Name: 디메틸벤드 a 안트라세네 및 12-O-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(DMBA-TPA)를 이용한 화학적 유발 피부 발암 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 12 s
Description: 학습하세요 DMBA-TPA 화학적 유발 피부 발암 모델을 통해 염증이 피부암에서 어떤 역할을 하는지 연구하는 방법을. 이 모델은 종양 발생과 진행 메커니즘을 분석하고 면역 체계 및 혈관신생 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 핀란드 아카데미 (보조금 25013080481 및 25013142041 (I.J.), 286377 및 295814 (M.P.), 287907 (T.J.), Päivikki 및 사카리 솔베르크 재단 (M.P., T.J.), 핀란드 의학 재단 (T.P.), 경쟁 국가 연구 탐페레 대학 병원의 전문가 책임 영역 의 자금 조달 (부여 9V049 및 9X044 (M.P.), 9X011 및 9V010 (T.J.), Fimlab 실험실의 전문가 책임 영역의 경쟁 국가 연구 자금 조달 (부여 X51409 (I.J.)), Tays 지원 재단(I.J., M.P., T.J.), 탐페레 결핵 재단(I.J., M.P., T.J.), 핀란드 문화 재단(M.V.), 파울로 재단(T.P.), 핀란드 암 학회(M.P.), 에밀 알토넨 재단(T.P.).

