Name: 쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 학습하세요 쥐에서 만성 포스트 허혈 고통(CPIP) 모형을 수립하여 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I(CRPS I) 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 모형은 기계적·열적 과민반응 및 캡사이신 유도 통증 행동을 평가하여 만성 통증 치료 전략 개발에 기여합니다.

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이 프로젝트는 중국 국립 자연 과학 재단 (81873365 및 81603676), 저명한 젊은 학자를위한 절강 성 자연 과학 기금 (LR17H270001) 및 절강 중국 의과 대학의 연구 기금 () 후원했다 Q2019J01, 2018ZY37, 2018ZY19).

동물 프로토콜은 절강 중국 의과 대학 동물 윤리위원회에 의해 승인되었다.
1. 동물
<ol><li>상하이 실험실 동물 센터에서 수컷 스프라그-도울리(SD) 쥐(280-320g, 8-10주)를 획득하십시오. 저장 성 중국 의과 대학 실험실 동물 센터에서 동물을 집. 사육 조건에는 12 h / 2h 의 빛 / 어두운 사이클이 포함되어야하며 온도를 24 °C에서 일정하게 유지해야합니다. 물과 음식 광고 libitum을제공합니다. 총 48 마리의 쥐가 이 연구에 사용됩니다. 이 모델에서 한 가지 주의 사항에서 전체 프로세스 동안 통증 반응을 관찰해야합니다. 진통제가 적용되면 통증 모델을 성공적으로 설정할 수 없습니다. 실험 후, 쥐는 희생된다.</li>
</ol>2. CPIP 모델 설립
<ol><li>나트륨 페노바르비탈 (50 mg/kg, 복강 내 주사 [i.p.])으로 모든 쥐 (샴 및 CPIP 모델 그룹 포함)를 마취시요. 필요한 경우 최대 20 mg/kg/h 페노바르비탈[i.p.]으로 마취를 유지하십시오. 집게를 사용하여 뒷발이나 꼬리 끝을 꼬집어 각 동물의 반사 신경을 확인합니다. 모델 을 수립하기 전에 쥐가 반응하지 않는지 확인하십시오. 시술 중 건조를 피하기 위해 수의사의 연고를 눈에 놓습니다. 다음 절차를 위해 37°C에서 유지된 가열된 패드 위에 마취된 랫트에 놓는다.</li>
	<li>
뒷발의 허혈 및 재관류
	<ol>
<li>쥐가 마취되면 오른쪽 뒷발과 발목을 글리세롤로 윤활하십시오.</li>
		<li>7/32"(5.5mm) 내부 직경의 Nitrile 70 듀로미터 O 링을 1.5mL Eppendorf 튜브의 큰 면에 밀어 넣습니다(사용하기 전에 스냅 캡이 잘려있음). 뒷발을 중공 에펜도르프 튜브에 조심스럽게 삽입하여 바닥에 도달할 때까지 넣습니다.</li>
		<li>점차적으로 O-링을 튜브에서 발목 관절 근처의 오른쪽 뒷다리로 밀어 넣고 3 시간 동안 쥐의 가짜 그룹에 동일한 치료를 적용합니다.</li>
		<li>허혈 단계 후 O-링 3시간 절단. 쥐가 흉골 의전성을 유지하기에 충분한 의식을 회복 할 때까지 조심스럽게 보십시오. 마취를 받은 쥐는 완전히 회복 될 때까지 다른 쥐의 회사에 다시 배치해서는 안됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 노시펜제성 행동 테스트
<ol><li>메쉬 바닥에 앉아 투명 플렉시 글라스 챔버에 쥐를 배치합니다. 어떤 행동 시험든지 전에 0.5 시간 동안 쥐를 습관화하십시오.</li>
	<li>
기계적 알로디니아
	<ol>
<li>본 프레이 필라멘트(0.4, 0.6, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 15.0 및 26.0 g 필라멘트)를 시험에 사용하십시오. 중간 필라멘트 (4.0 g)에서 테스트를 시작합니다. 필라멘트를 뒷발의 중간 발바닥 표면에 수직으로 적용합니다. 필라멘트를 최대 5s까지 구부리기 위해 적당한 힘을 약간 가합니다. 자극에 대한 응답으로 뒷발의 갑작스런 후퇴는 비감퇴 행동으로 간주됩니다. 13일까지 -3일, -2, -1, 격일로 기계적 알로디니아 테스트를 실시합니다.</li>
		<li>업다운 테스트 방법을 적용하여 임계값을 테스트합니다. 50% 발 인출 임계값(PWT)13,14,15를계산하기 위한 Dixon 방법을 적용합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
열 고갈수증
	<ol>
<li>Hargreaves의 방법을 사용하여 열 과민증을 검사하십시오. 발출 대기 시간(PWL)을 측정하기 위해 전구(50W)에서 뒷발로 방출되는 라이트 빔을 직접 조준한다. 가열에서 과도한 부상을 방지하기 위해 컷 오프 임계 값으로 20 s를 설정합니다.</li>
		<li>각 뒷발에 대해 5분 간격으로 각 테스트를 3회 반복합니다. 각쥐(16)의PWL로서 이 세 가지 시험의 평균을 취한다. 13일까지 -3일, -2일, -1일, 격일로 열과민 검사를 실시합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
캡사이신 유발 급성 호민성 행동
	<ol>
<li>디메틸 설폭사이드(DMSO)를 사용하여 캡사이신 스톡 용액(200 mM)을 준비하고 뒷발 주입을 위해 멸균 인산완충식염수(PBS)에서 1:1000까지 추가희석합니다. PBS의 최종 DMSO 농도는 0.1%입니다(비차는 PBS에서만 0.1% DMSO를 포함). 1 mL 주사기에 부착 된 30G 바늘을 사용하여 50 μL의 부피에서 캡사이신 또는 차량을 뒷발 (인트라 플란타르 주사)에 주입하십시오.</li>
		<li>주사 직후 10분 동안 비디오 카메라를 사용하여 nocifensive 동작(즉, 주사된 발의 핥기, 물기 또는 플린칭)을 기록하고, 그 후 앞서 설명한 바와 같이정량화17,18,19.</li>
	</ol>
</li>
	<li>뒷발 부종 평가: 발 직경의 증가를 측정하여 뒷발 부종을 평가한다. 디지털 캘리퍼스로 측정하고 기저값과 다른 시점에서 관찰된 테스트 값 간의 차이를 계산합니다. 모델 설립 후 발 두께의 변화를 15분, 24시간, 48시간 및 72시간으로 평가합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Goh, E. L., Chidambaram, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+recent+update%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%2C+Trauma%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a recent update.</a> Burns, Trauma. 5 (1), 2(2017).</li>
