Name: 탄소 테트라 클로라이드를 통해 쥐에 급성 간 상해를 유도 (CCl4)오로 위관을 통해 노출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-04-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 배우세요 쥐에서 탄소 테트라클로라이드를 이용한 급성 간 상해 유도 방법입니다. 위관을 통해 CCl4를 투여하여 활성산소 생성을 유도하고 간 보호 전략을 평가할 수 있습니다.

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저자는 감사하게도 베르사 델가도, 병리학과, 소로카 의료 센터, 건강 과학 학부, 네게브의 벤 구리온 대학, 실험실에서뿐만 아니라 조직학 분석에 그녀의 도움을 인정합니다.

실험은 헬싱키와 도쿄 선언의 권고와 유럽 공동체의 실험 동물 사용에 대한 지침에 따라 수행되었습니다. 실험은 네게브의 벤 구리온 대학의 동물 관리위원회에 의해 승인되었다.
참고: CCl4 모델은 이전 연구17에서생성되고 사용되었습니다. 프로토콜 타임라인은 표 1에서설명됩니다.
1. 실험 절차에 대한 쥐 준비
참고 : 300−350g의 무게성인 남성 스프라그 Dawley 쥐를 선택합니다.
<ol><li>기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에서 실험에 대한 승인을 얻습니다.</li>
	<li>12 시간 빛과 12 시간 어두운 주기와 실온 (22 ° C ± 1 ° C)에서 쥐를 유지합니다. 쥐 차우와 물 광고 리비텀을 제공합니다.</li>
	<li>오전 6:00에서 오후 12:00 사이에 모든 실험을 수행합니다.</li>
	<li>쥐를 면도하고 알코올로 피부를 소독하십시오.</li>
</ol>2. 혈청 GOT, GPT 및 결핵 기준선 수준의 결정
<ol><li>마 취<ol>
<li>마취를 유도하는 연속 이소플루란 투여 시스템을 준비한다. 기화기 시스템이 이소플루란으로 채워져 있는지 확인하십시오.</li>
		<li>2 % 이소플루란으로 쥐를 마취시. 쥐가 외부 자극에 반응하여 움직임과 페달 반사를 관찰하여 완전히 마취되어 있는지 확인하십시오. 참고: 마취 유도 및 유지 보수를 위해 1-5% 이소플루란을 사용하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>꼬리 정맥을 22 G 카테터로 통조합니다.</li>
	<li>기준선에서 0.5 mL 혈액 샘플을 수집합니다. 검색된 혈액 량이 IACUC 지침을 초과하지 않는지 확인합니다.</li>
	<li>앞서 설명한 바와 같이 혈청 GOT, GPT 및 TB의 측정을 포함하는 혈액 생화확적인 분석을수행한다. 참고: 소로카 메디컬 센터의 생화학 실험실에서 간 효소와 결핵 수준의 검사가 수행되었습니다. 혈액 샘플을 화학분석기(물자 표)에서형광 방법을 사용하여 분석하였다.</li>
</ol>3. 쥐에 있는 심각한 간 상해의 유도
주의: CCl4의고농도에 노출, 증기 또는 피부를 통해 흡수를 포함 하 여, 중추 신 경계에 부정적인 영향을 미칠 수 있으며 간 및 신장의 변성을 일으킬. 장기간 노출되면 혼수 상태에 빠질 수 있습니다.
<ol><li>CCl4와 올리브 오일을 1:1 비율로 혼합하여 CCl4(재료 표)의50% 용액을 준비합니다. 참고: 용액은 비 제약 등급 화합물에 대한 IACUC 지침에 따라 준비되어야 합니다.</li>
