Name: 꼬리 정맥 전이 검사의 결합된 사용 및 생체 내 실시간 생체 내 이미징을 결합하여 폐암 전이성 식민지화 및 폐의 부담을 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: 배우세요 꼬리 정맥 전이 검사와 생체 내 실시간 이미징을 결합하여 유방암 전이를 비침습적으로 정량화하는 방법입니다. 이 프로토콜은 전이 식민화와 성장을 실시간으로 모니터링하여 후보 유전자의 역할을 연구하는 데 활용됩니다.

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우리는 바이러스 감염과 원고의 비판적 독서를 지원에 대한 에밀리 노턴 감사합니다. 우리는 또한 폐에 있는 녹색 전이의 심상 분석에 도움을 위한 폐와 케이트 E. Tubbesing의 심상을 취득하는 것을 도움을 위한 라이언 카나이 에게 감사합니다. 동물 연구 시설 직원의 지원과 이 비디오 작성에 도움을 주신 것에 대해 감사드립니다. 이 작품은 J.M.L.에 수여 수잔 G. 코멘 경력 촉매 그랜트에 의해 지원되었다 (#CCR17477184).

저자는 공개 할 것이 없다.

메서드의 중요한 단계 주어진 세포주 및 마우스 균주에 대해 주입된 세포수(단계 3)를 최적화하는 것이 중요하며, 이는 실험의 형태및 길이에 크게 영향을 미칠 수 있다. 너무 많은 세포가 주입되거나 전이가 너무 오래 증가하는 경우에, 전이가 평가하기 어려운 유전 조작의 효력을 만드는 계산하기 어려울 지도 모릅니다. 그러나, 너무 적은 세포가 주입되는 경우에, 몇몇 또는 전혀 전이가 형성될 수 있습니다. 따라서, 예비 실험은 전이가 성장하는 최적의 수와 시간의 길이를 결정하기 위해 세포의 다른 숫자를 사용하여 수행해야합니다. 그룹 내에서 전이의 일관된 수를 보장 하기 위해, 각 마우스에 실행 가능한 세포의 동일한 수를 주입 하는 것이 중요 하다. 세포는 튜브와 주사기 모두에 정착 할 수 있기 때문에, 세포는 주사기를 적재하기 전에 부드럽게 다시 중단되어야하며, 세포 현탁액은 너무 오래 주사기에 방치되어서는 안됩니다 (단계 4.3.2). 세포 생존력은 세포가 현탁액에 오래 있을수록 감소하므로 세포의...

