Name: 토끼의 동맥 파우치 미세 외과 분기 동맥류 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: 학습하세요 토끼 동맥 파우치 미세 외과 분기 동맥류 모델을 통해 혈관 내 장치 개발을 위한 표준화된 실험 기법을. 이 방법은 뇌동맥류 치료 연구에 중요한 전임상 평가 도구를 제공합니다.

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저자들은 수술 전 단계에서 탁월한 지원과 기술 지원을 해준 Olgica Beslac과 Kay Nettelbeck과 장기적인 동물 건강에 대한 헌신적 인 감독을 위해 Alessandra Bergadano, DVM, PhD에게 감사드립니다.

모든 수의학 치료는 제도적 지침 (모든 실험은 스위스 광저우 베른 동물 관리위원회 (BE 108/16)의 승인을 받음)에 따라 수행되었으며 이사회 인증 수의사 마취 전문의의 감독하에 수행되었습니다. ARRIVE 지침과 3R 원칙은17,18을 엄격히 준수했습니다.
참고 : 모든 동물을 섭씨 22 \u201224 ° C (°C)의 실온에 보관하고 12 시간 (h) 밝고 어두운 사이클을 유지하십시오. 매번 물, 펠릿 및 광고 리비툼 건초 다이어트에 무료로 액세스 할 수 있습니다. 통계적 분석은 비모수 Wilcoxon-Mann-Whitney-U 검정을 사용하여 수행되었다. 0.05의 확률 값(p)≤ 유의한 것으로 간주되었다.
1. 수술 전 단계
<ol><li>23 ± 3 °C의 온도를 유지하는 조용하고 무균 수술실 바로 옆에 수술을 계획한 모든 토끼에 대한 상세한 수술 전 임상 검사를 수행하십시오.<ol>
<li>각 동물의 무게를 기록하고, 점막, 모세관 리필 시간 및 펄스 품질을 거시적으로 평가하십시오.</li>
		<li>청진기와 복부 촉진으로 심장 청진을 추가로 수행하십시오.</li>
		<li>임상 연구 결과에 기초하여, 미국 마취 학자 협회 (ASA) 분류를 각 토끼19에 기인한다. ASA I 점수를 받은 동물만 연구에 포함시켰다.</li>
		<li>전기 면도기로 양쪽 귀를 면도하고 오줌 동맥과 정맥 모두에 prilocaine-lidocaine 크림을 바르십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>토끼를 케타민 20 밀리그램 (mg) / 킬로그램 (kg), 덱스 메데토미딘 100 mg / kg 및 메타돈 0.3 mg / kg을 주사기를 통해 피하 주사 (SC)의 조합으로 진정시킵니다.</li>
	<li>각 동물을 적어도 15 분 동안 방해받지 않고 그대로 두십시오.</li>
	<li>그 후, 느슨한 얼굴 마스크를 통해 3 리터 (l) / 분 (분)으로 보충 산소를 공급하고 맥박 산소 측정기를 통한 꾸준한 모니터링하에 왼쪽 오줌 중앙 동맥에 22G 캐뉼라를 놓고 대측 귀의 오줌 정맥에 또 다른 22G 캐뉼라를 놓습니다.</li>
	<li>수술장(목)을 면도하고 0.75% 절개전 로피바카인을 피내 주사한다. 다음으로 이마를 면도하고 소아 뇌파 (EEG) 센서를 배치 할 준비를하십시오.</li>
	<li>프로포폴 1-2 mg / kg을 정맥 내 (IV)로 전신 마취를 유도하여 효과를 발휘하십시오. 그런 다음 즉시 모든 토끼의 기관을 캡노 그래피 제어하에 실리콘 튜브 (3 밀리미터 (mm) 내부 직경)로 삽관하십시오. 그런 다음 모든 토끼를 수술실로 운반하여 등쪽 쓰레기통에 놓고 튜브를 소아 서클 시스템에 연결하십시오.</li>
	<li>산소에서 이소플루란을 통해 마취 심화 및 유지를 달성하여 최대 말단 조수 이소플루란 농도 1.3%를 목표로 합니다.</li>
	<li>기관 삽관이 될 때까지 임상 및 도구 모니터링 (맥박 산소 측정, 도플러 및 침습적 혈압, 3 리드 심전도, EEG, 직장 온도 모니터링 및 흡입 및 내뿜는 가스)을 확인하십시오.</li>
	<li>수분 공급을 유지하려면 정맥 접근을 통해 링거의 젖산을 5 ml / kg / h의 연속 주입 (CRI)으로 제공하십시오. 항상 10 분 간격으로 발가락 핀치를 사용하여 적절한 마취를 확인하십시오.</li>
	<li>manubrium sterni에서 양쪽 턱 각도로 포비돈 요오드를 사용하여 수술 현장을 소독하십시오. 이제 수술 현장의 멸균 드레이핑을 수행하십시오.</li>
	<li>수술 중에 50 마이크로그램 (μg) / kg / min의 CRI에서 리도카인과 3 \u201210 μg / kg / h의 펜타닐로 진통제를 제공하십시오. 자발적 또는 보조 환기뿐만 아니라 허용 과다 캡니아를 적용하십시오. 수술 중 적어도 한 번 동맥 혈액 가스 분석을 수행하십시오.</li>
	<li>노르 아드레날린으로 관련 저혈압 (평균 동맥압 < 60 mmHg)을 치료하십시오. 가열 패드 또는 가열 강제 공기 온난화 시스템을 사용하여 저체온증 (직장 온도 ≤ 38 °C)을 예방하십시오.</li>
</ol>2. 수술 단계 – 단계 I
<ol><li>manubrium sterni에서 턱 각도 / 후두 수준까지 중간 피부 절개로 수술을 시작하십시오. 메스, 외과 용 가위 및 포셉으로 피부와 연조직을 날카롭게 해부하십시오. 무딘 해부로 subcutis와 뚱뚱한 패드를 중앙으로 분리하십시오.</li>
