중국 햄스터 난소 세포 재배에서 고처리량 자동화 마이크로 바이오리액터를 사용한 공정 최적화

이 비디오에서 사용자는 실험 또는 DOE 설계를 계획하고 실행하여 마이크로 생물 반응기 소프트웨어에 도입했습니다. 분석기 보조 밸브는 공정 상태를 최적화하는 데도 입증됩니다. 모뎀을 자동화된 마이크로 바이오리소터 소프트웨어에 통합하는 것은 데이터 분석을 위한 공식적인 것입니다.

많은 수의 실험을 소규모로 동시에 계획하고 실행할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 과정 학생 인 타마나 나그라익 (Tamanna Nagraik)이 될 것입니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 주요 재배에서 사전 배양 절차로 시작합니다.

새 실험을 만들려면 Amber 자체 배양 소프트웨어를 열고 소개 탭에서 클릭하여 새 실험을 만듭니다. 새 실험 탭에서 실험 이름과 실험이 수행되는 날짜와 함께 입력합니다. 재배 중에 사용되는 선박의 배양소의 검문소를 활성화합니다.

DOE 실험을 프로그래밍하는 동안 자동 추가 DOE 태그가 활성화되어 쉽게 전환할 수 있습니다. 다음 탭으로 전환하려면 다음 탭을 클릭합니다. 항폼, 접종, 사료 및 포도당과 함께 용기에 미디어를 추가하는 것에 대한 정보를 설정하려면 추가 미디어 플레이트"체크포인트를 활성화합니다.

배지를 포함하는 플레이트의 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의합니다. 용기에 미디어를 추가하려면 클릭하십시오. 용기에 추가할 미디어의 볼륨을 입력합니다.

플레이트에서 선박으로의 미디어 전송 매핑을 정의합니다. 다음 탭으로 전환하려면 다음 탭을 클릭합니다. 미디어 정보가 소프트웨어에 공급된 후 재배 조건을 할당합니다.

조건 매체를 클릭하고 온도, 대상 DO, 상부 PH 제한 및 교반 RPM을 채웁니다. 그런 다음 교반을 클릭"또는 아래로 저어. 혈관에 접종을 추가하려면 세포 판을 추가하려면 활성화하십시오.

배지를 포함하는 플레이트의 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의합니다. 용기에 셀을 추가하려면 클릭하십시오. 접종 시간과 용기에 추가될 매체의 부피를 입력합니다.

액체 처리기에 의해 이동 된 경로를 정의하여 플레이트에서 용기로 셀을 전송합니다. 다음 탭으로 전환하려면 다음 탭을 클릭합니다. 사료, 포도당 및 항폼의 첨가를 설정하려면, 사료 플레이트를 추가하고 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의한다.

용기에 사료를 추가하고 용기에 추가할 수 있는 사료의 부피를 입력합니다. 재배에 따라 추가 된 사료 수를 추가합니다. 이 재배를 위해, 반응기는 24 시간마다 72 시간 후에 공급됩니다.

데이터를 추가된 셀에서 지연으로 입력하여 수유 사이의 시간 지연을 수동으로 추가합니다. 먹이의 첫 날은 접종72 시간 후이며, 다음 날은 96 시간 후에 등등입니다. 플레이트에서 선박으로 이송하는 매핑을 정의합니다.

재배 중에 샘플링을 설정하려면 샘플 플레이트를 추가하고 플레이트 유형, 이름 및 위치를 정의합니다. 선박에서 샘플을 채취하여 검사하고 용기에서 제거할 시료의 부피를 입력합니다. 재배 의 전체 과정에서 볼륨이 10 밀리터 미만감소하지 않는지 확인합니다.

재배 중에 채취해야 할 샘플 수를 추가합니다. 수유와 마찬가지로 각 입력 샘플 점에 대해 용기에서 제거되는 샘플의 시간을 추가합니다. 프로세스를 저장합니다.

이제 실행 준비가 되었습니다. 마지막으로, 용기에서 플레이트로 샘플 의 전송 매핑을 정의합니다. 호박색 15 DOE 소프트웨어를 엽니 다.

