Name: 관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후의 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: 배우세요 관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후 예측을 위한 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커 활용법. 이 방법은 혈관 손상 정도와 수복 메커니즘을 평가하여 주요 심혈관 부작용 위험을 측정합니다.

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저자는 기관 프로그램 E015의 지원에 감사드립니다; 및 폰도 섹터 FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

이 프로토콜은 인간 연구 윤리 위원회의 제도적 지침을 충족합니다.
1. 관상 동맥 혈관 조영술, 초음파 및 혈액 샘플링
<ol><li>관상 동맥 개입 전에 기준 임상 및 인구 통계 학적 정보를 요청하십시오. 개인의 데이터를 수집: 나이, 성별, 현재 흡연 상태, 체질량 지수 (BMI), 고혈압, 이상지질혈증, 당뇨병 mellitus, 약물, 현재 관상 동맥 혈관 조영술에 대한 표시.</li>
	<li>방사형 접근법을 사용하여 심장 카테터화를 통해 관상 동맥 혈관 조영술을 수행합니다. 이 절차는 전문 심장 전문의가 혈역학 실에서 형광 투시경 가이드하에 수행해야합니다. 참고: 귀중한 선박을 식별합니다. 본 연구를 위해, 귀중한 혈관은 1.5 mm 보다 큰 단면도및 50% 이상의 루멘 협착을 가진 동맥으로 정의되었습니다.</li>
	<li>혈관 내 초음파 카테터를 관심 영역으로 진행하고 이미지를 기록합니다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 가장 작은 발광 영역을 찾고 측정합니다.</li>
	<li>관상 동맥 카테터를 사용하여 플라크에 가장 가까운 위치에서 10 mL의 혈액을 수집하십시오.</li>
	<li>환자 퇴원 후, 정기적인 의학적 평가를 예약하여 연구 종점을 추적합니다. 전화 연락이 불가능하거나 의사 방문이 2개월 이상 지연되는 경우, 승인된 사람(이전에 설계)에게 연구 끝점을 확인하도록 요청하십시오. 참고 : 1) 심혈관 사망, 2) 새로운 심근 경색, 3) 관상 동맥 조영술에 의해 입증 된 바와 같이 24 시간, 4) 스텐트 레스코시스 내 의학적 방문을 자극하는 불안정한 협심증, 5) 보상의 에피소드 를 고려하십시오. 임상주의가 필요한 심부전.</li>
</ol>2. 순환 MPC의 결정(그림 2)
<ol><li>수집에서 1 시간 이내에 혈액을 처리합니다. 수집된 혈액의 6 mL을 15 mL 원점 튜브로 옮기고 1x 인산완충식염수(PBS), pH=7.4로 1:1(v/v)을 희석한다.</li>
	<li>3개의 시험관에 2mL의 밀도 그라데이션 매체를 추가합니다. 밀도 그라데이션 배지를 포함하는 각 시험관으로 희석된 혈액의 3개의 동등한 부피 aliquots를 주의 깊게 전송합니다. 참고 : 밀도 그라데이션 배지 및 희석 된 혈액의 총 부피는 시험관 최대 용량의 3/4를 초과해서는 안됩니다.</li>
	<li>1,800 x g,4 °C에서 30 분 동안 원심 분리기. 층 사이의 계면에서 밴드를 새로운 튜브로 옮긴다. 1,800 x g,4 °C에서 6 분 동안 2 mL의 PBS 및 원심 분리기를 추가하십시오. 펠릿에는 MPC가 포함됩니다.</li>
	<li>펠릿을 여러 번 씻으십시오. 이전 용액을 흡인하고 신선한 PBS에서 세포 펠릿을 부드럽게 다시 놓습니다. 후속 세차의 경우, 1,800 x g,4 °C에서 원심 분리기를 2 분 동안. 6x 과정을 반복하십시오.</li>
	<li>PBS의 1 mL에 있는 세포 펠릿을 다시 중단하십시오. 세포 현탁액의 20 μL을 0.4% 트라이판 블루와 혼합하고 1:1(v/v)로 희석하였다. 혈세포계에 한 방울을 바르고 가벼운 현미경으로 얼룩지지 않은 세포를 계산합니다.</li>
	<li>MpC 결정을 진행합니다. 라벨 5 mL 유세포 분석 튜브 및 알리쿼트 아웃 1 x 10 튜브 당6 세포. 상응하는 이소타입-매칭 대조군 항체를 준비한다. 1,800 x g,4 °C에서 6 분 동안 원심 분리기를 폐기하고 상급체를 폐기한다.</li>
	<li>1x PBS (pH = 7.4), 2 mMM에 의해서인에이페디아미네테트라아세트산(EDTA), 0.05% 소 혈청 알부민(BSA)으로 구성된 항체 인큐베이션 용액의 100 μL에서 희석된 1차 항체를 첨가한다. 10 초 동안 다시 중단하고 4 °C에서 20 분 동안 배양하고 빛으로 보호합니다. 프로토콜은 PBS에서 4% 파라포름알데히드에 림프구를 고정하고 4°C에서 최대 24시간까지 샘플을 저장함으로써 이 단계에서 일시 중지될 수 있다. 참고: 본 프로토콜에 사용된 1차 항체의 최종 농도는 CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50이었다.</li>
	<li>1,800 x g,4 °C에서 2 분 동안 원심 분리기를 폐기하고 상급체를 폐기한다. 1x PBS(pH = 7.4), 2 mM EDTA의 500 μL에서 다시 일시 중단합니다.</li>
	<li>유세포 분석 수행. 이색성 일치 대조항체를 사용하여 배경 염색을 설정합니다. 그런 다음 FSC/SSC 플롯에서 확산되는 림프구를 선택하여 잔류 과립구, 세포 파편 및 플롯에서 일반적으로 왼쪽 에 있는 다른 입자를 배제합니다. 이러한 분포는 100 %로 간주됩니다.</li>
