Name: 태아 기 이슬mn에서 Oculomotor, Trochlear 및 척추 모터 뉴런의 격리 및 문화 :GFP 형질전환 마우스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 4 s
Description: 배우세요 태아 마우스에서 안구운동신경과 척수운동신경을 동시에 분리하고 배양하는 방법을 통해 운동신경 질환의 선택적 취약성 메커니즘을 연구하세요. 이 기술은 형태학, 분자생물학 및 전기생리학 특성 분석에 활용됩니다.

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브리기테 페트만(미국 매사추세츠 주 바이오젠)에게 SMN 해부기술 에 대한 강의에 감사드립니다. 다나 파버 암 연구소 흐름 세포 측정 시설, 하버드 의과 대학의 면역학 부문 흐름 세포 측정 시설, 조슬린 당뇨병 센터 흐름 세포 분석 코어, 브리검 과 여성의 병원 흐름 세포 측정 코어, 보스턴 어린이 병원 흐름 세포 측정 연구 시설 기본 모터 뉴런의 FACS 격리를위한; A.A. Nugent, A.P. Tenney, A.S. Lee, E.H. Nguyen, M.F. 로즈, 추가 엥글 연구소 회원 및 프로젝트 ALS 컨소시엄 회원으로 기술 지원 및 사려 깊은 토론을 제공합니다. 이 연구는 프로젝트 ALS에 의해 지원되었다. 또한, R.F.는 일본 심장 재단 / 바이엘 야쿠힌 연구 보조금 해외 및 유전학 T32 GM007748에 NIH 교육 보조금에 의해 지원되었다; J.J.는 Schepens 안과 연구소와 발달 신경학 교육 프로그램 박사 후 펠로우십 (5T32NS007473-19)을 통해 보스턴 아동 병원을 통해 안구 질환의 분자 기지 (5T32EY007145-16)에서 NIH / NEI 교육 프로그램에 의해 지원되었습니다. M.C.W는 NEI (5K08EY027850)와 어린이 병원 안과 재단 (교수 발견 상)에 의해 지원되었다; E.C.E.는 하워드 휴즈 의학 연구소 조사관입니다.

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저자는 이해 상충을 선언하지 않습니다.

역사적으로, CN3 및/또는 CN4 운동 뉴런의 체외 연구는 해리 된17,18,19,20,21,17,22,23,24,25,슬라이스27,28 배양과 같은 이기종 문화에 의존해 왔으며, 이러...

