Name: 직교 간 이식의 쥐 모형에 있는 동맥 재연결 후에 감소된 합병증 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: 학습하세요 쥐 직위 간 이식 모형에서 동맥 재연결을 통한 수술 기법을. 이 방법은 인간 간 이식을 모방하며 수용자 생존률을 향상시키고 합병증을 감소시켜 임상 관련 연구에 활용됩니다.

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이 연구는 UHN의 다기관 이식 프로그램의 자금과 토론토 일반 및 토론토 서부 재단의 지원을 통해 지원되었습니다.

저자는 공개 할 것이 없습니다.

작은 동물 간 이식 모델은 이식 면역을 이해하고 새로운 치료 전략을 식별하는 데 중요하다32. 이상적인 작은 동물 간 이식 모델은 동맥 해부학을 포함하여 인체 절차의 모든 단계를 복제합니다. 대부분의 버전이 HA 해부학 단계를 통합하지 않기 때문에 쥐 OLT 모델의 결과를 해석하는 것은 어려울 수 있으며, 이는 합병증과이환율(42)의높은 비율로 이어진다. 일부 재건 절차는 신장 27의 제거를 필요로 하는 신장 동맥을이용했습니다. 이 프로토콜은 인간 적인 절차에서 일어나는 무슨 이상이기 때문에 기관 제거를 방지합니다.
동맥 재건은 또한 쥐대동맥(31)을조작하여 수행될 수 있다. 그러나 이러한 방법은 대동맥의 광범위한 해부 및 클램핑이 필요합니다. 클램프 시간이 연장되면 받는 쥐는 탈약허혈(43)과관련된 결과가 좋지 않습니다. 인간에서, LT 외과 기술은 수신자 위장 동맥 (GDA)의 결찰 그리고 분할을 관련시킵니다. 그러나, 설치류의 생리적 및 해부학적 특징은 이 기술을 사용하여 이식을 더 생리적으로 도전하게 하고 합병증으로 이어질 수 있습니다 (즉, 췌장 및 담즙 덕트35 및 담즙누설44). 이 프로토콜의 동맥 재연결은 이 도전을 우회하고, 덕트 혈류를 유지하고, 수령인 의 결과를 개선하기 위한 것입니다.
쥐 HA의 재건을 위한 슬리브 및 스텐팅 기술의 사용은 이전에설명되었다 27. 이 기술에서 스텐트는 가이드로 사용되며, 동맥은 기증자 체강 트렁크에서 받는 사람 공통 HA로 재구성됩니다. 받는 사람 공통 HA는 해부되고 받는 사람 GDA는27로묶여 있습니다. 그 결과, 수령인 BD의 하부에 혈액 공급과 췌장의 머리가 손상될 수 있다. 이 지역에 부수적인 순환은 종종 담관에 부적당한 혈류를 제공한다는 것을 믿어집니다. 예를 들어 이 프로토콜은 먼저 받는 사람 GDA를 마이크로혈관 클립으로 클램프한 다음 받는 사람 BD를 나눕니다. GDA가 고정되어 있는 경우 분할된 BD가 출혈되지 않습니다. GDA 클램프를 제거한 후 BD로부터 활발한 출혈이 관찰됩니다. 분할 된 받는 사람 담관에 좋은 흐름을 유지 하는이 프로토콜, 적절 한 간 혈액 관혈을 제공 하 고 후 OLT hypoxic 간 손상을 방지 하 여 받는 사람 간 조직의 생리학을 보호.
기증자 측에서는, HA 스텐트는 체강 트렁크, 좌측 위동맥 및 비장 동맥에서 패치를 만들어 쉽게 이식 준비 도중 체강 트렁크에 삽입됩니다. 스텐트는 넓은 개구부를 통해 삽입할 수 있으며, 이는 스텐트를 체강 트렁크에만 삽입하는 것보다 덜 어렵습니다. 24 G는 HA 스텐트에 사용하기에 이상적인 크기인 것으로 나타났습니다. 스텐트의 길이는 1.0-1.5mm 길이여야 하는데, 이는 수령인의 적절한 HA를 기증자의 일반적인 HA로 쉽게 끌어당길 수 있도록 하는 열린 게이트 역할을 하기 때문입니다. 10-0 에틸론 봉합사가 어디에 배치되는지 주의 깊게 주의를 기울이면, 이 연결을 통해 흐르는 혈액은 스텐트를 직접 만지지 않으며, 수령인의 적절한 HA는 내부에서 이를 보호하여 합병증의 위험을 줄입니다. 중요한 것은, 기증자의 HA는 혈관 경련을 피하기 위하여 결코 고정되지 않습니다. 동맥 재건의 성공은 기증자 GDA를 열어 두어 평가됩니다. 성공적인 해부학은 재건이 완료되면 기증자 GDA에서 좋은 혈류를 초래한다.
이 프로토콜에서, 다른 사람과 유사하게, SHVC 재연결은 가장 느린 단계이고 궁극적으로 간 단계의 기간을 지시합니다. 간 시간의 지속 시간이 증가함에 따라, 위험 허혈성 손상 및 간 기능 장애 증가45. OLT 쥐 모델의 또 다른 중요한 구성 요소는 접목, 스텐트 및 커프의 크기입니다. 접목이 너무 작으면 접목이 비틀거나 뒤집어 혈관 연결을 방해할 수 있습니다. 스텐트와 커프스의 크기는 쥐의 나이, 성별, 체중 및 변형에 따라 조정이 필요할 수 있습니다. 여기에 사용된 커프스의 크기는 이전에 설명된28로선택되었으며, 쥐 크기를 조절하는 커프 사이즈 1개를 사용했습니다. 후속 기간 동안 (즉, 간 혼잡, 부종, 아스테아시 또는 비장)의 징후는 없었다 (현재까지 : 중앙값 = 133 일 수술 후, 최소 = 115 일 후, 최대 = 161 일 후). 연령과 성별 을 모두 차지하는 다양한 쥐 균주에 대한 PV 및 IHVC의 적절한 크기를 결정하는 추가 연구가 보증됩니다.
이 수정된 쥐 OLT 프로토콜은 이전에 설명된 바와 같이 PV 및 IHVC에 대해3D,프팅 커프스를사용합니다. PV 및 IHVC를 연결하는 기존 방법에는 미세 수개기술(32),커프기술(46)및 미세 수거-임시 부목기술(47)이 포함된다. 3D 프래팅 커프 기법은 쥐 의 변형에 따라 커프의 크기를 표준화할 수 있고 준비 및 사용하기 쉽기 때문에 선택되었습니다. 동일한 치수를 가진 다량의 커프를 한 번에 인쇄할 수 있습니다. 커프의 바깥쪽 표면에는 두 개의 홈이 되어 서넥타이를 고정하고 미끄러지지 않도록 돕습니다. 또한 커프 디자인에 꼬리가 통합되어 커프스를 쉽게 조작할 수 있습니다. 전반적으로, 3D 프릭 커프스를 통합하면 간 시간을 단축하여 OLT 절차의 높은 성공률과 재현성을 초래한다고 믿어집니다. 이 기술은 또한 외과 학습 곡선을 단축한다는 것을 결정됩니다.
결론적으로, 기술된 프로토콜은 동맥 재연결 단계를 통합하여 인간 간 이식과 더 유사한 모델을 확립했다. 이 프로토콜은 간 이식의 많은 면역 학적 및 외과 적 측면을 연구하도록 적응 할 수 있으며 이식과 관련된 새로운 치료 개입을 테스트하는 모델로 사용될 수 있습니다.

