td><td>31003</td><td></td></tr><tr><td>Tritiplex (EGTA)</td> <td>Merck</td><td>1.08435.0025</td><td></td></tr><tr><td>Triton &reg; X-100 10%</td><td>Merck</td><td>648463</td><td></td></tr><tr><td>조직 균질화기(GKH GT 모터 제어)</td><td>Terre Haute Glas-col</td><td></td><td></td></tr><tr><td>길이 컨트롤러(모델 315C-I)</td><td>Aurora Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Force Transducer(모델 403 A)</td><td>Aurora Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software ASI 600A</td><td>Aurora Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sotware VSL(모델 900B)</td><td>오로라 과학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경 (IX51)</td><td>올림푸스</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

피부 심근세포를 이용한 심장 기능의 체외 평가

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

이 기사에서는 단일 과구("skinned") 심근세포를 분리하고 기능적 연구를 수행하기 위해 힘 측정 장치 및 모터에 부착하는 데 필요한 단계를 설명합니다. 이러한 연구는 심근세포 강성(수동력)과 다른 칼슘(Ca2+)함유 솔루션으로 활성화하여 최대 력 개발, 근안타멘트 Ca2+-감도(pCa50),쿠퍼티움(nHill) 및 힘 재개발 속도(ktr)를 측정할 수 있습니다. 이 방법은 또한 근막에 직접 작용하는 약물의 효과와 심근세포의 활성 및 수동 적 특성모두에 외인성 재조합 단백질의 발현을 가능하게합니다. 임상적으로, 피부 심근 세포 연구는 많은 심근 질환의 병리생리학을 강조하고 myofilaments를 대상으로 치료 개입의 영향의 체외 평가를 허용. 전부, 이 기술은 열린 심혼 또는 이식 수술 도중 얻은 동물 모형 및 인간 조직에서 시험관 내 및 생체 내 파라미터 사이 상관관계를 조사하여 심장 병리생리학의 설명을 가능하게 합니다.

이 프로토콜은 피부 심장 근구를 사용하여 심장 기능의 추출 및 평가 기술을 단계별로 설명하는 것을 목표로합니다. 이 방법론은 마우스에서 남성에 이르기까지 다른 심장 위치에서 수집 할 수있는 작은 냉동 생검을 사용하여 myofilament 기능의 측정 및 급성 변조를 허용합니다.