	<li>미세 포셉과 외과 용 가위를 사용하여 무딘 해부로 왼쪽에있는 흉쇄 유돌기 근육의 앞쪽 위 능선을 중앙으로 입력하십시오.</li>
	<li>거시적으로, 둔탁한 준비를 수행하고 미세 포셉과 외과 용 가위를 사용하여 후두 마비를 피하기 위해 왼쪽 CCA를 미주 신경에서 조심스럽게 분리하십시오 (그림 2). 좌측 CCA의 분기는 수술내 랜드마크로서 작용한다는 점에 유의한다(도 3 및 도 4A). 다음 모든 단계의 경우 연조직 스프레더를 사용하여 수술 시각화를 개선하십시오.</li>
	<li>미주 신경에서 왼쪽 원위 CCA를 성공적으로 준비하고 해방 한 후 papaverine (40 mg / ml, 0.9 % 등장성 염화나트륨 용액으로 희석 된 1 : 1)을 국부적으로 투여하십시오. 마이크로 면봉으로 모든 혈관 세그먼트를 지속적으로 보호한 후 외부 파파베린을 추가로 투여합니다. 파파베린에 담근 왼쪽 CCA를 자가 근육 조직 아래에 놓아 혈관이 조작 현미경의 빛으로 건조되지 않도록 보호하십시오.</li>
	<li>수술 과정에서 외과 의사의 편안함을 극대화하면서 측면을 전환하십시오. 오른쪽에서 동일한 수술 절차를 반복하십시오. CCA를 미리 정의 된 랜드 마크까지 원위 및 근접으로 해부합니다 (턱 각도 / 후두 및 내부 경정맥 수준에서 경동맥 분기; 그림 4A, B). 스프레더를 재삽입하고 앞서 설명한 대로 마이크로 면봉과 파파베린을 투여하십시오.</li>
	<li>오른쪽 근위 CCA의 결찰 전에 정맥 귀 카테터를 통해 헤파린 (500 국제 단위 (IU) / kg)을 전신적으로 주사하십시오.</li>
	<li>지금부터 수술 현미경을 사용하십시오. 먼저, 동맥 혈관의 긴장을 피하기 위해 거시경으로 보이는 근위 랜드 마크의 끝에 직접 4-0 비 흡수성 봉합사로 오른쪽 근위 CCA를 리게이트하십시오.<ol>
<li>둘째, 첫 번째 4-0 합자에서 원위적으로 절단 한 후 결과 동맥 파우치가 모든 동물에서 약 3 \ u20124 mm의 표준화 된 길이가 될 것이라는 점을 고려하여 측정을 위해 용기 클립을 사용하여 6-0 비 흡수성 합자를 정확하게 4 \ u20125 mm 원위 방향으로 적용하십시오 (그림 5A, C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>6-0 합자를 조인 후, 내피 손상을 방지하고 혈전 발생을 방지하기 위해 임시 혈관 클립(뇌동맥류 수술에 일반적으로 사용됨)으로 오른쪽 CCA를 가능한 한 멀리 원위 방향으로 고정합니다(그림 5B).</li>
	<li>이제 4-0 비 흡수성 합자를 원위 적으로 절단하십시오. 동맥 파우치를 수확하기 위해(도 5C), 6-0 비흡수성 합자를 원위적으로 두 번째 절단을 수행한다.</li>
	<li>동맥 파우치를 모든 연조직에서 꼼꼼하게 청소하고 용기 클립으로 길이, 너비 및 깊이를 측정합니다 (그림 5C). 추가 변형이 필요하지 않은 경우, 자가 동맥 이식편을 추가로 사용할 때까지 실온에서 헤파린화 된 용액 (0.9 % 등장성 염화나트륨 중 500 IU / 100 ml)에 보관하십시오.</li>
</ol>3. 동맥 파우치 분해
<ol><li>동맥 파우치 분해가 필요한 경우, 연조직을 꼼꼼하게 닦고 실험 당일 실온에서 트리스 버퍼 5ml에 녹인 돼지 엘라스타제 100IU로 20분 동안 예비배양한다. 브러시 기술을 사용하지 마십시오. 동맥 파우치를 쉐이커를 사용하여 인트라- 및 엑스트라-발광적으로 인큐베이션한다.</li>
	<li>파우치를 0.9% 등장성 염화나트륨의 헤파린화된 용액에 넣기 전에, 0.9% 등장성 염화나트륨 용액에 해부학적 포셉으로 3분 동안 부드럽게 3번 살짝 밀어 남은 돼지 엘라스타제를 씻어낸다.</li>
	<li>필요한 경우 동맥 파우치의 내강을 실리콘으로 만든 마이크로 튜브로 열어 두십시오. 젖은 마이크로 패딩으로 전체 수술 과정에서 왼쪽 및 오른쪽 CCA를 꼼꼼하게 보호하십시오.</li>
</ol>4. 수술 단계 – 단계 II
<ol><li>CCA의 추가 준비를 위해, 동맥을보다 피상적으로 움직이기 위해 두 개의 둥근 마이크로 면봉을 그 바로 아래에 놓습니다. 이제 동맥의 더 나은 시각화를 위해 왼쪽 CCA 아래에 보라색 패딩이있는 마이크로 면봉 하나를 원위 세 번째 아래에 놓습니다.</li>
	<li>0.9% 등장성 염화나트륨 100ml에 용해된 헤파린 500IU와 결합된 0.9% 등장성 염화나트륨 용액으로 우근위 CCA를 플러시한다. 장력이없는 문합을 만들려면 오른쪽 CCA를 왼쪽으로 터널링하기 위해 외과 용 가위를 사용하여 뚱뚱한 패드 / 기관주 근육 조직 아래에 놓습니다. 동맥의 연조직을 제거하십시오.<ol>
<li>이제 마이크로 가위와 포셉을 사용하여 오른쪽 CCA의 근위 측에서 2mm 물고기 입 절개를 수행하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>운영 테이블의 측면을 변경합니다. 왼쪽 원위 CCA를 다른 임시 용기 클립으로 클립한 다음 근위 왼쪽 CCA를 두 개의 임시 용기 클립으로 클립합니다. 젖은 마이크로 면봉을 사용하여 수술 광 아래에서 노출된 모든 용기 세그먼트가 건조되지 않도록 보호하십시오.</li>