간 질환의 글로벌 부담은 2005년부터 2013년1,2까지간 질환 관련 사망자가 30% 증가하면서 계속 증가하고있습니다. 간 이식은 종종 말기 간 질환을 가진 환자에 대 한 유일한 의지. 간은 두 번째로 자주 이식된 고체 기관이며, 2015년부터 2016년1,2까지 전 세계적으로 수행된 간 이식 횟수는 7.25%증가했습니다.2 그것의 보급에도 불구하고, 이식 후 생존율은정체되고 있다 3,,4,,5. 15년 환자 생존율은 53%로 보고되고, 20년 환자 생존율은 21%3,3,5로낮을 수 있다. 새로운 치료와 향상된 임상 결과로 이끌어 낼 수 있는 흥미진진한 새로운 면역생물학 이니셔티브가 있는 동안, 그(것)들을 시험하는 믿을 수 있는 작은 동물 모형은 아직 없습니다.
쥐 OLT 모델은 거부,,6,7,8,89,10,면역 내성11,이식 허혈-재관류 부상12,면역 억제13,담즙 나무 부상,14,,15,16,17을포함한 간 이식 에 대한 조사에 널리 사용되어 왔다.,, 그러나, 현재 의 형태로 모델의 단점은 높은 수술 후 이환율과 사망률18,,19이다. 이것은 인간 적인 작동과 확률에 심각한 단점이며, 모델(20)에서임상적으로 관련 된 결론을 도출 하는 능력을 손상.
추가적으로, 이 이환율의 큰 비율은 결석하거나 불완전한 간 동맥 (HA) 재연결18에기인할 수 있습니다. 비록 인간의 간 이식에 중요 한 단계, 기술적 어려움 쥐 OLT 모델에서 HA 재연결을 손상 하는 경향이. 그 결과, 담관(BD) 해부학은 끈질기게 되어 담즙 누설 및 BD괴사(21)의높은 비율을 초래한다. 담즙합병증(22)의높은 발생률을 넘어, 동맥 유입의 부재는 이식후이식23의생리학을 변화시키고, 공여자 간이식편(24)에서 저산소증과 염증이 있는엽(19,,25,,26)에서간 손상이 관찰된다. 동맥 재연결 없이 쥐 OLT는 또한 섬유증을 촉진하는 경향이있다 (27). 아래에 설명된 쥐 OLT 프로토콜은 이전에 발표된 쥐 OLT방법(28)과간단한 HA 재건 단계를 통합하여 이러한 문제를 해결하여 간 parenchyma의 보존과 생존율 향상을 초래합니다.
간 이식은 기증자로부터 간 이식의 (1) 추출, (2) 기증자 간 이식의 준비, (3) 간 이식과 함께 받는 간 교체의 3상이 있다. 절차는 5개의 해부학 적인 구조물의 조작을 관련시킵니다: supracc 열등한 베나 카바 (SHVC), 포털 정맥 (PV), 적외선 정맥 (IHVC), 간 동맥 (HA), 및 담관 (BD).
쥐내OLT는 SHVC, PV 및 IHVC의 미세 수거 해부학, 그리고 BD29용풀스루 기술을 사용하여 이외 에 의해 처음 도입되었다. 이 모델은 나중에 1979 년30에서두 커프 기술을 사용하여 개선되었다. 그 이후로, 몇몇 대체 기술은 제안된, 대다수는 정맥 해부학에 집중하고 몇몇 수정31와2 개의 커프 기술을 사용하여. HA 해부학은 이전에 쥐 OLT 모델에서 미세 수, 커프 및 인트라루컬 슬리브(26,,31,,32,,33,34)와34같은 기술을 사용하여 쥐 OLT 모델에 설명되었지만, 이러한 기술은 종종 고도로 훈련 된 미세 수술 능력을 필요로하고 쥐 생리학을 크게 변화시키고 혈전증 및 / 또는 담즙 합병증27,,35에의해 방해된다.
더욱이, 외과적 수술의 선택은 또한 쥐 간 이식의 성공에 중요한 ancc 시간 (PV 클램핑에서 재구성된 PV를 통해 이식의 재침투에 시간)에 영향을 미칠 수 있습니다. 구체적으로, 높은 생존율은 15-20분36의간시간, 30분은성공의 상한선인 37,,38로관찰된다. 따라서, 이 방법의 목표는 간 동맥을 다시 연결하고, 이식된 간의 효율적인 관류를 촉진하고, 수령인 담관으로의 흐름을 유지하고, 수령인의 생리적 상태를 보존할 수 있는 덜 침습적이고 더 쉽게 채택할 수 있는 수술용 쥐 OLT 모델을 구현하는 것이다.
여기에 상세하여 기증자 간체 의 체강 트렁크의 조작뿐만 아니라 1) 1.5mm 스텐트의 사용을 포함하여 이 개정 된 프로토콜의 모든 단계는 받는 사람과 의외소매 연결을 수행 적절한 HA, 2) SHVC 재건을 위한 러닝 봉합사, 3) PV 및 IHVC 재건을 위한 2개의 3D 인쇄 플라스틱커프스(39,40,4) HA18,,27,,41 및 5) 이전에 설명된 BD 스텐팅,기술(28)에대한 마이크로혈관 슬리브 재연결. PV를 통한 감기 홍조와 이전 연구결과(17)를기반으로 하는 항생제 처방등 2개의 추가 단계도 포함되어 있습니다. 이 최적화된 OLT 프로토콜은 perioperative 합병증과 이환율을 최소화하고 인간 간 이식에 사용되는 수술 수술을 보다 면밀히 모델합니다.