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

이 기술은 동물 모델과 인간의 시험관 및 생체 내 매개변수 간의 상관 관계를 조사하여 심장 질환의 병태 생리학을 명확히 할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 매우 작은 생검 또는 냉동 보관된 샘플을 사용하여 깊은 근필라멘트 기능을 연구할 수 있다는 것입니다. 이 기술을 사용하면 근필라멘트에 대한 치료 개입의 영향을 체외에서 평가할 수 있습니다.실험을 시도하기 전에 심근세포 추출을 몇 번 연습하여 크기, 줄무늬 및 모양이 좋은 심근세포를 선택, 접착 및 활성화하는 방법을 배우는 것이 좋습니다. 절차를 시작하기 전에 챔버 내 테스트 장치의 온도를 섭씨 15도로 조정하고 힘 변환기와 모터를 켭니다. 2.5ml의 릴렉스 ISO 용액이 들어 있는 페트리 접시에 3-5마이크로그램의 심근 샘플을 해동하고 메스를 사용하여 불필요한 세포 손상을 일으키지 않고 조직을 작은 조각으로 정밀하게 자릅니다.모든 조직을 절단한 후 절단된 피펫 팁을 사용하여 전체 부피의 용액과 조직 조각을 Potter-Elvehjem 유리에 옮기고 그라인더를 사용하여 분당 30-40회 회전으로 조직을 기계적으로 파괴합니다. 양호한 세포 현탁액이 얻어지면 2.25ml의 릴렉스 ISO가 포함된 15ml 튜브에 250마이크로리터의 Triton을 추가하고 결과 용액에 세포 현탁액을 추가합니다. 튜브를 세 번 부드럽게 뒤집어 섞은 다음 튜브를 실온에서 1분 동안 그대로 둔 다음 얼음에서 4분 동안 배양합니다.얼음 배양이 끝나면 튜브의 최종 부피를 추가 이완 ISO로 최대 15 밀리리터까지 가져오고 시연된 대로 반전으로 튜브를 세 번 혼합한 다음 세포를 원심분리한 다음 상등액의 마지막 3밀리리터를 제외한 거의 모든 액체를 조심스럽게 제거합니다. 마지막 세척 후 최대 5-10 밀리리터의 세포 현탁액까지 상층액을 제거합니다. 스킨 심근세포 선택의 경우, 도립 현미경 슬라이드 홀더의 유리 슬라이드 위에 놓인 커버슬립에 세포 현탁액 한 방울을 추가하고 20X 대물렌즈를 사용하여 줄무늬 패턴과 크기가 좋은 단일 막대 모양의 심근세포를 선택합니다.선택한 심근 세포가 힘 트랜스듀서 및 모터의 바늘과 끝이 정렬된 상태로 수평으로 배치될 때까지 두 손을 사용하여 커버슬립을 회전하고 피펫 팁을 사용하여 커버슬립 측면을 따라 얇은 접착제 선을 놓습니다. 세포를 제자리에 접착하려면 힘 센서와 모터의 바늘 끝을 접착제 라인에 담그어 양쪽 팁 주위에 접착제 후광을 만들고 힘 변환기의 바늘 끝을 빠르게 아래로 움직여 심근세포의 한쪽 가장자리에 접착되도록 합니다. 모터의 끝과 셀의 다른 쪽 끝으로 이 절차를 반복합니다.5-8분 후 두 마이크로 매니퓰레이터를 동시에 움직여 바늘을 약 15마이크로미터 들어 올려 셀이 커버슬립에 접착되지 않도록 합니다. 능동 및 수동 힘과 칼슘 민감도를 측정하려면 첫 번째 실험 우물에 55-100 마이크로 리터의 이완 용액을 채우고 두 번째 실험 우물에 55-100 마이크로 리터의 활성화 용액을 채 웁니다. 카메라 소프트웨어를 사용하여 관심 영역을 명확한 줄무늬 패턴이 있는 심근세포 영역으로 설정하고 육상 길이를 2.2마이크로미터로 설정합니다.심근세포의 두 극단 사이의 거리를 측정하고 그 값을 소프트웨어 내에서 근세포 길이로 기록합니다. 다음으로, 바늘을 약간 더 위로 이동하고 현미경 스테이지를 부드럽게 움직여 세포가 커버슬립에서 스테이지 뒤쪽의 이완 용액이 들어 있는 웰로 이동하도록 합니다. 세포가 칼슘과 이완 용액에서 순차적으로 출현할 때 발생하는 두 개의 세포 단축을 포함하는 프로토콜을 선택합니다.등척성 수축을 유도하려면 심근세포가 이완 용액에서 활성화 용액으로 이동하도록 현미경 스테이지를 이동합니다. 힘 고원에 도달하면 힘 데이터를 기록하기 시작합니다. 10초 후 셀을 이완 용액으로 전환하고 테스트가 중지될 때까지 데이터를 기록합니다.칼슘 민감도를 측정하려면 활성화 용액을 각 칼슘 용액 55-100마이크로리터로 교체하고 방금 설명한 대로 데이터를 기록합니다. 측정이 끝나면 힘 센서와 모터의 끝을 늘려 셀에서 바늘을 제거하고 아세톤에 적신 면봉을 사용하여 바늘 끝에서 접착제 후광을 조심스럽게 제거합니다. 장기간의 실험 후 어느 정도의 저하 및 힘 감소가 예상되지만, 기능적 투과성 심근세포 내의 활성 장력 값은 비교적 안정적이어야 합니다.여기에서는 근필라멘트 칼슘 민감도 프로토콜을 수행하는 데 필요한 8개의 힘 기록 중 3개의 대표적인 힘 흔적이 표시됩니다. 활성화 용액이 들어 있는 우물로 세포를 이동시킴으로써, 심근세포는 고원에 도달할 때까지 힘을 개발하기 시작합니다. 빠른 슬랙 테스트 후 제로 포스의 기준선 값을 얻을 수 있습니다.이 곡선의 마지막 부분의 기울기는 겉보기 횡교 부착 및 분리 속도의 척도인 힘 재개발 속도의 값을 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 세포를 이완 용액이 들어 있는 우물로 다시 옮기면 세포가 이완되고 힘이 떨어집니다. 근필라멘트 칼슘 민감도 및 길이 의존적 활성화 측정 외에도 수동 장력의 sarcomere 길이 의존성 및 단면적 당 칼슘 활성화력의 sarcomere 길이 의존성 및 칼슘 독립 장력을 계산할 수 있습니다.마지막으로, 심근세포가 분리되는 방식이 결과에 상당한 영향을 미친다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 피부가 벗겨진 심근세포를 사용하여 체외에서 심장 기능을 평가하는 것은 세포 수준에서 발생하는 변화를 명확히 하고 다양한 생리학적 및 병리학적 조건에서 근필라멘트 메커니즘을 연구하는 중요한 기술입니다. 이 방법은 최소한의 심근 샘플이 필요하고 다양한 종, 심장 위치 및 병리학의 심근세포를 사용할 수 있다는 장점이 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

야생형 마우스와 돌연변이 마우스의 개별 심근세포는 수축성과 칼슘 과도 상태를 연구하기 위해 심장에서 분리할 수 있습니다. 이를 통해 모든 원인에서 심장 기능 장애에 대한 세포 기능 장애의 기여도를 특성화할 수 있습니다.

마우스 심근의 분리 및 생리 학적 분석

외막은 심혈관 발달 및 재생에 필요한 다능성 심혈관 전구 세포와 부분비 인자의 필수 공급원입니다. 여기에서는 마우스 배아 심외막 세포를 배양하는 방법을 설명합니다.