	<li>왼쪽 CCA의 원위 세 번째를 연조직으로부터 완전히 해방시키고 동맥 절제술을 수행한다. 외과 용 마이크로 포셉을 사용하고 부드럽게 연조직을 잡으십시오. 이제 동맥을 상승시키고 외과 용 마이크로 가위로 왼쪽 원위 CCA를 천천히 절개하십시오. 혈관 세그먼트를 헤파린 (0.9 % 등장성 염화나트륨 용액 100ml에 용해 된 500 IU)으로 플러시하십시오.</li>
	<li>곡선형 마이크로 포셉 및 마이크로 가위로 동맥 절제술을 수행 한 후, 왼쪽 CCA의 원위 세 번째에 위치한 동맥 절제술을 원위 방향으로 확대하여 경동맥 및 자가 이식편의 오른쪽 둔기의 직경의 약 2 배를 측정합니다. 이것은 동맥 파우치로 충분한 혈류를 허용합니다.</li>
	<li>동맥 파우치를 헤파린화 된 식염수 용액에서 꺼내십시오. 파우치를 분기가 계획되어있는 수술 현장에 두십시오. 흡수성이 없는 9-0 봉합사로 우측 경동맥 둔탁의 후면을 교합하기 시작하고, 그 다음에 물고기 입 절개 수준에서 두개골로 위치한 뒤쪽에 봉합사를 가한다. 단일 바늘로 원위부터 근위까지 후면을 바느질하십시오.</li>
	<li>봉합하는 동안, 모든 엘라스타제 프리인큐베이션된 파우치를 지속적인 관개로 촉촉하게 유지하십시오. 파우치의 용기 벽을 봉합하는 동안 곡선 수술 용 마이크로 포셉을 사용하여 팁으로 루멘을 부드럽게 엽니 다. 왼쪽 또는 근위 오른쪽 CCA의 일부를 봉합 할 때마다 직선 수술 용 마이크로 포셉을 사용하십시오. 그런 다음 수평 뒷면을 봉합하십시오.</li>
	<li>다음으로 수평 앞면을 봉합하여 동맥류의 돔에서 시작하여 바닥으로 이동합니다. 그 후, 앞쪽에 원위 방향으로 움직이는 단일 스티치로 시작하십시오.<ol>
<li>모든 단계에서 4.5\u20124.8 해부학을 봉합하는 동안 의원 성 협착을 피하기 위해 동맥 절제술에 가까운 혈관의 일부를 잡기 위해주의를 기울이십시오. 또한, 전체 수술 과정 동안 모든 혈관 세그먼트를 헤파린화 된 염화나트륨 용액 (0.9 % 등장성 염화나트륨 100ml에 용해 된 500 IU)으로 채워진 주사기로 외발광으로 지속적으로 적시고 젖은 마이크로 면봉으로 보호하십시오.</li>
		<li>아나스토마증을 끝내기 전에 헤파린화 된 0.9 % 등장성 염화나트륨 용액 (0.9 % 등장성 염화나트륨 100ml에 용해 된 500 IU)으로 전체 복합체를 관개하십시오. 엘라스타아제 변형 동맥 파우치는 건조하고 트롬보스를 만드는 경향이 강하기 때문에 가능한 한 빨리 꿰매어야 한다는 점에 주의하세요. 소화 원주 혈관에 관한 파우치 내의 잔류 엘라스타제 농도의 공격적인 행동 때문에, 혈관 복합체를 신속하게 재관류시키는 수술을 빨리 진행한다.</li>
	</ol></li>
	<li>모든 임시 혈관 클램프를 단계적으로 제거하십시오.<ol>
<li>왼쪽 CCA에서 원위 클램프를 분리합니다. 경미한 출혈을 받아들이고 문합에 마이크로 면봉을 부드럽게 각인시켜 고정시킵니다. 그런 다음 오른쪽 CCA의 클램프를 제거하고 혈전 형성을 피하기 위해 마이크로 면봉과 포셉으로 부드럽게 누릅니다.</li>
		<li>필요한 경우 임시 혈관 클립을 교체하여 충분한 응고를 제공하십시오. 그런 다음 왼쪽에서 두 용기 클립을 인접 적으로 완화하십시오. 모든 단계에서 필요한 경우 클립을 교체하여 응고를 허용하거나 다시 바느질을 수행하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>이 단계에서 혈관 복합체의 형광 혈관 조영술을 수행한다(도 6 및 도 7). 참고: 형광 혈관조영술은 2개의 대역통과 필터, 비디오 카메라가 장착된 스마트폰 및 자전거 스포트라이트를 사용하여 1ml의 플루오레세인 IV를 투여하여 수행됩니다. 이 절차는 이미 다른 곳(20,21,22)에서 설명되었다.</li>
	<li>마지막으로, 수술 좌석을 닫으십시오. 다시 적응하고 부드럽게 운동성 유방을 보호하기 위해 단일 노드가있는 3-0 재 흡수 가능한 봉합사로 지방 패드를 봉합하십시오. 같은 방식으로 subcutis와 피부를 닫습니다.</li>
</ol>5. 수술 후 단계
<ol><li>수술이 끝날 때 isoflurane 및 전신 진통 투여를 중단하고 삼키는 반사가 돌아 오자마자 기관 삽관을 제공하십시오.</li>
	<li>0.5 mg/kg의 멜록시캄 IV, 10 mg/kg 아스피린(ASS) IV, 100 μg의 비타민 B12 SC 및 20 mg/kg의 클라녹실 IV를 투여하십시오.</li>
	<li>토끼가 자발적으로 흉골 잔해를 회복 할 때까지 보충 산소와 적극적인 온난화를 제공하십시오.</li>
	<li>설치류와 토끼의 통증 평가 및 관리에 대한 지침에 따라 처음 3 일 동안 하루에 네 번 수술 후 추적 관찰 및 동물 관리를 수행하십시오23,24.</li>
	<li>통증 평가를위한 점수 시트에 따라 외이에 적용된 펜타닐 패치 (12 μg / h), 하루에 한 번 멜록시캄 SC 및 구조 요법 SC로 메타돈으로 수술 후 진통을 투여하십시오. 모든 토끼에서 3 일 동안 250 IU / kg 저분자 헤파린 (LMH)을 피하 투여하십시오.</li>
</ol>