<table><tbody><tr><td>10-0 Ethilon</td><td>Ethicon</td><td>2830G</td><td>10-0 Ethilon Black 1X5" BV100-4 테이퍼</td></tr><tr><td>10mL 주사기</td><td>BD</td><td>B302995</td><td>Luer-Lok 팁, 멸균, 일회용</td></tr><tr><td>1mL 주사기</td><td>BD</td><td>B309628</td><td>Luer-Lok 팁, 멸균, 일회용</td></tr><tr><td>20mL 주사기</td><td>BD</td><td>B301031</td><td>Luer-Lok 팁, 멸균,</td></tr><tr><td>IHVC</td><td></td><td>용 일회용 3D 프린팅 커프</td><td></td></tr><tr>PV<td></td><td></td><td></td><td>용 맞춤형 3D 인쇄 커프</td></tr><tr><td>IHVC</td><td></td><td></td><td></td>용 맞춤형 3D 인쇄 홀더</tr><tr><td>PV</td><td></td><td></td><td></td>용 맞춤형 3D 인쇄 홀더</tr> 맞춤형 <tr><td>3mL 주사기</td><td>BD</td><td>B309657</td><td>Luer-Lok 팁, 멸균, 일회용</td></tr><tr><td>4-0 Sofsilk</td><td>Coviden</td><td>GS-835</td><td>Wx 코드 꼰 실크, 30", 봉합사 1-바늘 26mm 길이 1/2 서클 테이퍼 포인트 바늘</td></tr><tr><td>5-0 Monocryl</td><td>Ethicon</td><td>Y433H</td><td>염색되지 않은 모노필라멘트 1X27" TF</td></tr><tr><td>5mL 주사기</td><td>BD</td><td>B309646</td><td>Luer-Lok 팁, 멸균, 일회용</td></tr><tr><td>7-0 실크</td><td>Teleflex Medical</td><td>103-S</td><td>블랙</td></tr><tr><td>8-0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>2775G</td><td>8-0 Prolene Blue 1X24" BV130-5 EVP 더블 무장</td></tr><tr><td>Barraquer 마이크로 바늘 홀더 캐치 없이</td><td>Aesculap 수술 기구</td><td>FD231R</td><td>곡선형 120 mm, 4 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Barraquer 바늘 홀더, 엑스트라 파인 죠 8.0mm, 곡선 잠금 장치 없음</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-025T</td><td>스몰 사이즈, 티타늄</td></tr><tr><td>바라커 니들 홀더, 파인 죠 12.0mm, 아웃 락 Rumex</td><td>International Co.</td>가 없는 곡선<td>8-021T</td><td>소형 크기, 티타늄</td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard BC 22 GA x 1.00 IN</td><td>BD Angiocath / Autoguard</td><td>382523</td><td>22 G x 1.00"(0.9 mm x 25 mm) 날개 없는 카테터, 37 mL/min</td></tr><tr><td>BDPrecisionGlide 일회용 바늘: 일반 베벨 - 일반 벽.</td><td>BD</td><td>B305106</td><td>PrecisionGlide 스테인리스 스틸 바늘에는 반투명, 색상 코드, 폴리프로필렌 허브가 있습니다. 22 G</td></tr><tr><td>BD Precisionglide 주사기 바늘 21G</td><td>BD</td><td>305167</td><td>게이지 21, 길이 1.5 인치, 피하 주사 바늘</td></tr><tr><td>BD Precisionglide 주사기 바늘 30G</td><td>BD</td><td>305128</td><td>게이지 30, 길이 1 인치, 피하 주사 바늘</td></tr><tr><td>Betadine Solution by Purdue Products LP</td><td>Purdue Products Lp</td><td>67618-150-17</td><td>10% 포비돈&ndash; 요오드 국소 용액 USP</td></tr><tr><td>부피바카인 주사 BP 0.5%</td><td>SteriMax Inc.</td><td>DIN : 02443694</td><td>0.5 % (100mg / 20mL)</td></tr> <tr><td>곡선 타이 겸자</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-501E</td><td>6mm 타이잉 플랫폼, 스트레이트 샤프트, 플랫 핸들, 길이 88mm</td></tr><tr><td>DC 온도 컨트롤러</td><td>FHC Inc.</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>DK 아이리스 가위(곡선형)</td><td>Duckworth & Kent</td><td>1-211B</td><td>무딘 팁, 절단 길이 4mm, 팁에서 피벗 길이 11mm, 원형 핸들, 길이 107mm</td></tr><tr><td>에탄올, 200 프루프(100%), USP, Decon Labs</td><td>Decon Labs, Inc.</td><td>2716</td><td>d2H2O</td></tr><tr><td>미세 조정 가능한 와이어 견인기</td><td>Fine Science Tools</td><td>17004-05</td>로 70%로 희석 <td>최대 스프레드: 3.5cm, 깊이 5cm</td></tr><tr><td>Harvard Apparatus Isoflurane Funnel-Fill Vaporizer</td><td>Harvard Appartus Limited</td><td>34-1040SV</td><td></td></tr><tr><td>Heparin LEO(헤파린 나트륨)</td><td>LEO Pharma Inc.