Name: 쥐의 작은 창자를 대상으로: 우수한 장막 동맥에 장기 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 학습하세요 쥐의 우수한 장막 동맥(SMA) 관류술을 이용한 장기 약물 주입 기법. 이 방법은 출혈과 혈전 없이 장 직접 약물 효과를 연구하는 신뢰할 수 있는 수술 모델을 제공합니다.

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저자는 Cen.Ri.S.를 인정하고 싶습니다. 로마의 유니버시타 카토리카 델 사크로 쿠오레(Centro di ricerche sperimentali)의 허가를 받았다.

이 원고에 설명 된 연구는 지역 동물 윤리위원회 (Università Cattolica 델 사크로 Cuore, 로마)에 의해 승인되었으며 이탈리아 보건부에 따라 수행되었습니다.
1. SMA의 근위 가지에 삽입할 캐뉼라 준비
<ol><li>0.93mm O.D.의 더 큰 캐뉼라를 0.5mm I.D.를 필요한 길이(약 30cm)로 자른다.</li>
	<li>작은 캐뉼라(0.4mm O.D, 0.25mm I.D.)를 길이약 5cm로 자르고 1cm를 큰 캐뉼라에 삽입합니다.</li>
	<li>시아노아크라일트 접착제로 두 캐뉼러를 함께 고정하여 루멘의 폐색을 피하십시오.</li>
	<li>식염수 용액으로 채워진 1 mL 주사기에 장착된 Luer 스텁 어댑터(23 G)에 대형 캐뉼라의 무료 단경을 연결합니다.</li>
	<li>SMA의 분기에 카테터의 삽입을 용이하게하기 위해 가위로 작은 캐뉼라의 무료 팁을 선명하게합니다.</li>
	<li>식염수 용액으로 플러시하여 캐뉼라의 패실을 확인하십시오. 참고 : 캐뉼라의 날카로운 끝은 고정되고 혈관을 따라 미끄러지지 않기 때문에 동물의 움직임 중에 동맥을 손상시키지 않습니다.</li>
</ol>2. 수술 용 쥐준비
<ol><li>케타민/자일라진(100/10 mg/kg)으로 근육 내 마취를 수행합니다. 참고: 충분한 마취 깊이는 발 핀치 반사의 부재 또는 거의 부재에 의해 판단됩니다.</li>
	<li>외과 부위에서 털을 면도 : SMA 캐뉼레이션의 분기복부, 캐뉼라 출구에 대한 목 의 뒷면.</li>
	<li>외과 적 영역을 무균하게 청소 하는 외과 발 핀치 반사를 사용 하 여. 참고: 모든 준비는 무균 기술로 수행되어야 합니다.</li>
	<li>스크럽 또는 용액이 원형 동작에 적용되고 멸균 식염수 또는 70% 에탄올이 3회 뒤따랐다.</li>
	<li>동물을 척추 자세에 놓고 네 개의 팔다리를 움직이지 못하게 합니다.</li>
</ol>3. SMA의 근근 분지 의 수분
<ol><li>절개 전에 발 핀치 반사를 테스트하여 적절한 마취 깊이를 보장합니다.</li>
	<li>멸균 수술, 방수 드레이프를 적용합니다.</li>
	<li>메스 블레이드를 사용하면 모든 복부 평면을 통해 중위 부위의 중간에 직선 3cm 절개를 하여 복벽을 열어 복막으로 들어갑니다.</li>
	<li>식염수 용액에 담근 거즈를 수술 커튼 위에 복강경 절개 주위에 놓습니다. 봉합사를 사용하여 외과 절개를 열어 두십시오. 참고: 모든 면봉과 수술 기구는 멸균되어야 합니다.</li>
	<li>면 봉면을 사용하여 소장을 식별하고 노출시하십시오. 장간을 식별하기 위해 자연적인 성향을 따르십시오. 절개 절단에서 장간을 추출하고 거즈에 아래로 놓습니다 (그림 1A).</li>
	<li>맥동을 느끼면 SMA를 식별합니다.</li>
	<li>면 봉면을 사용하여 막연한 지방 사이에 "길을 만들"고 SMA와 근동 가지의 2-3을 발견하십시오.</li>
	<li>캐닝의 수술 기동을 허용하기에 충분히 큰 SMA의 근위 가지를 선택합니다. 이 지점(4-0 실크 봉합사)을 원점에서 하류3-4cm로 묶어 서 봉합사가 나중에 조작할 수 있을 만큼 길게 확장할 수 있도록 합니다.</li>
	<li>SMA 의 지점 아래에 경직된 지지대를 배치합니다. 수술용 집게의 손잡이는 여기에서 충분합니다.</li>