여기에 설명된 프로토콜은 핀란드 국립 동물 윤리 위원회(프로토콜 번호 ESAVI/23659/2018)의 승인을 받았습니다.
1. 실험 동물, 시약 및 장비
<ol><li>나이와 성냥생을 사용한다. 대부분의 마우스에 있는 피부가 그 나이 의 주위에 텔로겐 (휴식 단계)에 있기 때문에 나이의 7-9 주에 연구 결과를 시작합니다2.</li>
	<li>연구 기간 동안 동물의 행동을 관찰하고 종종 남성과 함께 발생하는 싸움을하면 별도로 보관하십시오. 싸움은 종양 형성을 촉진하는 피부에 상처를 일으킬 수 있습니다. 암컷 마우스는 그들의 보다 적게 공격적인 행동 때문에 선호됩니다. 일반적인 실험군 크기는 그룹24, 25,26,27당8-20 마리의 동물 사이에서 다양하다. 참고: 이전 연구에서 볼 수있는 생물학적 차이를 기반으로 전력 계산은 충분히 큰 그룹 크기를 선택하는 데 도움이됩니다. 이 문서에서 예로 사용되는 균주는 Balb /c 및 C57BL / 6을 포함한다. 그러나, SENCAR 및 FVB와 같은 많은 다른 마우스 균주는 DMBA-TPA 모델뿐만 아니라 위스타 및 스프라그-Dawley 쥐2,28,29와함께 사용되어 왔다. 연구를 시작하기 전에 동물 작업의 국가 또는 지역위원회의 라이센스가 필요합니다. 일반적인 복지 고려 사항 이외에, 모델 특정 종점은 전형적으로 편평상피세포 암 (SCC) 및 피부의 감염입니다. 아세톤에 종양성 화학 물질을 적용 한 후 가려움증으로 인한 피부의 긁힘은 전형적이지만 그렇지 않으면 동물은 불편 함의 흔적을 보이지 않아야합니다. 정기적으로 계량(예: 한 달에 2회)하면 동물의 복지를 평가하는 데 도움이 됩니다.</li>
	<li>아세톤으로 희석된 DMBA와 TPA를 사용하십시오. DMBA의 작업 농도는 250 g/L입니다. 한 동물에 대한 투여량은 아세톤의 200 μL에서 DMBA의 50 μg이다. TPA의 재고 농도는 125 g/L 및 처리 농도 25 g/L입니다. 한 동물에 대한 TPA 투여량은 아세톤의 200 μL에서 5 μg이다. 주의: DMBA는 삼키면 유해하며 암을 유발할 수 있습니다. 아세톤은 빠르게 증발하고 가연성입니다. 그것은 현기증과 자극 눈을 일으킬 수 있습니다. 호흡 마스크를 사용하거나 진공 흐름 에서 작업하십시오. 이러한 화학 물질을 취급한 후 장갑을 교체하십시오. 개별적으로 통풍이 되는 케이지는 마우스의 하우징 중에 화학 물질의 확산을 방지합니다. 적용 후 DMBA 처리에 사용되는 파이펫 팁을 수집하고 위험한 폐기물로 처리하십시오. 참고: DMBA는 빛으로부터 보호되어야합니다. 희석된 TPA는 -20°C에 저장되며, 바람직하게는 빛으로부터 보호된다.</li>
	<li>다음 장비 조달 : 규모, 모피, 파이펫 및 적절한 크기의 팁, 일반 통치자, 디지털 카메라, 메모장과 펜 또는 유두종 을 기록하기위한 펜이나 컴퓨터, 흡입 마취 시스템 또는 마우스 억제기 뒷면 상단에 개구부, 그리고 생쥐를 희생하기위한 이산화탄소 마취 시스템.</li>
</ol>2. 피부 유두종 유도 및 홍보
<ol><li>등 피부를 면도하고 동물의 무게를 측정합니다. 나중에, 필요할 때마다 피부를 면도하지만 화학 물질에 노출 될 때는 면도하지 않습니다. 참고: 유두종 주위를 면도 할 때주의하고 피부에 상처를주지 않도록하십시오. 모든 잠재적인 체중 감소를 통지 하기 위해 각 동물의 무게 2 주.</li>
	<li>모피를 면도한 후 48시간 동안 피펫을 사용하여 면도 부위에 200 μL의 아세톤에 50 μg의 DMBA를 바치게 합니다. 필요한 경우, 가벼운 흡입 마취 또는 마우스 억제기를 사용하여 동물을 억제하십시오.</li>
	<li>후 7 일, 첫 번째 TPA 복용량을 제공. 주2x 파이펫으로 국소적으로 아세톤의 200 μL에 TPA 5 μg을 적용하십시오( 가급적 월요일, 목요일 또는 화요일 및 금요일).</li>
	<li>매주 유두종 수를 계산하고, 기록하고, 사진을 찍습니다. 직경이 1mm보다 큰 만져지면 1주일 이상 머무르는 경우 유두종으로 간주됩니다. 각 유두종에 지도에 표시하고 매주 그 크기를 나열한다. 디지털 사진을 저장합니다.</li>
</ol>3. 동물 희생 및 샘플 수집
<ol><li>종양 반응이 고원에 도달 할 때까지 치료를 계속하십시오. 일반적으로 유두종 부담은 마우스 균주에 따라 개시 후 10-20주 까지 증가할 것으로 예상된다. 고원은 15-20 주에 예상된다. 유두종의 작은 비율 (아래 3%) 20-50 주 이내에 SCC로 발전 할 수있습니다 2.</li>
	<li>마지막 TPA 신청 후 24 시간 동안 동물을 희생하십시오. 자궁 경부 탈구 또는 다른 적합한 방법으로 이산화탄소 narcosis를 사용합니다.</li>
	<li>연구 질문에 따라, 동물30,31에서적절한 샘플 물질을 수집한다.<ol>
<li>예를 들어, 희생하기 전에 혈액 샘플을 채취하고 플라즈마를 분리하십시오.</li>
		<li>면역성 화학 (IHC) 염색을위한 피부의 조각을 잘라 (예를 들어, 헤마톡실린 및 에오신, 증식 또는 염증 세포).</li>
		<li>생검 펀치를 사용하여 유전자 발현(예: qPCR) 및/또는 단백질 분석(예: 웨스턴 블롯 또는 ELISA)을 위해 유두종 조직 또는 비유두종(처리된) 피부로 피부 조각을 수집합니다.</li>
		<li>면역 세포 집단의 보다 상세한 분석이 필요한 경우 유세포 분석 분석을 위해 비장 및 피부 배수 림프절의 조각을 수집합니다. 또한 추가 분석을 위해 표피와 진피 층을 분리할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 통계
<ol><li>유두종 없는 시간의 카플란-마이어 생존 곡선을 그리고 생존을 위해 Mantel-Cox 로그 랭크 테스트를 사용하십시오. 주당 유두종 수의 선형 곡선을 그립니다. 이것은 카운트 데이터이므로 비선형 회귀 모델을 사용합니다. 필요한 경우 통계학자에게 문의하십시오.</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