암은 전 세계적으로 사망의 두 번째 주요 원인 남아1 전이 이 죽음의 대부분에 대한 책임이2,3. 그러나, 전이성 식민지및 후속 성장을 통제하는 분자 기계장치의 한정된 이해는 전이성 질병을 위한 효과적인 처리의 발달을 방해했습니다. 새로운 치료 표적의 확인은 후보 유전자의 교란된 발현 또는 기능이 전이 형성 및 성장에 미치는 영향을 테스트하기 위한 분석법을 필요로 한다. autochthonous 마우스 모델은 장점이 있지만 생성하는 데 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 들기 때문에 대상 검색보다는 대상 유효성 검사에 더 적합합니다. 후보 유전자가 시험관 내 암세포에서 교란되고 전이성 전위전위에 대한 영향이 생체 내에서 평가되는 이식 모델 시스템은 자가 진단모델보다 비용이 적게 들고 처리량이 높다. 또한, RNAi, CRISPR/CAS9 및 트랜스유전자의 안정한 전달을 위한 바이러스 벡터가 널리 이용가능하여, 암 세포주에서 관심 있는 거의 모든 유전자 또는 유전자를 비교적 쉽게 교란할 수 있다. 이 접근법은 또한 세포를 면역 타협 또는 인간화 된 마우스로 이식함으로써 인간 암 세포주에서 전이성 식민지화 및 성장에서 후보 유전자의 역할을 분석하는 데 사용할 수 있습니다.
생체 내에서 이식된 암세포에 의한 전이 형성을 테스트하는 데 사용되는 두 가지 유형의 실험은 자발적전이성 전이 검정 및 실험전이이다. 자발적 전이분석4,5에서,암세포는 마우스로 주입되고, 원발성 종양을 형성하도록 허용한 다음, 자발적전이 형성 및 후속 성장이 분석된다. 이 모형의 힘은 세포가 전이성 종양을 형성하기 위하여 전이성 프로세스의 모든 단계를 완료해야 한다는 것입니다. 그러나, 많은 암 세포주는 자발적인 전이 모델에서 효율적으로 전이되지 않으며, 원발성 종양 성장에 영향을 미치는 세포의 조작은 전이 분석의 결과를 혼동할 수 있다. 암세포가 순환에 직접 주입되는 실험적 전이 실험은 이러한 함정을 피하기 위해 사용됩니다. 일반적인 실험전이검사는꼬리정맥주사6,7,8(여기서 입증됨), 심내주사9,및 문맥주사(10)를 포함한다.
여기에 제시된 프로토콜의 목적은 연구원이 실시간으로 전이 형성 및 성장을 모니터링할 수 있도록 하는 생체 내 실험 전이 분석실험을 제공할 뿐만 아니라 동일한 마우스의 폐에서 종점 전이 수 및 크기를 정량화하는 것이다. 이를 달성하기 위해, 전통적인 꼬리 정맥 전이 검소6,7,8은 생체 내 이미징 장치9,11,12,13,14를사용하여 살아있는 동물 이미징과 결합된다. 루시퍼라제와 형광 단백질을 모두 안정적으로 발현하는 종양 세포는 측면 꼬리 정맥을 통해 마우스내로 주입된 후 생체내 이미징 장치는 시간이 지남에 따라 폐의 전이성 부담의 변화를 측정하는데 사용된다(그림1). 그러나, 생체 내 살아있는 동물 이미징 장치는 개별 전이의 크기를 구별하거나 측정할 수 없다. 따라서, 실험의 끝에서, 형광 입체 현미경은 절편 및 조직학 또는 면역 조직화학의 필요없이 폐에서 형광 전이의 크기를 카운트하고 측정하기 위해 사용된다(그림 1). 이 프로토콜은 후보 유전자의 발현 또는 기능을 변경하는 것이 전이 형성 및 성장에 미치는 영향을 테스트하는 데 사용될 수 있다. 항체를 차단하는 작은 분자 또는 기능과 같은 잠재적인 치료 화합물도 시험될 수 있습니다.
이 접근법을 설명하기 위하여는, 우리는 먼저 필수적인 복제 인자, 복제 단백질 A3 (RPA3)가 전이성 마우스 유방암 세포에서 쓰러지는 개념 실험의 증명을 수행했습니다. 우리는 RPA3 녹다운 세포로 주입된 마우스가 대조군 세포로 주입된 마우스에 비해 매 시점에서 현저한 전이성 부담을 가지고 있음을 보여준다. 전이 함유 폐의 분석은 이러한 전이성 부담 감소가 전이성 식민지화 및 형성되는 전이의 성장을 크게 감소시킨 결과임을 보여준다. 이 기술을 추가로 설명하기 위하여는, 우리는 PDZ 결합 모티프 (TAZ)를 가진 예 관련 단백질 (YAP) 및 전사 공동 활성제의 동시 노크가 전이성 식민지화 또는 후속 성장을 손상하는지 여부를 시험했습니다. YAP 와 TAZ는 하마 통로의 중요한 하류 이펙터인 두 개의 관련 전사 공동 활성제입니다. 우리15,16 및 그 외는 전이에 YAP와 TAZ를 연루했습니다(17,18,19에서검토), 이 단백질이 좋은 치료 표적이다는 것을 건의합니다. 일관되게, 우리는 YAP/TAZ 녹다운 세포로 주입된 마우스가 전이성 부담을 현저하게 감소시켰음을 발견했습니다. 폐의 분석은 YAP/TAZ 녹다운 세포가 더 적은 전이를 형성하고 양식한 전이가 더 작다는 것을 보여주었습니다. 이 실험은 실험적인 전이 실험이 어떻게 연구원이 전이 형성 및 성장에 있는 후보 유전자의 역할을 신속하고 저렴하게 시험하는 것을 허용하는지 보여줍니다. 그(것)들은 또한 살아있는 동물 화상 진찰의 결합한 사용 및 전체 폐에 있는 전이의 형광 정량화가 전이성 식민지 도중 단계를 더 잘 이해하는 것을 허용하는 방법을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>10% SDS-PAGE 젤</td><td></td><td></td><td>웨스턴 블롯용</td></tr><tr><td>2.5% 트립신</td><td>Gibco</td><td>15090-046</td><td>조직 배양을 위한 트립신</td></tr><tr><td>96웰 플랫 바텀 화이트 어세이 플레이트</td><td>Corning</td><td>3922</td><td>배양된 세포에서 루시페라아제 및 레닐라 신호 측정용</td></tr><tr><td>알코올 와이프</td><td></td><td></td><td>꼬리 정맥 삽입 전 주사 부위를 스테롤화하기 위해</td></tr><tr><td>BALB/C 마우스( 여성, 6 주)</td> <td>Taconic</td><td>BALB-F</td><td>꼬리 정맥 전이 집락 및 부담 분석</td></tr><tr><td>BSA 일반</td><td>VWR Ameresco</td><td>97061-416</td><td>웨스턴 블롯</td></tr><tr><td>세포 용해 완충액</td><td>세포 신호</td><td></td><td>protien 샘플 수집</td></tr><tr><td>용 Celltreat 주사기 필터, PES 30mm, 0.45 &mu; m</td><td>Celltreat</td><td>40-229749-CS</td><td>바이러스 상등액</td></tr><tr><td>CO2 및 안락사 챔버</td><td></td><td></td><td>여과용</td></tr> 마우스 안락사용 <tr><td>Dual-luciferase reporter assay kit</td><td>Promega</td><td>E1960</td><td>배양 세포에서 루시페라제 및 레닐라 신호 측정용</td></tr><tr><td>Dulbecco& 39; s 인산염 완충 식염수</td><td>Himedia</td><td>TS1006</td><td></td></tr><tr><td>PBS EDTA</td><td>VWR</td><td>97061-406</td><td>조직 배양을 위해 트립신을 희석하는 데 사용</td></tr><tr><td>FBS 100% 미국 원산지</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>완전 