Name: 마우스 간 조직에서 혈관의 다광 현미경 관찰 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: 학습하세요 마우스 간 혈관 동역학을 다광 현미경으로 실시간 관찰하는 방법을. Rhodamine B isothiocyanate–dextran을 이용한 이 기술은 살아있는 조직의 3차원 혈관 구조를 고해상도로 시각화하여 간 생리학 및 병리학 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(81772133)의 지원을 받았습니다. 8190244), 광동자연과학기금(2020A1515010269, 2020A1515011367), 광저우시민건강과학기술연구프로젝트(201803010034, 201903010072), 군사의료혁신사업(108X7).

모든 동물 관리 및 절차는 히스와 웰빙에 대한 중국 난팡 병원 정책에 따라했다 (응용 프로그램 번호: NFYY-2019-73).
1. 마우스 준비
<ol><li>마우스를 마취합니다.<ol>
<li>주사기에 펜토바르비탈 나트륨(50 mg/kg)을 준비합니다.</li>
		<li>마우스(8주된 남성 C57BL/6)를 왼손으로 잡아 배가 위를 향하고 머리가 꼬리보다 낮을 수 있도록 하십시오. 75%의 알코올로 복부 피부를 소독하십시오.</li>
		<li>오른손에 주사기를 잡고, 3-5mm피부의 오른쪽에 바늘로 복부 흰색 선을 관통한다. 주사기 바늘과 피부가 45° 각도에 있는지 확인하고 펜토바르비탈을 복강에 천천히 주입하십시오.  면도 후 마우스 절개 부위 주변을 3번 번 소독하여 75%의 알코올과 클로르헤시딘 용액을 번갈아 사용합니다.</li>
		<li>마취가 올바른 반사의 부족에 의해 성공적이었는지 확인하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>로다민 B 이소토오카네이트-dextran을 카우달 정맥에 넣습니다.<ol>
<li>10 mg/mL 로다민 B 이소토오카네이트-디엑스트라넨의 100 μL을 주사기에 준비한다.</li>
		<li>마우스의 꼬리를 75%의 알코올로 닦으부습니다.</li>
		<li>왼손으로 꼬리를 잡고, 정맥과 평행하게 바늘로 오른손에 주사기를 잡고, 100 μL 염료를 주입한다.</li>
		<li>주입 후 면봉으로 출혈을 멈춥시다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>살균수로 젖은 거즈로 마우스의 복부 털을 담그고 면도기로 마우스의 복부를 면도하여 모피 방향으로 스트로크합니다. 면도 후 마우스 절개 부위 주변을 3번 번 소독하여 75%의 알코올과 클로르헤시딘 용액을 번갈아 사용합니다.</li>
	<li>75%의 알코올로 가열 패드를 닦은 후, 가열 패드를 열고, 37 °C에서 체온을 유지하기 위해 가열 패드에 뒷면에 마우스를 배치합니다.</li>
</ol>2. 신체 장기 이미징 프레임으로 마우스 간 고정
참고: 상업적인 기관 화상 진찰 프레임은 아직 풀어 놓이지 않았습니다.
<ol><li>깨끗한 흡입 컵을 고정 된 위치에 놓습니다.</li>
	<li>장기 이미징기구(보조 도 1)를설치하고 가열 패드와 흡입 컵을 75% 알코올로 닦아냅니다.</li>
	<li>진공 펌프 호스에 진공 패드 (직경 5mm)를 연결하고 진공 펌프를 켭니다.</li>
	<li>75%의 알코올로 살균된 멸균 테이블에서 마우스 절개 부위 주변을 75%의 알코올과 클로레시딘 용액으로 3번 번 소독한 다음 마우스 절개 부위 주변을 75%의 알코올및 클로레시딘 용액으로 3배 번 소독한 다음 수술용 가위를 사용하여 간암의 2cm를 잘라냅니다.</li>
	<li>마우스를 홀더 베이스에 가열 패드와 함께 놓습니다.</li>
	<li>흡입 컵이 간을 보유할 수 있도록 장기 이미징 기구를 조정합니다. 그런 다음 흡입에 30-35 kPa의 음압을 사용하여 간이 흡입 컵(보충 도 2)에부착되도록합니다.</li>
</ol>3. 다광레이저 스캐닝 현미경 조정
<ol><li>다광현미경을 켜고 60x/1.00 W 목표를 선택합니다.</li>
	<li>목표 렌즈 아래에 프레임과 마우스를 고정합니다.</li>
	<li>흡입 컵의 중심인 렌즈 전체를 덮을 수 있는 일반 식염수를 추가하고, 일반 식염수를 터치하기 위해 목표 렌즈를 조정합니다.</li>
	<li>컴퓨터 아이콘을 두 번 클릭하여 레이저 소프트웨어를 켜고 스위치를 켭니다. 그런 다음 전원 버튼과 셔터를 3s로 누르고 누릅니다.</li>
	<li>파장을 800 nm로 설정합니다.</li>
	<li>컴퓨터를 사용하여 현미경 작동 소프트웨어를 시작합니다.</li>
	<li>획득 설정의경우 레이저 800을설정합니다.</li>
</ol>4. 다광레이저 스캐닝 현미경을 이용한 관찰
<ol><li>이미지 수집 제어를위해 형광 스위치를 클릭합니다.</li>
	<li>방과 장비 조명이 꺼져 있는지 확인합니다. 소음 수준을 줄이려면 어두운 환경에서 현미경을 사용하십시오.</li>
	<li>현미경의 라이트 패스 셔터를 엽니다.</li>
	<li>형광 필터를 네 번째 기어로 회전시키고 광학 스위치의 두 레버를 당깁니다.</li>
	<li>접안렌즈를 살펴보면, 거칠고 미세한 초점 준나선형을 사용하여 초점 거리를 조정하고 X/Y 축을 사용하여 시야를 조정하여 대상 영역을 찾습니다.</li>
</ol>5. 다광 레이저 스캐닝 현미경
<ol><li>소프트웨어의 형광 스위치를 끄고 형광 필터를 두 번째 기어(두 번째 기어는 RXD1)로 전환하고 광학 스위치의 두 레버를 밀어 넣습니다.</li>
	<li>포커스 ×2를 클릭하여 대상 영역을 미리 보고 획득 설정 및 이미지 수집 제어 매개 변수(이미지 해상도: 1024)를 조정합니다.</li>
	<li>제어 + C를 누르고 고전압, 게인 및 오프셋을 조정합니다(소음 수준을 줄이기 위해).</li>
	<li>미리보기를 중지하려면 중지를 클릭하고 XY 버튼을 클릭하여 두 차원으로 스캔하고 완료 후 저장합니다(그림1).</li>
	<li>지역을 선택하고 깊이를클릭한 다음 미리 보기를 클릭하여 최종 세트를 선택하고 현미경 설정에서 집합을 시작합니다(혈관의 전체 필수 부분 참조). 3D 이미지를 스캔하고 완료 후 저장(그림 2).</li>
	<li>지역을 선택하고 시간을클릭하고 다른 획득 설정 및 이미지 수집 제어 매개 변수를 조정합니다(단계 크기: 1 μm; 슬라이스: 10; 시간 스캔 번호: 40). 다른 슬라이스를 스캔하고 완료 후 저장하여 움직이는 이미지를 얻습니다(비디오 1). 참고 : 누군가가 스캔 중에 마우스를 돌보고 그에 따라 마취를 추가해야합니다.</li>
