Name: 쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-08T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: 학습하세요 쥐의 이종 심혼 이식 및 심장 근육 세포 주입을 통한 간소화된 면역학 모형. 외과적 배경 없이도 이식 거부 및 내성 메커니즘을 연구할 수 있는 접근성 높은 방법론입니다.

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브리타 트라우테비히, 코린나 뢰버트, 잉그리드 메더의 헌신에 감사드립니다.

모든 동물 체험은 니더작센(LAVES, 올덴부르크, 독일)의 소비자 보호 및 식품 안전을 위해 지역 당국의 지역 윤리 동물 검토 위원회의 지침에 따라 수행되었으며, 승인 된 IDs 12/0768 및 17/2472.
1. 심장 박식 및 관류
참고: 접목 기증자로서, 7-22주 령의 나이에 암컷 또는 수컷 쥐가 사용되었다.
<ol><li>이소플루란 흡입으로 기증자 쥐를 마취시요(5%에서 유도,O2 1L/min의 3%로 유지보수). 주입 5 카프로펜의 mg 을 피하 적으로 perioperative 진통에 대 한 체중의 킬로그램 당 고 투 박 금 반사의 부재에 대 한 확인.</li>
	<li>눈 윤활제를 바르고 기계식 클리퍼를 사용하여 복부 및 흉부 털을 제거합니다.</li>
	<li>기증자를 척추 위치에 놓고, 탄력있는 밴드로 수술 대위에 사지를 고정하고 70 % 에탄올 또는 다른 충분한 대안으로 피부를 살균하십시오.</li>
	<li>국소 마취제 의 적용 후 세로 방향으로 피부를 절개 (예를 들어, 리도카인 0.2 %) 가위를 사용하여 중간 개복술을 수행합니다.</li>
	<li>리트랙터를 삽입하고, 기증자의 왼쪽에 소장을 동원하고, 멸균 된 면봉으로 열등한 정맥을 노출하십시오.</li>
	<li>항응고를 위해, 열등한 베나 카바를 천공하여 얼음-차가운 동위 원소 식염수 용액 1 mL에 용해된 헤파린 500 I.U.를 정맥내로 주입한다. 바늘을 철회 한 후 면봉으로 가벼운 압축으로 펑크 부위에서 출혈을 멈춥니다(그림 3A).</li>
	<li>다이어프램을 절개하고 기증자의 양쪽에 측면 대두 절제술을 수행합니다.</li>
	<li>흉부의 동원된 복부 벽을 수술대에 고정합니다.</li>
	<li>두 개의 마이크로 니들 홀더를 사용하여 무딘 준비로 심낭과 미근 신경을 제거합니다.</li>
	<li>기증자를 추방하고 심장을 내리기 위해 복부 혈관의 절제술을 수행하십시오.</li>
	<li>프로브 의 무딘 분기를 트랜스버 심낭 부비동에 삽입하고 젖은 압축으로 심장의 가벼운 코그트랙 견인하에 가능한 한 말단으로 승천 대동맥과 폐 동맥을 분리합니다(그림 3B).</li>
	<li>우수하고 열등한 정맥과 폐 정맥 주위에 단일 5-0 합자를 놓고 가능한 한 등등으로 조입니다(그림 3C).</li>
	<li>조직을 등도를 합자에 분리하고 심장을 추출합니다(도3D).</li>
	<li>이식된 심장을 정맥 카테터로부터 오름차순 으로 캐뉼라와 폐 동맥을 통해 30 mL의 얼음-차가운, 이소톤 식염수 용액을 1000 I.U.로 보충하고 15 mL 튜브에 심장을 얼음에 담사(그림3E-F)로주입하였다.</li>