성장 매체의 구성 요소</td></tr><tr><td>Fujifilm LAS-3000 젤 이미저</td><td>Fujifilm</td><td></td><td>웨스턴 블롯</td></tr><tr><td>GAPDH(14C10) Rabibit mAb</td><td>세포 신호 전달</td><td>2118</td><td>용 웨스턴 블롯</td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 IgG (H + L) 2 차 항체, HRP conjugate</td><td>Thermo Scientific</td><td>31460</td><td>웨스턴 블롯</td></tr><tr><td>인간 배아 신장 세포, HEK-293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td>바이러스 포장에 사용되는 세포주</td></tr><tr><td>HyClone DMEM / High clucose</td><td>GE Healthcare 생명 과학</td><td>SH30243.01</td><td>완전 성장 매체</td></tr><tr><td>Hygromycin B, Ultra Pure Grade</td> 구성 요소<td>VWR Ameresco</td><td>97064-810</td><td>감염된 세포의 항생제 선별용</td></tr><tr><td>I3-P/i3 다중 모드 마이크로플레이트/EA</td><td>분자 장치</td><td></td><td>배양된 세포에서 루시페라제 및 레닐라 신호 측정용</td></tr><tr><td>Imagej</td><td></td><td></td><td>폐 전이의 이미지 분석에 사용: 임계값을 25 & 100으로 설정</td></tr><tr><td>면역 블롯 PVDF 멤브레인</td><td>Biorad</td><td>1620177</td><td>웨스턴 블롯용</td></tr><tr><td>이소플루란</td><td></td><td></td><td>마우스 마취용</td></tr><tr><td>IVIS Lumina XRMS In Vivo 이미징 시스템(in vivo 살아있는 동물 이미징 장치)</td><td>PerkinElmer</td><td>CLS136340</td><td>전이성 부담의 in vivo 이미징용</td></tr><tr><td>Leica M205 FA & Lecia DCF3000 G (GFP 및 명시야 필터)</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>폐의 전이된 부분을 시각화, 계산 및 복용하기위한 현미경 및 카메라; 10X 배율, 3.5 초 노출, 1.4 이득</td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>완전 성장 매체의 구성</td></tr><tr><td>요소 Lipofectamine 3000</td><td>YAP</td><td>/ TAZ-TEAD 리포터 형질 주입</td><td></td></tr> <tr><td>용 생명 기술 L3000008Living Image 3.2 (이미지 소프트웨어 프로그램)</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Software for IVIS</td></tr><tr><td>Mouse breast cancer cells, 4T1</td><td>Karmanos Cancer Institute</td><td>Aslakson, CJ et al.,1992</td><td>Mouse metastatic breast cance cell</td></tr><tr><td>line Multi-Gauge version 3.0</td><td>Fujifilm</td><td></td><td>Software for quantifying western blot band intensity</td></tr><tr><td>Opti-MEM (transfection buffer)</td><td>Gibco</td><td>31985-062</td><td>바이러스 및 트랜스펙션용</td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>완전 성장 배지의 구성 요소</td></tr><tr><td>Pierce BCA 단백질 분석 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>단백질 농도 정량화용</td></tr><tr><td>Pierce Phosphatase 억제제 미니 정제</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32957</td><td>세포 용해 완충액에</td></tr><tr><td>추가 Pierce Protease 억제제 미니 정제</td><td>세포</td><td>용해 완충액에 추가된</td>Thermo Scientific <td>A32953</td></tr><tr><td>폴리브레네(헥사디메트린 브로마이드)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>45-H9268</td><td>감염용</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>45-P7255</td><td>감염된 세포의 항생제 선택용</td></tr><tr><td>설치류 억제</td><td></td><td></td>제 꼬리 <td>정맥 주입 중 마우스</td></tr> 억제용 <tr><td>SDS-PAGE 러닝 버퍼</td><td></td><td></td><td>웨스턴 블롯의 경우</td></tr><tr><td>TAZ (V3886) 항체</td><td>세포 신호</td><td>4883</td><td>웨스턴 블롯</td></tr><tr><td>TBST 버퍼</td><td></td><td></td><td>용</td></tr><tr><td>TC20 자동 세포 계수기</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>세포 계수용</td></tr><tr><td>벡터</td><td></td><td></td> 벡터<td>의 전체 목록은 표 1 참조</td></tr><tr><td>VWR 도립 형광 현미경</td><td>VWR</td><td>89404-464</td><td>형광 시각화 ZSGreen labeled cells</td></tr><tr><td>Western transfer buffer</td><td></td><td></td><td>웨스턴 블롯용</td></tr><tr><td>XenoLight D-Luciferin K+ Salt</td><td>PerkinElmer</td><td>122799</td><td>in vivo bioluminescent IVIS 이미지를 위해 마우스에 주입하는 기질</td></tr><tr><td>X-tremeGENE 9 DNA transfection 시약(transfection용 지질 용액)</td><td>Roche</td><td>6365787001</td><td>바이러스 YAP</td></tr><tr><td>(D8H1X) XP Rabbit mAb</td><td>세포 신호 전달용</td><td>14074</td><td>웨스턴 블롯의 경우</td></tr></tbody></table>