	<li>목 해부로 마우스를 희생합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-photon+microscopy+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multi-photon microscopy in cardiovascular research.</a> Methods. 130, 79-89 (2017).</li>
<li>Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrahepatic+mass-forming+cholangiocarcinoma+growing+in+a+giant+hepatic+hemangioma%3A+A+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report.</a> Medicine (Baltimore). 98 (27), 16410(2019).</li>
<li>Werkmeister, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+microscopy+for+blood+vessel+imaging%3A+new+non-invasive+tools+%28Spectral+SHG%2C+FLIM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Hemorheology+and+Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Multiphoton microscopy for blood vessel imaging: new non-invasive tools (Spectral SHG, FLIM).</a> Clinical Hemorheology and Microcirculation. 37 (1-2), 77(2007).</li>
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<li>Centonze, V. E., White, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+excitation+provides+optical+sections+from+deeper+within+scattering+specimens+than+confocal+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Journal%22%5BJournal%5D)">Multiphoton excitation provides optical sections from deeper within scattering specimens than confocal imaging.</a> Biophys Journal. 75 (4), 2015-2024 (1998).</li>
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<li>Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+dendritic+calcium+dynamics+in+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons.</a> Nature. 385 (6612), 161-165 (1997).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Deep-Brain+Structural+and+Hemodynamic+Multiphoton+Microscopy+Enabled+by+Quantum+Dots%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">In vivo Deep-Brain Structural and Hemodynamic Multiphoton Microscopy Enabled by Quantum Dots.</a> Nano Letters. , (2019).</li>
<li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+multiphoton+microscopy+as+a+tool+for+studying+renal+physiology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Intravital multiphoton microscopy as a tool for studying renal physiology and pathophysiology.</a> Methods. 128, 20-32 (2017).</li>
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<li>Heymann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+intravital+multiphoton+microscopy+imaging+of+immune+cells+in+healthy+and+diseased+liver+using+CXCR6.Gfp+reporter+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Long term intravital multiphoton microscopy imaging of immune cells in healthy and diseased liver using CXCR6.Gfp reporter mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), (2015).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+first+fully+human+anti-TEM1+scFv+in+models+of+solid+tumor+imaging+and+immunotoxin-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+%26+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Characterization of the first fully human anti-TEM1 scFv in models of solid tumor imaging and immunotoxin-based therapy.</a> Cancer Immunology & Immunotherapy. 66 (3), 367-378 (2017).</li>
<li>Williams, R. M., Zipfel, W. R., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+microscopy+in+biological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Multiphoton microscopy in biological research.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 5 (5), 603-608 (2001).</li>
</ol>