DMBA-TPA 유도된 피부암은 매우 재현성이 뛰어나고 개시에서 악성종양에 이르는 종양 진행에 대한 정보를 제공하기 때문에 가장 일반적으로 사용되는 암 모델 중 하나입니다. 주요 결과 측정, 유두종 형성은 쉽고 안정적으로 양적입니다. 이 모델은 종양 개시 (종양없는 생존) 및 진행성 (종양 수 및 크기)을 동시에 해결합니다. 이 모델은 잠재적 치료제와 같은 다양한 화합물을 연구하는 데 적합하며 유전자 변형 동물의 종양 진행에 대한 개별 유전자의 영향을 연구하는 데 적합합니다. 주어진 변형에 대한 모델을 적용할 때 기존 문헌을 연구하여 변형이 모델에서 어떻게 반응하는지(예: 첫 번째 유두종이 얼마나 빨리 나타나는지 알아내기 위해) 하는 것이 좋습니다. 유전자 변형 마우스를 사용할 때, 야생 형 흰자 새끼의 사용은 항상 권장됩니다. DMBA 또는 TPA를 아세톤으로 대체하거나 둘 다 대체하는 것과 같은 잠재적인 추가 제어의 사용은 DMBA 또는 TPA를 제거하거나 투여 순서를 반전시킬 가능성이 매우 낮기 때문에 매우 논쟁의 여지가 ...

