Name: 신장 동맥 협착증에서 레닌 조절의 수정 된 두 신장 하나의 클립 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: 배우세요 쥐에서 신장 동맥 협착을 유도하는 수정된 2K1C 모델을 통해 레닌 발현 조절 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 신혈관성 고혈압 치료 표적을 식별하는 데 활용됩니다.

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연구는 JAG에 NHLBI 연구 과학자 개발 보조금 (1K01HL135461-01)에 의해 지원되었다. David Carmona-Berrio와 Isabel Adarve-Rengifo의 기술 지원에 감사드립니다.

마우스는 밴더빌트 대학 의료 센터 (VUMC) 동물 관리 부서 국립 보건원 (NIH) 지침과 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 가이드, 미국 보건 복지부에 따라 보관되고 보살핌을 받았다. 모든 동물 절차는 실험을 시작하기 전에 VUMC 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.
1. 동물 준비 및 해부
<ol><li>수술을 시작하기 약 30 분 전에 가열 패드의 발아기와 워터 펌프를 켭니다.</li>
	<li>날카로운 메스로 0.5mm 길이의 폴리 우레탄 튜브를 자릅니다. 커프를 만들기 위해 길이 방향으로 절단하여 둘레의 0.2mm를 제거하십시오. 참고 : 이것은 극도의 정밀도, 세부 사항 및 인내심에 대한 관심을 필요로하는 신장 동맥 협착 절차의 중요한 부분입니다. 한 번에 여러 조각의 폴리 우레탄 튜브를 자르십시오. 이 모든 절차를 현미경으로 수행하십시오.</li>
	<li>더 이상 진행하기 전에 외과 용 멸균 장갑과 외과 용 마스크를 착용하십시오.</li>
	<li>6-8 주간의 C57BL / 6 야생형 (WT) 마우스를 사용하십시오. 성별 편견을 피하기 위해 동일한 수의 수컷과 암컷 마우스를 사용하십시오.</li>
	<li>수술을 수행하기 전에 마우스의 무게를 기록하십시오. 폴리 우레탄 튜브로 신장 동맥 협착을 수행하는 이상적인 무게는 18-22g입니다. 마우스를 부드럽게 처리하고 마취를 주입하는 동안 교반하지 마십시오. 수술 전 진통을 투여하십시오 (Ketofgen, 5 mg / kg body wieght). 참고 : 생쥐를 숙소실에서 수술실로 옮기는 동안 동요를 피하기 위해 매우 온화하고 조심스럽게 운반하십시오. 트롤리 대신 쥐 케이지를 손에 들고 다니는 것이 좋습니다.</li>
	<li>복강 내 주사를 통해 케타민 (100 mg / kg BW)과 자일라진 (10 mg / kg BW)의 혼합물로 마우스를 마취하십시오.</li>
	<li>완전히 마취 될 때까지 마우스를 케이지 안에 다시 넣으십시오. 마우스가 완전히 의식을 잃기까지 약 4-5 분이 걸립니다. 꼬리 또는 발가락을 포셉으로 집어 넣어 마우스가 완전히 의식이없고 수술 준비가되었는지 확인하십시오.</li>
	<li>마우스를 종이 타월에 등을 대고 눕히십시오. 모발 성장의 반대 방향에 따라 전기 헤어 클리퍼를 사용하여 측면 복부의 머리카락을 제거하십시오. 수술 부위를 면도 한 후 요오드 (또는 클로르헥시딘)를 함유 한 수술 용 스크럽으로 부위를 닦은 다음 70 % 에탄올 (또는 멸균 식염수)으로 헹구십시오.  3 번 반복하십시오. 참고 : 제모 절차는 수술 절차 중 모발 간섭 및 모발 오염을 피하기 위해 수술 절차 벤치와 다른 벤치에서 어느 정도 거리 또는 바람직하게는 수행해야합니다.</li>
	<li>가열 패드를 멸균 시트로 덮으십시오. 마우스를 수술 벤치로 가져 와서 멸균 시트에 올려 놓고 마우스의 오른쪽 측면을 현미경쪽으로 향하게하십시오. 순환수로 패드 온도를 37°C로 일정하게 유지하십시오.</li>
	<li>모든 수술 장비가 들어있는 멸균 된 가방을 엽니 다. 해부 현미경과 멸균 된 날카로운 가위를 사용하여 작은 측면 절개 (13번째 흉부 갈비뼈, 마우스의 마지막 갈비뼈에 가까운)를 만들고 척추에서 약 0.5cm 떨어진 곳에 만듭니다. 요추를 따라 진행하고 1 인치 절개를하십시오.</li>
	<li>피부와 근육을 뒤로 당겨 신장을 노출시킵니다.</li>