</td><td>DIN:00453811</td><td>10,000 i.u./10 mL</td></tr><tr><td>Ice-Pak</td><td>Cryopak</td><td>FIP88016</td><td>4.00 in. x 7.00 in., 두께 1.50 inch</td></tr><tr><td>Isoflurane 미국 약전(USP) 99.9%</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>DIN: 02231929</td><td>250 mL, 흡입 마취제, NDC 66794-017-25</td></tr><tr><td>Khaw Transconjunctival Adjustable Suture Control Forceps</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-502N</td><td>5mm 고광택 타이 플랫폼, 스트레이트 샤프트, 플랫 핸들, 길이 84mm</td></tr><tr><td>젖산 링거 주입 USP, 1000mL</td><td>Baxter Co.</td><td>DIN : 00061085</td><td>JB2324</td></tr><tr><td>McPherson 묶는 집게</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-500E</td><td>6mm 타이 플랫폼, 스트레이트 샤프트, 플랫 핸들, 길이 90mm</td></tr><tr><td>Metzenbaum 가위 - 14.5cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14024-14</td><td>스트레이트 샤프/블런</td></tr>트 <tr><td>Micro Kitzmiller 클램프</td><td>Scanlan</td><td>3003-630</td><td>턱 길이 23mm, 길이 11cm</td></tr><tr><td>현미경-Leica M525 F20</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>카탈로그 번호</td></tr><tr><td>없음 부직포 거즈 스폰지</td><td>Fisherbrand</td><td>22-028-556</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar 봉합사 커터</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>12002-14</td><td>15mm 커팅 엣지, 2mm 턱 표면 - 14cm</td></tr><tr><td>OptixCare 아이 루브, 25gm</td><td>OptixCare</td><td>ES-KE8O-69U1</td><td>이전 Optixcare 수술용 아이 윤활제</td></tr><tr><td>피페라실린 나트륨염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8396</td><td>페니실린 아날로그</td></tr><tr><td>퓨리탄 3" 표준 면 면봉 w/ 나무 손잡이</td><td>Puritan Medical Products Company LLC</td><td>803-WC</td><td>정규 면 팁 애플리케이터 나무 손잡이</td></tr><tr><td>라운드 핸들 바늘 홀더 스트레이트 w/ 잠금</td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-12</td><td>라운드 핸들로 손끝을 쉽게 조정할 수 있습니다 - 12.5cm</td></tr><tr><td>시어 가위 곡선형 둔기</td><td>Fine Science Tools</td><td>14105-12</td><td>가볍고 섬세한 패턴의 이식 가위 - 12cm</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 마이크로 Serrefines 곡선 - 4mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-06</td><td>턱 길이 4mm, 턱 너비 0.75mm, 총 길이 16mm, 턱 압력 125g</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 Micro Serrefines 곡선 - 6mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-05</td><td>턱 길이 6mm, 턱 너비 1mm, 총 길이 17mm, 턱 압력 100g</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 마이크로 Serrefines 스트레이트 - 6mm</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>18055-03</td><td>턱 길이 6mm, 턱 너비 1mm, 총 길이 15mm, 턱 압력 100g</td></tr><tr><td>수술 플랫폼</td><td></td><td></td><td>맞춤형, 자기</td></tr><tr><td>SurgiVet Vaporstick 마취 기계</td><td>일반 마취 서비스, Inc</td><td>V7015</td><td></td></tr><tr><td>T / 펌프 국소 요법</td><td>스트라이커</td><td></td><td>TP700 시리즈</td></tr><tr><td>진공 압력 펌프</td><td>Barnant Co.</td><td>400-1901</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 가위와 Microserrations 스트레이트</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>15070-08</td><td>절삭 날 : 5mm, 팁 직경 : 0.1mm - 8.5cm</td></tr><tr><td>Vetergesic Buprenorphine</td><td>Ceva Animal Health Ltd</td><td>NAC 번호 : 12380352</td><td>0.324 mg / ml 개와 고양이 용 주입 용 부프레 노르핀 hydochloride 솔루션</td></tr><tr><td>Vetroson V-10 양극성 전기 수술 유닛</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td>No 카탈로그 번호</td></tr><tr><td>Surgical Drape</td><td>PDC Healthcare</td><td>DRP1824</td><td>Multi-purpose sterile clear plastic, 18" x 24", 40/케이스</td></tr></tbody></table>