<li>Birklein, F., Ajit, S. K., Goebel, A., Rsgm, P., Sommer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome+-+phenotypic+characteristics+and+potential+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neurology%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome - phenotypic characteristics and potential biomarkers.</a> Nature Reviews Neurology. 14 (5), (2018).</li>
<li>Shim, H., Rose, J., Halle, S., Shekane, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+narrative+review+for+the+practising+clinician%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a narrative review for the practising clinician.</a> British Journal of Anaesthesia. , (2019).</li>
<li>Urits, I., Shen, A. H., Jones, M. R., Viswanath, O., Kaye, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+Regional+Pain+Syndrome%2C+Current+Concepts+and+Treatment+Options%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain%2C+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Complex Regional Pain Syndrome, Current Concepts and Treatment Options.</a> Current Pain, Headache Reports. 22 (2), 10(2018).</li>
<li>Helyes, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+complex+regional+pain+syndrome+to+mice+via+human+autoantibodies+is+mediated+by+interleukin-1-induced+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transfer of complex regional pain syndrome to mice via human autoantibodies is mediated by interleukin-1-induced mechanisms.</a> Proceedings of National Academy Sciences of the United States of America. 116 (26), 13067-13076 (2019).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-Type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-Type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1), 94-105 (2004).</li>
<li>Coderre, T. J., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hypothesis+for+the+cause+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28reflex+sympathetic+dystrophy%29%3A+pain+due+to+deep-tissue+microvascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Medicine%22%5BJournal%5D)">A hypothesis for the cause of complex regional pain syndrome-type I (reflex sympathetic dystrophy): pain due to deep-tissue microvascular pathology.</a> Pain Medicine. 11 (8), 1224-1238 (2010).</li>
<li>Klafke, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+nociceptive+phases+observed+in+a+rat+hind+paw+ischemia%2Freperfusion+model+depend+on+different+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic nociceptive phases observed in a rat hind paw ischemia/reperfusion model depend on different mechanisms.</a> Pflugers Archiv European Journal of Physiology. 468 (2), 229-241 (2015).</li>
<li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+astrocytic+colony+stimulating+factor+and+its+receptor+on+microglia+mediates+central+sensitization+and+behavioral+hypersensitivity+in+chronic+post+ischemic+pain+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behavioral+Immunology%22%5BJournal%5D)">Interaction between astrocytic colony stimulating factor and its receptor on microglia mediates central sensitization and behavioral hypersensitivity in chronic post ischemic pain model.</a> Brain Behavioral Immunology. 68, 248-260 (2018).</li>