이 연구는 연구위원회, Kantonsspital Aarau, Aarau, Switzerland 및 스위스 국립 과학 재단 SNF (310030_182450)의 연구 기금에 의해 지원되었습니다. 저자는 제시된 연구의 설계 및 수행에 대한 전적인 책임이 있으며 경쟁 이익을 선언하지 않습니다.

우리의 연구는 토끼의 벽 조건이 다른 진정한 분기 동맥류 모델을 만들 가능성을 보여줍니다. 전반적으로, 평균 체중이 3.7 ± 0.09kg이고 평균 연령이 112 ± 3 일인 14 마리의 암컷 뉴질랜드 흰 토끼가 연구에 포함되었습니다. 모든 동맥류의 85.72 %는 28 일 동안 추적 관찰 기간 동안 특허를 유지했습니다. 두 마리의 동물이 조기에 사망했습니다 (사망률 12.5 %).
이전의 연구는 혈관 내 동맥류 치료 25,26,27,28의 관리를 분석하기 위해 다양한 두개외 동맥류 모델을 제안했다. 그러나 이들 중 어느 것도 다른 벽 조건의 비교를 허용하지 않았습니다. 이전의 실험은 이미 동맥류 측벽 쥐 모델29</su...

두개내 동맥류(IA) 파열로 인한 Subarachnoid 출혈은 혈관내 또는 미세외 과적 폐색 기술(1,2,3,4)에 의해 효과적으로 조절될 수 있다. 코일링 후 IA 재발의 주요 한계를 극복하기 위해 다른 혈관 내 치료법은 지난 수십 년 동안 혈관 내 장치 테스트의 필요성이 증가하면서 중요성을 얻었습니다. 이러한 새로운 치료 접근법을 테스트하기 위해 유변학 적 특성, 혈역학 및 동맥류 벽 상태를 존중하는 적절한 동물 모델은 5,6,7 개가 매우 보증됩니다. 이러한 맥락에서, 임상 및 전임상 연구는 이미 폐색 후 동맥류 파열 및 재발에 관한 동맥류 벽 조건의 중요한 역할을 밝혀 냈으며, 특히 벽화 세포 7,8,9의 손실에 초점을 맞추고 있습니다.
지금까지 토끼의 실험적 동맥류는 엘라스타제 배양된 일반적인 경동맥(CCA) 그루터기 또는 인공 CCA 분기로 봉합된 정맥 파우치에 의해 가장 자주 생성되었다. 10,11,12,13,14,15,16 따라서, 진정한 동맥 파우치 분기 모델은 결코 설명되지 않았다.
이 연구의 목적은 토끼 모델에서 서로 다른 벽 조건을 가진 분기 동맥류의 미세 외과 적 생성을위한 안전하고 빠르며 표준화 된 기술을 설계하는 것이 었습니다 (그림 1). 이것은 변형되지 않고 변형 된 동맥 파우치를 두 CCA의 인공 생성 된 분기로 봉합함으로써 달성되었습니다.

<table><tbody><tr><td>3-0 흡수성 봉합</td>사 <td>Ethicon Inc., 미국</td><td>VCP428G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 비흡수성 봉합</td>사 <td>B. Braun, 독일</td><td>G0762563</td><td></td></tr><tr><td>6-0 비흡수성 봉합</td>사 <td>B. Braun, 독일</td><td>C0766070</td><td></td></tr><tr><td>9-0 비흡수성 봉합사</td><td>B. Braun, 독일</td><td>G1111140</td><td></td></tr><tr><td>아드레날린</td><td>아미노 AG</td><td>1445419</td><td>모든 제네릭</td></tr><tr><td>Amiodarone</td><td>Helvepharm AG</td><td>5078567</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>마취 기계</td><td>Dr&auml; ger</td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>아스피린</td>, <td>Sanofi-Aventis (스위스) SA</td><td>622693</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>아트로핀</td><td>Labatec Pharma SA</td><td>6577083</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>대역 통과 필터 파란색</td><td>Thorlabs</td><td>FD1B</td><td>기타</td></tr><tr><td>모든 밴드 패스 필터 녹색</td><td>Thorlabs</td><td>FGV9</td><td>기타</td></tr><tr><td>바이폴라 겸자</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>자전거 스포트라이트</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>Biemer 혈관 클립 (2 x)</td> <td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td><td>FD560R</td><td>임시</td></tr><tr><td>이중 분광 지수 (신생아)</td><td></td><td></td> <td>기타</td></tr><tr><td>혈압 커프 (신생아)</td><td></td><td></td> <td>기타</td></tr><tr><td>Clamoxyl</td><td>GlaxoSmithKline AG</td><td>758808</td><td>일반</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine</td><td>Ever Pharma</td><td>136740-1</td>, <td>모든 일반</td></tr><tr><td>심전도 전극,</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>Elastase</td><td>Sigma, Aldrich</td><td>45125</td>, <td>모든 일반</td></tr><tr><td>Ephedrine</td><td>Amino AG</td><td>1435734</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Esmolol</td><td>OrPha Swiss GmbH</td><td>3284044</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>펜타닐 (정맥 사용)</td><td>Janssen-Cilag AG</td><td>98683</td>, <td>모든 제네릭</td></tr><tr><td>펜타닐(경피)</td><td>Mepha Pharma AG</td><td>4008286</td><td>모든 제네릭</td></tr><tr><td>Fluoresceine</td><td>Curatis