	<li>일반적인 면역 표현형 CD45+ 및 CD34+와세포의 높은 수를 포함하는 게이트를 사용합니다. 이중 양성 면역 체형의 경우 이전에 식별 된 게이트를 사용하여 CD45+, CD34++ KDR (VEGFR-2)+ + CD133+또는 CD184+를추가하십시오. 특정 셀 표면 마커로 MPC 하위 모집단을 식별합니다. 게이트된 이벤트의 백분율로 보고합니다.</li>
	<li>MpC의 주요 하위 채우기를 식별합니다. 본 연구에서 주요 면역표현형은 CD45+ CD34+CD133+ , CD45+CD34+CD184+CD184+CD184+, CD45+CD34+KDR+CD133+ 및 CD45+CD44 + CD44 + 참고: 사용된 세포 표면 마커는 CD45 (림프구), CD34 (내피 및 / 또는 혈관 세포), KDR (VEGFR-2, 내피 세포의 막 마커), CD133 (내피 전구 세포), 및 CD184 (조혈 줄기 세포 및 내피 세포)였다.</li>
</ol>3. 플라즈마 수용성 바이오마커의 결정
<ol><li>효소 연계 면역흡착 분석(ELISA)을 사용하여 SICAM-1 및 MMP-9의 농도를 결정합니다(도3,위행).<ol>
<li>혈액 샘플을 3,000 x g,실온에서 5 분 동안 원심 분리하고 플라즈마를 수집합니다.</li>
		<li>표준, 샘플 튜브 및 제어 튜브에 라벨을 지정합니다. ELISA 키트에 제공된 세척 버퍼로 2x세척하여 분석판에 미리 코팅된 웰을 평형화한다.</li>
		<li>표준, 샘플 및 컨트롤을 웰로 전송합니다. 90 분 동안 37 °C에서 밀봉하고 배양하십시오. 참고: 우물을 완전히 말리지 마십시오.</li>
		<li>내용물 버려서 비오틴 검출 항체를 추가한다. 밀봉 및 60 분 동안 37 °C에서 배양.</li>
		<li>내용물의 것을 버리고 3 x를 씻으십시오. 플라크를 밀봉하고 스트렙타비딘 작업 용액으로 순차적으로 인큐베이션한 다음 37°C에서 테트라메틸벤지딘 기판을 30분 동안 가볍게 보호합니다. 배양 사이에 3x를 씻으소서. 색상이 발생하면 정지 용액을 추가하고 마이크로 플레이트 ELISA 리더에서 광학 밀도 흡광도를 읽습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>면역-자기 다중화 분석기를 사용하여 종양 괴사 인자 알파(TNFα) 및 인터류키친 1 베타(IL-1β)의 농도를 결정한다(도3,하부 행).<ol>
<li>표준, 샘플 튜브 및 제어 튜브에 라벨을 지정합니다.</li>
		<li>30s. 비드 현탁액을 적당한 크기의 튜브로 옮은 다음 멀티플렉싱 분석 판의 우물로 자성 비드 바이알을 소용돌이치게 한다. 주기적인 소용돌이는 구슬의 침전을 피합니다.</li>
		<li>핸드헬드 마그네틱 플레이트 와셔를 단단히 삽입합니다. 구슬이 각 우물의 바닥에 축적될 때까지 2분 간 기다렸다가 싱크대 나 폐용기 위에 휴대용 자기 판 와셔와 플레이트 어셈블리를 빠르게 반전시다. 우물 내부의 구슬을 유지하기 위해 휴대용 자기 플레이트 와셔를 사용하는 것을 기억하십시오.</li>
		<li>각 우물에 150 μL의 세척 버퍼를 추가하고 구슬이 바닥에 축적 될 수 있도록 30 s를 기다립니다. 3.2.3단계에서와 같이 내용을 폐기하십시오. 그런 다음 25 μL의 범용 분석 버퍼(키트에 제공)를 추가하고 준비된 표준, 샘플 및 제어의 25 μL을 추가합니다.</li>
		<li>접시를 밀봉하고 500 rpm에서 일정한 흔들림으로, 빛보호, 실온에서 적어도 60 분 동안 배양. 양자택일로, 4°C에서 밤새 배양하고, 빛으로 보호되고, 가능하면 500 rpm에서 일정한 흔들림을 갖는다.</li>
		<li>세척 버퍼 150 μL을 추가하여 2x세척하고 30s를 기다립니다. 2분 정도 기다렸다가 싱크대 나 폐통을 뒤집습니다.</li>
		<li>검출 항체 혼합물 25 μL로 순차적으로 인큐베이션하고 실온에서 스트렙타비딘-PE 용액 25 μL을 30 분 동안 밀봉하고 500 rpm에서 일정한 흔들림으로 밀봉하고 빛으로 보호합니다. 3.2.6 단계에서 설명한 바와 같이 인큐베이션 사이에 2x를 세척합니다.</li>
		<li>판독값을 가져옵니다. 읽기 버퍼의 120 μL을 추가합니다. 접시를 밀봉하고 500rpm에서 일정한 흔들림으로 가벼운 보호, 실온에서 5 분 배양. 멀티플렉싱 분석 리더에서 읽기를 실행합니다. 각 측정값에 따라 판독 매개변수를 조정합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+coronary+artery+disease%3A+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li>
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<li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li>
<li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22American+Society+for+Artificial+Internal+Organs+Journal%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li>
<li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy%3A+the+BIOCRT+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline%2C+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01(2019).</li>
<li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790(2010).</li>
<li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li>
<li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