	<li>더 작은 캐뉼라 (반대의 단말에 더 큰 캐뉼라와 연결)의 극단을 잡고 집게를 사용하여 지배적 인 손으로 봉합사를 당기고 용기를 변형시키고 카테터의 진입을 용이하게합니다 (도 1B).</li>
	<li>혈관 끝을 혈관의 평면에서 20° 각도로 유지하여 혈류와 반대 방향으로 누립니다.</li>
	<li>팁을 가볍게 눌러 동맥 벽에 침투하고 캐뉼라를 삽입합니다. 참고: 캐니어는 동맥을 절단하지 않고 수행됩니다. 카테터의 끝은 선박 벽을 깨고 진입을 용이하게합니다. 캐뉼라로 다시 흐르는 혈액은 올바른 삽입을 확인합니다.</li>
	<li>SMA의 원산지에 가까운 동맥 가지에 또 다른 1cm에 대한 캐뉼라 삽입을 계속합니다.</li>
	<li>수술 매듭 (4-0 실크)으로 동맥에 캐뉼라를 고정하고 멸균 식염수 용액 1 mL을 플러시하거나 혈액 샘플링으로 올바른 기능을 확인합니다.</li>
</ol>4. 캐뉼라의 터널링 및 주입 지원 시스템의 배치
<ol><li>동물의 위치를 변경하기 전에 절개에 멸균 수술 커튼을 놓습니다. 참고 : 뒤에서 복부에 터널은 뾰족한 수술 기구와 피하 공간에 압력을 가하여 만들어집니다. 복부와 등 절개에 멸균 수술 커튼을 사용해야합니다.</li>
	<li>목의 후방 부위를 1cm 절개하고 구형 밸브를 수용하십시오.</li>
	<li>카누루를 절개 절제술에서 피하 조직을 통해 목에 놓인 밸브에 대한 캐뉼라를 전달합니다(그림 2A). 카테터 플러그로 캐뉼라 말단을 닫아 공기 유입을 방지합니다.</li>
	<li>복강의 작은 창자를 교체하십시오. 복벽을 닫고 연속 3-0 실크 봉합사로 피부 절개를 닫습니다.</li>
	<li>바늘로 목 피부에 밸브를 고정하십시오. 연속 3-0 실크 봉합사로 피부 절개를 닫습니다.</li>
</ol>5. 수술 후 관리
<ol><li>버튼 밸브를 보호하기 위해 재킷으로 쥐를 드레스. 주입 하는 동안 강철 막대와 캐뉼러의 노출 된 부분을 보호 하 고 밸브에 고정 (그림 2B). 참고: 수술은 무균 기술로 수행되기 때문에 항생제는 표시되지 않습니다. NSAID는 통증 조절을 위해 수술 전 투여해야 합니다(5 mg/mL Meloxicam 주사용, 최대 3일 동안 매일 1mg/kg). 수술 후, 주입 시간(24h)에 대한 대사 케이지에서 쥐를 안정시다. 그런 다음 주입 시스템을 분해하는 데 필요한 시간 동안 이소플루란 흡입으로 쥐를 다시 마취합니다. 그 후 12시간 의 빛/어두운 주기와 음식과 물에 무료로 접근할 수 있는 일반 케이지에 쥐를 보관할 수 있습니다.</li>
	<li>주입 시간 동안 신진 대사 케이지에서 쥐를 안정화시. 쥐는 이제 깨어 있고 자유롭게 움직이고 케이지에서 먹을 수 있습니다.</li>
	<li>50mL의 멸균 식염수 용액으로 채워진 탄성 모메라 펌프(최대 100mL, 5.0mL/h 유량)에 캐뉼라의 황사 단경을 연결합니다. 24시간 동안 주입을 진행합니다(그림 2C).</li>
	<li>첫날에는 근육 내 항생제(처음 24시간 동안 10 mg/kg)를 투여한 다음 구강 투여(식수 500mL에서 100 mg)로 전달합니다. 각성 (케토프로펜 5.0 mg/kg) 및 다음 날에 구두로 (파라세타몰 200 mg식수)를 발동하는 동안 근육질 치료를 분배합니다. 참고 : 견딜 수있는 맛을 얻기 위해 식수에 투여 된 경구 요법을 희석시하십시오. 체중 측정 및 수분을 모니터링합니다.</li>
	<li>주입 시간(24시간)이 끝나면 펌프, 재킷, 강철 막대 및 밸브를 쥐로부터 제거하여 동물의 외부 주입 시스템을 분해합니다. 목에서 나올 때 캐뉼라를 닫고 자르고 상처 봉합사 후 목 피부 아래에 이 사지를 남깁니다. 참고: 이 단계에서는 이소플루오란 흡입에 의해 몇 분 동안 쥐를 마취할 필요가 있을 수 있다.</li>
	<li>쥐를 개별적으로 12시간 의 빛/어두운 사이클로 일반 케이지에 보관하고 음식과 물을 무료로 이용할 수 있습니다. 참고: 기준선 후 음식 섭취량은 약 30g./일 기준물 섭취량은 약 50 ml/일입니다. 평균 무게는 약 해야 400 mg.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

