Name: 외과 클립을 사용하여 마우스에 소매 위절제술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 16 s
Description: 학습하세요 마우스 소매 위절제술을 통한 대사 효과 및 인슐린 저항성 연구 방법을. 이 동물 모델은 비만과 제2형 당뇨병 치료 기전 이해에 중요한 통찰을 제공합니다.

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영어 내레이션에 대한 미스 이사벨 루에게 감사드립니다.

동물 사용에 대한 모든 절차는 국립 양명대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었으며 "실험실 동물의 치료 및 사용에 대한 가이드"를 준수했습니다. 8판, 2011". 마취 절차는 국립 양명대학, ICAUC-016, 2015,1st edition의 실험동물에 대한 통증 조절, 마취, 수술 전 및 수술 후 치료에 대한 지침에 따라 수행되었다.
1. 동물 준비
<ol><li>16-18 그램의 무게국립 실험실 동물 센터 (NLAC)에서 20 8 주 된 야생 유형 C57BL/6 수컷 마우스를 가져옵니다. 무작위로 SG 또는 10 마우스각각의 가짜 수술 그룹에 이러한 마우스를 할당합니다.</li>
	<li>bariatric 또는 sham 수술9전에 차우 또는 고지방 식단 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60719/High%20fat%20diet.pdf" target="_blank">(보충 파일</a>참조)에 마우스를 시작합니다. HFD의 적어도 2 수술 전 주를 가진 규정식 유도한 비만을 생성합니다.</li>
	<li>국립 양명대학 실험실 동물 센터에 12:12의 밝은 어두운 주기 아래 12:12에 빛이 발병하고 .M.</li>
	<li>모든 동물을 음식에서 제한하지만 수술 전날 밤에 무료로 물을 이용할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 일반 수술 전 준비
<ol><li>수술 전에 적어도 6 시간 동안 마우스를 빨리. 5% 이소플루란과 산소(3-4 L/min)로 유도 챔버에서 마취를 유도합니다.<ol>
<li>마취의 깊이를 확인하여 뒷발, 앞포 및 귀의 핀치 자극 (무딘 곡선 의 부드러운 미세 집게)이 모터 반사를 일으키지 않도록합니다. 항생제를 관리 (25 mg/kg cefazolin) 수술 전에 피하 주사를 통해.</li>
	</ol>
</li>
	<li>외과 적 절차에 대한 특정 작업 영역을 할당합니다. 수술 부위를 청소하고 수술 전에 75 %의 알코올 용액으로 수술 테이블을 분사하십시오.</li>
	<li>마우스를 코 콘에 놓고 마취를 2% 이소플루란(2L/분)과 산소(4L/분)로 유지합니다.</li>
	<li>슬리브 위절제술과 샴장 작동의 경우 발가락 자극에 의한 마취의 적절한 깊이를 확인한 후, 안구건조증을 방지하기 위해 마우스의 눈에 0.2% 카보머 아이 젤을 바르십시오.</li>
	<li>전기 면도기를 사용하여 복부에서 흉골까지 머리카락을 면도합니다. 남은 모발을 탈모 크림으로 제거하고 청소합니다. 수술 대에 마우스를 놓고 고정시 면에 놓습니다.</li>
	<li>3개의 응용을 위해 75%의 알콜로 번갈아 가며 povidone 요오드 용액으로 마우스의 복부 벽을 소독하십시오.</li>
</ol>3. 슬리브 위절제술과 가짜 절차
<ol><li>중앙 분리근<ol>
<li>마이크로 가위를 사용하여 상부 복부에서 1-1.5cm 길이의 중간 선 절개를 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>위장 및 장 외부화<ol>
<li>예측할 수 없는 출혈과 저혈당 충격을 방지하기 위해 필요에 따라 돋보기 해부 현미경 또는 돋보기의 도움으로 SG 절차를 수행하십시오.</li>
		<li>두 개의 곡선된 부드러운 톱니 모양의 마이크로 포스프를 사용하여 위장을 부드럽게 움직이고 외부화하십시오.</li>
		<li>필요에 따라 면기울 프로브와 전기 카우터리를 사용하여 왼쪽 위를 비장으로 연결하는 위장 인대를 조심스럽게 나누어 주변 비장 및 기타 내부 장기에서 위 기금을 해부합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 위장 격리 및 클립