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특정 살아있는 조직을 관찰하는 것은 조직 내부의 물질의 변화, 국소화 및 생물학적 효과를 이해하는 효과적인수단이다(17) 이 실험에서 중요한 단계는 호흡과 심장 박동으로 인한 운동 유물의 문제를 해결할 수있는 장기 이미징 기구로 간을 고정하고 관찰을위한 다광자 현미경을 사용하는 것입니다. 이 방법을 이용하여, 생체 내 간의 내부 조직은 다광 현미경을 통해 관찰되고, 혈관은 형광으로 표시되어 그들의 위치와 3차원 구조를 명확하게 관찰한다. 이 방법은 형광으로 물질을 라벨링하고 추가 시각화를 제공하기 위해 살아있는 조직에서 물질을 동적으로 따라가하여 특정 효과를 관찰하는 데 사용할 수 있습니다.
다광현미경검사는 조직화된 조직 환경에서 세포 이벤트에서 정보를 수집하기 위한 필수 도구가 되기 위해 새로운 기술에서 진화했습니다. 그러나, 기관은 특정 조직 및 장기를 관찰하는 데 효과적일 수 있도록 안정적인 이미지를 생성하기 위해 제자리에 고정되어...

혈관은 인체의 다양한 장기 조직에 영양분을 제공하고 물질을 교환 할 수 있습니다. 동시에, 많은 사이토카인, 호르몬, 약물 및 세포는 또한 특정 위치로 혈관 수송을 통해 기능. 간 조직의 혈관 변화를 관찰하면 간 조직에서혈량의 분포와 물질의 운반을 이해하는 데 도움이 될 수 있으며, 특정 혈관 관련 질환의 분석을돕는다 1,2.
마우스에서 간 혈관을 관찰 하는 많은 방법이 있다. 그 중에서도 광학 현미경 검사법은 불투명혈관 조직3을관찰하는 데 많은 한계를 가지고 있다. 다광 현미경 검사는 비침습적 고해상도4를가진 살아있는 간의 혈관을 이미지하기 위하여 이용될 수 있습니다. 뿐만 아니라 혈관의 3 차원 이미지를 얻을 수 있습니다., 하지만 기술은 또한 그 안에 생물학적 효과를 관찰 하는 조직을 구성 하는 데 도움이 사용할 수 있습니다.; 더욱이, 전체 조직은 계산된 단층 촬영 및 자기 공명 화상 진찰5에서와같이 마이크로혈관만이 아니라 심영상될 수 있다.
다광 현미경 검사는 광독성6이적은 깊은 살아있는 조직에서 산란된 형광 신호를 효과적으로 검출하는 데 사용될 수 있다. 따라서 살아있는 조직의 활성을 보장할 수 있으며 손상의 양을 줄일 수 있습니다. 다광 현미경 검사는 공초점 현미경 검사법보다 더 나은 관통 전력을 가지고 있으며, 더 깊은 층을 관찰 할 수 있게7,독특한 3D 이미징을 제공합니다. 다광현미경검사는 이제 종종 이미징 두개골 신경8에 사용되며 살아있는 마우스9,10,11에서신경 역학의 연구로 확장되었다.
이 실험에서는 마우스 혈관의 형광 라벨링 후, 간은 프레임에 고정되고, 살아있는 간 조직에서 혈관의 역학은 다광산 현미경을 사용하여 볼 수 있다. 본 실험은 특정 물질을 표시하고, 다광현미경을 사용하여 조직 내의 위치를 관찰하고, 세포간 조직에서 세포 간 사건을 관찰하고, 광화학 적측정(12,13,14)을하고, 살아있는조직(15)내부의 물질 역학을 관찰하는 방법을 보여 준다. 