이 쥐 SMA 주입 모델의 주요 장점은 동물의 대다수에서 적어도 24 시간 동안 의 확고함과 내구성이다. 항응고제의 주입은 이 시간 간격을 연장할 수 있습니다. 이 모델은 대장의 작은 창자와 근근 부분을 대상으로 장막 부위에서 선택적으로 약물을 안정적으로 주입할 수 있게 합니다.
몇 가지 단계는 기술의 성공에 매우 중요합니다. 아주 작은 용기에서 캐니언을 달성하기 위해서는 적어도 400g의 쥐를 선택하는 것이 중요합니다. 성별과 나이는 관련이 없습니다. 올바른 수술 기구와 캐뉼라의 유형을 선택하는 것도 중요합니다. 여기서, 더 작은 폴리우레탄 캐뉼라(0.4mm O.D, 0.25 mm I.D.)는 1cm를 더 큰 캐뉼라(0.93mm O.D, 0.5mm I.D.)에 삽입하여 작은 동맥과 더 큰 주입 시스템에 모두 연결될 수 있도록 기능적이고 유용한 카테터를 얻을 수 있다.
첫 번째 수술 중요한 단계는 주변 지방 조직 (단계 3.5)에서 캐닝을 위해 확인 된 SMA 및 분기를 청소하는 것입니다. 이것은 일반적인 실수인 조직과 동맥 사이 캐뉼라의 삽입을 피하는 것을 돕습니다. 그러나 SMA의 작은 가지가 깨지기 쉽고 손상되기 쉽기 때문에 이 청소 단계는 어렵습니다. 가지가 다치면 합자에 의한 출혈을 멈추고 동물을 낭비하지 않도록 다른 근위 가지를 선택할 수 있습니다.
캐뉼라 내의 기포 형성을 방지하고 가스 색전증을 피하기 위해, 캐뉼라는 분기에 삽입하기 전에 팁까지 식염수로 채워져야합니다. 캐뉼라를 제자리에 고정하려면 수술실(4-0 실크)을 동맥에 삽입하는 지점과 카테터 주변의 용기 바로 위에 캐뉼라 팁 사이에 있어야 합니다. 수술 매듭은 캐뉼라를 고칠 만큼 단단해야하지만 너무 단단해서 그것을 가리기에는 너무 단단하지 않아야합니다 (3.12 단계).
올바른 캐뉼레이션을 보장하는 가장 좋은 방법은 캐뉼라(3.10단계)를 통해 혈류를 다시 보는 것입니다. 문제 해결의 관점에서, 이 일이 일어나지 않는 경우, 그것은 다음과 같은 이유로 인해 될 수 있습니다 :
캐뉼라는 동맥에 올바르게 삽입되지 않았습니다.
캐뉼라는 동맥 내부에 있지만 노드가 잘못된 위치에 가려져 있습니다.
캐뉼라는 동맥 내부에 있고 캐뉼라의 기포가 흐름을 늦추고 있습니다.
캐뉼라 내에서 혈전이 형성되었습니다.
잘못된 삽입은 동맥과 지방 조직 사이의 공간에서 캐뉼러 위치 지정 때문일 수 있다. 이 경우 다시 삽입이 필요합니다. 용기 위의 매듭이 캐뉼라를 가리면 매우 신중하게 풀고 다시 만들 수 있습니다. 카테터의 작은 기포는 일반적으로 캐니어를 손상시키지 않으며 생명을 위협하지 않습니다. 그러나 캐뉼라에 큰 기포가 있는 경우 주사기를 사용하여 캐뉼라에 다시 그리거나 카테터를 다른 가지에 재배치할 필요가 있다. 일반적으로, 혈전 형성을 피하고 작업 중에 가끔 식염수의 0.2 mL 볼루스를 주입하여 캐뉼라 특허를 유지할 수 있다.
이 연구의 한계는 더 긴 주입 시간에 있는 캐뉼라의 가혈의 저평가입니다: 여기에서, 24 시간 주입은 신진 대사 케이지에 보관된 쥐 동안 행해졌습니다. 더 긴 주입 기간을 얻으려면, 항 응고 요법을 사용하는 것이 유용할 수 있으며, 이 연구에서 투여되지 는 않는다. 그러나, 주입 하는 동안, 쥐는 주입 시스템을 지 원하는 유일한 하나 이기 때문에 신진 대사 케이지에 보관 해야 합니다. 이 위치는 더 긴 기간 동안 치료하는 경우 스트레스를 받을 수 있는 동물에 대 한 불편. 더욱이, 식염수 용액만 주입에 사용되었기 때문에 특정 약물 투여에 대한 결과는 없습니다. 이 방법의 한 가지 제한은 카테터에 사용되는 동맥 가지(존재하는 경우)에 주입할 수 없다는 것입니다. 이러한 이유로 대어타에서 가장 가까운 지점을 수분하는 것이 좋습니다.
억제되지 않은 동물을 위한 다른 쥐 SMA 장기 주입 모형은 문학에 존재하지 않습니다. 수년 전에 설명된 IMA 캐니언레이션 모델에 비해, 여기서 기술된 기술은 SMA 관류 영역에서 약물 주입을 허용하고 결장에 국한되지 않기 때문에 더 넓은 실험 목표를 가지고 있다. 최근에는 처음으로, SMA의 분기의 선택적 수분은 장경질 부위에 직접 보툴리눔 독소의 주입을 사용하였으나, 앞으로 많은 다른 약물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 항응고제는 장혈전증, 또는 장내 미생물군유전체작용을 이용한 약물11 또는 염증성 장질환에 대한 약물12를 연구하기 위해 주입될 수 있다. 동맥 내 주입은 특히 장 대사 연구에 유용하며, 혈액이 간 대사의 대상이 되는 포털 순환을 거치기 전에 약물 효과가 매우 중요하기 때문입니다.