<li>Kim, J. H., Kim, Y. C., Nahm, F. S., Lee, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Therapeutic+Effect+of+Vitamin+C+in+an+Animal+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Produced+by+Prolonged+Hindpaw+Ischemia-Reperfusion+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The Therapeutic Effect of Vitamin C in an Animal Model of Complex Regional Pain Syndrome Produced by Prolonged Hindpaw Ischemia-Reperfusion in Rats.</a> International Journal of Medical Sciences. 14 (1), 97-101 (2017).</li>
<li>Yin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+profiling+of+dorsal+root+ganglia+in+a+rat+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type-I+reveals+potential+mechanisms+involved+in+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptome profiling of dorsal root ganglia in a rat model of complex regional pain syndrome type-I reveals potential mechanisms involved in pain.</a> Journal of Pain Research. 12, 1201-1216 (2019).</li>
<li>Hu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+Channel+Contributes+to+the+Behavioral+Hypersensitivity+in+a+Rat+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">TRPV1 Channel Contributes to the Behavioral Hypersensitivity in a Rat Model of Complex Regional Pain Syndrome Type 1.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 453(2019).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+analysis+of+experimental+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Chai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroacupuncture+Alleviates+Pain+Responses+and+Inflammation+in+a+Rat+Model+of+Acute+Gout+Arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Electroacupuncture Alleviates Pain Responses and Inflammation in a Rat Model of Acute Gout Arthritis.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2018, 2598975(2018).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Fang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameter-specific+analgesic+effects+of+electroacupuncture+mediated+by+degree+of+regulation+TRPV1+and+P2X3+in+inflammatory+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Parameter-specific analgesic effects of electroacupuncture mediated by degree of regulation TRPV1 and P2X3 in inflammatory pain in rats.</a> Life Sciences. 200, 69-80 (2018).</li>
<li>Tai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+Transient+Receptor+Potential+Cation+Channel+Member+A1+activation+in+the+irritation+and+pain+response+elicited+by+skin-lightening+reagent+hydroquinone%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Involvement of Transient Receptor Potential Cation Channel Member A1 activation in the irritation and pain response elicited by skin-lightening reagent hydroquinone.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7532(2017).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8+is+the+principal+mediator+of+menthol-induced+analgesia+of+acute+and+inflammatory+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">TRPM8 is the principal mediator of menthol-induced analgesia of acute and inflammatory pain.</a> Pain. 154 (10), 2169-2177 (2013).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidized+Phospholipid+OxPAPC+Activates+TRPA1+and+Contributes+to+Chronic+Inflammatory+Pain+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidized Phospholipid OxPAPC Activates TRPA1 and Contributes to Chronic Inflammatory Pain in Mice.</a> PLoS One. 11 (11), 0165200(2016).</li>