영향 받은 관상 동맥에서 혈액 수집은 어려울 지도 모릅니다. 때로는 관상 동맥에 거의 접근 할 수 없습니다. 이 경우 정맥 부비동에서 샘플링하는 것이 대안이 될 수 있습니다. 우리는 관상 동맥에 있는 순환 biomarkers 대 정맥 부비동에 있는 비교하는 유효성 검사 시험을, 유의한 다름 없이 수행했습니다. 그러나, 순환 바이오마커의 성능은 관상 동맥 샘플링에 대해서만 검증되었다. 따라서 정맥 부비동으로부터 얻은 바이오마커의 성능은 아직 탐구되어야 합니다.
혈액 수집 후 처음 3 시간 이내에 MpC에 대한 샘플을 처리하는 것이 가장 좋습니다. 따라서 심장학 팀과 실험실 연구자 간에 좋은 의사 소통을 확립해야합니다. MPC 격리 동안, MPC 펠릿을 세척할 때 밀도 구배 준비 중에 혈액 샘플을 증착할 때 주의를 기울여야 합니다. 마지막으로, 편의를 위해, 우리는 항상 세포 분석 튜브로 세포를 전송하고, 1 차 항체를 추가하고, 세포를 4 °C에서 밤새 고정 및 저장하고, 다음 날...