암은 세계에서 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 따라서, 질병에 대한 더 나은 이해를 얻고 잠재적인 치료 접근법을 탐구하기 위해 신뢰할 수 있는 실험적 질병 모델을 개발해야 하는 요구가 있다. 피부암 발병을 연구하기 위해 생체내에서 가장 일반적으로 사용되는 실험 모델 중 하나는 화학적으로 유도된 2단계 피부발암 생성 모델1,2이다. 이 모델은 면역 세포 침투 및 혈관 신생과 같은 특정 사건 이외에 종양 개시, 승진 및 진행을 연구하는 도구를 제공합니다.
2단계 피부 발암 모델을 사용하기 위해, 마우스의 뒷피부는 함께 종양 형성을 유도하는 2개의 상이한 화학물질로 치료된다. 모델은 돌연변이원, DMBA의 저용량으로 개시되고, 종양 프로모터, TPA3에 장기간 노출된다(도1). DMBA는 표피 세포와 1 차적인 각질 세포 줄기 세포의 DNA를 가진 공유 adducts를 형성하여 무작위로 DNA를돌연변이4,5,6,7. 이 무작위 돌연변이의 몇몇은 Hras1와 같은 프로토 종양유전자에서 일어나고 (Kras와 Nras에 있는 돌연변이는 또한 검출됩니다) 및 종양 유전자에 프로토 종양유전자의 변환은 적당한 자극의 밑에 종양 대형을 구동합니다. TPA는 차례로, 가장 일반적으로 사용되는 종양 성장 촉진 제이다. 이의 분자 표적은 단백질 키나아제C(PKC)8이다. TPA는 또한 모델9에서종양 형성에 중요한 Wnt/β-카테닌 신호를 활성화합니다. 촉진제에 대한 반복적이고 장기간 노출되면 세포 신호 신호, 성장 인자의 생산 증가, 및 치료된 피부의 DNA 합성 및 염증 세포 침투 증가로 인한 국소 염증 반응이 나타납니다.
DMBA-TPA 모델의 주요 염증 성 중재자는10. 인터류핀-17A(IL-17A)는 DMBA-TPA 모델11,12에서특히 종양발생성인 것으로 알려져 있다. 인터류키친 6(IL-6)과 시너지 효과를 발휘하며 대식세포 및 호중구 모집에 참여하고13,14. 또한,CD4+ T 세포 및 호중구는 DMBA-TPA 모델에서 종양발생이 있는 것으로 나타났다. 마지막으로, 대식세포는 또한 모델15,16,17에서종양 발생을 촉진할 수 있다.
촉진 단계에서, 돌연변이된 세포의 세포 증식은 강화되고 표피의 지속적인 증식은1. 이것은 10-20 주에 있는 피부에 있는 유두종 발달로 이끌어 내고, 그 후에 유두종은 악성 종양, 편평상피세포 암(SCC)2로 전환하기 시작합니다. 그러나, 유두종의 10% 미만은 악성으로 진행되지만, 이 비율은 또한 마우스2,18의유전적 배경에 의존한다. 수십 년 동안 어떤 종류의 세포가 악성 종양으로 이어지는 종양에서 처음 돌연변이되었는지는 알려지지 않았지만, 일부 연구는 양성 유두종19,20과비교할 때 악성 종양에서 명확하게 뚜렷한 특징을 보고했음에도 불구하고. 그러나, 최근 연구 결과는 DMBA-TPA 모형21에있는 종양 대형의 클론 기원에 우리의 이해를 크게증가시켰습니다. 22. 23.골수 유래 상피 세포와 모낭 줄기 세포 모두 종양 형성에 기여하는 것으로 입증되었다22. 단계 특정 혈통 추적 연구 결과는 양성 유두종이 단클론 기원의 다는 것을, 그러나 새로운 상피 세포 인구를 모집한다는 것을 밝혔다21,23. 그러나, 세포 클론 중 하나만 발암을 위한 드라이버로 기능; 그것은 Hras 돌연변이23을포함합니다. 암종 형성에 대한 진행은 클론스윕(23)과연관된다.
발암 물질 DMBA 유두종 형성을 시작 하 고 TPA 종양 성장을 촉진. 따라서, 종양 개시는 TPA 치료 기간 전에 실험을 중단시킴으로써 촉진으로부터 별도로 연구될 수 있다. 종양 진행이 매주 연구됨에 따라 연구 전반에 걸쳐 상세한 종양 성장 분석을 위한 좋은 기회를 제공한다. 종양은 외부 화학 물질에 의해 생성되기 때문에 생식선의 종양 발생 돌연변이가 필요하지 않습니다. 따라서, 종양 발생에 대한 유전 적 배경 (예를 들어, 녹아웃 / 이식 유전자 대 야생 유형)의 효과를 연구하는 것은 간단합니다2. 요약하면, DMBA/TPA 피부암 모델은 종양 진행에서 면역 계통의 역할을 연구할 뿐만 아니라 종양 개시 및 승진 단계의 독립적으로 또는 상호 의존적으로 평가하는 데 특히 유용한 접근법이다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig1a.jpg"> 도 1: DMBA-TPA-유도 피부 발암 모델 개요. 발암 물질 DMBA는 모델의 개시 단계에서 DNA 돌연변이를 유도하기 위해 국소적으로 적용된다. 성장 촉진제 TPA는 촉진 단계 동안 세포 증식을 향상시키기 위해 일주일에 2회 투여되며, 피부의 유두종 발달로 이어진다. 유두종 반응이 고원에 도달한 후, 보통 마우스의 유전적 배경에 따라 15-20주 이내에 동물을 희생한다. 유두종의 작은 비율은 20-50 주 안에 SCC로 더 발전할 수 있습니다. 개시 및 조기 승격 단계에서 초기 이벤트를 연구하기 위해 샘플을 수집할 수 있습니다(예: 두 번째 TPA 적용 직후). 19주 간의 치료 후 C57BL/6 마우스 피부에 유두종의 대표적인 사진과 헤마톡실린 및 에오신 스테인드 단면이 표시됩니다. 