참고: 마우스용 SG는 이전에 게시된10과같은 새로운 클립 어플리케이션 기술을 사용하여 수행되었다.
<ol><li>위금욕과 유동을 집게로 부드럽게 그리고 옆으로 스트레칭하고, 중간선(도1 및 도 2)을식별하고, 위내측의 중간쪽의 절반에 외과 클립을 열등하게 대열시키고 하부 극을 우월하게 적용한다. 위장의 약 75-80%를 클램프 및 배제하여 위장의 전체 측면 슬리브(도1 및 도 2)를생성한다.</li>
	<li>장의 피부를 옆의 맨손으로 옮기고 따뜻한 살린 촉촉한 거즈로 덮고 탈수와 저체온증을 방지하기 위해 필요에 따라 복통 수분을 섭취하십시오.</li>
	<li>측면 잘린 위장을 절제하고, 미세 시저로 위장의 제외 된 소매를 제거 한 다음 povidone-요오드 용액으로 위장의 절단 가장자리를 살균하십시오.</li>
	<li>클립 라인을 5-0 모노필라멘트 비흡수성 봉합사로 오버세우하여 누출이 없도록 합니다. 봉합사의 끝을 매듭짓고 양쪽 끝에 있는 클립에 고정합니다.</li>
	<li>복부와 내장을 복강내의 적절한 위치로 되돌리고 복부를 5-0 모노필라멘트 무흡수성 연속 및 불연속 봉합사로 닫습니다.</li>
	<li>케토프로펜(2-5 mg/kg)과 세파졸린(25 mg/kg)을 투여한 항생제를 전체 시술 후 인과간으로 투여한다.</li>
</ol>5. SG의 샴 절차
<ol><li>앞서 설명한 바와 유사한 절차를 미드라인 복강경 절제술과 함께 수행하고, 37°C 젖은 따뜻한 식염수 거즈 커버리지를 사용하여 장과 위를 5분 동안 외부화한다.</li>
	<li>이 내부 장기의 적절한 사이트에 위와 내장을 반환합니다.</li>
	<li>이전에 설명된 바와 같이 복부 벽을 세심하게 닫는 것은 느리거나 흡수성이 없는 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 근막과 피부에 연속적이고 불연속적인 폐쇄2층으로 설명되어 있습니다. 케토프로펜(2-5 mg/kg)과 세파졸린(25 mg/kg)을 투여한 항생제를 전체 시술 후 인과간으로 투여한다.</li>
</ol>6. 일반 수술 후 치료
<ol><li>이소플루란을 멈추고 마우스가 완전히 깨어날 때까지 3-5 L/min의 실내 공기 흐름을 계속합니다.</li>
	<li>그것은 이동성을 회복하고 케이지 주위를 걷기 시작하는 동안 마우스를 계속보고.</li>
	<li>마우스를 30°C 독립 인큐베이터에 5일 동안 배치합니다. 마우스가 서로 부상하지 않도록 케이지당 마우스가 하나만 있는지 확인하십시오.</li>
	<li>수술 후 3일 간 젤 다이어트 식품(고지방 젤 다이어트: 라드 10%, 액상 설탕 10%, 물 57%)에 무료로 접속하고 수술 후 3일 간 이전 식단을 다시 도입합니다.</li>
	<li>피하 또는 복천성 케토프로펜 (2-5 mg/kg), 및 cefazolin (25 mg/kg) 수술 후 1 일 동안 주입.</li>
	<li>전체 연구 기간을 통해 매주 마우스 체중을 평가합니다. 케토프로펜(2-5 mg/kg)을 필요에 따라 매일 한 번 통증 조절을 위한 관복막 주사를 제공하여 수술 후 동물이 곤란하다. 참고: 여기서 SG의 생존율은 학습 기간 이후 90%였습니다.</li>
</ol>7. 대사 매개 변수 평가
<ol><li>6h에 대한 빠른 마우스, 기준선 혈액 샘플을 (0 분). 자유롭게 움직이는마우스(11),12의꼬리 정맥 끝에서 모든 혈액 샘플을 얻을 수 있다.</li>
	<li>포도당 내성 검사를 위한 복막 주사로 50% 덱스트로오스1 mg/g를 전달합니다.</li>
	<li>글루코미터 및 테스트 스트립을 사용하여 중복 시료에 대한 포도당 투여 후 0, 5, 15, 30, 60 및 120분에서 자유롭게 움직이는 마우스의 꼬리 정맥 끝에서 혈당을 측정합니다.</li>
	<li>30 분 동안 응고와 실온에서 전체 혈액 샘플 (n = 10)을 유지합니다.</li>
	<li>4°C에서 10분 동안 3,000 x g의 혈액 샘플을 원심분리합니다.</li>
	<li>혈전을 방해하지 않고 별도의 튜브로 플라즈마를 옮기고 -80 °C에 보관하십시오.</li>
	<li>헤모글로빈 A1c (HBA1c), 포도당, 콜레스테롤 및 인슐린 수치를 위한 상용 마우스 ELISA 키트를 사용하여 연구 결과의 끝에 플라즈마 견본을 공부하십시오.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 이해 상충을 선언하지 않습니다.