쥐에서와 같이 인간에서 우수한 막질 동맥 (SMA)는 복부 대동맥에서 유래하고 근위 횡막 결장에 십이지장에서 동맥 혈액으로 창자를 공급합니다. SMA는 수많은 지점을 초래합니다.
모세관 관류 후, 막질 순환은 전신 순환으로 판독되기 전에 간 대사를 겪는 간으로 포문 정맥을 통해 배수됩니다. SMA의 캔포레이션은 대장또는 가장 중요한 간 대사 및 화학 적 통관에 미치는 영향을 평가하기 위해 선택적 이거나 지속적인 방식으로 진단 목적, 치료 색전및 약물 주입에 유용하다. 인간에서는, SMA의 최소 침습적인 방사선 카테터화는 혈관 내 치료를 위해 수행1 또는 선택적 약물 주입2 경피성 또는 형질 천자 및 캐넌션 과 같은 여러 경피적 접근을 사용하여.
작은 복부 혈관의 캐포레이션의 다른 기술의 문학 보고서가 있습니다: 우수한 막질 정맥 (SMV)3, 열등한 장간 동맥 (IMA)4, 막질 림프 덕트 5, 간 동맥6 또는 쥐의 창 자 관류에 전 생체 내 연구에 대한 연구7. 정맥 측에 비해, 쥐에 있는 SMA의 통조림은 그것의 높은 압력을 제공한 혈전증과 출혈의 동시 리스크 때문에 훨씬 더 까다롭습니다. 특히, 수술 후 케이지에 무료 동물을 필요로 하는 경우 쥐가 수술용 침대의 마취로부터 깨어날 때 수분이 작동할 경우 문제가 발생한다.
최근 논문은 마취8의 밑에 동물에 있는 실험 (혈압 측정)의 한 부분으로 SMA 캐넌레이션을 기술했습니다. 그러나, 어떤 기술도 무제한 동물에 장기 주입을 위한 SMA의 외과 수통에 기술되지 않습니다. 이 원고의 목적은 적어도 24 시간 (이상) 동안 막새 침대에 약물의 선택적 주입을 허용하는 근위 가지를 통해 SMA의 장기 수화를위한 외과 기술을 단계적으로 설명하는 것입니다. 꾸준하고 튼튼한 캐넌트는 카테터가 삽입된 선박의 영구 결찰 및 폐쇄가 필요하기 때문에, 이 기술은 대신 SMA9 에 직접 카테터를 삽입하는 것을 피하고, 대마로부터 SMA의 기원에 가능한 한 근접적으로 근위 분지의 통조림을 통해 용기에 접근한다. 근접 주입을 통해 주입된 약물이 주요 혈관을 통해 혈류를 닫지 않고 가능한 가장 넓은 해부학 침대에 도달 할 수 있습니다.
쥐 SMA 캐니언레이션 기술은 많은 응용 프로그램이 있습니다. 간질 동맥 구획에서 선택적으로 약물을 투여하여 위장 수준에서 국소 작용을 얻고 전신 효과 및 간 약물 대사를 피할 수 있습니다. SMA 캐뉼레이션 쥐 모델은 더 큰 동물 모델에 비해 장점이 있습니다 : 그것은 저렴하고 윤리적으로 허용되며 수행하고 배우기 쉽습니다. SMA 캐닌레이션 수술은 마우스 모델에 비해 쥐 모델에서 수행하기가 더 용이하다.