</ol>2. 심장 이식
참고: 수령인으로, 10-14 주 오래 된 여성 또는 남성 쥐 사용 되었다. 기증자와 수령인은 대략 무게가 일치했습니다.
<ol><li>또한 isoflurane 흡입을 사용하여 받는 쥐의 마취를 수행 (5 %에서 유도 및 유지 보수 1.5-2% O2 의 흐름 1 L / 분). 주입 5 카프로펜의 mg 을 피하 적으로 perioperative 진통에 대 한 체중의 킬로그램 당 고 투 박 금 반사의 부재에 대 한 확인.</li>
	<li>눈 윤활제를 바르고, 복부 털을 제거하고, 팔다리를 고치고, 기증자 준비와 유사하게 피부를 살균하십시오. 최적의 수술 후 결과를 위해, 수술 중 저체온증을 방지하기 위해 가열 매트에 작업을 수행합니다.</li>
	<li>피부의 세로 절개 후, 복부 근막에 리도카인 (0.2 %)과 같은 국소 마취제를 적용하십시오. 중간 개복술로 복강을 열고 리트랙터를 삽입합니다.</li>
	<li>수령인의 왼쪽 상단에 소장을 동원하고 따뜻하고 젖은 압축에 놓습니다.</li>
	<li>십이지장과 근위축을 각각 동원한 후, 5-7배 배율로 수술용 현미경(또는 돋보기)을 사용하여 면봉으로 무딘 제제로 복부 대류와 열등한 정맥을 노출시켰다. 복부 혈관을 분리하지 마십시오.</li>
	<li>요추 정맥을 손상시키지 않고 두 개의 마이크로 니들 홀더를 사용하여 복부 혈관을 높이고 쿨리 혈관 클램프를 배치합니다(그림 4A).</li>
	<li>30-45 ° 아치형 27 G 캐뉼라로 복부 혈관을 뚫습니다(그림 4B).</li>
	<li>Potts 가위를 사용하여 천자 부위를 확대하여 기증자 혈관의 내강 크기와 일치하는 세로 절개를 만들고(그림 4C-D)응고를 제거하고 수술 후 혈전증을 예방하기 위해 수용자 혈관에 식염수 용액을 주입합니다.</li>
	<li>이식편을 소동에 넣고 기증자가 오름차순을 두 개의 간단한 중단 바늘로 받는 복부 대동맥에 고정시다 (8-0) 세로 절개절의 두개골 및 꼬리 모서리에서 모노필라멘트 비-재음봉합사(그림4E).</li>
	<li>8-0을 실행하여 수령인의 복부 대와 기증자의 오름차순 대단을 anastomose 두 단계로 모모노 필라멘트 봉합사 : 먼저, 수신자 혈관의 오른쪽에 접목을 배치하고 해부학의 전반을 수행(그림 4E). 이어서, 접목을 수용자 혈관의 왼쪽에 놓고 해부학의 후반을 수행한다(그림 4F).</li>
	<li>대동맥 항문과 유사하게 열등한 정맥에 공여폐 동맥을 고정 (8-0) 모노필라멘트 비-레서블 봉합사). 혈관의 내발측에서 정맥 해부학의 전반부를 봉합(그림 4G-H).</li>
	<li>말초 색전증을 방지하기 위해 매듭을 조이기 전에 식염수로 해부학을 직접 씻어 내보하십시오.</li>
	<li>지혈 거즈를 두 해부학 주위에 놓고 이식의 재관류가 시작될 수 있도록 쿨리 혈관 클램프를 조심스럽게 놓습니다. 살균 된 면봉으로 가벼운 압축으로 해부학을 따라 출혈을 처리하십시오. 참고 : 접목은 약 60 초 후에 치기 시작해야합니다.</li>
	<li>장내를 패션과 같은 구불구불한 것으로 교체하십시오. 장 내 괴사 또는 기계적 방해를 방지하기 위해 장간막 방랑색의 부회전이 없는지 확인하십시오.</li>