	<li>멸균 면봉을 사용하여 주변 지방을 청소하고 제거하여 신장 동맥을 분리하십시오. 구부러진 포셉을 사용하여 신장 동맥에서 신장 신경을 분리하십시오.</li>
	<li>가짜 수술을 수행 할 때 봉합사를 적용하여 피부를 닫고 닫힌 상처에 항생제를 바르고 수술 후 치료를 진행하십시오. 그렇지 않은 경우 다음 섹션을 진행하여 동맥을 스테노스하십시오. 참고 : 모든 실험에는 수술 절차의 통제로 가짜 동물이 있어야합니다. 샴 동물은 커프를 올려 놓지 않고 신장 동맥을 노출시키는 외과 적 절차를 거친 마우스로 구성됩니다.</li>
</ol>2. 우측 신장 동맥 협착증
<ol><li>오른쪽 신장 동맥 아래에 두 개의 나일론 봉합사를 놓고 느슨한 매듭을 만든 다음 신장과 대동맥 분기 사이의 약 등거리에있는 주요 신장 동맥 주위에 커프를 놓습니다.</li>
	<li>나일론 봉합사를 사용하여 커프를 닫습니다. 수술 후 봉합사가 손실 될 가능성을 피하기 위해 각 봉합사에 대해 네 개의 매듭을 만드십시오.</li>
	<li>간단한 연속 봉합사를 적용하여 근육의 절개를 닫습니다.</li>
	<li>피부를 닫기 위해 간단한 중단 봉합사를 만드십시오.</li>
	<li>IACUC 승인 진통제를 관리하십시오. 참고 : 모든 사용 전에 Autoclave 수술 도구. 한 번에 두 개 이상의 수술을 수행하는 경우 멸균 알코올 게이지로 사용 된 모든 도구를 닦아 모든 수술 후 15-30 초 동안 뜨거운 발아기에 두십시오. 각 마우스에 대해서도 멸균 장갑을 교체하십시오.</li>
</ol>3. 수술 후 치료
<ol><li>생쥐를 새장으로 돌려 놓고 케이지를 반쯤 켜고, 반쯤 떼어 내고, 순환수 가열 패드를 2 - 3 시간 동안 두십시오. 케이지 안에 젤 다이어트 회복 음식을 추가하십시오.</li>
	<li>다음날 진통제(케토프로펜)를 복강내 투여(용량: 5mg/kg BW)한다.</li>
	<li>다음 이틀 동안 마우스의 무게를 재는 단계; 일부 마우스가 체중의 20 % 이상을 잃은 경우 수의사와상의하고 적절한 IACUC 승인 절차에 따라 동물을 안락사시켜야하는지 결정하십시오.</li>
	<li>매일 마우스를 모니터링하여 발적, 붓기, 통증 또는 감염을 평가하십시오.</li>
	<li>제도적 IACUC 정책에 따라 수술 후 합병증에 대한 수의학 상담을 받으십시오.</li>
</ol>4. 조직 수확
<ol><li>수술 후 3 주 후에 조직을 수확하십시오. 각 마우스의 무게를 기록합니다.</li>
	<li>IACUC가 승인한 절차로 마우스를 안락사시킨다.</li>
	<li>마우스를 수핀 위치의 멸균 플랫폼에 올려 놓고 해부하십시오.</li>
	<li>움직임을 제한하기 위해 팔다리를 고정하고 확장하십시오.</li>
	<li>마우스에 70 % 에탄올을 철저히 뿌리십시오.</li>
	<li>날카로운 가위를 사용하여 복부와 가슴 부위를 열기 위해 중간 선 절개를하십시오.</li>
	<li>피부와 복막 벽을 뒤로 당깁니다.</li>
	<li>조심스럽게 심장을 노출시키고 우심실에 구멍을 뚫고 마우스를 exsanguinate하십시오.</li>
	<li>포셉을 사용하여 두 신장을 모두 제거하십시오. 신장은 생쥐의 뒤쪽에 있습니다. 참고: 두 신장을 모두 섞지 마십시오. 협착, 가짜 및 대측성 신장에 유의하십시오.</li>
	<li>신장 캡슐을 제거하고 지방에서 닦아내고 각 신장의 무게를 별도로 기록하십시오.</li>
	<li>양쪽 신장의 종방향 절편을 절단하고, 파라핀 포매를 위해 나중에 처리되도록 4°C에서 하룻밤 동안 4% PFA에 고정시키고, 계내 혼성화 (ISH) 및 면역조직화학(IHC)을 수행한다. 보고된23,24대로 ISH 및 IHC 프로토콜을 따르십시오.</li>
	<li>남아있는 신장의 피질을 분리하고 액체 질소에서 플래시 동결하여 웨스턴 블롯을 수행하십시오. 분석될 때까지 샘플을 -80°C에서 보관한다.</li>
	<li>레닌을 정량화하고, N-GAL 발현을 문헌23,24에 기재된 바와 같이 웨스턴 블롯으로 정량화한다.</li>
</ol>5. 통계
<ol><li>세 가지 이상의 조건을 가진 실험에는 단방향 또는 양방향 ANOVA를 사용한 다음 개별 그룹 간의 비교를 위해 Bonferroni 사후 테스트를 사용하십시오. p-값이 0.05보다 작거나 같다고 가정하십시오. 소프트웨어(예: GraphPad Prism 8.2)를 사용하여 모든 통계 분석을 수행합니다.</li>
</ol>