직교 간 이식의 쥐 모형에 있는 동맥 재연결 후에 감소된 합병증

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

쥐 직교 간 이식 (OLT) 모델은 급성 및 만성 거부를 연구하는 강력한 도구입니다. 그러나 동맥 재연결의 부재로 인해 인간 간 이식의 완전한 표현은 아닙니다. 여기에 설명된 간 동맥(HA) 재연결의 통합을 포함하는 수정된 이식 절차, 이식 결과에 있는 현저한 개선으로 이끌어 내는. 평균 간 시간 12 분 과 14s, HA 재연결 결과 이식 된 간의 향상 된 관류와 장기 받는 사람 생존의 증가 37.5% 받는 사람 88.2%. 이 프로토콜에는 포털 정맥과 적외선 베나 카바를 연결하는 3D 프린팅 커프스와 홀더의 사용이 포함됩니다. 그것은 간 이식의 여러 측면을 공부하기 위한 구현될 수 있습니다., 면역 반응 및 감염에서 절차의 기술적인 측면에. 이 수정된 쥐 OLT 프로토콜은 미세 혈관 기술을 사용하여 동맥 재연결을 위한 간단하고 실용적인 방법을 통합함으로써 인간 간 이식의 측면을 면밀히 모방하고 귀중하고 임상적으로 관련된 연구 모델로 작용할 것입니다.