	<li>연속 3-0 폴리 필라멘트 실행 봉합사를 사용하여 복부 근육 / 근막과 피부를 별도로 닫습니다.</li>
</ol>3. 수술 후 치료
<ol><li>수술 후 진통의 경우, 첫 번째 수술 후 날 (POD)에 체중 kg 당 카프로펜 5 mg의 추가 피하 주사를 수령인에게 공급하십시오. 또한, 세 번째 POD까지 500 mL의 식수에 메타미졸 1 g을 추가하십시오.</li>
	<li>세 번째 POD에서 매일 복부 촉진으로 심장 이식 기능을 모니터링하기 시작합니다. 참고 : 세 번째 POD 전에 접목 실패의 경우, 면역 장애보다는 수술을 고려해야합니다. 그러나, 이것은 물론 선택된 균주 조합 및 각각의 면역학적 모델(예를 들어, 사전 예방 접종 후과급성 거부)에 의존한다.</li>
	<li>이식 거부 에 이어, 유세포 분석 또는 면역 조직 화학을 통해 추가 면역학 분석을 위한 해부학, 비장, 혈액, 흉선 및 이식의 배수 후배 회액 림프절 과 같은 조직을 추출합니다.</li>
</ol>4. 심장의 효소 소화와 귀에 심장 세포의 피하 주입
<ol><li>이종성 심장 이식과 유사하게 심장 박식 및 관류를 수행합니다(1단계 참조).</li>
	<li>멸균 메스 또는 멸균 가위를 사용하여 3 mm x 3 mm 블록으로 심장을 파쇄하고 0.5 mg / mL 콜라게나아제를 함유 한 배양 배지에서 37 °C에서 30 분 동안 배양하십시오. 참고: 특히 FCS가 콜라게나아제 소화를 억제하기 때문에 태아 송아지 혈청(FCS)없이 페니실린, 스트렙토마이신 및 글루타민을 함유한 배양 배지를 사용하는 것이 중요합니다.</li>
	<li>소화 된 조직을 큰 체에 추가하면서 배양 배지를 제거하고 철저히 다진 후 중요한 심장 근육 세포, 주로 죽은 단일 심장 세포 및 남아있는 혈액 세포의 현탁액을 얻습니다. 멸균 동위 원소 식염수로 셀 서스펜션을 두 번 씻으소서. 참고 : 원심 분리 설정 : 10 분, 200 x g, 20 °C</li>
	<li>40 μm 세포 스트레이너를 사용하여 현탁액을 걸러내고 동위 원소 식염수 용액의 5-10 mL로 세포 스트레이너를 플러시하여 중요한 세포 붕어를 수집합니다.</li>
	<li>원심 분리 후, 5x105 세포/mL의 농도로 용해된 식염수로 심장 근육 세포를 다시 중단하고 세포 용액을 1 mL 주사기로 끌어올.</li>
	<li>이종성 심장 이식에 대해 수용인 마취(단계 2 참조)에 대해 기재된 프로토콜과 유사하게 마취를 수행한다.</li>
	<li>양면 테이프를 사용하여 수신자를 측면 위치에 놓고 손가락으로 귀를 고정합니다(그림5A).</li>
	<li>27 G cannula s.c.를 통해 심장 근육 세포 용액 (1 x 104 세포 포함)의 20 μL을 시각적 모세관 혈관에 가까운 수령인의 귀에 주입합니다(그림 5B).</li>
	<li>정의된 관찰 기간(선택된 균주 조합 및 거부강도에 따라), 배수 자궁 경부 림프절을 추출하고 유세포 분석 또는 공동 배양과 같은 추가 분석을 수행한다(그림5C). 참고 : 또한, 피나 조직학적 분석은 세포 침투를 결정하기 위해 수행 될 수있다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