<table><tbody><tr><td>Crile-Wood 바늘 홀더</td><td>2Biological Instruments</td><td></td><td>팁 모양: 직선; 팁 폭 : 2mm; 클램핑 길이 : 14mm; 자물쇠 : 예; 가위: 아니요; 합금 / 재질 : 스테인레스 스틸; 길이 : 15cm; 톱니 모양 : 예</td></tr><tr><td>엑스트라 파인 Graefe 집게</td><td>2Biological Instruments</td><td></td><td>팁 폭 : 0.5 mm; 팁 치수: 0.5 x 0.5mm; 합금 / 재질 : 스테인레스 스틸; 길이 : 10cm</td></tr><tr><td>Luer Stub Adapter</td><td>BD Intramedic</td><td></td><td>23 게이지 427410 튜빙</td></tr><tr><td>멤브레인 밸브</td><td>Biomed</td><td>Mod 617</td><td></td></tr><tr><td>Poliurethane 카테터</td><td>ENKI</td><td></td><td>외경 : 0.4mm, 내경 : 0.25mm</td></tr><tr><td>실라스틱 카테터 실험실 튜빙</td><td>헬스케어 산업</td><td>508-002</td><td></td></tr><tr><td>봄 가위</td><td>2Biological Instruments</td><td></td><td>팁 모양: 각진; 팁 : 날카롭다; 합금 / 재질 : 스테인레스 스틸</td></tr><tr><td>학생 외과 가위</td><td>2Biological Instruments</td><td></td><td>팁 모양 : 직선; 합금 / 재질 : 학생 스테인레스 스틸; 톱니 모양: 아니요; 기능: 학생 품질</td></tr></tbody></table>

쥐의 작은 창자를 대상으로: 우수한 장막 동맥에 장기 주입

Targeting the Rat's Small Bowel: Long-Term Infusion into the Superior Mesenteric Artery