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</ol>

재정적 또는 기타 이해 상충은 저자에 의해 선언되지 않습니다.

신장 동맥 협착증은 이차 또는 내성 고혈압 및 신장 손상 1,29의 중요한 원인이다. 두 개의 신장 1 클립 (2K1C) Goldblatt 모델은 RAStenosis 유도 망막 혈관 고혈압1,17,18,19를 연구하기 위해 채택되었다. 다양한 동물 모델을 사용한 다수의 이전 연구들은 신장 동맥의 협착이 레닌 과발현 및 방출의 강력한 자극제이며, 신장 손상 18,30,31,32,33,34,35임을 보여주었다.<sup...

신장 동맥 협착증 (RAStenosis)은 65 세 이상의 사람들의 약 6 %와 관상 동맥 또는 말초 혈관 질환 1,2 환자의 최대 40 %에 영향을 미치는 난치성 문제입니다. 질병에 대한 현재 치료법은 제한적입니다. 따라서 RAStenosis에 의해 유발 된 망막 혈관 고혈압 또는 내성 고혈압을 치료하기위한 새로운 치료법을 개발할 필요가 있습니다. 레닌 안지오텐신 알도스테론 시스템(RAAS)은 RAStenosis 유도성 고혈압 또는 망혈관 고혈압 3,4의 발병기전에 관여하는 주요 경로이다. ACE 억제제 또는 안지오텐신 수용체 차단제와 같은 RAAS를 표적으로 하는 알려진 치료법은 고혈압을 완화시키지만, 신부전 및 고칼륨혈 증5,6,7에 대한 면밀한 검사가 필요하다. 레닌은 RAAS에서 속도 제한 단계를 촉매한다; 그것은 안지오텐시노겐을 안지오텐신 I로 변환시킨다. 죽상 동맥 경화증에서 플라크 형성은 레닌 분비를 유도하는 신장 동맥의 협착을 일으켜 망상 혈관 고혈압 및 신장 손상을 초래합니다8. 다수의 연구들이 인간에서 망혈관 고혈압 동안 산화적 스트레스의 증가된 수준을 보고하였으며, 이는 두 개의 신장 1클립(2K1C) 마우스 모델 및 다른 고혈압 동물 모델 2,9,10,11,12,13,14,15,16으로 확증되었다. . RAStenosis 유도 망혈관 고혈압 동안 레닌 발현 조절의 분자 메카니즘은 잘 이해되지 않으며 추가 조사를 보증한다.
RAStenosis를 안정적이고 재현 가능하게 재해석하는 실험 동물 모델은 새로운 치료법의 개발을 위해 레닌 발현 조절의 세포 및 분자 메커니즘을 밝히는 데 중요합니다. 2K1C 마우스 모델은 망혈관 고혈압17,18,19,20의 발병기전을 연구하기 위해 잘 확립된 실험 모델이다. 이 모델은 클립 17,20,21을 사용하는 신장 동맥의 수축에 의해 생성되며, 따라서 레닌 발현 및 고혈압 17,19,20,21의 증가를 초래하는 신장 동맥 폐색을 생성한다. 그러나 동물 모델에서 신장 동맥 협착증을 발생시키는 단계별 절차를 설명하는 기술 보고서는 없습니다.
종래의 U자형 실버 클립, 폴리우레탄 튜브 및 기타 클립은 신장 동맥 협착을 유도하기 위해 신장 동맥을 수축시키기 위해 사용되어 왔다. 일부 연구에 따르면 클립의 디자인과 재질은 2K1C 동물 모델로 신뢰할 수 있고 재현 가능한 데이터를 얻는 데 중요합니다. Lorenz et al.에 따르면, 기존의 U-designed silver clips의 사용은 고혈압의 낮은 성공률 (40-60 %)을 유도합니다.21. 클립 디자인으로 인해 신장 동맥은 옆으로 눌러 약간의 수축을 유발하고 신장 동맥에서 빠져 나올 확률이 높아집니다. 실버 가단성과 연성은 클립 폭의 변화를 허용 할 수 있습니다; 따라서 생쥐들 사이에서 다른 고혈압 수준을 유발합니다. 클립상의 이산화은은 혈관주위 염증, 내막 증식 및 조직 과립화를 일으켜 신장 동맥 직경(22)을 변화시킬 수 있다. 종래의 U-design 실버 클립으로 수득된 고혈압 수준의 가변성으로 인해, Warner et al. 및 Lorenz 등은 마우스에서 신장 동맥 협착을 개시하기 위해 라운더-디자인 폴리우레탄 튜빙을 성공적으로 사용하여, 두 개의 신장 하나의 클립 동물 모델20,21의 보다 안정적이고 일관된 유도를 생성하였다.