관상 동맥 혈관 성형술 및 스텐트 삽입은 관상 동맥 질환 (CAD)을 가진 환자를위한 인양 절차를 나타냅니다. 그러나, 심장 혈관 죽음, 심근 경색, 관상 동맥 재협착 및 협심증 또는 보상 심부전의 에피소드를 포함하여 중요한 불리한 심장 혈관 사건 (MACEs는, 관상 동맥 내정간섭 후에 달, 병원에 예정되지 않은 방문을 자극하는 생길 수 있습니다. MACEs는 전 세계적으로 일반적이며, 그들의 morbi 사망률은 높은1.
관상 동맥 허혈성 상해는 그들의 분화 능력 및/또는 혈관 회복 잠재력 때문에 MPC의 동원을 관련시키는 초기 혈관 반응 및 회복 기계장치를 유도합니다, 세포 간 접착 분자 같이 수용성 분자의 생산 뿐만 아니라 (ICAMs), 매트릭스 금속 loloproteinases (MMPs), 및 반응성 산소 종, 세포 접착, 반사성, 조직 을 반영하는. 플라크 특성 및 관상 동맥 복잡성과 같은 본질적인 혈관 특징이 MACE를 예측하는 데 사용되었지만, 일부 연구는 관상 동맥 내피에서 발생하는 부상 및 수리 메커니즘과 관련된 바이오 마커가 관상 동맥 혈관 성형술2,4,4에제출 된 CAD 환자의 심장 혈관 사건의 조기 식별 및 예후에 매우 유용 할 수 있다고 제안했습니다.
COR 손상 및 수리의 근본적인 메커니즘을 이해하는 데 지속적인 관심은 관상 동맥 샘플링이 혈관 손상을 더 밀접하게 반영하고 수리하기 때문에 관내 순환 바이오 마커를 연구하는 연구자에게 동기를 부여했습니다6. 그러나, 인간 연구에서 관상 동맥 바이오 마커의 특성화는 부족했다7,8,9. 따라서 본 연구의 목적은 관상 동맥 순환 MFC 및 가용성 분자의 양을 결정하고, 혈관 손상 및 수리를 모두 반영하는 방법을 설명하고, 이러한 바이오마커가 MACE및 관상 혈관 성형술을 받은 CAD 환자의 임상 예후와 연관되어 있는지 여부를 보여주기 위한 것이었다. 이 방법은 혈관 손상에 가장 가까운 샘플링 위치에 의해 얻어진 혈관 관련, 순환 MPC 및 수용성 분자의 사용을 기반으로합니다. 그것은 또한 하지 호 혈에 대 한 임상 연구에 대 한 유용할 수 있습니다., 스트로크, 혈관 염, 정 맥 혈전증, 그리고 혈관 부상 및 수리를 포함 하는 다른 부상.