<li>Terkelsen, A. J., Gierthmuhlen, J., Finnerup, N. B., Hojlund, A. P., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+hypersensitivity+to+capsaicin%2C+thermal%2C+and+mechanical+stimuli+in+unilateral+complex+regional+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Bilateral hypersensitivity to capsaicin, thermal, and mechanical stimuli in unilateral complex regional pain syndrome.</a> Anesthesiology. 120 (5), 1225-1236 (2014).</li>
<li>Drummond, P. D., Morellini, N., Finch, P. M., Birklein, F., Knudsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+intradermal+injection+of+phenylephrine+evokes+pain+and+hyperalgesia+in+a+subgroup+of+patients+with+upregulated+alpha1-adrenoceptors+on+dermal+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: intradermal injection of phenylephrine evokes pain and hyperalgesia in a subgroup of patients with upregulated alpha1-adrenoceptors on dermal nerves.</a> Pain. 159 (11), 2296-2305 (2018).</li>
<li>Minert, A., Gabay, E., Dominguez, C., Wiesenfeld-Hallin, Z., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+pain+following+spinal+nerve+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous pain following spinal nerve injury in mice.</a> Experimental Neurology. 206 (2), 220-230 (2007).</li>
<li>Kingery, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsaicin+sensitive+afferents+mediate+the+development+of+heat+hyperalgesia+and+hindpaw+edema+after+sciatic+section+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Capsaicin sensitive afferents mediate the development of heat hyperalgesia and hindpaw edema after sciatic section in rats.</a> Neuroscience Letters. 318 (1), 39-43 (2002).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+cannabinoid+receptor+2+attenuates+mechanical+allodynia+and+neuroinflammatory+responses+in+a+chronic+post-ischemic+pain+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type+I+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Activation of cannabinoid receptor 2 attenuates mechanical allodynia and neuroinflammatory responses in a chronic post-ischemic pain model of complex regional pain syndrome type I in rats.</a> European Journal of Neuroscience. 44 (12), 3046-3055 (2016).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1-2), 94-105 (2004).</li>
<li>Weissmann, R., Uziel, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+complex+regional+pain+syndrome%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Rheumatology+Online+Journal%22%5BJournal%5D)">Pediatric complex regional pain syndrome: a review.</a> Pediatric Rheumatology Online Journal. 14 (1), 29(2016).</li>
<li>Kim, H., Lee, C. H., Kim, S. H., Kim, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+complex+regional+pain+syndrome+in+Korea%3A+An+electronic+population+health+data+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of complex regional pain syndrome in Korea: An electronic population health data study.</a> PLoS One. 13 (6), 0198147(2018).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+complex+regional+pain+syndrome+type+I+%28CRPS-I%29+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Sex differences in complex regional pain syndrome type I (CRPS-I) in mice.</a> Journal of Pain Research. 10, 1811-1819 (2017).</li>
</ol>