예를 들어, 종양 내피 마커 1(TEM1)은 많은 고형 종양에서 혈관 및 기질상에 상응한 새로운 표면 마커로 확인되었으며, TEM1에 대한 단일 연쇄 가변 단편(scFv) 78을 표시한 다음, 다중광 현미경 검사법은 마우스 혈관진종 위치 및 종양16의평가에 사용될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>1mL 주사기 x 2</td><td>Hunan Pinan Medical Devices Technology</td><td>YA0551</td><td></td></tr><tr><td>5W 가열 패드</td><td>BiolinkOptics Technology</td><td>BL336</td><td></td></tr><tr><td>75% 절대 에탄올</td><td>Guangdong Guanghua Sci-Tech</td><td>1.17113.023</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 면봉</td><td>건강한 위생 왕국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마우스 수술 기구</td><td>RWD 생명 과학</td><td>SP0001-G</td><td>가위와 핀셋 포함</td></tr><tr><td>다광자 현미경</td><td>Olympus</td><td>FV1200MPE</td><td></td></tr><tr><td>Organ 이미징 픽스처</td><td>BiolinkOptics Technology</td><td>BL336</td><td>흡입 컵, 호스, 음압 펌프 및 브래킷 포함</td></tr><tr><td>Rhodamine B isothiocyanate&ndash; 덱스트란</td><td>시그마</td><td>R9379</td><td></td></tr><tr><td>면도기</td><td>Lei Wa</td><td>RE-3201</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 펜토바르비탈</td><td>시그마</td><td>P3761-25G</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 간 조직에서 혈관의 다광 현미경 관찰

Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue

마우스 간 조직의 내트라바산 역학을 관찰하면 마우스 간의 조직 관련 질병에 대한 심층관찰 및 연구를 더욱 심층적인 관찰할 수 있습니다. 마우스는 혈관을 얼룩지게 할 수 있는 염료를 주입합니다. 생체 내에서 마우스 간을 관찰하기 위해, 그것은 노출되어 프레임에 고정된다. 간 조직에서 혈관의 2 차원 및 3 차원 이미지는 다광 현미경을 사용하여 수득된다. 선택한 사이트의 조직의 이미지는 장기적인 변화를 관찰하기 위해 지속적으로 획득됩니다. 간 조직에 있는 혈관의 동적 변경은 또한 관찰됩니다. 다광현미경검사는 깊은 조직 단면 또는 기관에서 세포 및 세포 기능을 관찰하는 방법입니다. 다광 현미경 검사는 조직 미세 구조에 감도를 가지며 생체 내에서 높은 공간 해상도에서 생물학적 조직의 이미징을 가능하게하여 조직의 생화학 적 정보를 캡처 할 수있는 기능을 제공합니다. 다광현미경검사는 간 일부를 관찰하는 데 사용되지만 간을 고정하여 이미지를 보다 안정적으로 만드는 것은 문제가 된다. 이 실험에서, 특수 진공 흡입 컵은 간을 고치고 현미경의 밑에 간보다 안정적인 심상을 얻기 위하여 이용됩니다. 또한, 이 방법은 염료로 이러한 물질을 표시하여 간에서 특정 물질의 동적 변화를 관찰하는 데 사용할 수 있습니다.