배율 표시줄 = 0.1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60445/60445fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<table><tbody><tr><td>1000 ul rpt XL 눈금 필터 팁(멸균), 리필</td><td>Starlab</td><td>S1182-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>300 ul RTP 눈금 필터 팁(sterile), 리필</td><td>Starlab</td><td>S1180-9710-C</td><td></td></tr><tr><td>7,12-Dimethylbenz[a]anthracene (DMBA)</td><td>Sigma</td><td>D3254-100MG</td><td>삼키면 유해하며 암을 유발할 수 있습니다. 빛으로부터 보호하여 보관하십시오.</td></tr><tr><td>아세톤</td><td>시그마</td><td>1000141011</td>는 <td>빠르게 증발하며 인화성이 있습니다.</td></tr><tr><td>Attane vet 1000 mg/g</td><td>Piramal Critical Care Limited</td><td></td><td>흡입용 액체 이소플루란</td></tr><tr><td>배터리로 작동되는 클리퍼 Isis</td><td>Albert Kerlb GmbH</td><td>GT421</td><td>모피 면도용</td></tr><tr><td>CONTRAfluran-Restgasfilter</td><td>ZeoSys GmbH</td><td></td><td>마취용</td></tr><tr><td>Linex Nature N1030 Ruler 30 cm</td><td>Staples Business Advantage</td><td>60383</td><td>유두종</td></tr> <tr><td>측정용중간 CO2 챔버 300 x 200 x 200mm - Red</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN045AR</td><td>희생</td></tr><tr><td>Mekasoft</td><td>Mekalasi</td><td>23008</td><td>테이블 커버</td></tr><tr><td>마우스 (Balb / c JRj)</td> <td>Janvier labs</td><td></td><td>다른 변종도 가능한</td></tr><tr><td>마우스 (C57BL / 6JRj)</td> <td>Janvier labs</td><td></td><td>다른 변종도 가능</td></tr><tr><td>Panasonic Lumix DMC-FS5 디지털 카메라</td><td>Panasonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>Merck</td><td>30525-89-4</td><td>조직학 샘플용</td></tr><tr><td>Phorbol 12-myristate 13-acetate 일명 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)</td><td>Enzo</td><td>BML-PE160-0001</td><td></td></tr><tr><td>정밀 저울 PLJ-C/PLJ-G</td><td>KERN & SOHN GmbH</td><td>PLJ 600-3CM</td><td></td></tr><tr><td>Pre-Set CO2 System-2 Chamber-S/S Housing</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN044BX</td><td>희생용</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>핵산 샘플용</td></tr><tr><td>Tacta 피펫 100-1000 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729070</td><td></td></tr><tr><td>Tacta 피펫 20-200 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729060</td><td></td></tr><tr><td>UNO 마취키 필러</td><td>Scintica 계측 Inc.</td><td></td><td>마취용</td></tr><tr><td>UNO 안면 마스크 마우스</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>마취용</td></tr><tr><td>UNO FM2200 유량계</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>마취용</td></tr><tr><td>UNO 가스 배기 장치</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>마취용</td></tr><tr><td>UNO 인덕션 박스</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>마취용</td></tr><tr><td>UNO200VAP Vaporizer</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>마취용</td></tr></tbody></table>