	<li>오로위관을 통해 CCl4 투여에 의해 생체 내 간독성을 유도한다.<ol>
<li>쥐의 구강을 통해 16G oro위관 (3 인치 깊이)을 삽입하십시오.</li>
		<li>1 mL/kg (온화한 ALI), 2.5 mL/kg (온건한 ALI), 또는 5 mL/kg (심한 ALI) 50% 용액의 : 쥐의 위장에 다음과 같은 희석 된 용액 중 하나와 주사기를 주입하여 CCl4의 다른 용량에 쥐를 노출. 가짜 조작 대조군의 경우, 쥐를 5 mL/kg 올리브 오일에만 노출시다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 24 시간 후에 혈청 GOT, GPT 및 결핵 수준의 결정
<ol><li>마 취<ol>
<li>마취를 유도하는 연속 이소플루란 투여 시스템을 준비한다. 기화기 시스템이 이소플루란으로 채워져 있는지 확인하십시오.</li>
		<li>2% 이소플루란으로 쥐를 마취시다. 쥐가 외부 자극에 반응하여 움직임과 페달 반사를 관찰하여 완전히 마취되어 있는지 확인하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>CCl4 노출에서 24 시간에서 혈액 샘플을 수집합니다.</li>
	<li>혈청 GOT, GPT 및 결핵의 측정을 포함하여 혈액 생화확적인 분석을 수행합니다.</li>
</ol>5. 조직학적 검사를 위한 간 수집
<ol><li>영감 받은 가스 혼합물을 20% O 2/80%CO2로대체하여 쥐를 안락사시한다.2 IACUC 지침에 따라CO2가 소정의 속도로 전달되도록 합니다.</li>
	<li>심장 박동의 부족을 확인 하 여 죽음을 보장 하 고 IACUC 지침에 따라 보조 방법으로 확인.</li>
	<li>쥐를 해부 보드에 놓고 등지 표면이 아래를 향하고 복부를 위로 향합니다. 쥐의 복부를 면도하십시오.</li>
	<li>메스로 항문에서 턱까지 뇌 피부 전체를 절개합니다. 피부를 분리합니다. 항문에서 자이포이드 연골까지 메스로 복벽을 절개하여 복부 내장을 노출시하십시오.</li>
	<li>가위와 집게를 사용하여 인대와 부착부에서 해부하여 간을 분리하십시오. 간 hilum에서 시작하여 부착에서 모든 간 엽을 방출하여 간 절제술을 신중하게 수행하십시오. 해부하고 모든 인대와 혈관을 잘라.</li>
	<li>간을 페트리 접시에 옮김을 넣습니다. 적어도 24 시간 동안 4 % 버퍼링 된 포름알데히드 용액(재료 표)에간을 고정시.</li>
</ol>6. 조직학 검사
<ol><li>샘플 준비<ol>
<li>고정 후 샘플을 마이크로토메 단면으로 5 μm 두께의 슬라이스 시리즈로 자른다.</li>
		<li>부드러운 브러쉬로 슬라이스를 슬라이드당 1슬라이스로 유리 슬라이드에 부드럽게 놓습니다.</li>
		<li>앞에서 설명한 대로 H&E염색을 수행합니다 19.</li>
	</ol>
</li>
	<li>20mm 대물 렌즈(재료 표)를 사용하여 200배 배율로 현미경으로슬라이스를검사합니다. 참고 : 간 절은 치료 프로토콜에 눈을 멀게 한 전문 병리학자에 의해 등급이 매겨져야합니다. 점수0은 간 이상이 없음을 나타내고, 1-2는 경미한 간 손상을 나타내고, 3-4는 중간 간 손상을 나타내고, 5-6은 심각한 간 손상을 나타냅니다20,,21,,22.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