간에서 혈관의 분포는 다광현미경검사를 사용하여 수득된 도 1에서볼 수 있다. 혈관은 트렁크에서 방출되는 복수의 가지로 나누어 주변 공간으로 분배된다. 혈관의 외주는 빨간색이며 내부 구멍은 어둡고 내부에는 많은 것들이 있습니다. 이미지가 명확해질수록 관측 평면에 가깝습니다. 염료가 주변 조직을 침투하여 다른 물질을 얼룩지게 하기 때문에 붉은 반점도 있습니다. 비디오 1에서는적혈구에서 움직이는 세포가 될 수 있는 비적색것들이 있습니다. 동영상이 끝나면 이러한 것들 중 일부가 어두워져 있습니다. 이것은 아마도 고정 된 간 시간이 지남에 잘 고정 되지 않은 때문에. 이 방법은 2 시간 동안 이미징을 허용합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60932/60932fig01....

이 실험에서 마우스는 혈관을 얼룩지게 할 수있는 로다민 B 이소티오카네이트 -dextran과 꼬리 정맥에 주입됩니다. 간이 노출되고 고정된 후에, 간의 특정 부분은 다광 현미경 검사를 사용하여 살아있는 바디에 있는 깊은 조직을 관찰하기 위하여 선택될 수 있습니다.

Observing the intravascular dynamics of mouse liver tissue allows us to conduct further in-depth observations and studies on tissue-related diseases of ...