이 보고서에서는 폴리 우레탄 튜브를 사용하여 신장 동맥을 수축시키는 마우스에서 실험적 RAStenosis를 생성하는 수술 프로토콜을 설명합니다. 폴리 우레탄 라운드 디자인 커프는 마우스에서 협착을 발생시키는보다 재현 가능하고 신뢰할 수 있으며 저렴한 클립입니다. 이 실험 모델의 목표는 신장 동맥 협착 동안 레닌 발현 조절의 분자 및 세포 메커니즘을 연구하고 정의하는 것입니다. 레닌 발현 및 신장 손상 마커인 호중구 젤라틴아제-관련 리포칼린(N-GAL)을 측정함으로써 RAStenosis 마우스 모델의 성공을 확인하였다.

<table><tbody><tr><td>다이어트 젤</td><td>클리어 H2O</td><td>다이어트 젤 76A</td><td>수술 회복 다이어트</td></tr><tr><td>EMC 가열 하드 패드</td><td>Hallowell</td><td>000A2788B</td><td>마우스를 따뜻하게 유지하기 위해 가열 패드를 사용했습니다</td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Suture</td><td>Ethicon</td><td>662G</td><td>4-0 (1.5 미터법), 이 봉합사는 복막을 닫는 데 사용되었으며 피부</td></tr><tr><td>Ethilon 나일론 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>2815 G</td><td>8-0 (0.4 미터법), 이 봉합사는 Germinator 500 Braintree Scientific Inc.의 동맥을 묶고 수축시키기 위해 커프를 닫는 데 사용되었습니다</td></tr><tr><td></td><td>.</td><td>GER 5287</td><td>수술 간 수술 도구 살균</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Zoetis,</td><td>Ketofen</td><td>Painkiller</td></tr><tr><td>Polyurethane</td>, <td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>MRE-025</td><td>이 튜브는 협착을 시작하는 데 사용되었습니다</td></tr><tr><td>포비돈 - 요오드 소독 면봉</td><td>Medline</td><td>MDS093901</td><td>그것은 제모 및 피부 수술 후 적용되었습니다</td></tr><tr><td>Reflex 7 클립 애플 리어</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>204-1000</td><td>이 클립 애플 라이어는 하나 이상의 봉합사가 벗겨진 경우 클립을 적용하는 데 사용되었습니다</td></tr><tr><td>멸균 수건 드레이프</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>수술 중 생쥐의 침대 시트로 사용되었다</td></tr><tr><td>삼중 항생제 연고</td><td>Medi-First</td><td>22312</td><td></td></tr><tr><td>워터 펌프</td><td>스트라이커</td><td>T/펌프 전문가</td><td>수술 중 및 수술 후 마우스를 따뜻하게 유지하기 위해 가열 하드 패드에서 물을 따뜻하게 하고 순환시키는 데 사용됩니다</td></tr></tbody></table>.