이 프로토콜에서, CCl4는 쥐에서 ALI를 유도하기 위해 간 독소로서 사용된다. ALI는 간 자렌치의 손실과 간 대사 및 합성 기능의 후속 dysregulation특징입니다. 약물, 바이러스, 독소, 자가 면역 질환, 대사 성 질환 및 혈관 장애는 모두 간세포 사망을 유발하며, 후속 염증 반응은 ALI의 발병기전에 기여합니다.
간으로의 초기 모욕은 사이토카인 생산, 케모카인 방출 및 염증 성 세포의 후속 침투로 이어집니다. ALI 평가를 위한 일반적으로 시험된 바이오마커의 3개는 GPT, GOT 및 결핵 수준입니다. GPT와 GOT는 활동 수준으로 측정된 효소이며, 결핵 수준은 혈청 농도에 따라 간 기능을 측정합니다. 상승하는 때, 혈청 효소 활동 수준은 간세포 또는 담관옥시23에 상해를 나타냅니다.23 급속 한 분광 광도 방법은 1955년 24에서 아서 카르멘의 연구에서 ...

특히 알코올 및 약물 남용으로 인해 간에서 독성 모욕의 빈도가 증가하고 있습니다. 급성 간 손상 (ALI)은 높은 사망률과 관련이 있으며 임상 적 우려를 일으켰습니다1,,2. 독성 상해는 간세포 세포 사멸, 괴사 증, 또는 pyroptosis의 결과로 간에서 죽음 신호 통로로 이끌어 냅니다. ALI는 간뇌병증 및 단백질 합성 장애 등의 합병증을 포함하는 중증 간 기능 장애를 특징으로 하는 간 부전의 발달에 중요한 역할을 한다3,,4. 최근 연구는 간 실패를 동반하는 생리적 및 병리학적 변화에 대한 우리의 지식을 증가시켰지만, 세포 사멸의 메커니즘에 영향을 미치는 병리 분자 특징을 완전히 설명하지는 못했습니다. 게다가, 어떤 약물은 현재 ALI 환자에 있는 진보적인 악화를 반전하기 위하여 유효하지 않습니다. 현재, 유일하게 유의하고 효과적인 치료법은 간 이식5,,6.
ALI의 메커니즘 및 병리생리학을 조사하고 상이한 간보호 전략을 테스트하기 위해, 다른 동물 모델이 ALI를 유도하는 데 사용된다. ALI의 바람직한 동물 모델은 신뢰할 수 있고, 검증되고, 저렴하고 적용하기 쉬운 방법을 통해 질병의 병리학 적 과정을 모방해야합니다. 실험 모델의 예로는 간독성 제제, 전체 또는 부분 간절제술과 같은 외과 적 시술, 완전 또는 일시적인 편환성 및 감염 시술7,,8,,9가포함된다. 알려진 간독성 물질에는 갈락토사민, 아세트아미노펜, 티오아세타미드, 아조시메탄 및 CCl4가포함된다. 이들 중, CCl4는 아직잘 10,11,,,12,,13을특징으로하지 않았지만 널리 사용된다.
CCl4는 달콤한 냄새가 나고 낮은 온도에서 가연성이 거의 없는 유기 무색 액체 화합물입니다. CCl4의 고농도에 노출은 간 및 신장의 악화를 포함하여 중추 신경계에 손상을 일으킬 수 있습니다. CCl4는 반응성 산소 종을 형성하는 간에서의 생체 변환을 통해 ALI를 유도합니다. 이는 P450 시토크롬 효소 2E1을 통해 발생하며, 활성 대사 산물을 형성하고 거대 분자 결합에 의한 세포 손상을 초래하고, 지질 과산화의 향상 및 세포 내 칼슘 항상성의교란을 초래한다 14. 또한, CCl4 모델은 RNA 합성15의수준에서 성상 세포체를 자극하는데 사용될 수 있다. 이 간독소는 복강 내, 인트라포탈, 구강 및 위내 경로16에의해 투여되고 있다.
이 프로토콜에서, 우리는 오로위관을 통해 쥐에서 CCl4-유도ALI를 상세히 기술한다. 이 방법은 ALI의 병인을 조사하는 데 사용할 수 있는 강력하고 재현 가능한 ALI를 유도합니다. 간 질환 중증도의 결정은 혈청 글루타메이트 피루베이트 트랜스아미나제(GPT), 글루타믹 옥살로아세틱 트랜스아미나제(GOT) 효소 및 총 빌리루빈(TB)의 측정뿐만 아니라 헤마톡실린과 에오신(H&E)의 스테인드 간 조직에 의한 확실한 조직학적 진단을 통해 모니터링됩니다. 위내 접근을 통해 CCl4에 노출되면 위험 위험을 최소화하면서 실용적이고 저렴하며 최소침습적인 방법을 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>22G 카테터 BD Neoflon TM</td><td>Becton Dickinson 주입 요법 AB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% 완충 포름알데히드 용액</td><td>시그마 - Aldrich lab materials technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST TM Tubes</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carbone tetrachloride</td><td>Sigma - Aldrich lab materials technologies</td><td>CAS 56-23-5</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran, USP 100%</td><td>Piramamal Critical Care, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus AU2700 화학-면역 분석기</td><td>Olympus(MN, USA)</td><td></td><td>혈액 샘플 분석은 형광 방법</td></tr><tr><td>Olympus BX 40 현미경</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RAT Feeding Needles</td><td>ORCHID SCIENTIFICS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYRINGE SET 1 및 2 ml MEDI -PLUS</td><td>Shandong Zibo Shanchuan Medical 인스트루먼트 Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