앞서 설명한 쥐의 이종성 심장 이식 방법은 주로 1969년 오노와3린지의 설명에 기초한다 3. 그 이후로, 이 모형의 넓은 다양성으로 이끌어 내는 각종 종에서 몇몇 수정이 소개되었습니다. 이러한 수정의 몇 가지를 결합하고 실험실에서 이종 성 심장 이식을 수행의 30 년 이상에서 발생하는 우리 자신의 경험을 소개, 우리는 긴 훈련 기간이나 수술 배경을 필요로하지 않는 가능한 수술 접근 방식을 만들었습니다. 다음에서는 이 모델의 일반적인 제한 사항에 대해 설명하고 프로토콜의 중요한 단계에 대해 설명합니다. 또한, 우리는 심장 근육 세포의 귀 내 주입의 새로운 방법과 이종 성 심장 이식의 장점을 강조할 것입니다.
마취 및 일반적인 합병증 이소플루란 마취가 이종성 심장 이식 후 조기 생존에 관한 주사 마취에 우수하다고 보고되었지만, 수술 중 호흡우울증은 여전히 가장 흔한 합병증 중 하나를 나타내므로 신중한 마...

이종성 심장 이식은 이식 허용 오차, 급성 및 만성 동종 이식 거부, 허혈 재관류 손상, 기계 관류 또는 심장 리모델링에 관한 다양한 조사를 위해 자주 사용되는 실험 모델입니다. 다른 장점 들 중에서도, 이식 기능은 촉진및 이식 실패에 의해 비침습적으로 모니터링될 수 있으며 신장이나 간과 같은 다른 장기와 달리 수용자의 중요한 손상을 유발하지 않는다.
에서 1964, Abbott 외. 처음에 쥐에 이종 성 복 부 심장 이식 설명1. 나중에, 1966년에, 해부학을 위한 종단 간 기술은 Tomita 등2에의해 기술되었습니다. 현재 사용되는 모델의 기초는 1969 년 오노와 린지에 의해보고되었다3. 지난 수십 년 동안, 결합된 이종성 심폐 이식4,,5,,6을포함하여 언로드, 부분적으로 로드되거나 로드된 좌심실 심장 이식의 다른 모형을 만들기 위하여 몇몇 수정이 간행되었습니다. 면역학 분석을 위해 비부적 부하 심장 이식 이식이 가장 일반적으로 수행됩니다. 이 경우, 혈류는 기증자가 대동맥을 상승하고 이어서 관상 동맥으로 역행하게 들어간다. 정맥 배수는 관상 동맥 부비동을 따라 오른쪽 심방과 심실로 발생합니다(그림 1A-B). 따라서 좌심실은 테베시안 정맥에서 혈액의 한계 양을 제외하고 혈류에서 제외됩니다. 이것은 또한 좌심실 보조 장치 치료 동안 병리 생리학적 메커니즘을 연구하기 위한 유용한 모형7.
이종성 심장 이식은 마우스, 토끼, 돼지 등 다양한 종에서 수행되어 왔으며 심지어 인간8,9,10,,11에서단일 또는 쌍심실 보조 장치로 사용되어 왔다.9, 쥐는 여전히 이식 모델에 대한 인기 있는 실험 동물을 나타내며, 특히 상이한 쥐 균주 조합에 대한 이식 편이식 생존 시간이 과거에 잘 정의되어 왔기 때문에 많은 수의 면역학적 시약이 접근가능12,,13. 마우스와는 달리, 쥐는 면역학적 분석을 위한 림프 조직에 더 큰 만들기 수술 및 접근이 더 실현 가능한12입니다. 더욱이, 최근 래트에서 상업적 복제 기술의 도입은 실험적인 쥐모델(14)에대한 반복적인 관심을 유도할 가능성이 크다.
일반적으로, 이종성 심장 이식편은 자궁 경부 또는 복부 해부학을 수행함으로써 수용자 혈관에 부착될 수 있다. 그러나, 몇몇 연구 결과는 대퇴문 해부학이 수동 촉진 또는 경피 심초음파에 대한 더 나은 접근 때문에 향상한 감시를 용이하게 하고 이렇게 접목 실패의 더 정확한 검출을 허용한다는 것을건의합니다 15,,16.
동작 시간, 합병증 비율, 결과 및 이식편 생존 시간에 관한 차이가 없는 것으로 나타났다17. 분명히, 충분한 수의 배수 림프절의 가용성은 자궁 경부 해부학의 이점으로 언급되어야합니다. 그러나, 더 긴 훈련 기간이 필요합니다. 대조적으로, 복부 문합은 면역 학적 조사를 위해 덜 복잡하고 동등하게 가치가 있습니다, 특히 알로겐성 심장 근육 세포및 후속 자궁 경부 림프절 절제술의 귀 내 주사의 새로운 방법의 결과와 결합 될 때. 두 모델의 조합은 개입 후 면역 학적 분석의 광범위한 스펙트럼을 제공합니다.
다음 프로토콜은 허혈 시간을 줄이기 위해 외과 의사의 쌍으로 작동을 말합니다. 그러나, 모든 실험은 한 사람에 의해 수행 될 수있다. 심장 박식 및 이식을 위한 기기 및 재료의 설정은 그림 2A-B에표시됩니다.