1 차적인 운동 신경의 문화는 외인성 스트레스 요인에 신경 발달, 기능 및 감수성의 연구를 가능하게 하는 강력한 공구입니다. 운동 신경 배양은 근위축성 측삭 경화증(ALS)1,2,그의 질병 기전이 불완전하게 이해되는 것과 같은 신경 퇴행성 질환의 연구에 특히 유용하다. 흥미롭게도, ALS 환자와 ALS 모델 마우스 모두에서 척추 운동 뉴런(SMN)의 유의한 세포 사멸에도 불구하고, 오큘러 뉴런(CN3s) 및트로클레어 뉴런(CN4s)에서의 세포 사멸은 상대적으로1,3,4,5,6,7,8,9. 따라서 CN3s/CN4및 SM의 순수 문화어를 비교분석하면 상대적 취약점의 근본적인 메커니즘에 대한 중요한 단서를 제공할 수 있습니다. 불행 하 게도, 이러한 분석에 주요 장벽은 이러한 모터 뉴런의 정제 된 문화를 성장 하는 무 능력.
많은 프로토콜은 동물 모델에서 SMN의 정제를 위해 기술되었다. 이러한 프로토콜의 대부분은 밀도 구배 원심 분리10,11,12 및 / 또는 p75NTR-항체 기반 세포 정렬 패닝 기술13,14,15,16을사용합니다. 밀도 구배 원심분리는 다른 척수 세포에 비해 SM의 더 큰 크기를 이용하는 반면, p75NTR은 척수에 있는 SMS에 의해 독점적으로 표현되는 세포외 단백질입니다. 거의 100% 순수 SMN 문화는 이들 프로토콜 들 중 하나 또는 둘 다에 의해 생성되었다11,12,14. 그러나 CN3s/CN4s가 p75NTR을표현하지 않고 다른 특정 CN3/CN4 마커가 확인되지 않았기 때문에 이러한 프로토콜은 CN3/CN4 문화를 생성하는 데 성공하지 못했습니다. 또한 SM보다 작기 때문에 크기에 따라 격리하기가 더 어렵습니다. 대신, CN3s 또는 CN4s의 시험관 내 연구는 해리17,18,19,20,21,17,22, 23,24,25, 슬라이스27,28 배양에 의존했으며, 이질적인 세포 유형으로 구성되며 프로토콜이 존재하지 않았습니다. 기본 CN3 또는 CN4의 격리 및 문화.
여기서, 프로토콜은 동일한 배아일11.5(E11.5) IslMN으로부터 CN3s, CN4s 및 SM의 시각화, 절연, 정제 및 배율에 대해 기재되어 있다:GFP 형질전환 마우스29(도 1, 도 2A). IslMN:GFP는 특히 세포막에 국소화되는 원거리 GFP로 운동 뉴런을 라벨을 지정합니다. 이 프로토콜은 운동 신경 질환의 병리학 적 메커니즘을 밝히기 위해 여러 유형의 운동 뉴런을 종과 연령일치로 비교할 수 있게 합니다.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 488-conjugated goat anti-mouse IgG (H+L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594-conjugated F(ab')2 염소 anti-rabbit IgG (H+L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11072</td><td>1:400</td></tr><tr><td>B27 Supplement (50x), serum free</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSAria llu SORP 유세포 분석기</td><td>BD Bioscience</td><td>- </td><td>여기에는 405, 488, 594 및 640nm 레이저가 장착된 4개의 레이저 시스템이 있습니다.</td></tr><tr><td>BD 팔콘 70&mu; m 나일론 세포 스트레이너</td><td>CORNING</td><td>352350</td><td>FACS 전에 해리 세포를 필터링합니다.</td></tr><tr><td>스냅 캡이 있는 BD Falcon 둥근 바닥 시험관</td><td>CORNING</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>BDNF Human</td><td>ProSpec-Tany TechnoGene, Ltd.</td><td>CYT-207</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 마이크로 플레이트, 96 웰, PS, F-바닥 (굴뚝 웰)</td> <td>Greiner Bio-One International</td><td>655090</td><td>우리는 여러 개의 96 웰 접시를 시도했으며</td></tr><tr><td>현미경 검사용 ICC 원형 커버 안경</td><td>Karl Hecht & 어시스트</td><td>1001/14</td><td>우리는 면적이 넓기 때문에이 커버 슬립을 사용했습니다 (지름 : 14mm).</td></tr><tr><td>CNTF Human</td><td>ProSpec-Tany TechnoGene, Ltd. (CNTF 휴먼 프로스펙-Tany TechnoGene, Ltd.)</td>Penicillium cyclopiumSigma-Aldrich C1530 CPA의 <td>CYT-272</td><td></td></tr><tr><td>Cyclopiazonic acid</td><td></td><td></td><td>. 응급실 스트레스 요인 중 하나입니다.