AG</td><td>5030376</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Fragmin</td><td>Pfizer PFE Switzerland GmbH</td><td>1906725</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Glico</td><td></td><td></td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>가열 패드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>아이소톤성 염화나트륨 용액(0.9%)</td>, <td>Fresenius, KABI</td>, <td>336769</td>, <td>제네릭</td></tr><tr><td>케타민</td>, <td>화이자</td><td>342261, 제</td><td>네릭</td></tr>, <tr><td>실험실용 셰이커</td>, <td>스튜어트</td>, <td>SRT6</td>, <td>기타</td></tr><tr><td>리도카인</td>, <td>Streuli, Pharma AG</td><td>747466</td>, 제<td>네릭</td></tr><tr><td>Longuettes,</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>Metacam</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>P7626406</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Methadone</td>, <td>Streuli Pharma AG</td><td>1084546</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Microtubes</td><td></td><td></td>, <td>기타</td></tr><tr><td>모든 마이크로 니들 홀더</td><td></td><td></td>, <td></td></tr><tr><td>기타 Midazolam</td><td>Accord Healthcare AG</td><td>7752484</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>니들 홀더</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>O2-페이스 마스크</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>작동 현미경</td><td>Wild Heerbrugg</td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>Papaverine</td><td>Bichsel</td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>Prilocaine-lidocaine 크림</td><td>Emla</td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>Propofol</td><td>B. Braun Medical AG, 스위스</td><td></td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>맥박 산소 측정기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>직장 온도 프로브(신생아)</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>Ropivacaine</td>, <td>Aspen Pharma, Schweiz GmbH</td><td>1882249</td><td>일반</td></tr><tr><td>Scalpell</td>, <td>Swann-Morton</td><td>210</td>, <td>기타</td></tr><tr><td>소형 동물 면도기</td><td></td><td></td>, <td>기타</td></tr><tr><td>스마트폰</td><td></td><td></td>, <td>기타</td></tr><tr><td>연조직 겸자</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>연조직 스프레더</td><td></td><td></td>, <td>기타</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 스폰지 그릇,</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>멸균 마이크로 면봉</td><td></td><td></td>, <td>기타</td></tr><tr><td>청진기</td><td></td><td></td><td>및</td></tr><tr><td>기타 직선 및 곡선 마이크로 집게</td>, <td>기타</td>직선 및 곡선 마이크로 가<td></td><td></td></tr><tr><td>위</td><td></td><td></td>, <td>기타</td></tr><tr><td>직선 및 곡선 겸자</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>수술 드레이프</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>수술 가위</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>주사기 1ml, 2ml 및 5ml</td><td></td><td></td><td>기타</td></tr><tr><td>Tris-Buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>93302</td><td>일반</td></tr><tr><td>혈관 클립 어플리케이터</td><td>B. Braun, 독일</td><td>FT495T</td><td></td></tr><tr><td>정맥 및 동맥 카테터 22G</td><td></td><td></td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Vitarubin</td><td>Streuli Pharma AG</td><td>6847559</td><td>모든 일반</td></tr><tr><td>Yasargil 타이탄 표준 클립 (2 x)</td> <td>B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland</td><td>FT242T</td><td>임시</td></tr></tbody></table>