이 방법은 여러 차원에서 간 역학의 진화를 따라 마우스 간 내의 혈관의 움직임을 시각화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법을 사용하여, 우리는 3 차원에서 간 내혈관의 역학을 시각화할 수 있습니다. 우리는 사용 혈관 염료를 시연했지만 현미경 시각화 전에 관심있는 물질로 혈관 염색을 수행 할 수 있습니다.마취 된 8 주 된 남성 C 57 블랙 6 마우스에서 오른쪽 반사의 부족을 확인 한 후. 마우스의 꼬리를 75%의 알코올로 닦아내고 30 게이지 바늘을 장착한 마이크로리터 주사기를 사용하여 로다민 B 이소티오네이트-엑스트라엔100마이크로리터에 새로 준비된 로다민 B 이소티오야네이트-엑스트라엔의 밀리리터당 10밀리그램을 코달린에 주입한다. 모든 용액이 전달되면 면봉을 사용하여 천개 부위에 압력을 가하고 멸균물로 젖은 거즈를 사용하여 복부 모피를 담급니다.면도기를 사용하여 복부를 면도하여 모피 방향으로 스트로크를 만들고 마우스를 섭씨 37도, 알코올 에 감염된 가열 패드에 놓습니다. 바디 장기 화상 진찰 프레임으로 마우스 간을 고정하기 위하여는, 첫째는 고정된 위치에 깨끗한 5 mm 직경 흡입 컵을 놓고 75% 알콜로 가열 패드 및 흡입 컵을 닦아냅니다. 진공 펌프 호스에 흡입 컵을 연결하고 펌프를 켭니다.75%의 알코올 살균 테이블에 는 수술 용 가위를 사용하여 마우스의 하부 흉골 경계에서 2 센티미터의 피부를 자르고 간을 노출시합니다. 마우스와 가열 패드를 체프레임의 홀더 베이스에 놓고 오르간 이미징 기구를 조정하여 흡입 컵이 간을 잡을 수 있도록 합니다. 그런 다음 간이 컵에 부착되도록 흡입을 위해 30 ~35 킬로파스칼의 음압을 사용합니다.다광레이저 스캐닝 현미경을 설정하려면 현미경을 켜고 60 X 목표를 선택합니다. 목표 아래 프레임과 마우스를 고정하고 렌즈를 덮을 만큼 큰 컵에 일반 식염수를 추가합니다. 렌즈가 일반 식염수에 닿고 레이저 소프트웨어를 켜면 목표를 조정합니다.레이저를 켜고 3초 동안 전원 버튼과 셔터를 길게 누릅니다. 그런 다음 현미경 작동 소프트웨어를 시작하고 레이저를 800 나노미터로 설정합니다. 이미지 수집 컨트롤을 설정하려면 형광 스위치를 클릭하고 방 및 장비 조명을 끕니다.현미경의 라이트 패스 셔터를 열고 형광 필터를 네 번째 기어로 회전시다. 광학 스위치의 두 레버를 당기고 눈조각을 통해 찾고, 코스와 미세 초점 주체 나선형을 사용하여 초점 거리를 조정합니다. 그런 다음 X Y 축을 사용하여 뷰 필드를 조정하여 대상 영역을 찾습니다.이미징의 경우 소프트웨어의 형광 스위치를 끄고 형광 필터를 두 번째 기어로 전환합니다. 광학 스위치의 두 레버를 푸시하고 초점 시간을 2번 클릭하여 대상 영역을 미리 보고 획득 설정 및 이미지 획득 제어 파라미터 및 프레스 컨트롤 및 C를 눌러 고전압 게인 및 오프셋을 조정합니다. 미리보기를 중지하려면 중지를 클릭하고 X Y 버튼을 클릭하여 두 차원에서 스캔하고 저장을 클릭합니다.리전을 선택하고 깊이를 클릭하고 미리 보기를 클릭하여 현미경 설정에서 끝을 선택하고 집합을 시작합니다. 3D 이미지를 스캔하고 저장합니다. 스캔 후 지역 클릭 시간을 선택하고 다른 획득 설정 및 이미지 수집 제어 매개 변수를 조정합니다.그런 다음 다른 조각을 스캔하고 저장하여 결과 이미지 동영상을 가져옵니다. 여기서 는 입증된 바와 같이 다중 광자 현미경을 사용하여 간 내혈관의 분포를 시각화하고, 관찰될 수 있다. 이 혈관은 트렁크에서 방출되는 복수의 가지로 나누어 주변 공간으로 분배된다.혈관내외경은 내부 구멍이 어두우면서 적색으로 관찰될 수 있으며, 배 내에서 움직이는 비적물체에서 관찰된 바와 같이 세포일 수 있다. 이 비디오에서 관찰 된 조직의 어둠은 시간이 지남에 따라 잘 고정되지 않은 간 때문일 수 있습니다. 흉터가 없는 간이 어떻게 고정되는지, 이미지의 안정성에 영향을 미친다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이러한 방법론은 또한 관심있는 특정 노동 구조의 분포 또는 변화의 직접적인 관찰을 위해 간 내의 다른 구조물의 위치에 적용될 수 있다.

multiphoton-microscopic-observation-of-vessels-in-mouse-liver-tissue

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

광학 시스템은 FITC-라벨이 적혈구와 간장 microcirculation을 시각화하고 레이저를 이용한 phosphorimetry으로 microvessels에서 산소의 부분 압력을 측정하기 위하여 개발되었습니다. 이 방법은 microvascular 구조, 직경, 혈류 속도 및 산소 장력을 분석하여 생리 및 병리 학적 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

급성 간염 모델 신청 : 시각화와 간장 Microcirculation의 혈류와 산소 소비 분석

가까운 적외선 형광 (NIRF)를 사용하여 최근 개발 된 이미징 기술은 림프 시스템의 암 전이에서 활약 역할, 면역 반응, 상처 수리 및 기타 림프 - 관련 질병을 명료하게하다하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마우스의 림프 Vasculature의 비 침습적 광학 이미징

이 비디오는 장기의 안정화 후 다광자 현미경을 사용하여 마우스 간 조직의 혈관 내 역학을 관찰하고 연구하는 이미징 절차를 설명합니다. 다광자 현미경 검사는 생체 내에서 높은 공간 해상도로 생물학적 조직을 이미징할 수 있습니다.