탄소 테트라 클로라이드를 통해 쥐에 급성 간 상해를 유도 (ccl4)오로 위관을 통해 노출

Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride (CCl4) Exposure Through an Orogastric Tube

급성 간 손상 (ALI) 간 실패의 개발에 중요 한 역, 간 뇌 증 및 장애인된 단백질 합성 등 합병증을 포함 하 여 심한 간 기능 장애를 특징으로 하는. 적절한 동물 모델은 ALI의 메커니즘과 병리생리학을 테스트하고 다른 간 보호 전략을 조사하는 데 필수적입니다. 화학적 변형을 수행하는 능력으로 인해 탄소 사염소산화물 (CCl4)은반응성 산소 종의 형성을 통해 ALI를 유도하기 위해 간에서 널리 사용됩니다. CCl4 노출은 복강 내, 흡입, 또는 비위 관 또는 오로 위관을 통해 수행 될 수 있습니다. 여기에서, 우리는 ALI가 oro위관을 통해CCl4 노출에 의해 유도되는 설치류 모형을 기술합니다. 이 방법은 저렴하고 쉽게 수행되며 위험 위험이 최소화됩니다. 이 모델은 매우 재현 가능하며 잠재적 인 간 보호 전략의 효능을 확인하고 간 손상의 마커를 평가하는 데 널리 사용할 수 있습니다.

TB, GOT 및 GPT 수준은 SHAM-조작 대조군(p&amp;0.001)에 비해 ALI(더 높은 CCl4 투여량에서 더 많은)를 유도한 후 24시간 크게 증가하였다(그림1). 기준선에서 결핵, GOT 및 GPT의 수준은 정상이었고, sham-operate 컨트롤과 크게 다르지 않았습니다. 24 시간에서, 모든 3개의 개입 군, 1 mL/kg CCl4 (1, 1−2), 2.5 mL/kg CCl4 (3, 3−4), 및 5 mL/kg CCl4 (4, 4−5.75) sham-operate 대조군(0, 0−0) (p&lt; 0.05, 데이터) 보다 훨씬 더 높은 조직학적 등급 점수를 가졌다. 샴 작동 대조군(그림2A)과상이한 CCl4 투여량에 노출된 그룹의 H&amp;E 이미지(그림2</stro...

이 프로토콜은 오로 위관을 통해 CCl4 노출을 통해 급성 간 손상 (ALI)을 유도하는 일반적이고 실행 가능한 방법을 설명합니다. CCl4 노출은 간에서의 생체 변환 동안 반응성 산소 종의 형성을 통해 ALI를 유도합니다. 이 방법은 ALI의 병리생리학을 분석하고 다른 간 보호 전략을 검사하는 데 사용됩니다.