토끼의 동맥 파우치 미세 외과 분기 동맥류 모델

Arterial Pouch Microsurgical Bifurcation Aneurysm Model in the Rabbit

두개내 동맥류에 대한 혈관 내 치료는 지난 수십 년 동안 중요성을 얻었고, 결과적으로 혈관 내 장치를 검사해야 할 필요성이 증가하고 있습니다. 류학적, 혈역학적 및 동맥류 벽 조건을 존중하는 동물 모델은 매우 보증됩니다. 따라서, 본 연구의 목적은 토끼에서 변형되지 않고 변형되지 않은 벽 조건을 갖는 자가 동맥류 분기 동맥류를 만들기 위해 신규한 표준화되고 재현 가능한 수술 기술을 설계하는 것이었다.
Bifurcation 동맥류는 좌측 일반적인 경동맥의 우측 해부학에 의해 생성되었으며, 둘 다 미세 외과 적으로 봉제 된 동맥 파우치의 부모 동맥 역할을합니다. 이식편을 근위 우측 공통 경동맥으로부터 취하고, 대조군(n=7, 즉각적인 자가 재이식) 또는 변형(n=7, 자가 재이식 전에 20분 동안 100개의 국제 단위 엘라스타제와 함께 인큐베이션)하기 위해 취하였다. 파우치 및 모동맥 개통은 생성 직후 형광 혈관조영술에 의해 조절되었다. 추적 관찰 (28 일)에서 모든 토끼는 대조 강화 자기 공명 혈관 조영술 및 형광 혈관 조영술을 거친 다음 동맥류 수확, 거시적 및 조직 학적 평가를 받았다.
총 16 마리의 암컷 뉴질랜드 흰 토끼가 수술을 받았다. 두 마리의 동물이 조기에 사망했습니다. 후속 조치에서 모든 동맥류의 85.72 %가 특허를 유지했습니다. 두 그룹 모두 시간이 지남에 따라 동맥류 크기의 증가를 나타냈다. 이것은 대조군(생성 시의 6.48 ± 1.81 mm3 대 추적 관찰시 19.85 ± 6.40 mm3, p = 0.037)에서 변형된 그룹(생성 시 8.03 ± 1.08 mm3 대 후속± 6.16mm3, p = 0.054)에서 더 두드러졌다.
우리의 발견은 미세 외과 적 접근법에서 다른 벽 조건을 가진 분기 동맥류를 만들 수있는이 새로운 토끼 모델의 적절성을 보여줍니다. 시간이 지남에 따라 동맥류 성장의 우수한 장기 개통성과 특성을 감안할 때,이 모델은 새로운 혈관 내 요법의 전임상 평가를위한 중요한 도구로 작용할 수 있습니다.