디메틸벤드[a]안트라세네 및 12-o-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(dmba-tpa)를 이용한 화학적 유발 피부 발암 모델

Chemical-Induced Skin Carcinogenesis Model Using Dimethylbenz[a]Anthracene and 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

암은 가장 치명적인 인간의 질병 중 하나입니다. 실험적인 암 모형은 종양 진행을 승진시키기에 있는 다른 세포 모형 및 유전자의 복잡한 상호 작용에 통찰력을 얻고 다른 치료 접근의 효험을 시험하기 위한 발판을 제공하기 위하여 중요합니다. 가장 일반적으로 사용되는 실험적 염증성 암 모델 중 하나는 DMBA-TPA 2단계 피부 발암 모델입니다. 종양 형성은 두 가지 다른 화학 물질, 7,12-디메틸벤드[a]안트라세네(DMBA) 및 12-O-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(TPA)의 국소 적용에 의해 이 모델에서 유도되며, 이는 함께 피부에 유두종 형성을 일으킨다. 1 차적인 결과는 피부에 있는 유두종 대형이기 때문에, 모형은 종양 개시 (종양 자유로운 생존) 및 종양 진행 (눈에 보이는 종양의 수 그리고 크기) 둘 다를 해결하는 이상적이고, 믿을 수 있고, 재현가능한 방법입니다. DMBA-TPA 치료의 효과는 염증 메커니즘을 통해 전달되며, 이 모델은 종양 형성에서 면역 계통의 역할을 연구하는 데 특히 적합합니다. 그러나 이 모델은 화학 물질을 적용할 수 있는 피부 및 기타 표면으로 제한됩니다. 이 문서에서는 모델을 성공적으로 사용할 수 있는 자세한 프로토콜이 제공됩니다.

주요 결과는 치료 또는 유전자형 그룹 사이의 생존 (즉, 유두종 무료) 시간입니다. 두 번째 결과는 각 그룹에서 주당 유두종의 수입니다(그림 2). 예상 된 결과는 유두종 자유 시간 및 실험 (2 개 이상의) 그룹 사이의 유두종의 수에서 통계적으로 유의한 차이이다. 유두종의 수를 계산하고 프로모션 (TPA) 단계에서 곡선을 그리는 것이 좋습니다 그 단계에서 그룹 간의 차이의 아이디어를 얻을 수 있습니다. 실험을 너무 일찍 종료하는 것은 통계적으로 유의한 차이를 숨길 수 있습니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig2b.jpg"> 도 2: DMBA-TPA 유도 피부 발암 모델의 주요 결과. 마우스 피부와 두 가지 주요 결과에 유두종의 대표적...

2 단계 피부 발암은 2개의 국소 적용된 화학제품에 의해 유도됩니다. 돌연변이 원 7,12-디메틸벤젠[a]anthracene)은 표피 세포의 돌연변이를 일으키고 일반적인 성장 자극기 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-아세테이트의 지속적인 적용은 피부 유두종 형성을 가속화합니다.

디메틸벤드[a]안트라세네 및 12-O-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(DMBA-TPA)를 이용한 화학적 유발 피부 발암 모델

Cancer is one of the most devastating human diseases. Experimental cancer models are important to gain insight into the complex interplay of different ...