탄소 테트라 클로라이드를 통해 쥐에 급성 간 상해를 유도 (CCl4)오로 위관을 통해 노출

Acute liver injury (ALI) plays a crucial role in the development of hepatic failure, which is characterized by severe liver dysfunction including ...

나는 구로위관을 통해 탄소 테트라 클로라이드 노출을 통해 쥐에 유도 급성 간 손상에 대한 우리의 작업을 제시하고 싶습니다. 300 ~ 350 그램의 성인 남성 스프라그-Dawley 쥐를 선택합니다. 쥐 차우와 물 광고 리비툼을 제공합니다.오전 6시부터 오후 12시 사이에 모든 실험을 수행합니다. 이스라엘 네게브 벤 구리온 대학의 동물 관리 코미디는 이 프로토콜에 사용되는 모든 치료 및 테스트 절차를 승인했습니다. 12 시간 조명과 12 시간 어두운 주기와 22 섭씨 도의 실온에서 쥐를 유지합니다. 22 게이지 카테터로 꼬리 정맥을 캐너레이.기준선에서 혈액 샘플을 수집합니다. 혈액 생화학 적 분석은 혈청 GOT의 측정을 포함, GPT, 총 빌리루빈. 소로카 의료 센터의 생화학 실험실에서 간 효소 및 총 빌리루빈 수준의 검사가 수행되었습니다.주의: 증기 또는 피부 흡수를 포함한 고농도의 탄소 테트라클로리드에 노출되면 중추 신경계에 영향을 미치고 간과 신장을 퇴화시키고 장기간 노출되면 혼수 상태에 빠질 수 있습니다. 올리브 오일과 혼합된 탄소 테트라클로리제의 50% 용액을 차량으로 1대 1비율로 준비합니다. 구로위관을 통해 탄소 테트라클로리드 투여에 의해 생체내의 병독성을 유도한다.쥐의 구강을 통해 구위관을 삽입합니다. 탄소 테트라클로라이드의 다른 복용량에 쥐를 노출. 가벼운 급성 간 부상에 대 한 킬로 당 1 밀리 리터, 중간 급성 간 부상에 대 한 킬로 당 2 점 5 밀리 리터, 또는 심각한 급성 간 부상에 대 한 킬로 당 5 밀리 리터.가짜 그룹의 경우, 1킬로당 5 밀리리터에 쥐를 노출만 올리브 오일. 탄소 테트라클로리드 노출로부터 24시간 동안 혈액 샘플을 수집합니다. 혈액 생화학 적 분석은 혈청 GOT의 측정을 포함, GPT, 총 빌리루빈.복부가 위쪽으로 향하고 복부를 면도하는 등쪽 재조합의 해부 보드에 죽은 쥐를 놓습니다. 메스를 사용하여 항문에서 턱까지 벤트럼의 전체 길이를 절개합니다. 피부를 반사합니다.메스를 사용하면 항문에서 시포이드 연골에 복부 벽을 절개하여 복부 내장을 노출시합니다. 간을 페트리 접시에 옮기습니다. 헤마톡시린과 에진 염색을 수행합니다.20밀리미터 의 객관적 길이로 200배의 현미경 배율 하에서 슬라이스를 검사합니다. 간 단면도는 처리 프로토콜에 눈이 멀게 한 전문 병리학자에 의해 채점되어야 합니다. 0의 점수는 간 이상을 나타내지 않으며, 1 ~2 개는 가벼운 간 부상을 나타내며

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

담즙 흐름의 중단은 형태학적 변화의 특징적인 시간 의존적 순서와 함께 심각한 염증성 담즙 유발성 간 손상을 초래합니다. 여기에서는 21일에서 28일 후에 강한 섬유화 반응을 유도할 수 있는 마우스의 총담관 수술 결찰에 대한 프로토콜을 제시합니다.