<table><tbody><tr><td>BSA</td><td>Roche</td><td>10735086001</td><td>소 혈청 알부민(BSA)을 완충제, 안정제, 표준 및 혼합용입니다.</td></tr><tr><td>캘리브레이션 비드</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td> <td># 130-093-607</td><td>MACQuant 캘리브레이션 비드는 0.05 % 아지드 나트륨을 함유 한 수용액으로 공급됩니다. 최대 100 회 테스트를위한 3.5 ml</td></tr><tr><td>CD133 / 1 (AC133) -PE</td><td>Milteny Biotec / MACS</td> <td># 130-080-801</td> PBS / EDTA 완충액 CD184 (CXCR4) -PE-VIO770 Miltenyi Biotec / MACS # 130-103-798<td>에서 R-Phycoerythrin과 결합 된 항체</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>단클론, 동형 재조합 인간 IgG1, 공액</td></tr><tr><td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-093-601</td><td>PBS/EDTA 완충액</td></tr><tr><td>CD34-FITC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-081-001</td><td>단클론 항체 클론 AC136은 CD34</td></tr><tr><td>CD45- VioBlue</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-092-880</td><td>의 클래스 III 에피토프를 확인합니다.단클론 CD45 항체, human conjugated</td></tr><tr><td>Conical Tubes</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>#339651</td><td>15ml 원뿔형 원심분리기 튜브</td></tr><tr><td></td><td>FALCON Corning Brand</td><td>#352052</td><td>5 mL 폴리스티렌 라운드 바닥 튜브.12x75 스타일. 메 마른.</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BIO-RAD</td><td>#161-0729</td><td>중금속, (Pb로서) < 10ppm, 철 < 0.01%, 그대로 < 1ppm, 불용성 < 0.005%</td></tr><tr><td>Improved Neubauer</td><td>브랜드 없음</td><td>카탈로그 번호 없음</td><td>세포 계수를 위한 혈구계. (범위 0.1000mm, 0.0025mm2)</td></tr><tr><td>K2 EDTA 혈액 수집 튜브</td><td>BD Vacutainer</td><td>#367863</td><td>라일락 플라스틱 진공 튜브(K2E) 10.8mg, 6mL.</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Stemcell Technologies</td><td>01-63-12-002-A</td><td>멸균 및 내독소의 존재 여부를 확인했습니다. 밀도 : 1.077&plusmn; 0.001g/mL</td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td></td>#SZBF0920V <td>생물학적 시료 고정, (분말, 95%)</td></tr> <tr><td>피펫 이송 1,3mL</td><td>CRM Globe</td><td>PF1016, PF1015</td><td>이송 피펫은 더 높은 정확도로 액체 이송을 용이하게 하는 도구입니다.</td></tr><tr><td>시험관</td><td>KIMBLE CHASE</td><td>45060 13100</td><td>내열 시험관. 크기/캡 13 x 100 mm</td></tr></tbody></table>

관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후의 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

주요 불리한 심장 혈관 사건 (MACEs) 관상 동맥 허혈성 상해 때문에 관상 동맥 혈관 성형술을 겪고 있는 환자의 심장 혈관 예후에 부정적인 영향을 미칩니다. 관상 동맥 손상의 정도 및 혈관 수선 기전은 MACEs의 미래 발달에 영향을 미치는 요인입니다. 플라크 특성 및 관상 동맥 복잡성과 같은 본질적인 혈관 특징은 MACEs에 대한 예후 정보를 입증했습니다. 그러나 관상 동맥 내 순환 바이오마커의 사용은 관상 동맥 손상 및 수리와 관련된 동적 메커니즘을 보다 밀접하게 반영하기 때문에 MACE의 조기 식별 및 예후를 위한 편리한 방법으로 가정되었습니다. 단핵 전구 세포 (MPC)의 하위 집단의 수뿐만 아니라 염증, 세포 부착 및 수리를 반영하는 가용성 분자의 농도와 같은 혈관 성형술 중 관상 동맥 순환 바이오 마커의 결정은 향후 개발 및 MACEs의 예후 평가 6 개월 후 관상 동맥 혈관 성형술. 이 방법은 MACEs의 예측과 환자의 위험 계층화에 적용 될 수있는 심혈관 예후의 예측에 관한 말초 혈액 순환 바이오 마커보다 번역 특성과 더 나은 성능에 의해 강조된다 관상 동맥 질환이 혈관 성형술을 겪고있습니다.

관상동맥, 정맥부비동 및 말초혈액을 52명의 환자로부터 채취하여 관상동맥혈관조영술을 시행하였다(도1)와고혈압 및 이상지질혈증의 높은 유병률을 보였다. 임상 후속 조치에서 11명(21.1%)이 MACEs는 관상 동맥 혈관 조영술 후 6 개월 발생 : 죽음 (n = 1), 병원 출석을 필요로하는 협심증 (n = 6), 심근 경색 (n = 2), 및 / 또는 심부전의 증거 (n = 4).
대부분의 MFC의 기준관 상동맥 농도는 MPC 하위 집단 CD34+CD133+ 및 CD45+CD133+CD133+CD184+에서더 큰 감소와 함께 MACEs(그림 4)를</str...

관상 동맥 혈관 성형술 후 심장 혈관 예후에 영향을 미치는 주요 불리한 심혈관 사건의 개발은 관상 동맥 손상 및 혈관 수리의 정도에 의해 영향을 받습니다. 새로운 관상 동맥 세포 및 수용성 바이오 마커의 사용은 혈관 손상 및 수리에 반응성으로 MACEs 및 예후의 발달을 예측하는 데 유용합니다.