다광자 현미경 기반 혈관 시각화를 위한 이미징 픽스처 지원 마우스 간 스테이징: 마우스 간 혈관의 다차원 이미지를 얻기 위한 안정화 장치 보조 이미징 기술

이 기사는 이미지 획득 및 분석을 위한 특정 방법론과 함께 생체 내 현미경 이미징을 사용하여 마우스 간 혈관 구조의 개별 혈관 내 혈류 속도를 동적으로 측정하고 정량화하는 자세한 방법에 대해 보고합니다.

다음 간 생체 내에 현미경 이미징<em&gt; 슈만 편모충</em&gt; 감염 : 간 혈류의 평가

간의 면역 세포를 안정적으로 생체 내 고해상도 이미징하는 것은 어려운 일입니다. 여기에서는 집중 치료 모니터링과 함께 생체 내 다광자 레이저 스캐닝 현미경을 통해 장기간(약 6시간)에 걸쳐 마우스 간에 있는 면역 세포의 이동 및 세포-세포-상호 작용을 연구할 수 있는 매우 민감하고 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다.

CXCR6.Gfp 기자 마우스를 사용하여 건강하고 병에 걸린 간에서 면역 세포의 장기 생체 내에 다중 광자 현미경 이미징

우리는 최소한의 침공과 라이브 쥐 간 2 광자 영상에 대 한 새로운 수술 프로토콜을 설립. 이 기술을 우리 lipopolysaccharide 유도 endotoxemia 동안 간의 상세한 구조를 확인 할 수 있습니다. 우리는이 방법을 간 백혈구 이동에 다양 한 시 약 처리의 효과 결정 하기 위해 활용 될 수 있습니다 예상.

Lipopolysaccharide 취급 마우스 간에 면역 반응 동안 백혈구의 2 광자 Intravital 이미징

여기에 제시된 것은 혈관 동맥이 수납 및 가압되기 때문에, 모세관 침대 및 백혈구를 포함하는 혈관 나무 구성 요소뿐만 아니라 압력을 유지하는 동맥 관류 압력 및 흐름의 전 생체 모니터링에 의해 살아있는 뮤린 심장 조직에서 관상 동맥 미세 순환을 연구하는 프로토콜이다.

마우스 심장의 모세혈관, 동맥 및 페리사이클의 동적 측정 및 이미징

백혈구와 혈소판의 모집은 동맥 형성 동안 측부 동맥의 효과적인 성장에 필요한 필수 구성 요소를 구성합니다. 다광자 현미경은 동맥 형성 중 백혈구 모집 및 유출을 연구하기 위해 생체 내에서 높은 시공간 분해능과 더 적은 광독성으로 세포 역학을 추적하는 효율적인 도구입니다.

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징

여기에서는 Isolectin B4의 단일 염색을 사용하여 전체 마우스 폐 조직에 대한 폐 미세혈관 밀도의 편향되지 않은 정량화를 수행하는 간단하고 경제적인 프로토콜을 설명합니다.

소엽에 걸친 생쥐의 폐 미세혈관 밀도 정량화

높은 공간 해상도(100μm)와 감도를 가진 초고속 도플러 초음파(UFUS)는 간 혈관 구조에 대한 포괄적인 정성적 개요를 얻기 위한 적절한 비침습적 이미징 방식을 나타냅니다. UFUS는 또한 미세혈관 구조의 정량적 측정을 용이하게 하여 혈관 질환 메커니즘에 대한 이해를 높이는 것을 목표로 합니다.

초고속 도플러 초음파를 이용한 생쥐의 간 혈관 구조의 이미징 및 정량화

학습하세요 마우스 간 혈관 동역학을 다광 현미경으로 실시간 관찰하는 방법을. Rhodamine B isothiocyanate–dextran을 이용한 이 기술은 살아있는 조직의 3차원 혈관 구조를 고해상도로 시각화하여 간 생리학 및 병리학 연구에 활용됩니다.

마우스 간 조직에서 혈관의 다광 현미경 관찰

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