이전에 설명된프로토콜(28)을사용하여 비HA 해부학 쥐 OLT 모델을 확립하는 동안, 우리 팀은 각각 21일과 60일 후에 생존율을 50% 및 37.5%로 관찰했습니다. HA 해부학없이 장기 생존의 높은 비율은 일부 그룹에 의해보고되었지만28,이러한 초기 결과는 동맥 유입이없는 단점을 강조. 대조적으로, 최적화된 HA 재연결 절차는 장기 생존율이 37.5%에서 88.2%로 크게 증가하였다(p= 0.015)(그림6).
HA 재연결 없이 이식된 동물의 대표적인 하위 집합(6일과 13일 수술 후)의 조직학적 분석은 중심 괴사를 가진 저산소 간 손상의 징후를보였다(도 7). 광범위한 간 괴사는 이들 동물에서 알라닌 아미노 트랜스퍼라제(ALT) 및 아스파르타테 아미노트랜스퍼라제(AST)의 엄청나게 높은 수준과 연관되었다(그림7). 대조적으로, HA 재연결을 가진 이식된 쥐는 간 상해의 흔적을 보여주지 않았고, 조직화된 아시니, 소류(예를 들어, 간 정맥을 가진 중앙 정맥 및 포털 트라이아드), 동맥 및담관(그림 7)을가진 일반적인 간 빈혈 구조를 드러냈다.
23개의 개별 적인 수술 과정을 통해 평균 ancc 시간이 허용되었지만 (12 분 및 14 s [± 78 s]), 비 HA 재연결 모델에서의 생존은 결국 증가 된 연습으로 개선 될 수 있습니다. 그러나 HA 재연결 없이 이식된 4마리의 동물 중 3마리가 56일, 96일, 111일 의 고민으로 인해 안락사되었다는 점은 주목할 가치가 있다. 추가적으로, 간내학적 분석은 표시된 담관 증식, periportal 섬유증 및 염증, 왜곡된 간 parenchyma(보충 도 2)를포함하여 저산소 간 손상 후에 반응성 변화를 밝혔습니다. 저산소 간 상해의 형태학적 특징의 존재는 HA 재연결이 효율적인 간 관류 및 정상적인 기능에 중요하다는 사실 인정을 확증합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig1.jpg"> 그림 1: 포털 정맥 및 적외선 정맥에 대한 3D 인쇄 커프 디자인의 회로도 표현. 첫 번째 넥타이는 손잡이(iii)에 가장 가까운 홈(ii)으로 조여지고, 두 번째 넥타이는 손잡이에서 가장 멀리 떨어진 홈(i)에서 조여져 있습니다. 외부 직경은 (iv) 2.38 mm 포문 정맥 (PV)에 대 한 그리고 2.15 m m frac c 열 등 베나 카바 (IHVC)에 대 한. 내부 직경은 PV용 (v) 1.74mm, IHVC의 경우 1.38mm입니다. 길이는 PV용 (vi) 2.60mm, IHVC의 경우 2.15mm입니다(모든 3D 인쇄 재료에 대한 정확한 사양은 보충 재료에서찾을 수 있음). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig2.jpg"> 그림 2: 간 동맥 스텐트 삽입에 접목. (A)체강 트렁크(i)의 개구부 끝은 좌측 위동맥에 비장 동맥을 절단하여 넓어, 이는 일반적인 HA의 분기를 노출한다. (ii) BD 스텐트는 기증자 쥐 간추출 전에 묶여 있다. (iii) PV 커프스와 (iv) IHVC 커프스가 배의 끝을 커프스 위에 접혀 삽입하여 묶습니다. (b)(i) HA 스텐트를 삽입하기 위해, 노출된 공통 HA는 집게로 여러 번 뻗어 있다. (C)(i) HA 스텐트는 공통 HA에 단단히 배치되고 8-0으로 묶여 있습니다. 프롤렌. (D)HA 스텐트는 (ii) 링거의 젖산용액(BD = 담관, IHVC = 적외선 베나 카바, HA = 간 동맥)으로 플러시된다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig3.jpg"> 그림 3: 3D 프린팅 홀더를 사용하여 적외선 정맥 카바 연결. (A)(i) PV는 IHVC 연결과 동일한 기술을 사용하여 연결된다. 접목은 (ii) (iii) IHVC 커프 위에 고정되어 있습니다. 받는 사람 IHVC 개구부 (iv) (iv) 오픈의 측면에 봉합 3D 인쇄 홀더를 열어 유지합니다. 느슨한 (v) 7-0 실크는 받는 사람 IHVC 주위에 묶여있다. (B)접목 IHVC의 커프는 (i) 받는 사람 IHVC 내에 삽입된다. 이제 느슨한 넥타이가 강화됩니다. (C)클램프가 제거되고(i) 3D 인쇄 홀더는 가위로 분리된다. (D)추가 (i) 7-0 실크는 안전하지 않은 경우 연결 주위에 묶여 있지만, 일반적으로 하나의 넥타이는 충분하다 (PV = 포털 정맥, IHVC = 적외선 베나 카바). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig4.jpg"> 그림 4: 간 동맥의 미세 혈관 슬리브 연결. (A)(i) BD 스텐트는 받는 사람에게 연결되지 않습니다. (ii) HA 스텐트는 (iv) 받는 사람의 적절한 HA에 연결되는 접목에 배치된다. (iii) PV가 연결되어 있습니다. (B)10-0 에틸론을 (i) 커브드 바늘을 가진 에틸론은 하스텐트를 통해 하스텐트를 통해 받는 사람 HA 개회말의 측면에 그려집니다. (C)10-0 에틸론은 HA 스텐트를 통해 다시 그려집니다. 따라서 받는 사람의 적절한 HA는 슬리브처럼 스텐트를 통해 당겨지도록 합니다. (D)(i) 10-0 에틸론이 있는 넥타이는 수령인의 적절한 HA가 먼저 HA 스텐트를 통해 실행되는 부분으로 스텐트안으로 당겨지면 만들어집니다. (E)여기에 기재된 HA 해부학의 회로도(B),B(C),및(D)(BD = 담관, HA = 간 동맥, PV = 포털 정맥). *좌측 위동맥에 비장 동맥을 절단하여 체강 트렁크의 개통 끝이 넓어질 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig5.jpg"> 그림 5: 두 개의 스텐트를 사용하여 담관 연결. (A)(i) 이식편 BD 스텐트는 수신자의 BD의 개구부에서 느슨하게 묶인 (ii) 스텐트의 도움으로 수신자 BD에 삽입된다. (iii) PV는 BD 연결 전에 연결된다.