</td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylinodole (DAPI)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps Inox Tip Size 0.05 mm x 0.01 mm Biologie Tips</td><td>Roboz Surgical Instrument</td><td>RS-5015</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP25205</td><td></td></tr><tr><td>GDNF Human</td><td>ProSpec-Tany 주식회사 테크노진</td><td>CYT-305</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX 보충제</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>Hibernate E</td><td>BrainBits</td><td>HE</td><td></td></tr><tr><td>Hibernate E low fluorescence</td><td>BrainBits</td><td>HELF</td><td>배아의 GFP 발현 관찰을 방해하는 형광은 낮아야 합니다.</td></tr><tr><td>말 혈청, 열 불활성화, 뉴질랜드 원산지</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26050-070</td><td></td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Tocris Cookson</td><td>2845</td><td>Isobutylmethylxanthine</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz' s L15 매체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11415064</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-5913</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 나이프 4.75" 1.7 mm x 27 mm 블레이드</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-6272</td><td></td></tr><tr><td>Moria Mini Perforated Spoon</td><td>Fine Science Tools</td><td>10370-19</td><td></td></tr><tr><td>마우스 단클론 항체 뉴런 클래스 III &베타;-튜불린(TUBB3)</td><td>BioLegend</td><td>801202</td><td>1:500, TUJ1</td></tr><tr><td>Nikon Perfect Focus Eclipse Ti 라이브 셀 형광 현미경 및 원소 소프트웨어</td><td>Nikon-Differential</td><td></td> <td>interference contrast images and immunocytochemistry images of cell cultures with these equipments</td></tr><tr><td>Nitric Acid 90%, Fuming (Certified ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A202-212</td><td>헹굼용 커버슬립</td></tr><tr><td>Olympus 1.7mL 마이크로튜브, Clear</td><td>Genesee Scientific</td><td>22-281</td><td>이 튜브는 맥락에서 "1.7mL 마이크로 원심분리기 튜브"를 설명한 튜브입니다.</td></tr><tr><td>Papain Dissociation System</td><td>Worthington Biochemical Corp</td><td>LK003150</td><td>Papain 용액 및 alubumin-ovomucoid 억제제 용액이 이 키트에서 제조됩니다.</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Poly D-lysin(PDL)</td><td>MilliporeSigma</td><td>A-003-E</td><td></td></tr><tr>Islet1 <td>Abcam</td><td>ab109517</td><td>1:200</td>SMZ18 및 DS-Ri1을 사용한 SMZ1500 줌 실체 현미경<td>에 대한 토끼 단클론 항체</td></tr><tr><td> 카메라</td><td>Nikon-Dissection</td><td></td><td>을 수행하고 절개된 배아 및 조직의 이미지를 이러한 형광 현미경으로 캡처합니다.</td></tr><tr><td>Sylgard 170 블랙 실리콘 봉지재 - A+B 0.9kg 키트</td><td>다우코닝</td><td>1696157</td><td>우리는 이 키트를 사용하여 해부 접시를 만듭니다.</td></tr><tr><td>TC 처리 접시, 100mm x 20mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td>이 접시를 사용하여 해부 접시를 만듭니다.</td></tr><tr><td>Thum 드레싱 집게 4.5" 톱니 모양 2.2mm 팁 너비</td><td>Roboz 수술 기구</td> LOGOQ e VET용 <td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>변환기</td><td>GE Healthcare</td><td>L8-18i-RS</td><td>암컷 마우스 초음파용</td></tr><tr><td>수의학 초음파 기계</td><td>GE Healthcare</td><td>LOGOQ e VET</td><td>암컷 마우스 초음파용</td></tr><tr><td>Zeiss LSM 700 시리즈 레이저 스캐닝 컨포칼 현미경 및 Zen 소프트웨어</td><td>Carl Zeiss</td><td>-</td><td>배아의 컨포칼 이미지는 이러한 장비로 캡처되었습니다.</td></tr></tbody></table>