조사를 클릭"하고 새 를 선택합니다. 새 DOE 조사 이름을 작성하여 "대화 상자 만들기"를 입력합니다. DOE 조사에 실험을 할당하려면 다양한 매개 변수를 연구하기 위해 만든 레시피를 엽니다.

찾아보기를 클릭하고 각 실험을 선택합니다. 선박 태그가 이미 열에 등록되어 있습니다. 원하는 DOE 계수를 정의하려면 매개 변수를 선택하고 레이블이 지정된 열DOE 계수를 클릭합니다.

새 를 선택하고 단위, 약어뿐만 아니라 요인의 하부 및 상한을 추가합니다. 응답 탭에서 데이터 분석에 대해 고려해야 할 값을 정의합니다. DOE 응답 편집을 클릭하고 응답, 약어, 단위 및 최소 및 최대 제한의 이름을 정의합니다.

응답이 정의되면 각 응답에 대해 황색 변수를 선택하고 정의합니다. 반응은 미생물 생물 반응기 변수와 자동으로 연관될 수 있다. 드롭다운 목록에서 필요한 변수를 선택합니다.

요구 사항에 따라 각 응답에 대한 방정식을 변경합니다. 최소, 최대, 첫 번째, 마지막 데이터 및 평균 데이터 간의 선택 입니다. 디자인을 만들려면 시작 설계 마법사를 사용하여 실험 설계 유형을 선택하고 복제 및 중앙 점 수를 추가하거나 제거합니다.

디자인과 모델의 선택을 결정하는 목표를 선택합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 앰버 셀프 배양 소프트웨어로 가져올 수 있는 작업 패킷을 완료하고 만듭니다. 실험 탭에서 DOE 실험 만들기를 클릭하고 DOE 소프트웨어를 사용하여 만든 작업 패킷을 찾아봅보십시오.

시작을 클릭하여 프로세스를 초기화합니다. 실험이 실행되면 내보내기 DOE 결과를 사용하여 데이터를 내보냅니다. 내보내기 DOE 결과"창이 열리고 배양 용기와 역을 나타내는 행이 테이블에 나열됩니다.

원하는 행을 선택하고 선택한 행 내보내기"또는 내보내기 실험 데이터"를 클릭하여 모든 결과를 저장하고 추가 분석을 위해 파일을 저장합니다. 결과를 "탭"탭으로 전환하고 가져오기 결과를 선택하여 황색 DOE 모듈로 데이터를 가져옵니다. 원하는 데이터 파일을 찾아보고 결과를 분석합니다.

자동화된 미생물 생물 반응기의 세포 성장은 다용도 생물 반응기와 유사합니다. 3개의 다른 저울에서 세포 농도를 비교할 때, 15밀리리터 자동 미생물 생물반응기는 2리터 유리 생물반응기를 모방하는 것으로 관찰된다. 쉐이크 플라스크의 결과는 호박의 이점을 나타내는 것과도 비교됩니다.

다른 교반 속도와 PH의 영향은 자동화 된 미생물 생물 반응기에서 연구된다. 여기에 도시된 것은 상이한 미생물 생물반응기에서 실행 가능한 세포 농도, 또는 VCC, 및 단일클론 항체 농도의 비교이다. VCC에 대한 PH 6.9의 부정적인 영향을 관찰할 수 있다.

추가적으로, 세포의 성장은 PH 7.1에 비해 PH 7.3에서 배양하에서 현저하게 향상되었다. 여기에 표시된 VCC 및 단일 클론 항체 농도의 응답 윤곽 플롯이 있습니다. 값은 동일한 PH 및 다른 교반기 속도를 가진 용기에서 비교할 수 있으며, 이 공정을 위해 수집된 교반기 속도는 공정 출력에 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 나타냅니다.

실험을 실행하는 동안 오류를 방지하기 위해 컴퓨터에 제공된 모든 지침을 주의 깊게 작성해야 합니다. 이 소프트웨어는 유연하고 한 번에 여러 실험을 실행할 수 있으므로 프로세스를 최적화하는 데 걸리는 시간을 줄일 수 있습니다. 실험의 설계는 생체 공정 분야에서 유용하며, 그 결과는 지식 기반 공정 이해를 제공하므로 다른 유기체로 어느 정도 확장 될 수 있습니다.