예비 코호트 연구의 대부분은 체질량 지수를 증가시키는 것이 사망률 증가와 관련이 있음을 확인했습니다. 비만은 당뇨병의 고위험, 심혈관 질환 (CVD), 그리고 남녀 모두에서 사망과 관련이 있습니다. 특정 병리학 적 과정은 당뇨병, 비만 및 사망률14사이의 연결을 확립했다. 체계적인 검토는 심실 비대 회귀 및 향상된 확장기 기능에 대한 증거와 CVD에 대한 위험 요소를 감소에 bariatric 수술의 장점을 나타냅니다15. 비만/대사 수술은 비만 당뇨병 환자의 전통적인 CVD 위험 요소를 향상시킬 수 있으며, 10년 CHD 및 치명적인 CHD 위험은 T2D4를가진 비만 환자에서 다양한 bariatric/metabolic 수술 후 최대 50%까지 감소되는 것으로 나타났습니다.
Bariatric 수술은 비만을 위한 가장 효과적인 장기 치료 전략입니다. 지질 ...

비만의 보급은 1975년부터 전 세계적으로 거의 3배 증가했습니다. 2016년에는 18세 이상 성인 19억 명 이상이 과체중이었으며 6억 5천만 명 이상의 성인이 비만이었습니다. 성인 인구에서 T2D의 보급은 또한 1980년과 2014년 사이 1억 2,200만 명의 성인으로 증가한 숫자로 4.7%에서 8.5%로 두 배로증가했습니다. 대부분의 비만 수술은 상당한 체중 감소, 체지방의 감소, 포도당 내성, 인슐린 저항 성 및 당뇨병 조절2의개선으로 이어집니다. T2D의 체중 감소 및 면제 외에도, bariatric 수술은 고혈압 조절과 같은 추가적인 건강 이점을 생성하고 특정 유형의 비만 관련 암 개발 및 진행3의부각을 낮춥니다. Bariatric 수술은 또한 튼튼한 완전한 유도합니다, T2D의 부분적인 면제, 10 년 주요 관상 동맥 심장병의 리스크를 감소시습니다 (CHD) 및 뇌혈관 리스크의 어느 정도. 그러나 기본 메커니즘은4를완전히 이해하지 는 않습니다.
bariatric/신진 대사 수술을 위한 몇몇 절차가 있습니다. 제한및 위장 우회 수술 모두 신진대사5에긍정적인 영향을 미칩니다. bariatric 수술 모델 중, SG 및 변형 된 Roux-en-Y 위 우회는 더 높은 성공과 낮은 사망률을 가지고 있으며 마우스6에서신뢰할 수있는 제한적 및 위장 우회 수술 모델을 입증한다. 위장 우회 수술은 장기적으로 제한적인 절차보다 더 많은 체중 감량과 포도당 내성 및 간 steatosis의 상당한 개선을 제공하지만, SG는 여전히 체중과 포도당 수준의 좋은6제어를 생산하고 합병증6의 낮은 발생률로 수행하기 쉽습니다. SG의 비율은 30%에서 54%로 증가하고 Roux-en-Y 위 우회 수술은 2008년부터 2014년까지 52%에서 32%로감소했습니다. 현재 복강경 SG는 미국의 학술 센터 내에서 국가 수준에서 가장 일반적으로 수행되는 bariatric절차8. bariatric 수술, 당뇨병 및 비만 사이 병리 생리 과정에 관하여 많은 간행된 보고가 있더라도, 우리는 더 알려지지 않은 기계장치를 탐구하기 위하여 더 많은 동물 실험이 필요합니다.
이 프로토콜은 인간에 있는 bariatric 수술 후에 보인 결과의 근본적인 기계장치를 조사하는 동물 방법을 생성하는 것을 작합니다. 현재 번역 연구는 SG에서 비만 및 T2D 처리의 기계장치에 통찰력을 제공할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>0.9% 생리식염수</td><td>China Chemical & 공급자:Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 모노필라멘트 봉합</td>사 <td>Shineteh Inc. 대만</td><td></td><td>Ethicon</td></tr><tr><td>Alm</td><td>Shineteh Inc. 대만</td><td>ST-A072PK</td><td>UNIK</td></tr><tr><td>동물 마취</td><td>단계 기술</td><td>0712VAP11076</td><td>Matrx</td></tr><tr><td>Barraqer-Troutman 집게</td><td>Shineteh Inc. 대만</td><td>ST-N309(H-4410)</td><td>UNIK</td></tr><tr><td>cefazolin</td><td>대만 베테랑 약국 회사</td><td></td><td></td></tr><tr><td>차우 다이어트</td><td>연구 다이어트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>포도당 스트립 및 혈당 측정기</td><td>BeneCheck</td><td>BKM13-1</td><td>BeneCheck</td></tr><tr><td>HbA1c 키트</td><td>레벨</td><td>OKEH00661</td><td></td></tr><tr><td>혈액학 시스템</td><td>Fuji</td><td>FUJI DRI-CHEM 4000i</td><td>유럽</td></tr><tr><td>고지방 다이어트</td><td>연구 다이어트</td><td>1810724</td><td>LabDiet</td></tr><tr><td>아이리스 겸자</td><td>Shineteh Inc. 대만</td><td>ST-1210</td><td>UNIK</td></tr><tr><td>아이리스 가위</td><td>Shineteh Inc. 대만</td><td>ST-S011</td><td>UNIK</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Panion & BF 생명공학 INC</td><td>8547</td><td>Panion & BF</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Sigma</td><td>22071154</td><td>Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>MicroTech</td><td>SZ-5T</td><td>MicroTech</td></tr><tr><td>수술 클립 (M)</td> <td>Echicon Inc., Somerville, NJ</td><td></td><td>크기 M, 5mm</td></tr><tr><td>Vidisic gel</td><td>Dr. Gerhard Mann Chem.-pharm. 파브릭 GmbH</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