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

혈관 성형술은 관상 동맥 질환을 가진 환자를 돕지만, 심혈관 사건은 여전히 절차 후에 발생할 수 있습니다. CPC와 수용성 분자가 관상 동맥 순환에서 얻어지므로 혈관 손상 및 수리 정도와 상관관계가 있을 수 있습니다. 관상 동맥 MPC 및 수용성 중재자 수준은 그러므로 관상 동맥 혈관 성형술을 겪고 있는 관상 동맥 질병을 가진 환자에 있는 심장 혈관 사건 및 예후를 추정하기 위하여 이용될 수 있습니다.MPC 및 수용성 분자는 또한 재발사지 허혈성 치기와 같은 다른 허혈성 조정에서 생기는 합병증 및 예후를 추정하기 위하여 이용될 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 에두아르도 베라 고메즈와 알레한드로 에르난데스-파트리시오, 실험실 기술자, 카렌 드 라 베가 모레노, 카를로스 자모라-알레만, 학부 생학생이 될 것입니다. 또한 가브리엘라 알렉산드라 도밍게즈 페레즈, 과학 학생의 석사, 알베르토 멜코르 로페즈, 박사 과정 학생, 마리오 안토니오 텔레즈 곤잘레스, 과학 협력자 의 석사입니다.수집 1 시간 이내에 수확 된 혈액 샘플의 6 밀리리터를 15 밀리리터 원뿔 관으로 옮기고 PBS에서 1 대 1 비율로 혈액을 희석시하십시오. 밀도 그라데이션 배지 2밀리리터를 3개의 시험관에 추가하고 희석된 혈액의 3개의 동일한 알리쿼트를 각 밀도 그라데이션 배지 튜브에 조심스럽게 전달합니다. 원심분리로 세포를 분리하고 인터페이스에서 세포를 새로운 튜브로 옮긴다.수집된 세포를 PBS 2밀리리터에서 6분간 1회 세척한 후, 2분간 세척당 신선한 PBS 2밀리리터로 6개의 세척을 세척합니다. 마지막 세척 후, 계산을 위해 PBS의 1 밀리리터에 MPC 함유 세포 펠릿을 다시 중단하고 5 밀리리터 유동 세포 측정 튜브에 1회 10을 추가한다. 원심분리에 의해 세포를 펠렛하고 각 튜브에 항체 배양 용액에 희석된 적절한 관심 항체의 100 마이크로리터를 첨가한다.세포를 추가한 항체 칵테일과 10초 간 부드럽게 섞고, 샘플을 빛으로부터 보호한 섭씨 4도에 20분간 배치합니다. 인큐베이션의 끝에서, 원심 분리하고 2 밀리머 EDTA로 보충 PBS의 500 마이크로 리터에서 펠릿을 다시 중단. 등색성 일치 컨트롤을 사용하여 배경 염색을 설정하고, 표준 프로토콜에 따라 혈류 세포측정에 의해 샘플을 분석하고, 나란히 분산 된 플롯으로 앞으로 림프구를 게이팅하여 잔류 과립구, 세포 이물질 및 기타 입자를 배제합니다.CD45 양성 CD34 양성 표현형을

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

인간의 심장 조직 심근 재생에 적합 할 수있는 다 능성 혈관 주위 전구체 세포 집단을 항구. 주연 세포와 CD34 + CD146 - - 외막 세포, 인간 심근에서 여기에 설명 된 기술은 원시 혈관, 즉 CD34 + CD146와 연관된 두 능성 간질 세포 집단의 동시 분리 및 정제를 허용한다.

인간의 심장 조직에서 혈관 주위 능성 전구체 세포 집단의 분리

우리는 심근 세포, 내피 세포, 평활근 세포 및 패치 - 매개 사이토 카인 배달 세포 주입을 조합함으로써 이식 된 세포의 생착을 향상 배송 방법으로 인간 유도 만능 줄기 세포를 구별하기위한 세 가지 신규하고보다 효율적인 프로토콜을 제안한다.

다 능성 줄기 세포는 심근 수리를위한 심장 세포를 유도

내피 전구 세포 (내피 전구 세포는) 결정적으로 허혈성 조직의 혈관 신생에 관여한다. 이 방법은 말초 혈액에서 인간 내피 전구 세포의 분리뿐만 아니라, 심장 수술 환자의 혈청 샘플에 대한 그들의 이동성 전위의 식별을 설명한다.