우수한 장간 동맥은 대퇴 또는 부조류 동맥의 최소 침습 방사선 카테터화를 통해 인간에서 캔누틸 수 있습니다. SMA 캐넌션은 작은 해부학 적 차원으로 인해 쥐에서 더 어렵습니다. 이 연구의 목적은 쥐에서 SMA의 수조를 위한 수술 기술을 기술하여 제한되지 않은 동물의 SMA 혈관 침대에 약물을 장기간 주입하는 데 도움이 되며, 이는 수술 후 회복 후 24시간 동안 높은 카테터 육아 수술을 받게 됩니다. 
SMA 혈전증 또는 직접 접근에서 출혈의 위험을 피하기 위해, SMA의 근접 분기는 격리, 결집 및 0.25 mm 폴리 우레탄 모세관 튜브로 수통으로 그의 팁은 대르타에서 SMA의 기원에 가까운 고급. 그런 다음 캐뉼라는 동물의 목 뒤쪽과 인공 판막을 통해 피부를 통해 피하로 터널링됩니다. 캐뉼라의 외부 부분은 반강성 지지 시스템에 삽입되어 쥐가 자유롭게 움직일 수 있는 케이지 외부의 연속 주입 펌프에 연결됩니다. 
캐뉼라의 올바른 위치는 수술 후 혈관 조영술 및 부검 결과에 의해 입증되었다. 24시간 동안 SMA 부위에 식염수 주입 후 카테터 가혈은 펌프의 총 방전및 혈액 샘플링 또는 식염수 주입을 위한 기능성 캐뉼라의 인식에 의해 대부분의 쥐에서 보장되었다.

이 연구에서는, 절차는 15 마리의 쥐에 수행되었다. 식염수 주입의 24 시간의 끝에, 식염수 또는 혈액 손실의 흔적은 신진 대사 케이지에서 관찰되지 않았으며 복부 상처는 케이지와 마찬가지로 모든 동물에서 깨끗했다.
일반 케이지에서는 체중과 물/음식 섭취량을 매일 모니터링하여 5일 동안 쥐가 관찰되었습니다. 이 기간 동안, 총 검사에서 동물의 일반적인 상태는 행동 이상의 표시없이 좋았다. 수술 직후 모든 쥐가 다시 먹이를 주기 시작했습니다. 그림 3A 와 3B 에 도시된 바와 같이 평균 일일 음식과 물 섭취량은 3일 후에 정상까지 점진적으로 증가했습니다. 도 3C에서, 체중 증가가 규칙적이었다는 것을 볼 수 있으며, 관찰 기간이 끝날 때까지 점차 증가한다. 배변의 변화는 일어나지 않았고 매일 대변과 소변 출력은 정상이었습니다.
24시간 후, 식염수용 50mL로 채워진 펌프 2개(각각 40mL 및 20mL)가 있었고, 다른 모든 펌프(86.7%)는 비어 있었다. 더욱이, 이 주입 기간 이후에, 12개 칸누라(80%)는 혈액 샘플링과 식염수 주입(5mL)을 모두 기능하고 있었고, 3개 캐뉼라는 더 이상 특허를 받지 못했다(이들 중 2개는 잔류물을 가진 펌프에 연결된 칸누라였다)(표 1).
부검에서, 100% 캐뉼라 (n=15)는 여전히 SMA 가지에 위치하고 있었고 쥐에는 장 허혈 (그림 4B) 또는 내복부 출혈의 징후가 없었습니다. 3개의 폐색된 칸누라는 SMA 분기의 삽입에서 각각 0.5cm, 1cm 및 1.5cm로 꼬임된 것으로 나타났다. 이 현상은 아마도 케이지에있는 동물의 움직임에 기인한다.
5마리의 쥐에서, 절차 직후와 펌프 연결 직전, 2mL의 요오드 콘트라스트 배지를 장분수 칸라로 주입하여 심상 강화기를 통해 혈관조영술을 얻었다(혈관조영술은 수술 불능으로 수행되었다). 각 쥐(n=5)에서 , 도 4A에 도시된 바와 같이 복부에 대조 배지가 퍼지지 않고 막종 동맥원 및 SMA 및 주요 가지를 보는 것은 포지질이었다. 이것은 캐뉼라가 잘 배치되고 SMA의 지점에 고정되어 있음을 확인했습니다.