외과 클립을 사용하여 마우스에 소매 위절제술

Sleeve Gastrectomy in Mice using Surgical Clips

과체중과 비만인 사람들의 수는 성인과 사춘기 인구 모두에서 지속적으로 증가하고 있습니다. 이것은 타입-2 당뇨병 (T2D) 및 그밖 신진 대사 문제의 증가한 보편적인 현상과 일치합니다. SG와 같은 Bariatric 수술은 현재 비만과 T2D를 위한 가장 효과적이고 일반적으로 사용되는 장기 치료 중 하나이지만, 그(것)들 사이 협회는 아직 완전히 탐구되지 않습니다. 인간에 있는 bariatric 수술 후에 보인 결과의 근본적인 기계장치는 전임상 동물 연구 결과에 근거를 두어 조사될 수 있습니다. SG는 체중, 포도당 수준 및 많은 대사 매개 변수를 감소시키며 합병증발생률이 낮기 때문에 쉽게 수행할 수 있습니다. 이 작업의 목표는 간단한 방법과 연구원을위한 동물에 있는 bariatric 수술의 단순한 전임상 모형을 제공하는 것입니다.

작업의 결과는 도 3 및 도 4에표시됩니다. 연구 결과의 생존율은 90%이었습니다. 한 마우스는 약점 때문에 sham 그룹에서 사망하고 다른 마우스는 알 수없는 이유로 수술 후 3 일에 SG 그룹에서 사망했다. HFD 공급 마우스에 대한 체중감량(도 3A)에대한 결과(3주차)는 인간에서 관찰된 것과 매우 유사하며, 최종 체중 감소는 약 15~20%13. 연구 결과는 또한 HFD 먹이 마우스에 있는 SG 수술 후에 콜레스테롤 수준(도 3B)가현저하게 감소했다는 것을 보여주었습니다.
더 나은 인슐린 감도 및 포도 당 내성은 복막 내 포도 당 내성 테스트에 의해 수술 직후 관찰 되었다 (IPGTT). 현재 연구에서는, 우리는 HFD...

당뇨병과 비만의 보급은 전 세계적으로 지속적으로 증가하고 있습니다. 당뇨병, 비만 및 그들의 관련된 사망 및 공동 병위 사이 기계장치는 추가 조사될 필요가 있습니다. 여기서, 우리는 비만 수술의 단순한 전임상 모델로 동물에 있는 소매 위절제술 (SG)를 위한 프로토콜을 제시합니다.

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the ...