심장 수술 후 혈청 샘플의 영향을 건강한 자원 봉사자와 그들의 철새 잠재력에서 내피 전구 세포의 분리

이 프로토콜에서는 안전 하 고 효율적인 절차 CD133 수정+ 조 혈 줄기 세포. 제시 비 바이러스 성, 자기 polyplex 기반 접근 자기 공명 화상 진 찰을 통해 관리 셀 제품 모니터링에 관해서는 뿐만 아니라 치료 줄기 세포 효과의 최적화를 위한 기반을 제공할 수 있습니다.

성인 골 수 유래 조 혈 줄기 세포로 세포 공학 자기 대상으로 함께 있도록 예측에 관한 전송을 위한 프로토콜

여기 선물이 overexpression Mef2c, GATA4, Hand2, Tbx5, 미르-1, 그리고 미르-133 (GHMT2m) TGF-β 신호 전달의 억제와 함께 통해 기능 cardiomyocytes에 기본 미 발달 섬유 아 세포를 재 설 정할 하는 강력한 방법. 우리의 프로토콜 생성 박동 cardiomyocytes 일찍 최대 60 %7 일 후 변환 효율.

프로 거리 신호 억제 유도 Cardiomyocytes에 마우스 미 발달 섬유 아 세포의 프로그래밍 요소 중재 Potentiates

이 프로토콜 심장 조상 세포는 내 피 분화 기법을 설명합니다. 그것은 특히 혈 청 농도 셀 시드 밀도 미치는 내 피 분화 가능성에 초점을 맞추고.

낮은 혈 청 조건 하에서 심장 조상 세포에서 내 피 분화의 유도

관상 동맥 혈관신생의 시험관내 모델은 관상 동맥 혈관신생의 세포 및 분자 기전의 발견을 위해 이용될 수 있다. 부비동 및 심내막 조직의 체외 배원 배양은 VEGF-A에 반응하여 견고한 성장을 나타내고 생체 내에서와 같이 COUP-TFII 발현의 유사한 패턴을 표시한다.

관상 동맥 혈관 신생의 체외 모델

낮은 사지 절단은 중요한 사지 허혈 (CLI)에 있는 방해한 선박의 혈관 성형술 후에조차 생길 수 있습니다. 단핵 전구 세포 (MpC)는 혈관 수리를 반영합니다. 본 프로토콜은 혈관 성형술에 가까운 순환에서 MpC의 정량화, 내피 기능 장애및 낮은 사지 절단의 예측과의 관계를 설명합니다.

중요 사지 이혈증을 가진 Angioplasty 처리한 환자에 있는 현지 순환 단핵 전구 세포를 사용하여 절단을 예측합니다

본 연구는 진행성 관상동맥 협착증으로 인한 만성 심근허혈의 외과적 돼지 모델을 제시하여 경색 없이 심장기능 장애를 초래한다. 허혈 후 동물은 줄기세포 유래 엑소좀이 함유된 콜라겐 패치를 심외막 배치와 함께 오프펌프 관상동맥 우회술을 받습니다. 이 보조 요법은 심근 기능과 회복을 향상시킵니다.

엑소좀이 함유된 콜라겐 패치 및 오프 펌프 관상동맥 우회술로 치료한 만성 심근 허혈의 외과적 돼지 모델

관상동맥 내막 절제술 조직 샘플은 최적화된 해리 프로토콜을 사용하여 단일 핵을 분리하기 위해 처리되었습니다. 분리된 핵의 무결성은 세 가지 보완적 접근법을 통해 검증되었습니다: 막 무결성 평가를 위한 트리판 블루 배제 염색, 핵 형태를 확인하기 위한 DAPI 기반 공초점 현미경, 핵수율과 순도를 정량화하는 유세포 측정법.

관상동맥 우회 이식 환자의 관상동맥 내적출술 조직에서 단일 핵 분리

배우세요 관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후 예측을 위한 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커 활용법. 이 방법은 혈관 손상 정도와 수복 메커니즘을 평가하여 주요 심혈관 부작용 위험을 측정합니다.

관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후의 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커

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