<img alt="봉합 기술 및 혈관 노출을 포함하는 장의 외과적 문합 절차." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1: 실험 사진. (A) 거즈에 대한 자연적인 성향에 따라 소장 (모든 가지와 SMA를 시각화 할 수있다); (B) SMA 분기에 캐뉼라를 삽입하는 연산자. 튜브의 삽입을 보장하기 위해 선박 아래에 고체 지원을 해야합니다. 단부 실크 봉합사는 선박을 닫고 근위 가분 내부의 카테터를 고정시합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="미세 투석 프로브, 수술 절차 및 개략도를 사용한 쥐 뇌 주입 설정." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2: 주입 지원 시스템. (A) 피하터널이 되면, 카누라는 목의 후방 부위에서 흰색 밸브를 통해 나온다. (B) 흰색 판막을 안정화하기 위해 재킷을 입은 쥐. 강철 막대는 주입 중에 카테터를 보호합니다. (C) 강철 막대를 빠져나가는 캐뉼라에 연결된 탄성펌프를 사용하여 식염수를 주입하는 동안 대사 케이지에 보관된 쥐의 다이어그램 표현. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="5일 동안의 음식, 물 섭취량 및 체중 증가 그래프; 꺾은선형 차트; 통계 분석." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3: 5일 의 관찰 기간에 쥐(n=15)의 식품 섭취, 수취 및 체중 증가에 대한 대표적인 데이터. 평균 일일 식품(A)과 물(B)의 섭취는 점진적으로 증가하고 3일 후에 생리학적 수준으로 안정화됩니다. 평균 체중 증가 (C) 점차적으로 관찰 기간의 끝까지 증가. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="의료 개입을 보여주는 수의학 장 시술의 X-레이 이미지 및 수술 부위." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 그림 4: (A) 캐뉼라를 통한 대조 주입 후 막연동맥 영역의 대비 혈관조영술(적절하게 배치된 캐뉼라의 증거) 및 (B) 캐뉼라가 부검 중에 여전히 잘 배치되어 있는 사진. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig04large.jpg" target="_blank"></a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2">엘라스테메릭 펌프</td>
			<td colspan="2">정 맥</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>비우다</td>
			<td>잔류물</td>
			<td>특허</td>
			<td>특허가 아님</td>
		</tr>
<tr>
<td>n=15</td>
			<td>13</td>
			<td>2</td>
			<td>12</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>%</td>
			<td>86.7</td>
			<td>13.3</td>
			<td>80</td>
			<td>20</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 식염수 주입 24시간 후 엘라스소메릭 펌프 방전 및 캐뉼라 가혈. 주사기로 혈액을 그리고 캐뉼라에 식염수 5mL를 주입하여 패혈증을 검사했습니다.