저자는이 작품에 대한 이해의 충돌을 선언하지 않습니다.

이 프로토콜은 쥐의 뒷다리에 허혈/재관류를 적용하여 쥐 CPIP 모델을 확립하기 위한 상세한 방법을 설명합니다. 그것은 뒷다리 외관의 평가를 포함, 부 종, 기계/열 과민성, 그리고 capsaicin 주입에 대 한 응답에서 급성 nocifensive 거 동.
사지 허혈/재관류는 인간 환자12에서CRPS-I에 기여하는 일반적인 인자이다. 이 프로토콜은 인간 CRPS-I6을다시 하기 위해 일반적으로 사용되는 동물 모델인 쥐 CPIP 모델을 설정하는 방법을 설명합니다. 허혈은 마취하에 3시간 동안 발목에 단단한 O-링을 적용하여 쥐의 뒷다리에서 유도되었다. O-링을 제거하고 재관류가 발생했습니다. 모델 설립 후, CPIP 모델 쥐는 뒷다리에 초기 충혈과 부종을 개발했다. 이 모델은 또한 지속적인 기계적/열적 과민성을 포함한 신경병성 통증 거동을 표시합니다. 이러한 증상은 모두 인간 CRPS-I <su...

복잡한 국소 통증 증후군(CRPS)은 골절, 외상, 수술, 허혈 또는 신경손상으로인한 복합및 만성 통증 증상을1,2,3. CRPS는 2개의 하위 범주로 분류됩니다: CRPS 유형 I 및 타입-II (CRPS-I 및 CRPS-II)4. 역학 연구는 CRPS의 보급이 대략 이었다는 것을 밝혔습니다 1:20005. 명백한 신경 손상을 보이지 않는 CRPS-I는 만성 통증을 초래할 수 있으며 환자의 삶의 질에 극적으로 영향을 미칩니다. 현재 사용 가능한 치료는 부적절한 치료 효과를 보여줍니다. 그러므로, CRPS-I는 아직도 해결될 필요가 있는 중요하고 도전적인 임상 문제 남아 있습니다.
CRPS-I를 모방한 전임상 동물 모델을 확립하는 것은 CRPS-I의 근본적인 메커니즘을 탐구하는 데 매우 중요합니다. 이 문제를 해결하기 위해 Coderre 등은 CRPS-I6을다시 하기 위해 뒷다리에 장기간 허혈 및 재관류를 적용하여 쥐 모델을 설계했습니다. 허혈/재관류 손상은 CRPS-I7의주요 원인 중 하나인 것으로 알려져 있습니다. 랫트 CPIP 모델은 모델 설립 후 초기 단계에서 뒷다리 부종 및 충혈을 포함하는 많은 CRPS-I-유사 증상을 나타내며, 지속적인 열 및 기계적 과민성6. 이 모델의 도움으로 중앙 통증 감작, 말초 TRPA1 채널 활성화 및 반응성 산소 종 생성 등이 CRPS-I8,9,10에기여하는 것이 제안된다. 우리는 최근에 성공적으로 CPIP 쥐 모델을 설치하고 영향을받는 뒷발(11)을중화시키는 등뿌리 중추 (DRGs)의 RNA 시퀀싱을 수행했습니다. 우리는 CRPS-I11의고통 과민증을 중재하는 데 아마도 관여하는 몇 가지 잠재적 인 메커니즘을 발견했습니다. 우리는 또한 CRPS-I12의기계적 및 열 과민성에 중요한 기여로 DRG 뉴런에서 일시적인 수용체 전위 바닐로이드 1 (TRPV1) 채널을 확인했습니다.
이 연구에서는, 우리는 CPIP의 쥐 모형의 설치에 관련시킨 상세한 절차를 기술했습니다. 우리는 또한 급성 capsaicin 도전에 그것의 반응성 뿐만 아니라 기계및 열 과민성 측정하 여 쥐 CPIP 모형을 평가했습니다. 우리는 쥐 CPIP 모델이 CRPS-I에 관여하는 메커니즘의 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 동물 모델이 될 수 있음을 제안한다.

<table><tbody><tr><td>1.5 ml Eppendorf 튜브</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1435</td><td></td></tr><tr><td>Capsaicin</td><td>APEXBIO</td><td>A3278</td><td></td></tr><tr><td>디지털 캘리퍼스</td><td>Meinaite</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>O-링</td><td>O-링 West</td><td>Nitrile 70 경도계</td><td>7/32 in. 내경</td></tr><tr><td>Plantar Test Apparatus</td><td>UGO 바실레, 이탈리아</td><td>37370</td><td></td></tr><tr><td>폰 프레이 필라멘트</td><td>UGO 바실레, 이탈리아</td><td>NC12775</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-i를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