신장 동맥 협착증에서 레닌 조절의 수정 된 두 신장 하나의 클립 마우스 모델

A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

신장 동맥 협착증은 레닌 안지오텐신 알도스테론 시스템 (RAAS)이 과도하게 활성화되는 관상 동맥 또는 말초 혈관 질환 환자에서 흔한 상태입니다. 이러한 맥락에서, RAAS에서 속도 제한 프로테아제인 레닌의 발현 및 방출의 증가를 자극하는 신장 동맥의 협착이 존재한다. 레닌 발현의 결과적인 상승은 신장 손상 및 말단 장기 손상과 자주 관련된 망혈관 고혈압의 알려진 동인이다. 따라서이 상태에 대한 새로운 치료법을 개발하는 데 큰 관심이 있습니다. 신장 동맥 협착증에서 레닌 조절의 분자 및 세포 메커니즘은 완전히 이해되지 않았으며 추가 조사를 보증합니다. 마우스에서 신장 동맥 협착을 유도하기 위해, 변형된 2개의 신장 1 클립(2K1C) Goldblatt 마우스 모델이 개발되었다. 오른쪽 신장을 야생형 마우스에서 스테노스화하였고, 가짜 조작 마우스를 대조군으로 사용하였다. 신장 동맥 협착 후, 우리는 레닌 발현과 신장 손상을 결정했습니다. 신장을 수확하고 신선한 피질을 사용하여 레닌의 단백질 및 mRNA 발현을 확인했습니다. 이 동물 모델은 재현 가능하며 혈관 고혈압 및 신장 손상에 관련된 병리 생리학 반응, 분자 및 세포 경로를 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

신장 동맥 수축은 협착 된 신장에서 레닌 발현을 증가시키고 대측성 신장에서의 발현을 억제합니다. 협착증의 두 신장 1 클립 (2K1C) 또는 Goldblatt 모델은 레닌 발현 증가 및 신장 손상을 유도한다. 이것은 인간에서 일방적 인 신장 동맥 협착증의 가장 대표적인 모델로 인식됩니다.
레닌과 프로레닌(레닌의 전구체)의 발현은 면역블롯팅을 이용하여 측정하였다. 데이터는 대측성 및 가짜 신장에 비해 스테노시드 신장에서 레닌과 프로레닌 발현이 증가했음을 보여주며, 이는 커프가 신장 동맥을 수축시켜 신장 관류의 변화를 일으킨다는 것을 암시한다(그림 1). 레닌 발현의 국소화를 시각화하기 위해, IHC가 수행되었다. IHC는 잘린 신장에서 레닌의 증가된 발현을 나타내는 면역블롯팅 데이터를 확증하였다(도 2). 더욱이, 구심성 세동맥을 따라 모집된 병타글로메랄(JG) 세포는 협착된...

변형된 2 신장 1 클립(2K1C) Goldblatt 마우스 모델은 폴리우레탄 튜브를 사용하여 신장 동맥 협착을 개시하여 레닌 발현 및 신장 손상의 증가를 유도하여 개발되었다. 여기에서는 재현 가능하고 일관된 2K1C 마우스 모델을 생성하기 위해 커프를 준비하고 신장 동맥 상에 배치하는 자세한 절차를 설명합니다.

Renal artery stenosis is a common condition in patients with coronary or peripheral vascular disease where the renin angiotensin aldosterone system (RAAS) ...