<table><tbody><tr><td>마취 장치 (이소플루란 기화기 포함)</td><td>Summit 마취 솔루션</td><td>카탈로그</td><td></td>번호 없음</tr><tr><td>Cannula (27 G)</td><td>BD Microlance</td><td>302200</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Pfizer</td><td>Rimadyl 50 mg/mL</td><td></td></tr><tr><td>Cellstar Tubes (15 mL)</td><td>GreinerBioOne</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer (40 &micro; m)</td><td>BD Falcon</td><td>2271680</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type CLSII</td><td>Biochrome</td><td>C2-22</td><td></td></tr><tr><td>압축 5x5 cm</td><td>Fuhrmann</td><td>31501</td><td></td></tr><tr><td>압축 7.5x7.5 cm</td><td>Fuhrmann</td><td>31505</td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td>Heinz Herenz Medizinalbedarf</td><td>1032128</td><td></td></tr><tr><td>Dexpathenol (5 %)</td> 바이<td>엘</td> <td>"Bepanthen"</td><td></td></tr><tr><td>DPBS BioWhittaker</td><td>Lonza</td><td>17-512F</td><td></td></tr><tr><td>집게</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BD557R</td><td></td></tr><tr><td>집게</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BD313R</td><td></td></tr><tr><td>집게</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BD35</td><td></td></tr><tr><td>난방 매트</td><td>Gaymar Industries</td><td>"T/Pump"</td><td></td></tr><tr><td>지혈 거즈</td><td>Ethicon</td><td>Tabotamp</td><td></td></tr><tr><td>헤파린-나트리움 25 000 I.E.</td><td>Ratiopharm</td><td>카탈로그 번호 없음 사용 가능</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran CP</td><td>CP-Pharma</td><td>카탈로그 번호</td><td></td>없음</tr><tr><td>대형 다공성 체 (스테인리스 강)</td><td>Forschungswerkst&auml; tten Hannover Medical School</td><td>카탈로그 번호 없음 사용 가능</td><td></td></tr><tr><td>Lidocaine</td><td>Astra Zeneca</td><td>2 % Xylocain</td><td></td></tr><tr><td>Metamizol-Natrium</td><td>Ratiopharma</td><td>Novaminsulfon 500 mg/mL</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 집게</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BD3361</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>Codman, Johnson & Johnson Medical</td><td>Codmann 80-2003</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BD336R</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap FD241R</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap FD101R</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap FM471R</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BM221R</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신/글루타민(100x)</td><td>PAA</td><td>P11-010</td><td></td></tr><tr><td>말초 정맥 카테터(18G)</td><td>B. Braun</td><td>4268334B</td><td></td></tr><tr><td>말초 정맥 카테터(22G)</td><td>B. Braun</td><td>4268091B</td><td></td></tr><tr><td>프로브 뾰족한 가위</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BC030R</td><td></td></tr><tr><td>견인기</td><td>Forschungswerkst&auml; tten Hannover Medical School</td><td>카탈로그 번호 없음 사용 가능</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 배양 배지</td><td>Lonza</td><td>BE12-702F</td><td></td></tr><tr><td>식염수 (NaCl 0.9 %)</td><td>Baxter</td><td>카탈로그 번호 없음</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>B. Braun</td><td>Aesculap BC414</td><td></td></tr><tr><td>수술 용 현미경</td><td>Carl-Zeiss</td><td>OPMI-MDM</td><td></td></tr><tr><td>봉합사 (문합)Catgut</td><td></td><td>마리덤 8-0 모노필</td><td></td></tr><tr><td>봉합사(결사)</td><td>Resorba</td><td>Silk 5-0 폴리필</td><td></td></tr><tr><td>봉합사(피부, 근막)</td><td>Ethicon</td><td>Mersilene 3-0</td><td></td></tr><tr><td>주사기(1mL)</td><td>B. Braun</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>주사기(10mL)</td><td>B. Braun</td><td>4606108V</td><td></td></tr><tr><td>주사기(20mL)</td><td>B. Braun</td><td>4606205V</td><td></td></tr><tr><td>혈관 클램프</td><td>B. Braun</td><td>에스큘랩 FB708R</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