꼬리 정맥 전이 검사의 결합된 사용 및 생체 내 실시간 생체 내 이미징을 결합하여 폐암 전이성 식민지화 및 폐의 부담을 정량화

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

전이는 암 관련 죽음의 주요 원인이고 전이성 질병을 가진 환자를 위한 한정된 치료 선택권이 있습니다. 전이성 질병에 대한 더 나은 치료법의 개발을 용이하게 하는 새로운 치료 표적의 식별 및 테스트에는 생체 내 전임상 모델이 필요합니다. 여기에서 입증된 것은 유방암 전이성 식민지화 및 후속 성장을 위한 합성 마우스 모델이다. 전이성 암 세포는 반딧불 루시퍼라제 및 ZsGreen 단백질을 코딩하는 바이러스 벡터로 안정적으로 변환됩니다. 후보 유전자는 그 때 luciferase/ZsGreen 발현암세포에서 그 후에 세포가 전이성 식민지화 및 성장을 분석하기 위하여 측방 꼬리 정맥을 통해 마우스로 주입됩니다. 생체 내 이미징 장치는 살아있는 동물의 종양 세포의 생물 발광 또는 형광을 측정하여 시간이 지남에 따라 전이성 부담의 변화를 정량화하는 데 사용됩니다. 형광 단백질의 발현은 절편 또는 조직학적 염색없이 실험이 끝날 때 폐에서 전이의 수와 크기를 정량화할 수 있게 한다. 이 접근법은 전이성 식민지화 및 성장에서 후보 유전자의 역할을 테스트하는 비교적 빠르고 쉬운 방법을 제공하며, 전통적인 꼬리 정맥 전이 분석보다 훨씬 더 많은 정보를 제공합니다. 이 접근법을 사용하여, 우리는 유방암 세포에 있는 PDZ 결합 모티프 (TAZ)를 가진 예 연관된 단백질 (YAP) 및 전사 공동 활성제의 동시 녹다운이 폐에 있는 감소된 전이성 부담으로 이끌어 내고 이 감소된 부담이 현저하게 손상한 전이성 식민지 및 전이성의 감소된 성장의 결과이다는 것을 보여줍니다.