일곱 마리의 동물로 구성된 파일럿 시리즈에 이어 완전히 16 마리의 동물이 실험 프로토콜에 포함되었습니다. 두 마리의 동물이 조기에 사망하여 최종 분석에서 제외되었습니다 (사망률 12.5 %). 14마리의 동물에 대해 계산하여, 형광 혈관조영술 동안 즉각적인 동맥류 개통률은 대조군 및 변형군 모두에서 71.43%였다. 네 개의 동맥류는 연속적인 혈전 대피로 다시 열어야했으며 반복적 인 형광 혈관 조영술 후에 모든 경우에 문서화 된 개통이 있었다 (100 %). MR- 및 형광-혈관조영술에서의 동맥류 개통률은 대조군에서 85.72%, 28일 후 추적에서 엘라스타제 변형군에서 85.72%였다(두 동물은 완전한 모동맥 및 동맥류 혈전증을 나타냈고, 따라서 추가 분석에서 제외되었다). 부분 혈전증은 나머지 12건 중 3건에서 MR 영상화(도 9)의 3차원 재구성을 분석하여 관찰하였다. 두 그룹 모두 시간이 지남에 따라 동맥류 크기의 증가를 보여주었습니다. 대조군: 생성시의 6.48 ...

두개내 동맥류 치료를 위한 혈관 내 장치를 개발하고 테스트하는 것은 여전히 매우 중요합니다. 오늘날 사용되는 대부분의 동맥류 모델은 동맥 퇴화 벽의 중요한 특성이나 진정한 분기의 혈역학을 놓치고 있습니다. 따라서 우리는 토끼에서 새로운 동맥 파우치 분기 모델을 설계하는 것을 목표로했습니다.

Endovascular treatment for intracranial aneurysms gained importance over the past decades, consequently there is an increased need of testing endovascular ...

두개내 동맥류 치료에서 혈관내 장치의 개발 및 시험은 여전히 크게 필요합니다. 우리는 토끼에서 새로운 동맥 주머니 분기 모델을 설계했습니다. 이 모델은 고도로 표준화되고 쉽게 재현할 수 있는 단일 미세 수술 기술을 사용하여 토끼의 변형 및 비변형 벽 조건을 가진 자가 재료 파우치 분기 동맥류를 생성합니다.마취된 성체 토끼에서 페달 반사에 대한 반응 부족을 확인한 후 마누브리움 흉골에서 후두 수준까지 정중 피부 절개를 하고 메스, 수술용 가위, 겸자를 사용하여 피부와 연조직을 날카롭게 절개합니다. 마이크로 집게와 수술용 가위를 사용하여 둔기 절개로 바로 왼쪽에 있는 흉쇄유돌근의 전방 상부 융기로 들어갑니다. 그리고 후두 마비를 피하기 위해 왼쪽 총경동맥과 미주신경을 조심스럽게 원위적으로 분리하는 둔기 제제를 거시적으로 수행합니다.파파베린을 밀리리터당 40mg을 동맥에 국소적으로 투여하고 파파베린에 적신 동맥을 자가 근육 조직 아래에 위치시켜 수술 현미경의 빛 아래에서 혈관을 탈수로부터 보호합니다. 측면을 바꾸고 방금 시연한 것처럼 동물의 오른쪽에서 동일한 해부를 수행합니다. 오른쪽 총경동맥이 분리되면 정맥 귀 카테터를 통해 헤파린 1kg당 500 국제 단위를 전신적으로 주입합니다.6개의 제로 결찰을 조인 후 임시 혈관 클립을 사용하여 오른쪽 총경동맥을 가능한 한 원위부로 고정하여 내피 손상을 방지하고 혈전 형성을 방지하기 위한 관개를 위한 긴 혈관 세그먼트를 만듭니다. 파우치를 채취하려면 원위 혈관을 4개의 zero nonabsorbable ligature로 자릅니다. 그런 다음 혈관을 6-0 비흡수성 합자로 원위부로 절단합니다.모든 연조직의 동맥 주머니를 꼼꼼하게 청소하고 혈관 클립을 사용하여 주머니의 길이, 너비 및 깊이를 측정합니다. 파우치 분해가 필요한 경우, 세척된 파우치를 5ml의 Tris 완충액에 용해된 100단위의 돼지 엘라스타아제와 함께 실온에서 20분 동안 사전 배양합니다. 총경동맥의 추가 준비를 위해 총경동맥 바로 아래에 두 개의 마이크로 면봉을 배치하여 혈관이 표면적으로 움직일 수 있도록 하고 동맥을 더 잘 시각화하기 위해 원위 세 번째 동맥 아래에 파란색 패딩이 있는 추가 마이크로 면봉을 배치합니다.동물의 왼쪽에 접근할 수 있도록 측면을 변경하고 마이크로 가위와 집게를 사용하여 오른쪽 총경동맥의 근위부를 2mm 물고기 입으로 절개합니다. 두 번째 임시혈관 클립을 사용하여 좌측 원위 총경동맥을 고정하고 근위 좌측 총경동맥을 두 개의 추가 임시혈관 클립으로 고정합니다. 클램프가 모두 배치되면 좌측 총경동맥의 원위 3분의 1을 연조직에서 완전히 분리하고 동맥 절개술을 수행합니다.이제 수혜 혈관을 헤파린 식염수로 세척하고 외막에서 복합체를 해방시킨 다음 오른쪽 총경동맥을 왼쪽 총경동맥에 봉합합니다. 헤파린화된 식염수에서 동맥 주머니를 분기가 계획된 수술 구역으로 옮깁니다. 지속적인 식염수 세척으로 혈관 복합체의 모든 측면을 수화한 상태로 유지하면서 파우치를 혈관에 봉합한 다음 모든 임시 혈관 클램프를 단계적으로 제거합니다.클램프가 모두 제거되면 플루오레세인 1ml를 정맥 주사하여 혈관 복합체의 형광 혈관 조영술을 수행합니다. 그런 다음 표준 프로토콜에 따라 수술 현장을 닫습니다. 이 실험적 분석에서, 바이탈 파우치 또는 엘라스타제 파우치 방법에 의해 유발된 동맥류가 있는 동물은 시간이 지남에 따라 동맥류 크기가 증가하는 것을 보여주었습니다.대조군의 평균 수술 시간은 164분 플러스 마이너스 10분이었던 반면, 수정된 그룹은 201분 플러스 마이너스 13분이었다. 대조군에서는 동맥류를 생성하기 위해 평균 24회 이상 또는 1회의 중단된 봉합사가 필요했으며, 엘라스타제 대조군에서는 25회 이상 또는 2회 삭감이 필요했습니다. 그런 다음 MR 이미징의 3차원 재구성과 상세한 조직학적 분석을 사용하여 측정을 수행할 수 있습니다.총경동맥과 미주신경을 조심스럽게 분리하는 것은 수술 후 합병증을 피하는 데 필수적입니다. 혈전 형성을 피하려면 혈관과 동맥 주머니 복합체를 촉촉하게 유지하십시오. 시간이 지남에 따라 동맥류가 성장하면서 달성되는 우수한 인도성을 감안할 때 이 모델은 새로운 혈관 내 장치의 전임상 평가를 위한 중요한 도구 역할을 할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