이 두 단계 피부암 모델은 피부암에서 염증의 역할에 대한 연구를 가능하게 하고 종양 진행과는 별개의 과정으로서 종양 개시를 연구할 수 있게 한다. 이 모형에 있는 종양 형성은 화학적으로 유도되고 환경 요인 또는 치료 후보의 효력을 공부하기 위하여 녹아웃 긴장의 사용을 허용합니다. 이 모델은 암에서 면역 체계와 혈관 신생의 역할을 연구하는 데 적합합니다.그것은 인간 적인 환자에 있는 편평상피 세포 암에 유사한 질병 병리를 보여줍니다. 이 방법은 비교적 수행하기 쉽지만 정확한 타이밍이 필수적입니다. 발암물질인 DMBA를 취급할 때 적절한 안전 조치를 취하는 것도 중요합니다.실험을 시작하기 전에, 싸움과 피부 병변을 피하기 위해 별도의 케이지에 공격적인 7 ~ 9 주 된 마우스를 보관하십시오. 피부 유두종 유도의 경우 먼저 실험 동물의 뒤쪽 스킨을 면도하고 마우스를 개별적으로 계량합니다. 면도 후 48시간 후, 파이펫을 사용하여 200마이크로리터의 DMBA를 각 마취 마우스의 면도 부위에 적용합니다.피부 유두종 프로모션의 경우, DMBA 적용 후 7일 후 실험종료까지 일주일에 두 번 200마이크로리터의 TPA 5마이크로그램으로 피부를 치료한다. 유두종 동물을 검사하고 매주지도에 각 개별 유두종의 크기를 촬영하고 기록합니다. 직경이 1밀리미터보다 큰 만져볼 수 있는 질량은 1주일 이상 남아 있는 경우 유두종으로 간주됩니다.종양 반응이 고원에 도달하면, 마지막 TPA 적용 후 24시간 후 동물로부터 적절한 시료 물질을 수확하고 면역히스토컬 분석을 위해 피부의 전체 두께 조각을 수집한다. 생검 펀치를 사용하여 유두종 및 비 유두종 피부 샘플에서 유전자 발현 및 단백질 아나일스를 수집하고 메스를 사용하여 면역 화학 적 분석을 위해 유두종 및 비 유두종 피부에서 조각을 수집합니다. 그런 다음 원하는대로 흐르는 세포 측정 분석을 위해 림프절과 비장의 조각을 배출하는 피부를 수집합니다.유두종 자유 시간 및 실험 군 간의 유두종의 수에 통계적으로 유의한 차이는 전형적으로 DMBA TPA 종양 모델에서 관찰된다. 조직학적 분석은 유두종의 구조, 피부의 형태 또는 관심있는 면역 세포의 침투를 연구하는 데 적합합니다. DMBA와 TPA를 피부에 고르게 바르고 일관된 간격으로 TPA를 적용하는 것이 필수적입니다.또한 유두종을 정기적으로 계산하는 것이 중요합니다. 종양 형성의 수와 시간에 영향을 미치는 메커니즘은 면역 조직 화학, 유동 세포측정, 정량적 PCR 및 단백질 분석을 포함한 다른 방법을 사용하여 연구될 수 있다. 이 종래의 기술은 종양 개시 및 진행에 대한 관심의 다른 유전자, 환경 요인 또는 치료법의 효과를 연구하기 위해 쉽게 적응하고 적용될 수 있다.DMBA는 발암성이고 아세톤이 빠르게 증발하기 때문에 기술을 수행할 때 주의가 필요합니다. 적절한 호흡 마스크와 유동 캐비닛의 사용을 권장합니다.

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우리는 빠르게 친 염증성 에이전트 dextran 황산 나트륨 (DSS)의 세주기에 의해 다음과 일관되게 인간의 대장염에서 본 것과 morphologic와 분자 유사성과 마우스에 결장 종양을 생성 genotoxic 에이전트 azoxymethane (AOM)의 어느 관리의 프로토콜을 보여줍니다 암을 관련.

Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

광역학 요법(PDT)은 폐암 치료를 위한 비침습적 비수술적 방법입니다. 광감작제는 종양 조직에 선택적으로 축적되어 산소와 적절한 파장의 빛이 있는 상태에서 종양 세포를 사멸시킵니다. 이 프로토콜 비디오에서는 PDT 기반 방법을 사용하여 폐암 세포에서 잠재적인 광감작제의 광독성 가능성을 평가합니다.

체외 광독성 분석법: 폐암 세포에서 광감작제의 광독성 가능성을 평가하기 위한 PDT 기반 방법

이 비디오는 화학 물질의 국소 적용에 의한 종양 시작을 연구하기 위해 2단계 피부 발암을 유도하는 절차를 설명합니다. 첫 번째 단계에서는 줄기세포에 돌연변이를 일으켜 종양 형성을 시작하는 마우스 모델의 피부에 돌연변이 유발 물질인 DMBA를 적용한 다음 피부 유두종 형성을 가속화하는 성장 자극제인 TPA를 적용합니다.