상기 접근법을 입증하기 위해, 우리는 중요한 복제 인자인 RPA3가 전이성 마우스 유방 암종 세포주에서 쓰러졌던 개념 증명 실험을 수행하였다(4T122). 프로토콜은 유전자 조작 전에 루시퍼라제 및 형광 단백질로 세포를 표지하는 것을 설명하지만, RNAi 벡터는 ZsGreen(그림 2A)을제공하기 때문에 변형 된 접근 법을 사용했습니다. 먼저, 4T1 세포는 반딧불 루시퍼라아제 및 히그로마이신 저항성(pHAGE-Luciferase-IRES-Hygro)을 인코딩하는 렌티바이러스 구조체로 안정적으로 변환하였다. 히그로마이신 선택 후, 반딧불 루시퍼라아제의 안정적인 발현을 확인하기 위해 루시페라아아제 분석이 수행되었다(도2A). 다음으로, 4T1-루시퍼라제 세포는 ZsGreen 및 대조군 miR30 계질 shRNA, 또는 이전...

기술된 접근법은 실험적인 꼬리 정맥 전이 실험과 생체 내 살아있는 동물 화상 진찰을 결합하여 폐에 있는 전이 수 그리고 크기의 정량화 이외에 유방암 전이 대형 및 성장의 실시간 감시를 허용합니다.

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

우리의 프로토콜은 전이성 식민지화 및 성장에 있는 어떤 후보 유전자든지의 역할을 빠르고 쉽게 시험하기 위하여 이용될 수 있습니다. 또한 이 프로토콜은 전이, 형성 및 성장의 실시간 모니터링뿐만 아니라 절제 또는 조직학적 얼룩없이 동일한 동물의 전이 수와 크기를 정량화할 수 있습니다. 완전한 성장 매체에서 12웰 플레이트에서 잘 150, 000 세포당 4개의 T1 세포를 플레이트.하룻밤 사이에 37도에서 5%의 이산화탄소를 배양합니다. 다음 날, 세포에서 성장 매체를 흡인. 루시파라제 바이러스 성 체신화 500 마이크로리터와 500 마이크로리터의 형광 단백질 바이러스 성 슈퍼나티를 추가하여 루시파아제와 형광 단백질 바이러스 슈퍼나티제로 세포를 동시에 감염시다.그런 다음 밀리리터 헥사디메린 브로마이드당 8밀리그램의 마이크로리터 1개를 추가하고 섭씨 37도, 이산화탄소 5%를 24~48시간 동안 배양합니다. 트립신의 500 마이크로 리터와 네 개의 T1 세포를 트립시니화. 2~5분 후, 모든 세포를 선택 매체의 4밀리리터로 6센티미터 접시에 옮기면 트립신을 담금질합니다.선택이 완료되면 감염된 4개의 T1 세포가 50~100배배배율로 역형 형광 현미경을 사용하여 ZsGreen 형광 단백질을 발현하고 있는지 확인합니다. 또한 감염된 4개의 T1 세포가 시판적으로 이용 가능한 루시파아제 활성 키트를 사용하여 루시파라제를 발현하고 있는지 확인한다. 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 생체 내 실험 설계의 최적화를 수행합니다.미디어를 흡인하고 1X PBS로 셀 플레이트를 헹구세요. 트립시니저는 15센티미터 플레이트당 5밀리리터의 트립신으로 세포를 2~5분 동안 분리하고 모든 세포를 원추형 튜브로 옮기습니다. 트립신을 담금질하기에 충분한 완전한 성장 매체로 조직 배양 접시에서 남은 세포를 씻으십시오.같은 원물 튜브에 세척을 추가합니다. 자동화된 셀 카운터를 사용하여 셀을 계산하여 총 셀 수를 결정합니다. 다음으로, 세포를 122회 G로 3분간 원심분리하고, 수퍼나티를 흡인시한다.원하는 농도에서 1X PBS에서 세포를 다시 중단한다. 여기서, 25, 000 세포는 PBS의 각 마우스 및 100 마이크로리터로 주입됩니다. 따라서 다시 중단된 세포는 밀리리터당 250, 000 세포에 있습니다.세포 현탁액을 주입 할 때까지 얼음에 보관하십시오. 동물 시설에서 후드에서 작업, 부드럽게하지만 철저하게 튜브를 반전하거나 균일하게 다시 중단