태아 기 이슬mn에서 oculomotor, trochlear 및 척추 모터 뉴런의 격리 및 문화 :gfp 형질전환 마우스

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Oculomotor 뉴런 (CN3s) 및 trochlear 뉴런 (CN4s) 척추 모터 뉴런에 비해 근위축성 측삭 경화증 (ALS)와 같은 퇴행성 운동 뉴런 질환에 현저한 저항을 나타낸다 (SMNs). 기본 마우스 CN3, CN4 및 SM을 격리하고 배양하는 기능은 이 선택적 취약점의 기반이 되는 메커니즘을 연구하는 방법을 제공합니다. 현재까지 대부분의 프로토콜은 이기종 세포 배양을 사용하므로 실험 결과의 해석을 혼동할 수 있습니다. 혼합 세포 집단과 관련된 문제를 최소화하기 위해 순수한 배양이 필수적입니다. 여기서, 제1 프로토콜은 배아일 11.5(E11.5) IslMN:GFP 형질전환 마우스 배아를 사용하여 동일한 배아로부터 의SMN 대응체와 함께 CN3s/CN4를 효율적으로 정화하고 배양하는 방법을 자세히 설명한다. 이 프로토콜은 CN3/CN4 및 SMN 핵으로부터의 조직 해부 및 해리, FACS 기반 세포 분리, 시험관내 배작에 대한 세부 정보를 제공한다. 이 프로토콜은 기존 프로토콜에 새로운 체외 CN3/CN4 배양 시스템을 추가하고 동시에 비교를 위해 순수한 종 및 연령 일치 SMN 배양을 제공한다. 운동 뉴런의 형태학, 세포, 분자 및 전기 생리학적 특성에 초점을 맞춘 분석은 이 문화 시스템에서 가능합니다. 이 프로토콜은 운동 신경 발달, 선택적 취약성 및 질병을 정의하는 메커니즘에 대한 연구를 가능하게 합니다.

이 프로토콜의 목적은 운동 신경 장애의 기본 메커니즘을 비교 분석할 수 있도록 1차 CN3s/CN4및 SMN 을 장기적으로 고도로 정화하고 배양하는 것이었습니다(개요는 그림 1 및 그림 2 참조).
일단 뉴런이 성공적으로 분리되고 배양에서 성장되면, 거의 순수한 1차 CN3/CN4 및 SMN 배양체를 수득하였다(도5A,B)적어도 14 DIV(도4 및 도 6)에대해 유지하였다. 2 DIV에서 CN3/CN4 및 SMN 배양물의 순도는 각각 93.5±2.2% 및 86.7±4....

이 작품은 1 차적인 oculomotor, trochlear 및 척추 운동 뉴런의 동종 세포 배양을 산출하는 프로토콜을 제시합니다. 이러한 배양은 안구 및 척추 운동 뉴런의 형태학적, 세포적, 분자 적 및 전기 생리학적 특성의 비교 분석에 사용될 수 있다.

태아 기 이슬mn에서 Oculomotor, Trochlear 및 척추 모터 뉴런의 격리 및 문화 :GFP 형질전환 마우스

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...