쥐에서의 이종성 심장 이식은 50년 이상 다양한 면역학적 연구에 일반적으로 사용되는 모델이었다. 1964년 첫 번째 설명 이후 몇 가지 수정 사항이 보고되었습니다. 쥐에서 이종성 심장 이식을 수행 30 년 후, 우리는 쉽게 가르치고 추가 수술 훈련이나 배경없이 수행 할 수있는 단순화 된 수술 접근 방식을 개발했다.
오름차순 대동맥과 우수하고 열등한 기병 및 폐 정맥의 폐 동맥 및 결찰을 해부한 후, 기증자 심장을 수확하고 이어서 헤파린으로 보충 된 얼음 차가운 식염수 용액으로 관류합니다. 수용인 복부 혈관을 클램핑하고 절개한 후, 기증자는 오름차순 대동맥과 폐 동맥을 각각 연속 적인 실행 봉합사를 사용하여 수용자 복부 대동맥 및 열등한 정맥에 해부학됩니다.
다른 기증자-수령인 조합에 따라, 이 모형은 동종 이식의 급성 또는 만성 거부의 분석을 허용합니다. 이 모형의 면역학 중요성은 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입의 새로운 접근 및 배수 자궁 경관 림프조직의 후속 분석에 의해 더욱 강화됩니다.

과거에는 다른 면역학 적 문제가 모델에 기초하여 해결되었으며, 이는 95% 이상의 생존율을 가진 500개 이상의 이식에 의해 작업 군에서 검증되었으며,13,,18,,19,,20,21, 22,,,,23,,24.22 총 작동 시간 (이식 이식 및 이식 포함)은 일반적으로 60 분을 초과하지 않았지만 추위와 따뜻한 허혈 시간을 결합한 시간은 약 30 분이었습니다. 적용 된 변형 조합은 주로 루이스 (Le...