외과 적 개입의 주요 목표는 더 평가 가능한 마우스 모델에서 슬리브 위절제술의 대사 효과와 인슐린 저항을 측정하는 것입니다. 이 프로토콜은 비만과 타입-2 당뇨병 처리의 병기에 통찰력을 제공할 수 있는 인간에 있는 bariatric 수술 후에 보인 결과를 밑줄이 나는 기계장치의 연구를 위한 동물 모형을 생성하는 것을 작정입니다. 슬리브 위절제술과 샴장 작동의 경우 발가락 자극에 의한 마취의 적절한 깊이를 확인한 후, 구강 건조를 방지하기 위해 마우스 의 눈에 Carbomer 0.2%의 눈 젤을 바르십시오.마우스를 수술 대에 배치하고 고정합니다. 남은 모발을 탈모 크림으로 제거하고 청소합니다. 3개의 응용을 위해 알콜과 교대로 povidone 요오드 해결책으로 마우스의 복부를 소독합니다.예측할 수 없는 출혈과 저혈당 쇼크를 방지하기 위해 필요에 따라 확대된 해부 현미경 또는 돋보기를 사용하여 SG 절차를 수행하십시오. 상복부에서 길이 중간절개시 1~1.5cm를 만드십시오. 두 개의 곡선된 부드러운 톱니 모양의 마이크로 포스프를 사용하여 위장을 부드럽게 움직이고 외부화하십시오.장의 자식을 맨손으로 옮기고 탈수방지를 위해 따뜻한 식염수 모이스데거즈로 덮습니다. 필요에 따라 면기울 프로브와 전기 카우터리를 사용하여 왼쪽 위를 비장으로 연결하는 위장 인대를 조심스럽게 나누어 주변 비장 및 기타 내부 장기에서 위 기금을 해부합니다. 위금욕과 유동을 집게로 부드럽게 그리고 측면으로 스트레칭하고, 위장의 중간선을 식별하고, 위식도 접합부에서 위장의 15% 내측 세그먼트에 LIGACLIP 어플리케이터를 사용하여 두 개의 수술 클립을 열렬히 그리고 유동유를 우수하게 적용합니다.위장의 약 75-80 %를 클램프하고 분리하여 위장의 전체 측면 소매를 만듭니다. 미세 시저로 측면 격리 된 위를 절제하십시오. 면 봉면을 사용하여 위장에서 잔류 식품을 제거한 다음 povidone-요오드 수성 용액으로 위장의 절단 가장자리를 청소하십시오.클립 라인을 5-0 모노필라멘트 비흡수성 봉합사로 오버세우하여 누출이 없도록 합니다. 봉합사의 끝을 매듭짓고 양쪽 끝에 있는 클립에 고정합니다. 복강내의 적절한 위치로 위와 내장을 반환하고 복부벽에 5-0 monofilament 비흡수성 봉합사를 실행하여 복부를 닫습니다.SG의 가짜 절차의 경우, 미드라인 복강경 절제술과 함께 이전에 설명한 것과 유사한 절차를 수행하고, 37°C의 젖은 따뜻한 식염수 거즈 커버리지를 사용하여 장과 위를 5분 동안 외부화한다. 이 내부 장기의 적절한 사이트에 위와 내장을 반환합니다. 케토프로펜을 킬로그램당 2~5밀리그램, 세파졸린 25밀리그램을 킬로그램당 피하 또는 내과적으로 투여하여 통증 조절 및 감염 예방을 위해 수술 후 관리합니다.이소플루란을 멈추고 마우스가 완전히 깨어날 때까지 분당 3~5리터의 실내 공기 흐름을 계속합니다. 그것은 이동성을 회복하고 케이지 주위를 걷기 시작하는 동안 마우스를 계속보고. 5일 동안 온도 상태에 있는 독립적인 인큐베이터에 마우스를 놓고 케이지당 마우스가 하나만 있는지 확인합니다.숙련된 손에서 SG의 성공률은 학습 기간 이후 약 90%였습니다. 가짜의 체중은 작동하고 고지방 다이어트 먹이 쥐가 꾸준히 증가했습니다. 그러나 슬리브 위절제술과 고지방 식단은 마우스를 지속적으로 감소시다.콜레스테롤 수치의 차이는 가짜와 소매 위절제술을 가진 고지방 규정식 공급 마우스 사이에서 중요했습니다. 이것은 슬리브 위절제술 후 산화 스트레스 개선을 나타낼 수 있습니다. 헤모글로빈 A1C와 IPGTT 의 레벨의 차이도 중요했습니다.고지방 식단 사이에서 는 쥐에게 부끄러움과 소매 위절제술을 공급하고 소매 위절제술 후 인슐린 저항성과 당 제어 개선을 나타낸다. 이 동물 모형은 슬리브 위절제술을 가진 간단한 외과 적 절차를 사용하여 당뇨병과 비만의 임상 관련성을 조사하는 것을 도울 수 있습니다. 이 절차는 수술 시간을 단축하고 수술 생존율을 향상시킬 수 있습니다.이 연구의 주요 장점은 간단한 수술 마우스 모델을 사용하여 인간 환자에서 bariatric 수술의 임상 결과를 모방하는 것입니다.

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의학

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