복잡한 국부적인 통증 증후군 유형-I(CRPS-I)는 환자 들 사이에서 심한 통증을 일으키는 신경 질환이며 해결되지 않은 상태로 남아 있습니다. 그러나 CRPS-I의 기본 메커니즘은 아직 밝혀지지 않았습니다. 허혈/재관류는 CRPS-I를 일으키는 주요 요인 중 하나인 것으로 알려져 있습니다. 연장된 허혈 및 뒷다리의 재관류에 의해, 쥐 만성 허혈 후 통증(CPIP) 모델은 CRPS-I를 모방하기 위해 확립되었다. CPIP 모델은 CRPS-I의 메커니즘을 연구하기 위한 잘 알려진 동물 모델이 되었습니다. 이 프로토콜은 마취를 포함하여 CPIP의 쥐 모델의 확립에 관련된 상세한 절차를 설명하고 뒷다리의 허혈 / 재관류를 수행합니다. 랫트 CPIP 모델의 특성은 급성 캡사이신 주입에 대한 항성 반응뿐만 아니라 뒷다리의 기계적 및 열적 과민성을 측정함으로써 더욱 평가된다. 쥐 CPIP 모델은 설립 후 초기 단계에서 뒷다리 부종 및 충혈을 포함한 여러 CRPS-I-유사 증상을 나타내며, 지속적인 열 및 기계적 과민성, 급성 캡사이신 주사에 대한 노시펜성 반응을 증가시켰다. 이러한 특성은 CRPS-I에 관여하는 메커니즘의 추가 조사에 적합한 동물 모델을 렌더링합니다.

발목에 O-링을 배치한 후, 동측 뒷발 피부는 청색증, 조직 저산소증의 표시를나타냈다(도 1A). O-링을 절단 한 후, ipsilateral 뒷발은 혈액으로 채우기 시작하고 충혈의 강렬한 징후를 보여 강력한 붓기를 보였다(그림 1A). 발 붓기가 점차 감소하고 허혈성 / 재관류 절차 후 정상 48 시간으로 돌아왔다 (시닥 후- 혹 테스트와 양방향 ANOVA, 그림 1B). 이러한 모든 징후는 이전 연구6,12와일치합니다.
이어서, 기계적 알로디니아는 폰 프레이 모발 시험을 사용하여 측정되었다. CPIP 그룹의 입체 뒷발은 sh...

여기에 제공된 프로토콜은 만성 허혈 후 통증(CPIP)의 동물 모델을 확립하는 단계를 상세히 설명합니다. 이것은 인간 복잡한 지역 고통 증후군 유형-I를 모방하는 잘 인식된 모형입니다. 기계적 및 열적 과민성은 CPIP 래트 모델에서 관찰된 캡사이신 유도 노시펜스 거동뿐만 아니라 추가로 평가된다.