화학적 유도 2단계 피부 발암 모델: 피부암의 실험적 생체 내 마우스 모델

이 비디오는 인간의 피부를 모방한 마우스 모델인 인간화 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법을 설명합니다. 우리는 피부에 홍반 또는 부종을 유발할 수 있는 UV 방사선의 최소 홍반량(MED)을 결정합니다. 이 방법은 자외선 민감성을 줄이는 데 사용되는 약물의 효능을 알아내는 데 도움이 될 수 있습니다.

최소 홍반성 선량 분석: 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법

발암 성 암 세포와 암 미세 환경 사이의 상호 작용을 포함하는 프로세스입니다. 분자 이벤트를 해부 한 암을 개발하는 동안 여러 단계에서 서로 다른 세포 집단을 분리해야합니다. 기저 세포 암종에 대한 마우스 모델을 사용하여, 우리는 발암 동안 세포 분석을위한 프로토콜을 설명합니다.

세포 인구 분석 피부 발암 중

표피의 멜라닌은 공정한 피부가 자외선에 민감한 인간의 쥐 모델 포스 콜린의 국소 응용 프로그램에 의해 유도된다. 최소 홍반 량 (MED) 분석에 의해 측정 된 강력한 UV-매개 성 염증 (자외선)으로부터 보호 어둡게 피부 표피에있는 캠프 수준의 약리학적인 조작.

인간 답게 된 마우스 모델에서 표피 멜라닌 및 보호에 대하여 햇볕의 약물 유도

이 프로토콜은 간극 결합 채널을 통해 세포 간 통신을 측정하는 메스 로딩 형광 염료 전송 기술에 대해 설명합니다. 갭 접합부 간 통신은 조직의 항상성을 유지하고이 세포 신호의 중단은 건강에 악영향을 갖고있는 중요한 세포 과정이다.

갭 접합부 세포 간 통신 : 천연 제품의 독성 물질과 독소의 반작용을 평가하기위한 기능성 바이오 마커, 보건 혜택

여기 우리는 잠재적인 diabetogenic xenobiotic 화학 물질 식별는 xenobiotics에 의해 선생님 inductions을 심사에 대 한 마우스 췌 장 섬 세포 격리 프로토콜을 제시.

Diabetogenic 환경 화학 물질에 대 한 Murine 췌 장 섬 세포 기반 검사

다음 절차는 유전자 조작 된 마우스 모델을 사용 하 여 뮤 린 등 피부에 멜 라 세포 종양 개시의 공간적 및 시간적 제어를 위한 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 거시적 뿐만 아니라 현미경 피부 흑색 종 개시를 설명 합니다.

돌연변이 멜 뮤 린 줄기 세포에서 시작 하는의 공간적 및 시간적 제어

이 프로토콜의 목적은 마우스 피부에서 치명적이지 않은 수준의 활성 산소 종(ROS)의 일시적인 생체 내 생산을 유도하여 조직의 생리적 반응을 더욱 촉진하는 것입니다.

활성 산소 종의 전환 가능한 protoporphyrin IX 의존성 광생성에 의한 마우스 피부의 줄기 세포 틈새 및 조직 재생 자극 in situ

tBHP를 이용한 HNM 조기 노화 유도 표준화 프로토콜, 성장 정지, SA-β-갈락토시다제 활성, SASP 인자 등 주요 노화 지표 분석의 표준화 프로토콜.

테르트-부틸 하이드로퍼옥사이드를 이용한 스트레스 유발 조기 노화 유도 프로토콜

학습하세요 DMBA-TPA 화학적 유발 피부 발암 모델을 통해 염증이 피부암에서 어떤 역할을 하는지 연구하는 방법을. 이 모델은 종양 발생과 진행 메커니즘을 분석하고 면역 체계 및 혈관신생 연구에 활용됩니다.

디메틸벤드[a]안트라세네 및 12-O-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(DMBA-TPA)를 이용한 화학적 유발 피부 발암 모델

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