(B)수신자의 BD의 끝에 스텐트가 제거되고 와이드 개통으로 사용되었다(ID) (C)수신자 스텐트를 느슨하게 고정하는 넥타이는 이제 연결을 연결하는 데 사용되며, (i) 또 다른 7-0 실크는 스텐트의 미끄러지거나 비틀림을 피하기 위해 스텐트를 제자리에 단단히 유지하는 데 사용된다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig6.jpg"> 그림 6: 이식 퍼센트 생존. HA 재연결 없이 직교 쥐 간 이식 (n = 8) 하 와 HA 재연결 (n = 17). 동물은 적어도 60 일 동안 간 부전 및 /또는 감염의 표시를 위해 이식 후 밀접하게 따릅니다. 수술 후 합병증을 보이지 않는 쥐는 생존자로 간주되었다 (*p = 0.015, 카플란 마이어 추정에 의해 계산된 대로 [긴 순위 테스트]). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig7.jpg"> 그림 7: 간 조직 병리학 평가. 대표적인 헤마톡시린 및 에오신염색구간은 간간이식(LTx)이 끝난 후 6일과 13일에 간동맥(HA)을 재연결하지않고(B)가없는동물(A)에있다. (C)포털 트라이어드(포털 정맥, 동맥 및 담관), 중앙 정맥 및 아시니를 포함한 소구를 보여주는 정상 간 parenchyma. 포털 트라이어드 옆에 있는 간세포는 영역 1 간세포입니다. 로골 내의 중앙 정맥 옆에 있는 간세포는 영역 3 간세포입니다; 및 영역 1과 3 사이의 간세포는 영역 2 간세포 (ALT = 알라닌 아미노 전달제, AST = 아미노 트랜스퍼라제, CV = 중앙 정맥)이다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Supplementary Figure 1" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1.jpg"> 보조 도1: 스텐트 및 커프치치. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Supplementary Figure 2" src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2.jpg"> 보충 그림 2: 간 구실기종의 중단을 보여주는 간 조직 병리학 평가. 대표적인 헤마톡시린 과 에오신 염색 구간은 LTx 이후 54일, 96일, 111일 후에 HA재연결이 없는 동물의 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2large.jpg" target="_blank">경우.</a>
보충 재료 1 : 포르타 커프 200g - 지원 2.0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary1.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 재료 2 : 카바 커프 200g - 지원 2.0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary2.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 재료 3 : 간 리트랙터 200g. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary3.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 재료 4 : 백 홀더 - 1.2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary4.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 재료 5 : 카바 150g - 2.1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary5.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 자료 6: 포르타 1.4.1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary6.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 자료 7: 홀더 팔 맥길. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary7.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 소재 8: 홀더 미니 암 LAB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary8.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 자료 9: 홀더 및 팔 소프트 파트 1.3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary9.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>
보충 자료 10: 홀더 베이스 - 3.1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary10.stl" target="_blank">이 파일을 보려면 여기를 클릭하십시오 (다운로드하려면 마우스 오른쪽 클릭).</a>

