초파리를 이용한 헤테로크로마틴 촉진 약물의 식별을 위한 스크리닝 방법

현재 이종로마타틴 형성을 촉진하는 데 잘 설정된 약물은 없습니다. 여기에서 우리는 이 과정을 승진시키는 작은 분자 화합물을 확인하기 위한 간단하고 효율적인 방법을 제시합니다. 당사의 선별 프로토콜은 이종로크로마틴 촉진 약물 식별을 위한 생체 내 시스템에서 간단하고 저렴하며 쉽게 따르기 쉬운 것을 제공합니다.

이종로크로마틴 형성을 촉진하는 화합물을 식별하는 것은 수선및 암 치료암의 기계장치의 발견으로 이어질 수 있습니다. 이 비용 효과적인 드로소필라에서 이종로크로마틴 촉진 화합물을 식별하기 위해 측정된 것은 또한 세포 검열의 가장 높은 세포 풀에 대한 예방 조치이기 때문에 양식 안타를 계산하는 데 사용될 수 있었다. 이 Drosophila TranSheet 시스템은 즉석에서 존재하는 이종로크로마트틴의 양과 반비례하는 다양한 눈 색깔 표현형을 생성하기 때문에 우리의 선별 프로토콜은 빠른 파일럿 스크린에 유용 할 수 있습니다.

절차를 입증하는 데 도움이 케니 다오, 우리의 실험실에서 학부 학생이 될 것입니다. 적절한 용매와 원하는 농도를 사용하여 스크리닝을 위한 약물 라이브러리를 식별하고 준비한 후, 3마리 이상의 처녀 암컷 파리를 25~95mm 식품 병용 유리병에 파리3개 이상의 처녀 암컷 파리로 교차한다. 표준 드로소필라 식품 배지의 9 밀리미터.

각 약물에 대해 3개의 복제 바이알을 설정합니다. 화면에 컨트롤 바이알 하나를 추가합니다. 그리고 파리가 실온에서 이틀 동안 알을 낳을 수 있도록하십시오.

십자가 둘째 날, 이산화탄소의 짧은 버스트와 파리를 마취. 그리고 70 %에탄올이 들어있는 병에 부모 파리를 폐기하십시오. 다음으로, 물 속에서 마이크로 어금니 최종 농도에 참석하기 위해 초기 주식에서 각 약물 화합물을 희석.

그리고 플라이 푸드 위에 60 마이크로리터 또는 대조군 33%DMSO를 단독으로 추가합니다. 그런 다음 바이알 내에 부모 파리가 없는지 확인합니다. 그리고 적절한 바이알에 약물 용액을 추가합니다.

F1 파리가 나타난 지 이틀 후, 한 번에 한 유리병에서 마취된 파리를 필터 용지 아래에서 이산화탄소가 여과하는 다공성 해부 패드로 이송합니다. 해부 현미경에서, 각 전체 비행을 검사, 곱슬 o 지배적 인 곱슬 날개 표현형의 부족에 의해 이종수 의 모든 남성을 식별. 1~5의 척도로 각 이종수 남성의 눈 색깔을 채점한다.

1 점수가 5% 미만의 빨간색 으로 흩어져 있는 눈 총 표면적으로 할당됩니다. 6 ~25%의 적색 스팟 눈 총 표면적으로 두 점수를 추가하여 날아갑니다. 3대는 26~50%의 적색 스팟 눈 총 표면적을 가진 비행합니다.

4대는 51~75%의 적색 스팟 눈 총 표면적을 가진 비행합니다. 그리고 75% 이상의 적점 눈 총 표면적을 가진 5개의 파리. 그런 다음 트리플리케이트에서 득점한 각 바이알의 모든 남성의 평균 색상 인덱스를 계산합니다.

화합물이 실제로 이종로크로마틴 형성을 촉진한다는 것을 확인하기 위해, 서양 블로팅과 같은 다른 검증 기법을 수행할 수 있다. 본 대표적인 실험에서는, 작은 분자 약 라이브러리, 종양학 세트 3, 로소필라 멜라노가스터의 DX1 균주를 사용하여 97 개의 FDA 공인 종양학 약물로 구성된. 스크리닝 분석법에 따르면, 메토트렉세이트는 라이브러리에서 E7로 코딩되어 Dx1 균주 내에서 가장 많은 변화를 일으켰다.

메토트렉세이트는 미래의 암 표적 요법을 위한 가장 유망한 이종로마타닌 촉진 약일 수 있다는 것을 건의합니다. 이 화합물이 이종변환을 촉진한다는 것을 추가로 확인하기 위해 서부 얼룩 데이터가 수행되었다. 이종로크로마티닌 포르포틴 관련 단백질, H3K9 트리메틸레이션의 최대 조절을 입증하고, 스크리닝 결과를 검증한다.

중요한 단계는 미리 정해진 연구 경로에 따라 1~5의 규모로 날아가는 흰색 11-18 DX1 이종수남성의 눈색을 채점하는 것이다. 우리는 안타를 확인하기 위해 서양 얼룩이나 면역 스테인닝을 사용할 수 있습니다. 이종로크로마틴 형성을 촉진하는 것으로 의심되는 화합물의 발견은 또한 인간 적인 환자에 있는 암 발달 그리고 임상 시험의 IV 유전 기계장치의 발견으로 이끌어 낼 수 있습니다.