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

CRPS의 기본 메커니즘은 여전히 불분명합니다. CRPS를 모방하는 전임상 동물 모델을 확립하는 것은 CRPS I.Rat CPIP 모형이 초기 단계에서 뒤늦은 부종 및 고혈증을 포함하는 simitance를 좋아하는 많은 CRPS를 전시하는 데 중요할 것입니다. 모델 설립 후, 지속적인 열 및 기계적 과민성 다음에.페노바르비탈 나트륨으로 모든 쥐를 마취하는 것으로 시작합니다. 쥐가 뒷발이나 꼬리를 집게로 꼬집어 제대로 마취했는지 확인하십시오. 그리고 눈에 수의사 연고를 배치합니다.절차 중에 37도 섭씨 가열 패드에 쥐를 유지합니다. 글리세롤로 오른쪽 뒷발과 발목을 윤활합니다. 그런 다음 니틀릴 70 durometer O 링을 1점 5 밀리리터 튜브의 더 큰 면으로 밀어 넣고 스냅 캡이 잘려나갑니다.뒷발을 바닥에 닿을 때까지 중공 튜브에 조심스럽게 삽입합니다. 점차적으로 발목 관절 근처 오른쪽 뒷다리튜브에서 O 링을 밀어 넣습니다. 그리고 3 시간 동안 거기에 둡니다.허혈을 유도해서는 안 되는 깨진 O 링을 제외하고, 쥐의 샴 그룹에 동일한 치료를 적용하십시오. 3 시간 후, O 링을 잘라 그것은 흉골 억제를 유지하기에 충분한 의식을 회복 할 때까지 쥐를 모니터링. 쥐가 마취에서 완전히 회복 될 때까지 다른 쥐의 회사에 쥐를 두지 마십시오.메쉬 바닥에 투명 플렉시 글라스 챔버에 쥐를 놓고, 어떤 행동 테스트 전에 30 분 동안 환경에 쥐를 습관화. 폰 프레이 필라멘트를 사용하여 기계식 알로디니아용 쥐를 테스트합니다. 뒷발의 중간 발바닥 표면에 수직으로 적용하여 중간 필라멘트에서 테스트를 시작합니다.필라멘트를 최대 5초 동안 구부리려면 적절한 힘을 발휘합니다. 발의 갑작스런 철회는 불복갑시동작으로 간주됩니다. 13일까지 3일, 2일, 1일, 격일로 기계적 알로디니아 테스트를 실시합니다.임계값및 50%의 발 철수 임계값을 계산하기 위한 딕슨 방법을 테스트하기 위해 위아래 테스트 방법을 적용합니다. 열 과다 증에 대 한 테스트 하려면, 직접 50 와트 전구에서 나오는 광선을 목표로 하그리브스 방법을 사용 하 브 라 브 를 사용 하 여 뒷발. 과도한 부상을 피하기 위해 20초를 컷오프 임계값으로 설정하여 발 철수 대기 시간을 측정합니다.각 뒷드 발에 대해 5분 간격으로 각 테스트를 세 번 반복하고 발 철수 대기 시간으로 평균을 복용합니다. 13일까지 3일, 2일, 1일, 격일로 열과간 검사를 실시합니다. capsaicin 유도 급성 nocifensive 거 동에 대 한 테스트 하려면, DMSO와 200 밀리머 캡사이신 재고 솔루션을 준비 하 고 더 주입에 대 한 PBS에 1~ 1, 000 희석.Capsaicin은 시약, 피부, 눈, 호흡에 관절 자극을 일으킬 수 있는. 캡사이신 솔루션을 준비할 때 마스크와 고글을 착용하는 것이 중요합니다. 그런 다음 1 밀리리터 주사기에 부착된 30 게이지 바늘을 사용하여 캡사이신 또는 차량의 마이크로리터 50개를 뒷발로 주입합니다.주입된 발을 핥기, 물기 또는 주사 후 10분 동안 비디오 카메라를 사용하여 주사된 발의 플랑크와 같은 불시한 동작을 기록합니다. 모델 설립 후 15분, 24시간, 48시간, 72시간으로 발 직경의 증가를 측정하여 뒷발 부종을 평가한다. 발목에 O 링을 배치 한 후, ipsilateral 뒷발 피부는 조직 저산소증의 표시인 시안색을 보였다.O 링을 절단 한 후, 발은 혈액으로 채우기 시작하고 강렬한 충혈증을 나타내는 강력한 붓기를 보였다. 붓기는 점차적으로 감소하고 절차 후에 정상 48 시간으로 돌아왔습니다. 모델 설립 후 하루 만에 CPIP 그룹의 ipsilateral hind paw는 관찰 시간 프레임의 13 일 동안 지속된 명백한 기계적 알로디니아를 전시했습니다.CPIP 그룹의 반대쪽 뒷발은 또한 13 일 동안 기계적인 과간증을 표시했습니다. 열 과진증을 측정했을 때, CPIP 쥐의 양측 뒷발은 가짜 그룹 쥐에 비해 유해열 자극에 대응하여 인출 대기 시간을 현저히 감소시켰습니다. ipsilateral hind 발의 열 과진증은 관측 시간 프레임의 끝까지 지속된 반면, 반대로 힌드 발의 열 과간증은 7 일 동안 지속되었습니다.sham 및 CPIP 그룹은 capsaicin 주입을 가진 nocifensive 행동에 대 한 테스트 했다. 차량을 주입했을 때, sham 그룹은 약간의 향응반응을 보였고 CPIP 그룹은 상당히 높은 반응을 보였다. 더 중요한 것은, CPIP 쥐는 샴 그룹 보다는 capsaicin 주입에 상당히 더 높은 반응을 보여주었습니다, 이는 CPIP 쥐가 이 절차 I.By CRPS를 가진 인간 적인 환자와 유사한 현상을 전시한다는 것을 건의합니다, 쥐는 모형 설치 의 전과 도중 마취된다.허혈과 인간 CRPS에 의해 설립 된이 프로토콜에 설명 된 CPIP 쥐 모델은 시뮬레이션을 좋아한다. 이러한 모델의 가족, CRPS에 대 한 더 많은 메커니즘을 탐구 할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 "팔목 모델은"좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다.