이 연구의 목표는 쥐 정형 소 간 이식 모델을 수정하여 인간의 간 이식을 더 잘 나타내고 수령인 생존을 개선하는 것입니다. 제시된 방법은 기증자 간동맥을 수령인 간동맥에 연결하여 간 동맥 유입을 재확립합니다.

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

쥐 치열 교정 간 이식 모델은 간 이식의 여러 측면을 연구하기위한 강력한 도구입니다. 감염에 면역 반응에서, 절차의 기술적 인 측면에. 이 기술의 주요 장점은 합병증을 줄일 수 있다는 것입니다, 더 나은 와서 간 이식을 나타내는, 받는 사람의 생존을 향상.이 수정 된 쥐 치열 교정 간 이식 프로토콜 밀접 하 게 인간의 간 이식의 측면을 모방 하 고 변수 및 임상 관련 연구 모델로 봉사 할 것 이다. 시각적 데모를 통해 시청자는 모든 세부 사항을 배우고이 기술에 필요한 미세 수술 기술을 마스터하기위한 학습 곡선을 단축 할 수 있기를 바랍니다. 마취 된 12 - 14 주 된 쥐의 자궁 내 열등한 베나 카바에 헤파린 나트륨 300 개의 국제 단위를 주입 한 후 담관 분기 아래 5 밀리미터 절개를하고 담관 스텐트를 일반적인 담관에 삽입합니다.7-0 실크 합자 1개, 절개 1mm, 분기 아래 1개의 합자 1개로 스텐트를 고정합니다. 두 관계 사이의 담관을 잘라 적절한 간 동맥을 노출. 위장 동맥을 7-0 실크 합자 2개로 나누고 왼쪽 위 동맥, 비장 동맥 및 체강 트렁크를 노출시합니다.그런 다음 왼쪽 위 동맥, 비장 동맥 및 동맥 관계 사이에 체강 트렁크를 잘라냅니다. 21.5 게이지 바늘이 장착된 20 밀리리터 주사기를 사용하여 섭씨 4도의 20밀리리터를 포털 정맥에 천천히 주입하십시오. 기증자 간을 준비하기 위하여는, 체강 트렁크, 비장 동맥 및 좌위 동맥의 양면을 잘라 더 큰 동맥 소매 커프를 형성하고 커프를 통해 기증자 일반적인 간 동맥에 1.5 밀리미터 길이 24 게이지 동맥 스텐트를 삽입합니다.그런 다음 8-0으로 스텐트를 고정합니다. 폴리 프로필렌 합자 및 링거의 젖산 용액으로 스텐트를 플러시. 12 주에서 14 주 된 쥐 수령인의 포털 정맥을 노출 한 후, 수신자 담관을 틸러 분기 아래 0.5 센티미터로 나누고 담관 스텐트를 담관 스텐트를 말단 공통 담관에 삽입합니다. 왼쪽, 중간 및 오른쪽 간 동맥을 노출하고 혈관을 간 동맥 분면에 묶습니다.넥타이 위의 간 가까이 동맥을 잘라 슈퍼 간 열등한 베나 카바 뒤에 거즈의 긴 얇은 조각을 배치합니다. 3D 인쇄 된 정맥 카바 홀더를 간 정맥 카바 뒤에 놓고 텐노 비 흡수성 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 3D 인쇄 된 손잡이의 끝을 함께 바느질하십시오. 느슨하게 간 정맥 과 포털 정맥 사이의 3D 인쇄 홀더 아래에 7-0 실크 합자를 묶고, 3D 인쇄 카바 홀더 아래 오른쪽 신장 정맥 바로 위에 간 정맥 카바를 고정.포탈 정맥을 유철물 정맥 바로 위와 3D 인쇄 PV 홀더 아래에 고정하십시오. 27 게이지 바늘이 부착된 3밀리리터 주사기를 사용하여 포털 정맥의 분기를 통해 섭씨 37도 링거의 젖산 용액 2밀리리터를 플러시하고 키츠밀러 클램프로 간 위에 슈퍼 간 정맥 카바를 고정시하십시오. 그런 다음 가능한 한 간과 가까운 클램프 아래를 잘라 내고 포탈 정맥과 간 간 정맥 카바 모두에 대해 3D 인쇄 홀더 위로 잘라 받는 사람 간 을 제거합니다.기증자 간 이식의 경우, 상류 자갈 해부학이 생성 될 수있는 방식으로 수령인의 신체 구멍 내에서 기증자 간을 주의 깊게 지향합니다. 기증자의 포탈 정맥 커프를 받는 사람 포털 정맥에 삽입하고 7-0 실크 넥타이를 조입니다. 슈퍼 간 정맥 카바에서 외상성 클램프를 제거하고 포털 정맥에 대한 미세 혈관 클립을 제거합니다.따뜻한 혈액으로 간을 다시 perfusing 후, 기증자 간 정맥 카바 커프를 받는 사람 간 정맥 카바에 삽입하고 7-0 실크 넥타이로 혈관을 확보하십시오. 그런 다음 받는 사람 클립을 제거하기 전에 기증자 간 정맥 카바 클립을 제거합니다. 동맥 해부학을 수행하기 위해 스텐트를 넘어 확장되는 기증자로부터 체강 트렁크의 부분을 잘라 내어 받는 사람의 적절한 간 동맥을 고정시하십시오.끝에 넥타이와 혈관을 둘러싼 여분의 조직을 잘라. 그리고 링거의 젖산 용액을 사용하여 기증자와 수령인 용기의 루멘을 플러시하십시오. 구부러진 바늘을 사용하여, 기증자 간 동맥의 왼쪽 측면을 통해 10-0 에틸론 봉합사를 놓고, 스텐트의 해실 오리피스 위에 2.5 밀리미터, 스텐트의 끝을 통해 밖으로.용기의 왼쪽에서 동맥의 오른쪽으로 용기 아래 0.5 밀리미터 의 적절한 간 동맥을 트랜스픽스합니다. 기증자 간 동맥의 오른쪽 벽을 통해 안쪽에서 외부로, 원래 스티치와 동일한 스텐트 오리피스에서 멀리, 그리고 수신자에게 적절한 간 동맥을 미끄러 10-0 비흡수성 monofilament의 두 끝에 당겨, 및 간 동맥 스텐트로. 그런 다음 기증자 간 동맥위에 10-0 불흡수성 모노필라멘트를 묶습니다.수령인과 기증자 담관을 모두 플러시하고 기증자 담관 스텐트를 받는 사람 담관에 삽입합니다. 그런 다음 이전에 받는 사람 담관 주위에 배치 된 넥타이를 조입니다. 본 대표적인 실험에서, 비간 동맥 해부학 쥐 직교 간 이식 모델은 각각 21일과 60일, 수술 후 50 일과 37.5%의 생존율을 입증하였다.대조적으로, 최적화된 간 동맥 재연결 절차는 장기 생존을 현저하게 증가시켰습니다. 간 동맥 재연결 없이 이식된 동물의 대표적인 부분 집합의 조직학 분석은 6일과 13일 이식 후 중앙 lobular 괴사를 가진 저산소 간 상해의 표시를 밝혔습니다. 광범위한 간 괴사는 이러한 동물에서 알라닌 면역 전달및 아산 아미노 트랜스퍼의 엄청나게 높은 수준과 연관되었다.대조적으로, 간 동맥 재연결을 가진 이식한 쥐는 간 상해의 아무 표시도 보여주지 않으며 조직된 acini, 소굴, 동맥 및 담관과 가진 일반적인 간 parenchyma 구조물을 밝혔습니다. 또한, 비간 동맥 재연결 모델 쥐로부터 간의 조직학적 분석은 저산소 간 손상 후 반응성 변화를 드러냈다. 시장 담관 증식을 포함 하 여, peri 포털 섬유증 및 염증, 그리고 왜곡 된 간 parenchyma.이 프로토콜은 간 이식의 많은 면역 학적 및 외과 적 측면을 연구하도록 적응 할 수 있으며 이식과 관련된 새로운 치료 개입을 테스트하기위한 모델로 사용될 수 있습니다.

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Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

학습하세요 쥐 직위 간 이식 모형에서 동맥 재연결을 통한 수술 기법을. 이 방법은 인간 간 이식을 모방하며 수용자 생존률을 향상시키고 합병증을 감소시켜 임상 관련 연구에 활용됩니다.

직교 간 이식의 쥐 모형에 있는 동맥 재연결 후에 감소된 합병증

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