마우스 배아 심장에서 심 외막 세포의 체외 배양에서

유도 만능 줄기 세포 (hiPSC)이 심근를 - 유래에서 여기, 우리는 인간의 조작 된 심장 조직의 생성을 보여줍니다. 우리는 HERG 채널 저해제 인 E-4031에 의해 수축력과 수축 패턴의 예시적인 변화를 분석하는 방법을 제시한다. 이 방법은 심장 약물 스크리닝 견고성과 높은 수준의 적합성을 나타낸다.

심장 약물 안전 검사를위한 인간 공학 심장 조직의 자동 수축 분석

여기 선물이 심장 생리학을 모방 하는 전기 및 기계적 자극을 사용 하 여 셀 인구를 교육 하기 위한 프로토콜. 이 전기 자극 치료 세포의 cardiomyogenic 잠재력을 강화 하 고 더 세포 치료, 질병 모델링 및 의약품 심사를 위한 유망한 전략 이다.

셀의 Cardiomyogenic 잠재력 향상을 동시 전기 및 기계적 자극

이 프로토콜은 전임상 약물 검사를 위해 인간의 심장 조각을 단면화 및 배양하는 절차를 설명하고 이러한 조각에서 동시에 세포간 전압 및 세포내 칼슘 신호를 기록하기 위한 광학 매핑의 사용을 자세히 설명합니다.

인간 조직형 심장 슬라이스의 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑에 의한 전임상 심장 전극생리학 평가

인간 유도만능 줄기세포로부터 유래된 심근세포를 이용한 허혈성 심장질환 모델을 제시하고, 허혈에 의한 조직 손상의 정량적 평가를 위한 방법을 제시한다. 이 모델은 약물 검진및 허혈성 심장 질환에 대한 추가 연구를위한 유용한 플랫폼을 제공 할 수 있습니다.

허혈성 심장 질환 및 심장 근막 수축의 비디오 기반 비교 모델

여기서, 우리는 미리 분화된 인간 유도만능 줄기 세포 유래 심근세포, 심장 섬유아세포 및 내피 세포로 구성된 3D 자가 조립 심장 미세 조직 배열을 생성하는 사용하기 쉬운 방법론을 기술합니다. 심장 미세 조직을 생성하는 기술을 요구하는 이 사용자 친화적이고 낮은 세포는 질병 모델링 및 약물 개발의 초기 단계를 위해 구현될 수 있습니다.

인간 iPSC 유래 심근세포, 심장 섬유아세포 및 내피 세포를 사용하여 3D 심장 미세 조직 배열의 제조

우리는 여기에 설명, Tg의 설립 및 응용 프로그램 (Myh6-cre)1Jmk / J /Gt (ROSA)26Sortm38 (CAG-GCaMP3)(CAG-GCaMP3)(αMHC-Cre/Rosa26A-Flox-Stop-Flox-GCaMP3 아래라고함) 심장 재프로그래밍 평가를 위한 마우스 리포터 라인. 마우스 균주로부터 분리된 신생아 심장 섬유아세포(NCFs)는 유도된 심근세포(iCM)로 변환되어 칼슘(Ca2+) 플럭스를 통해 iCM의 재프로그래밍 효율과 기능성 성숙을 편리하고 효율적으로 평가할 수 있습니다.

GCaMP3 리포터와 심장 특정 칼슘 플럭스를 측정하여 심장 재프로그래밍의 체외 평가

인간 iPSC 유래 심근 세포의 수축 기능 및 세포 무결성의 변화 분석은 비임상 약물 개발에 매우 중요합니다. 하이브리드 96웰 세포 분석 시스템은 임상 단계로의 안전한 전환에 필요한 신뢰할 수 있는 인간 관련 결과를 위해 실시간 및 생리학적 방식으로 두 파라미터를 모두 처리합니다.

전임상 심장 위험 평가를 위해 인간 iPSC 유래 심근 세포의 구조적 및 수축성 변화를 평가하기위한 하이브리드 세포 분석 시스템

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포(hiPSC-CM)는 전임상 심장 독성 스크리닝을 위해 동물을 사용하는 것에 대한 대안을 제공합니다. 전임상 독성 스크리닝에서 hiPSC-CM의 광범위한 채택에 대한 한계는 세포의 미성숙하고 태아와 유사한 표현형입니다. hiPSC-CM의 견고하고 신속한 성숙을 위한 프로토콜이 여기에 제시되어 있습니다.

성숙한 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포 단층을 사용한 고처리량 심장 독성 스크리닝

여기에서는 비디오 기반 현미경과 결합된 유연한 기판에 도금된 2D 인간 유도만능 줄기 세포 유래 심근세포(hiPSC-CM) 단층을 사용하여 비침습적 심장 의료 기기 수축성 평가 방법을 시연합니다. 이 도구는 심장 전기 생리학 장치의 수축 특성에 대한 시험관 내 평가에 유용합니다.

2D 인간 줄기 세포 유래 심근 세포에서 심장 수축성 조절 요법의 평가

배우세요 심장 질환 병태생리를 밝히는 피부 심근세포 추출 및 기능 평가 방법을. 작은 생검으로 심근세포 기능과 칼슘 민감도를 측정하여 심장 기능을 체외에서 정밀 분석할 수 있습니다.

피부 심근세포를 이용한 심장 기능의 체외 평가

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