쥐의 우수한 막질 동맥 (SMA)에 장기 주입에 대한 액세스는 SMA의 근위 분기의 캐너레이션으로 구성된 외과 적 절차이다. 캐뉼라는 복부 상처에서 빠져나와 피하 공간을 통해 다시 교차층 접기로 터널을 통과합니다.

The superior mesenteric artery can be cannulated in humans through minimally invasive radiological catheterization of the femoral or axillary artery. SMA ...

쥐의 우수한 막질 동맥 통조림은 어렵고 실험 모델로 자주 사용되지 않습니다. 이 기술은 기능적 캐너레이션을 수행할 수 있게 하고 동맥 내 약물의 첫 번째 통과 효과로 실험 분야를 열어줍니다. 이 방법은 우수한 장막 동맥의 캐니언에 동의하면서 출혈과 혈전증을 피합니다.그리고 먹고 움직일 수있는 비교적 자유로운 동물에서 약물의 장기 주입을 허용합니다. 장내 활성 약물에 대한 약리학 연구는이 기술의 혜택을 크게 누릴 수 있습니다. 약물의 직접적인 단일 통과의 효과를 연구하는 대안은 없습니다.큰 캐뉼라를 자르는 것으로 시작합니다. 그런 다음 작은 캐뉼라를 자르고 1센티미터를 더 큰 캐뉼라에 삽입합니다. 루멘의 폐색을 피하는 시아노아크라일트 접착제와 함께 두 캐뉼러를 고정합니다.그 후, 더 큰 캐뉼라의 자유로운 단면과 식염수 용액으로 채워진 1 밀리리터 주사기에 장착된 루어 스텁 어댑터에 연결합니다. 우수한 장막 동맥의 가지에 카테터의 삽입을 용이하게하기 위해 가위로 작은 캐뉼라의 무료 팁을 선명하게. 식염수 용액으로 플러시하여 캐뉼라의 패실을 확인하십시오.우수한 장간 동맥 또는 SMA 캐뉼레이션의 가지에 대한 복부를 포함하여 마취 된 쥐의 수술 부위에서 모피를 면도하고, 캐뉼라 출구를위한 목 의 뒤쪽. 수술 부위를 무균으로 청소하십시오. 그리고 4 개의 사지를 고정시키는 척추 위치에 동물을 놓습니다.메스 블레이드를 사용하여 복막으로 모든 복부 평면을 통해 메소 위 영역의 중간에 직선 3 센티미터 절개와 복벽을 엽니 다. 복강경 절개 주위에 식염수 용액에 담근 거즈를 놓고 봉합사를 사용하여 외과 절개를 열어 둡니다. 면 봉면을 사용하여 소장을 식별하고 노출시키고, 복강경 절단에서 장간을 추출하여 거즈 위에 내려 놓습니다.맥동을 통해 SMA를 식별합니다. 면 봉면을 사용하여 장간 지방을 분리하고 SMA와 근해 가지의 2 ~3 개를 발견하십시오. 캐닝의 수술 기동을 허용하기에 충분히 큰 SMA의 근위 가지를 선택합니다.이 분기를 원점에서 3~4센티미터 다운스트림으로 묶어 봉합사 끝을 나중에 조작할 수 있을 만큼 길게 유지하여 확장이 가능합니다. SMA의 가지 아래에 경직된 지지대를 배치하고 집게를 사용하여 작은 캐뉼라의 사지를 잡고 다른 손으로 봉합사 끝을 당겨 용기를 변형시키고 카테터의 진입을 용이하게합니다. 혈관 의 끝을 혈류와 반대 방향으로 혈관의 평면에서 20도 각도로 잡습니다.그런 다음 팁을 가볍게 눌러 동맥 벽을 관통하고 캐뉼라를 삽입합니다. SMA의 기원에 가까운 동맥 가지에서 1센티미터 동안 캐뉼라 삽입을 계속합니다. 캐뉼라를 수술 매듭으로 동맥에 고정하고 멸균 식염수 용액 1 밀리리터를 플러시하거나 혈액 샘플링하여 올바른 기능을 확인합니다.목의 후방 영역에서 1센티미터 절개를 하고 구형 밸브를 수용합니다. 그런 다음 카테터 플러그로 목에 놓인 밸브에 대한 복강경 접근에서 캐뉼라를 통과합니다. 복강내의 작은 판막을 교체하고 복벽을 닫습니다.그런 다음 바늘로 다음 피부에 밸브를 고정하십시오. 버튼 밸브를 보호하기 위해 재킷으로 쥐를 드레스. 주입 하는 동안 강철 막대와 캐뉼러의 노출 된 부분을 보호 하 고 밸브에 고정.캐뉼라의 황사 단경을 멸균 식염수 용액 50밀리리터로 채워진 탄성 펌프에 연결하고 24시간 동안 주입을 진행합니다. 주입 후, 펌프, 재킷, 강철 막대 및 랫트에서 밸브를 제거하여 동물의 외부 주입 시스템을 분해합니다. 캐뉼라를 목에서 꺼내서 잘라내고, 상처 봉합사 후 목 피부 밑에 사지를 남깁니다.이 연구에서는, 15 마리의 쥐는 이 절차를 거쳤고 3 일 후에 정상까지 평균 일일 음식과 물 섭취량이 점진적으로 증가했습니다. 체중 증가는 또한 규칙적이고 점차적으로 관찰 기간의 끝까지 증가했다. 24시간 후, 두 개의 풍선 펌프에 식염수 잔류물이 있었고, 나머지 13개는 완전히 비어 있었습니다.더욱이, 주입 기간 이후에, 12 개의 칸누아는 혈액 샘플링과 식염수 주입 모두에 대해 여전히 작동했으며, 3 개의 캐뉼은 더 이상 특허가 아니었습니다. 부검에서, 칸누아의 100 %는 SMA 지점에 위치했다. 그리고 어떤 쥐도 창자 허혈 또는 복부 출혈의 징후가 없었다.혈관 조영술은 장막 수분에 io기증 된 대비 배지를 주입하여 5 마리의 쥐에서 수득하였다. 간질 동맥 원, 특히 SMA및 주요 가지는 복부에 항문 배지확산 없이 관찰되었으며, 캐뉼라가 SMA의 가지에 잘 배치되고 고정되어 있음을 확인하였다. 특허, 선박 아래 봉합사를 통과하 고 구멍을 뚫고 캐뉼라를 삽입하는 가장 적합한 위치를 선택하는 선박하류의 합자를 캐너레이하는 분기의 세심한 황폐는 이 프로토콜의 가장 중요한 측면이다.오류는 수정할 수 없습니다.

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Research

연구

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