이것은 배아 마우스에서 1 차적인 안구 및 척추 운동 신경을 동시에 능동하게 정화하고 배양하는 첫번째 프로토콜입니다. 그것은 모터 뉴런 질병의 근본적인 기계장치의 연구를 가능하게 합니다. 이 프로토콜은 기존 시스템에 새로운 체외 운동 배양 성분을 추가하고 비교를 위해 순수한 종과 나이 일치 척추 운동 신경 문화를 제공합니다.근위축성 측삭 경화증에서는 척추 운동 뉴런이 퇴화하면서 오큘로운동 뉴런은 상대적으로 절약됩니다. 이 문화를 비교하는 것은 질병 기계장치 및 치료에 대한 통찰력을 제공할 수 있었습니다. 이 방법은 모터 뉴런 개발, 질병 및 선택적 취약성의 근본적인 메커니즘에 대한 연구를 용이하게 합니다.우리의 배양 시스템은 운동 신경 형태학, 분자 생물학 및 전기 생리학의 특성화를 가능하게 합니다. 이 기술에 새로운 사람들을 위해, 우리는 연습을 많이 하는 것이 좋습니다. 해부는 기술적으로 도전적일 수 있고 다중 해장은 1 차 적인 문화에 대한 충분한 뉴런을 얻기 위하여 필요할 수 있습니다.임신 한 마우스에서 Islet1 EGF 양성 배아를 수확하여 시작 약 11.5 일 후 수정. 에탄올로 복부를 철저히 뿌리고 멸균 미세 절 가위와 엄지 손가락 드레싱 집게로 자궁을 제거하십시오. 멸균 PBS에서 자궁을 간략하게 씻으시다.그런 다음 미리 냉각 된 멸균 PBS로 채워진 해부 플레이트로 옮춥니다. 현미경의 밝은 빛 아래, 조심스럽게 미세 절 가위, 엄지 드레싱 집게, 듀몬트 5 핀셋을 사용하여 자궁에서 배아를 제거합니다. 그런 다음 멸균 된 모리아 미니 천포 숟가락을 사용하여 각 배아를 1X V27로 보충 된 미리 차가운 최대 절전 모드 E 저형 광채 매체로 채워진 24 웰 플레이트의 별도의 우물로 옮기는 것입니다.접시를 얼음 위에 유지하면서 한 배아를 멸균 해부 판으로 옮기고 얼음 냉기 멸균 행크의 균형 잡힌 소금 용액 또는 HBS로 완전히 덮습니다. 핀셋을 사용하여 중간 뇌를 손상시키지 않고 배아와 꼬리의 얼굴을 제거하십시오. 그런 다음 사지가 걸려 있고 꼬리가 현미경의 전면을 가리키는 경향이있는 배아를 놓습니다.핀셋을 사용하여 작은 개구부를 생성하기 위해 네 번째 심실의 지붕을 열어 슬릿하십시오. 이 개구부를 사용하여 핀셋을 네 번째 심실과 지붕 사이에 생성된 공간에 연결합니다. 배아 의 등대 표면을 따라 피질과 측면으로 바닥 판과 모터 컬럼으로 해부한다.그런 다음 GFP 양성 CN3 및 CN4 핵을 드러내기 위해 공개 된 책 방식으로 해부 된 조직을 엽니 다. 복부 중뇌를 배아에서 조심스럽게 분리하고 핀셋과 미세 절 칼로 수막 조직을 제거합니다. 양측 GFP 양성 CN3 및 CN4 핵을 바닥 판과 다른 GFP 양성 주변 조직에서 멀리 해부하여 뉴런을 만지거나 손상시키지 않도록 주의하십시오.별도의 CN3 및 CN4 핵을 수집하는 경우, 이 두 핵의 중뇌를 따라 잘라 최소한의 HBSS와 해부 된 복부 중뇌 조직을 수집하는 P1000 파이펫을 사용합니다. 해부 매체로 채워진 1.7 밀리리터 미세 원심 분리기 튜브에 놓고 해실 매체가 될 때까지 튜브를 얼음에 보관하십시오. 총 수가 실험 요구 사항을 충족 할 때까지 동일한 튜브의 추가 배아에서 복부 중뇌를 계속 당깁니다.복부 척수를 해부하려면 머리가 현미경의 전면을 향하도록 배아를 수시합니다. 핀셋 한 켤레로 잡고 다른 쌍의 끝을 네 번째 심실의 미개봉 된 caudal 부분에 삽입합니다. 배아의 전체 로스트로코달 정도에 뒤뜰과 척수의 나머지 부분을 번들로 엽니다.제 4 심실에서 시작하여 집게를 가위로 사용하여 척수의 중앙 운하를 향해 작업하는 등간 조직을 잘라냅니다. 그런 다음 한 세트의 핀셋으로 배아를 잡고 다른 쌍으로 양쪽에 등쪽 조직의 플랩을 꼬집습니다. 마이크로 디스섹션 나이프를 사용하여 복부 척수를 제거하여 GFP 양성 SMN 바로 아래를 관통하여 양쪽에 톱질 같은 움직임으로 복부 척수를 들어 올리십시오.