2K1C 마우스 모델은 신장 동맥 협착증을 유도하는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 방법입니다. 이 프로토콜은 신장 혈관 고혈압 동안 레닌 발현 조절과 관련된 분자 메커니즘을 밝히는 데 가치가 있습니다. 이 동물 모델은 인간의 편측성 신장 동맥 협착증을 모방합니다.신뢰성과 재현성은 신장 혈관 고혈압 치료를 위한 새로운 치료 표적을 식별하는 데 좋은 모델입니다. 이 기술은 생쥐에서 수술을 수행하기 위한 기본 지식을 필요로 합니다. 두 가지 중요한 부분이 있습니다: 튜빙 준비와 신장 동맥에 튜빙 배치.둘 다 자세히 설명되어 있습니다. 정밀하게 절단된 튜브를 사용하여 오른쪽 신장 동맥을 수축하는 것이 중요합니다. 이 시술 비디오는 학습자에게 튜브를 절단한 다음 동맥에 접근하여 수축하는 방법을 보여줍니다.협착 절차를 위해 튜브를 절단하는 것으로 시작합니다. 날카로운 메스로 0.5mm 길이의 폴리우레탄 튜브 조각을 자릅니다. 그런 다음 세로로 잘라 둘레의 0.2mm를 제거하여 커프를 만듭니다.18g에서 22g 사이여야 하는 마우스의 무게를 기록하여 폴리우레탄 튜브로 신장 동맥 협착을 수행합니다. 쥐의 무게는 수술을 수행하는 데 매우 중요합니다. 마취하고 진통제를 마우스에게 투여한 후 마우스가 완전히 의식을 잃을 때까지 케이지 내부에 다시 넣습니다.집게로 발가락을 꼬집어 마우스가 완전히 마취되어 수술할 준비가 되었는지 확인합니다. 수술 부위에서 떨어진 종이 타월 위에 마우스를 등을 대고 눕히고 모발이 자라는 반대 방향을 따라 전기 이발기로 측면 복부의 모발을 제거합니다. 멸균 알코올 거즈 패드로 면도한 부위를 청소하고 국소 포비돈 요오드 용액을 바릅니다.모든 수술 장비가 들어 있는 멸균된 백을 엽니다. 해부 현미경으로 작업하면서 멸균되고 날카로운 가위를 사용하여 척추에서 약 0.5cm 떨어진 곳에 작은 옆구리를 절개합니다. 요추를 따라 진행하고 1인치 절개를 만듭니다.피부와 근육을 뒤로 당겨 신장을 노출시킵니다. 그런 다음 면봉으로 주변 지방을 청소하고 제거하여 신장 동맥을 분리합니다. 구부러진 겸자를 사용하여 신장 동맥에서 신장 신경을 분리합니다.면봉으로 신장 동맥 근처에서 흘러나온 액체를 닦습니다. 오른쪽 신장 동맥 아래에 두 개의 나일론 봉합사를 놓고 매듭을 느슨하게 만든 다음 신장과 대동맥 분기점 사이의 대략 등거리에 있는 주요 신장 동맥 주위에 커프를 배치합니다. 나일론 봉합사를 사용하여 커프를 닫고 각 봉합사에 대해 3개의 매듭을 만들어 수술 후 봉합사를 잃을 가능성을 피합니다.간단한 연속 봉합사를 적용하여 근육의 절개 부위를 봉합하고 간단한 단속 봉합사를 만들어 피부를 봉합합니다. 쥐를 우리로 되돌려 보내고 동물이 수술에서 회복할 수 있도록 2-3시간 동안 순환 물 가열 패드에 절반 케이지를 그대로 둡니다. 동물에게 젤 다이어트 회복 식품을 제공하십시오.다음 날에는 진통제를 투여합니다. 다음 이틀 동안 쥐의 무게를 측정하고 쥐가 체중의 20% 이상을 잃으면 수의사와 상담하십시오. 매일 생쥐를 검사하여 발적, 부기, 통증 또는 감염을 평가합니다.각 마우스의 무게를 기록합니다. 동물을 안락사시킨 후 앙와위 자세로 멸균 플랫폼에 놓습니다. 팔다리를 고정하고 확장하여 움직임을 제한하고 마우스에 70% 에탄올을 철저히 분사합니다.가위를 사용하여 정중선을 절개하고 복부와 가슴 부위를 엽니다. 피부와 복막벽을 뒤로 당긴 다음 조심스럽게 심장을 노출시키고 오른쪽 심실을 뚫습니다. 집게를 사용하여 양쪽 신장을 모두 제거하고 어떤 신장이 협착되었는지 추적합니다.신장 캡슐을 제거하고 지방을 제거한 다음 각 신장의 무게를 별도로 기록합니다. 양쪽 신장의 세로 부분을 절단하고 현장 교잡 및 면역 조직화학을 위해 섭씨 4도에서 하룻밤 사이에 4% PFA로 고정합니다. 남아있는 신장의 피질을 분리하고 액체 질소로 급속 동결시켜 웨스턴 블롯을 수행합니다.추가 분석이 있을 때까지 샘플을 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. 신장 동맥 수축은 협착된 신장에서 레닌 발현을 증가시키는 반면, 반대쪽 신장에서는 발현을 억제합니다. 협착증의 2-신장 원-클립 모델은 레닌 발현을 유도하고 신장 손상을 증가시켰다.레닌(renin)과 프로레닌(prorenin)의 발현은 면역블로팅(immunoblotting)을 사용하여 측정하였다. 이 데이터는 협착된 신장에서 레닌과 프로레닌 발현이 반대쪽 신장 및 가짜 신장에 비해 증가했음을 보여주며, 이는 커프가 신장 동맥을 수축시키고 신장 관류에 변화를 일으키고 있음을 시사합니다. 레닌 발현의 국소화를 시각화하기 위해 면역조직화학(Immunohistochemistry)을 수행했습니다.이 영상은 잘린 신장에서 레닌의 발현이 증가했음을 확인했다. 더욱이, 구심성 동맥을 따라 병치된 세포 동원이 협착된 신장에서 관찰되었습니다. 레닌 mRNA 발현 수준에 미치는 영향을 조사하기 위해 in situ hybridization을 수행했습니다.이 데이터는 협착된 신장에서 레닌 mRNA와 JG 세포 동원이 증가했음을 시사합니다. 신장 동맥 협착증의 또 다른 특징은 신장 관류, 과산화물 생성 및 고혈압의 변화로 인한 신장 손상 표지자의 상향 조절입니다. 따라서 N-GAL은 면역 블로팅으로 측정하여 협착된 신장에서 급성 신장 손상 마커가 고도로 상향 조절되었음을 보여주었습니다.이 프로토콜을 시도할 때 커프를 삽입하기 전에 신장 동맥 주위에 나일론 봉합사를 배치하는 것을 잊지 마십시오. 절차를 신속하게 처리하는 데 도움이 됩니다.