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

쥐에서 간 섬유증의 동물 모델을 제작하는 방법을 설명하고, 간의 조직학적 검사를 통해 섬유화의 정도를 평가합니다. 이 모델은 간 질환의 발병을 연구하고 잠재적인 항섬유화제의 효능을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

쥐에이 dimethylnitrosamine 유도 된 간 섬유화 모델

이 프로토콜은 인간에서 관찰되는 산성 폐렴의 발병 기전과 매우 유사한 마우스에서 급성 폐 손상을 유발합니다. 우리는 최대한의 급성 치명적이지 않은 낮은 pH 폐 손상을 생성하고 원주 압력 방출과 결합된 개방 기관절개술을 사용하여 설치류-인간 해부학적 호흡 구조의 차이를 설명합니다.

급성 폐 손상의 열기 기관 절개 위산 흡인 쥐 모델은 최대한 급성 치명적 폐 손상의 결과

고유 한 쥐의 간 문부 클램프 모델은 허혈 - 재관류 손상을 완화의 약물 분자의 영향을 연구하기 위해 개발되었다. 이 모델은 직접 간 전송을 허용, 포털 정맥의 지점을 통해 허혈성 간 세그먼트 포털 공급의 직접 삽관이 포함되어 있습니다.

쥐 간 문부 클램프 모델을 사용하여 직접 분절 인트라 간 납품 방법

여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 다이어트의 먹이로 쥐에 만성 간 상해를 유발 하는 일반적인 방법에 설명 합니다. 상태 모니터링, 간 관류, 절연 및 보존 설명합니다. 6 주 시간 코스 간 부상, pathohistology, 섬유 증, 염증, 간 조상 세포 응답에 대 한 알릴 수 있다.

Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

현재 연구에서 개발된 급성 간 부전 동물 모델은 잠재적인 치료법의 연구를 위한 실행 가능한 대안을 제시합니다. 현재 모델은 물리적 및 약물 유발 간 손상의 결합 된 효과를 채택하고 새로운 치료의 잠재력을 연구하기에 적합한 시간 창을 제공합니다.

70% 부분 간 절제술과 아세트아미노펜을 결합하여 급성 간 기능 부전의 쥐 모델 생성

이 프로토콜의 목표는 간 손상을 유발하지 않고 오히려 기존의 간 손상을 악화낮은 수준의 독성 노출의 뮤린 모델을 개발하는 것이었습니다. 이 패러다임은 더 나은 인간의 노출과 안전한 것으로 간주되는 독성 농도에 노출시 발생하는 미묘한 변화를 재현.

환경과 비만 상호 작용의 모델로 비닐 염화물 과 고지방 다이어트

가혹한 급성 췌장염을 위한 동물 모형은 염증성 사건의 진화의 관측을 용이하게 하는 초기 단계에서 병리학적 변화의 연구를 가능하게 합니다. 여기서 우리는 마취 C57BL/6 마우스의 췌장 덕트에 타우로콜린산 나트륨의 역그레이드 주입에 의하여 가혹한 급성 담즙 췌장염의 유도를 위한 프로토콜을 제공합니다.

C57BL/6 마우스에서 타우로콜레이트 나트륨 유도 심한 급성 췌장염

급성 심근 경색 (AMI)의 쥐 모델은 심장 pathophysiological 및 생리 기능에 MI의 결과를 연구하는 데 유용합니다.

고양이에서 급성 심근 경색

환풍기 유도 폐 손상에 대한 murine 모델은 급성 폐 손상을 연구하는 중요한...

마우스의 급성 폐 상해를 유발하는 압력 제어 환기

배우세요 쥐에서 탄소 테트라클로라이드를 이용한 급성 간 상해 유도 방법입니다. 위관을 통해 CCl4를 투여하여 활성산소 생성을 유도하고 간 보호 전략을 평가할 수 있습니다.

탄소 테트라 클로라이드를 통해 쥐에 급성 간 상해를 유도 (CCl₄₎오로 위관을 통해 노출

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