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복합에 의한 마우스의 싱글 셀 해상도에서 폐 Metastases의 향상된 시각화<em&gt;에서 시츄</em폐 조직 및 X-걸의 착색의&gt; 재관류<em&gt; lacZ</em&gt; 태그 종양 세포

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이 비디오는 꼬리 정맥 주입을 사용하여 표지된 암세포를 마우스 모델에 주입하는 기술에 대해 설명합니다. 또한 실시간 생체 내 살아있는 동물 이미징을 사용하여 유방암, 전이 형성 및 성장을 모니터링합니다.

꼬리 정맥 주사: 마우스 모델에서 전이성 연구를 위한 암세포 투여 방법

이 원고 종양 전이의 동물 모델에서 폐에 종양 세포 축적을 계량 하는 방법을 설명 합니다.

폐 종양 세포 모집 분석 결과

이 프로토콜은 마우스 폐 조직 내에서 전이를 나타내는 특정 종양 세포의 mRNA를 검출하도록 정량적 실시간 PCR (QRT-PCR)을 사용하는 방법을 설명한다.

정량 실시간 PCR에 의해 마우스 유방 종양 모델에서 폐 전이의 평가

우리는 쥐에 형광 기자를 활용, 폐 전이에서 종양 세포 기질 상호 작용의 생체 라이브 영상에 대한 비교적 간단한 방법을 설명합니다. 스피닝 디스크 공 촛점 현미경을 사용하여,이 기술은 최소 4 시간 동안 생균의 시각화를 가능하게하고 다른 염증성 폐 상태를 학습하도록 구성 될 수있다.

예는 폐 전이 및 그들의 미세 환경의 라이브 영상을 생체 내

이 작업은 녹색 형광 단백질 및 생물 발광 신호의 검출뿐만 아니라 정량적 분자 검출 기술의 통합에 의해 종양 하중을 정확하게 평가하기 위한 고급 프로토콜을 미리 설정합니다.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

암세포의 정맥 주사는 전이 연구에서 자주 사용되지만 전이성 종양 부담은 분석하기 어려울 수 있습니다. 본명, 전이의 꼬리 정맥 주사 모델을 시연하고 결과전이성 폐 종양 부담을 분석하는 새로운 접근법을 포함한다.

종양 세포의 측면 꼬리 정맥 주입 다음 폐 전이의 병리학 적 분석

우리는 피지-ImageJ를 사용하여 4T1 유방암 모델에서 폐 전이를 정량화하는 보다 일관되고 신속한 방법을 설명합니다.

4T1 유방암 모델에서 폐 전이의 정량화를 개선하기 위해 컴퓨터 기반 이미지 분석을 사용하여

여기에서, 우리는 폐의 고해상도, 인트라비티 이미징을 가능하게 하는 뮤린 흉부에 대한 영구적으로 깃드는 광학 창의 외과 이식을 위한 프로토콜을 제시합니다. 창의 영속성은 폐에 있는 동적 세포 프로세스의 연구 결과, 특히 보급된 종양 세포의 전이성 진행과 같이 천천히 진화하는 그들에 적합합니다.

폐에 암 전이를 조사하기위한 영구적 인 창

이 원고는 전이성 캐스케이드의 모든 단계에서 개입할 수 있는 orthotopically 주입된 유방 종양의 자발적 폐 전이의 확립 및 종단 성장 모니터링을 위한 방법론을 설명합니다.

생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

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꼬리 정맥 전이 검사의 결합된 사용 및 생체 내 실시간 생체 내 이미징을 결합하여 폐암 전이성 식민지화 및 폐의 부담을 정량화

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