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연구

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이 비디오는 안지오텐신 II 유도 고혈압 마우스 모델에서 교감신경 기능을 방해하고 혈압을 낮추기 위해 페놀이 사용하는 신장 동맥 교감신경 탈신경 절차를 보여줍니다.

Angiotensin II-Induced Hypertension Mouse Model에서 신장 동맥의 교감신경 탈신경

여기에 설명된 신허혈증 재관류 손상의 마우스 모델은 급성 신장 손상을 초래하는 허혈증을 유도하기 위해 제어 조직을 제공하는 오른쪽 신장 절제술과 왼쪽 신장 척추를 고정하는 것으로 구성됩니다. 이 모델은 한 번의 절개를 통해 모든 단계를 수행하는 정중선 개복술 접근법을 사용합니다.

신장 허혈 재관류 상해 : 상해의 마우스 모델 및 재생

마우스 절연 신장 관류 (MIPK)를 관류하고 1 시간 동안 기능성 생체 조건 마우스 신장을 유지하기위한 기술이다. 버퍼 수술 기법은 상세하게 설명된다.

마우스입니다 관류 신장 기법

이 원고 마우스 5/6일 부분 신 (PNx) 극 결 찰과 수행에 상세한 2 단계 수술 절차를 제공 합니다. 수술 후 4 주 운영 하는 가짜 쥐에 비해 PNx 마우스 개발 장애 신장 기능, 빈 혈, 심장 비 대, 심장 섬유 증, 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소.

마우스 5/6일 신 모델 실험 신부전 심근을 유도

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여기에서는 안지오텐신 II 주입으로 유도 된 고혈압이있는 마우스에서 신장 교감 신경 탈신경 (RDN)에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차는 반복 가능하고 편리하며 고혈압 및 심장 비대에 대한 RDN의 조절 메커니즘을 연구 할 수 있습니다.

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