우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

이식 모델은 종종 외과 전문 지식이 필요한 면역 학적 연구를위한 귀중한 도구입니다. 여기에서, 우리는 쥐에 있는 이성애 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 실행 가능한 접근을 제시합니다. 우리의 모형의 모든 중요한 단계를 강조하고 단순화함으로써, 외과 배경이 없는 연구원은 적당한 시간 안에 이 모형을 마스터할 수 있어야 합니다.두 이식 모델은 허용 오차 및 거부 메커니즘에 대한 귀중한 통찰력을 제공하며 다양한 종에 적용 될 수 있습니다. 우리는 사전 수술 훈련없이 개인에게이 모델을 가르치는 경험이 많이 있습니다. 중요한 단계를 배운 후, 우리는 죽은 동물과 인내와 충분한 연습을 조언한다.기증자 심장 절제의 경우, 마취 된 7 - 22 주 된 쥐 기증자 동물에서 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 눈 윤활유를 적용하고 복부와 흉부 모피를 제거하기 위해 기계 클리퍼를 사용합니다. 가열 베이스에 쥐를 배치하고 탄성 밴드와 수술 테이블의 베이스에 사지를 고정합니다. 노출된 피부를 70%에탄올로 소독하고 중앙분리대를 수행합니다.개절에 리트랙터를 삽입하고 멸균 된 면봉을 사용하여 기증자의 왼쪽에 내장을 동원하여 열등한 베나 카바를 노출시하십시오. 다음으로 열등한 베나 카바를 천자에 맞아 얼음-차가운 동위 원소식 용액의 1밀리리터에 용해된 500개의 국제 헤파린 유닛을 정맥 주사할 수 있습니다. 면 봉면을 사용하여 가벼운 압축에 의해 바늘 을 철회 한 후 천공 부위에서 출혈을 중지합니다.다이어프램을 절개하고, 기증자의 양쪽에 측면 흉부 절제술을 수행하고 흉부 벽을 고정시하십시오. 두 개의 마이크로 바늘 홀더를 사용하여 무딘 준비로 심낭과 골신경을 제거하십시오. 멸종의 경우 복부 혈관을 횡단하고 프로브 뾰족한 가위의 무딘 가지를 횡회 회복 부비동에 삽입합니다.압축을 사용하여 심장의 가벼운 소달 견인하에서 가능한 한 해부하는 오름차순 대동맥과 폐 동맥을 해부하십시오. 우수하고 열등한 베나 카바와 폐 정맥 주위에 단일 5-0 합자를 배치하고 가능한 한 dorsally로 합자 단계적 조여. 조직 등갈을 합자에 세게 하고 심장을 추출합니다.각질된 심장을 견딜 수 있도록 정맥 카테터의 18게이지 캐뉼라를 사용하여 얼음 냉기, 동상 풍삭용 액약 30밀리리터를 1000개의 국제 헤파린 유닛으로 보충한 후 15밀리리터의 식염수 용액에 심장을 배치하십시오. 방금 입증 된 대로 10 에서 14 주 된 받는 사람 쥐를 준비 한 후,

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

이 동영상은 쥐에 이식 vasculopathy (TVP)의 개발을 연구하기위한 간단한 모델로 orthotopic 대동맥 이식 모델을 보여줍니다.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

여기, 선물이 프로토콜을 이식, 허용 오차를 유발 하 고 생체 외에서 그리고 vivo에서 평가 받는에서 고유한 셀 하위 집합의 진압 용량 및 기증자 또는 외 인 항 원 받는 사람의 면역 상태.

생체 외에서 그리고 Vivo에서 T, B 및 골수성 세포 진압 활동 및 이식 받는 체액 응답의 평가

이 프로토콜은 심장 판막의 동종 활성에 대한 연구를 허용하기 위해 신장 캡슐 아래에 대동맥 판막 전단지를 이식하는 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다.

설치류의 이종 주제 심장 판막 이식을위한 단순화 된 모델

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

본 논문은 업데이트된 무균 기술, 진통 및 마취를 사용하여 이종 혈관 심장 이식을 위한 수정된 기술을 설명합니다.

무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜

이 연구는 초보자가 배우고 수행할 수 있는 쥐의 재현 가능한 이종 복부 심장 이식 기술을 보여줍니다. 또한, 쥐의 새로운 대동맥 역류 모델은 이종 복부 심장 이식을 수행하고 수확 후 가이드와이어를 사용하여 기증자의 대동맥 판막을 손상시킴으로써 생성됩니다.

쥐의 수정된 이종 복부 심장 이식 및 새로운 대동맥 역류 모델

이 프로토콜은 마우스에서 커프가 없고 봉합 기반인 경추 이종성 심장 이식 기법을 제시하여, 이물질 간섭이 최소화된 생리학적 조건에서 기증자 특이적 면역 관용을 평가하기 위해 두 번째 이종성 심장 이식편을 신뢰성 있게 배치할 수 있도록 설계되었습니다.

마우스의 기증자 특이적 면역 내성을 평가하기 위한 2차 이종성 심장 이식을 위한 커프스 없는 봉합선 기반 자궁경부 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 쥐의 이종 심혼 이식 및 심장 근육 세포 주입을 통한 간소화된 면역학 모형. 외과적 배경 없이도 이식 거부 및 내성 메커니즘을 연구할 수 있는 접근성 높은 방법론입니다.

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

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