하반신의 상반신에서 척수를 횡적으로 자르고 자궁 경부 요추 부분을 제거합니다. 첫 번째 GFP 양성 전방 경적 프로젝트가 있는 C1 바로 위를 가로막고 자른다. 복부 척수 등쪽을 위로 놓고 GFP 양성 SMN 컬럼 사이에 핀셋을 눌러 고정합니다.마이크로 디스섹션 칼로 GFP 양성 SMN 컬럼의 양면을 다듬어 남은 부착된 메센키메, DRGs 및 등쪽 척수를 제거합니다. P1000 파이펫을 사용하여 최소한의 HBSS로 해부된 복부 척수 조직을 수집하고 해부 배지로 채워진 1.7 밀리리터 미세 센실리후지 튜브에 배치하십시오. 해리될 때까지 얼음 위에 보관하고 동일한 튜브에 있는 추가 배아에서 복부 척수를 계속 당깁니다.해부된 조직 샘플로 각 미세 원심 분리관에 적절한 양의 파아항 용액을 추가합니다. 37°C의 튜브를 30분간 배양하여 손가락으로 10분마다 튜브를 교반합니다. 인큐베이션 후 P200 파이펫으로 각 서스펜션을 8회 부드럽게 세리라세이션하고 원심분리기를 5분 동안 300배 g로 세리세티합니다.알부민 난소쿠푸이드 억제제 용액의 적절한 부피로 세포 펠릿을 부드럽게 위아래로 피펫팅하여 재보냅니다. 원심분리를 반복합니다. 그런 다음 P1000 파이펫으로 상체를 조심스럽게 제거합니다.해부 배지의 적절한 부피에서 세포를 다시 중단합니다. 70 마이크로미터 세포 여과기를 통해 서스펜션을 필터링합니다. 다음으로, FACS 정렬을 사용하여 CN3/CN4 및 SMN에서 해부된 GFP 양성 세포를 분리합니다.운동 신경 배양 배지로 격리 된 세포 현탁액을 적절한 밀도에 섭씨 37도로 미리 데워진 것으로 희석하고 PDL 라미닌 코팅 96 웰 플레이트의 우물에 200 마이크로리터를 첨가하십시오. 37도 의 섭씨 및 5 % 이산화탄소 인큐베이터에서 뉴런을 배양하여 5 일마다 운동 신경 배양 배지를 새로 고치십시오. 성공적으로 고립 된 뉴런이 문화에서 성장했을 때, 거의 순수한 1 차 CN3/CN4 및 SMN 배양은 시험관내에서 14 일 동안 얻어지고 유지되었습니다.시험관 내 이틀 동안 배양의 순수성은 CN3/CN4에 대한 93.5%, SMN의 경우 86.7%로 운동 신경 마커 Islet1 및 뉴런 마커 TUJ1을 통한 면역세포화학에 의해 평가되었다. 순수성은 배아의 나이와 FACS 도중 GFP 게이트에 대한 적절한 임계값을 설정하는 데 크게 의존했습니다. E10.5 배아에서 분리된 뉴런의 순도는 E11.5 배아의 것과 비슷했습니다.그러나, 순도는 E13.5 배아를 사용했을 때 현저하게 감소하였다. 1차 CN3/CN4s 및 중소기업이 내민성 망상 스트레스에 대한 차동 반응을 보였는지 여부를 결정하기 위해, 세포는 체외에서 2일 간 사이클로피아존산 또는 CPA의 다양한 농도로 처리되었고 생존비율을 평가하기 위해 면역세포화학을 위해 3일 후에 고정하였다. 각 샘플에서 실행 가능한 뉴런의 수가 계산되고 생존비가 계산되었다.CN3/CN4 단배양은 SMN 단배문화에 비해 CPA 치료에 훨씬 더 저항했다. 이 절차에 따라, 많은 추가 방법은 모터 뉴런을 검사하기 위해 수행 될 수있다. 몇몇 보기는 전기 생리학, 세포 생물학, 전사, 또는 크로마티닌 접근성의 연구 결과를 포함합니다.

isolation-culture-oculomotor-trochlear-spinal-motor-neurons-from

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

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태아 기 이슬^mn에서 Oculomotor, Trochlear 및 척추 모터 뉴런의 격리 및 문화 :GFP 형질전환 마우스

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