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

이 원고는 삼차신경병성 통증을 연구하기 위한 설치류 모델을 설명합니다. 설명된 방법에는 쥐의 안와하부신경의 만성 수축 손상을 수행하기 위한 외과적 절차와 지속적인 통증 및 이질통을 나타내는 자발적 및 유발 행동의 변화를 측정하기 위한 수술 후 행동 검사가 포함됩니다.

삼차 신경 병증 성 통증을 연구하기 위해 쥐의 눈꺼풀의 신경 (이온 CCI)의 만성 수축 부상

설치류 모델에서 [14C]-요오도안티피린(IAP) 흡수를 측정하고 중추 뇌졸중 후 통증(CPSP)에 관여하는 신경 기질의 활성화를 평가하는 프로토콜을 제시합니다.

의 방사 법적 측정 [<sup&gt; (14)</sup&gt; 중앙 후 스트로크 통증에 따라 쥐의 뇌에서 C] -Iodoantipyrine

수정된 수술은 생쥐 또는 쥐 보존 신경 손상 모델에 대한 단순화된 방법으로, 일반 비골 신경과 천성 신경을 모두 손상시키기 위해 한 번의 결찰과 한 번의 절개만으로 됩니다.

마우스의 신경병증성 통증에 대한 수정된 보존 신경 손상 수술 모델

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

마우스에서 요통 모델의 간단하고 신속한 유도를 위한 방법은 요로 플라스미노겐 활성제의 인대 내 주입을 사용하여 여기에서 제공됩니다.

우로키나아제(Urokinase)형 플라스미노겐 활성제(Plasminogen Activator)에 의한 생쥐 요통 모델

부분 좌골 신경 결찰술은 열 및 기계적 자극에 대한 과장된 반응을 특징으로 하는 오래 지속되는 만성 신경병성 통증을 유발합니다. 이 신경병성 통증 마우스 모델은 일반적으로 통증 관리를 위한 혁신적인 치료법을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기사에서는 표준화 및 재현성을 개선하기 위한 수술 절차에 대해 자세히 설명합니다.

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

생쥐에서 원위 안와하부 신경의 만성 수축 손상은 촉각 자극에 대한 반응으로 자발적 행동(얼굴 손질 활동 증가)과 통각 행동(von Frey 모발 자극에 대한 과민성)의 변화를 유발하며, 이는 지속적인 통증 및 이질증의 징후이며 삼차신경병증성 통증의 모델 역할을 합니다.

삼차신경병증성 통증을 연구하기 위한 마우스의 원위 안와하부 신경(DIoN-CCI)의 만성 수축 손상

이 프로토콜은 인간 신경종 통증을 모방하고 외과적 치료를 평가하기 위해 감각 신경을 사용하는 재현 가능한 쥐 모델을 제시하여 중개 신경종 연구를 위한 귀중한 도구를 제공합니다.

복재 신경을 통한 표적 근육 재신경 분포를 사용하여 신경종 통증 치료 옵션을 연구하기 위한 새로운 외과적 설치류 모델

학습하세요 쥐에서 만성 포스트 허혈 고통(CPIP) 모형을 수립하여 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I(CRPS I) 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 모형은 기계적·열적 과민반응 및 캡사이신 유도 통증 행동을 평가하여 만성 통증 치료 전략 개발에 기여합니다.

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

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