분기점 인간의 대뇌 동맥류을 흉내낸 동맥 분기 동맥류의 microsurgical 생성을위한 최적화된 기술이 설명되어 있습니다. 정맥 주머니는 모두 공통 경동맥 동맥의 인위적으로 만들어진 사실이 분기로 봉합니다. 촉진 microsurgical 기법과 적극적인 수술 anticoagulation와 진통제는 최소화 병적 속도와 높은 동맥 명백 속도로 이어집니다.

토끼 모델에서 Microsurgical 정맥 주머니 아티 - 분기점의 동맥류 : 기술적인 관점

출처: Wanderer, S., et al. 동맥 주머니 : 토끼의 미세 수술 분기 동맥류 모델. J. Vis. Exp. (2020)이 영상은 엘라스타아제 처리된 혈관 주머니를 사용하여 토끼에서 실험적 동맥류 모델을 만드는 방법을 보여줍니다. 오른쪽 CCA의 일부를 절제한 후 파우치에 엘라스타아제를 투여한 다음 왼쪽 CCA를 봉합하여 혈류를 회복시킵니다. 그 결과 약해진 주머니 벽에 가해지는 스트레스는 동맥류 형성을 유발합니다.

엘라스타아제 처리된 혈관 파우치를 사용한 토끼의 실험적 동맥류 모델 개발

동맥류 endograft 제외 후 조직 학적 및 생화학 적 수정은 아직 불분명하다. 우리는 쥐 동맥류에 endograft 이식의 새로운 모델을 설명합니다. 영속적 인 순환 혈액 스트림 인터페이스, 새로운 혈관 생체 적합 물질 평가와와없는 혈전 분석을 통해,이 모델은 더 나은 혈관 동맥류 제외 pathobiology을 이해하는 데 도움이 될 것입니다.

혈관 동맥류 수리의 새로운 쥐과 모델

쥐의 미세수술 측벽 동맥류는 복부 대동맥에 대한 대동맥 이식편의 종단 간 문합에 의해 생성됩니다. 단계별 지침을 제시하고 성공적인 실험적 낭골 동맥류 생성을 위한 해부학적 및 외과적 세부 사항에 대해 논의합니다.

헬싱키 쥐 미세 측벽 동맥류 모델

이 프로토콜은 서로 다른 혈역학 (그루터기 및 분기 별자리)을 가진 두 개의 엘라 스타제 소화 동맥류가있는 토끼 모델을 만드는 단계를 설명합니다. 이를 통해 단일 동물 내에서 다양한 혈관 구조 및 혈역학 적 상태를 가진 동맥류에서 새로운 혈관 내 장치를 테스트 할 수 있습니다.

한 토끼에서 서로 다른 혈역학을 가진 두 개의 천골 엘라스타제 소화 동맥류 생성

여기에서는 혈관 내 장치 평가를 위해 토끼의 거대 분기 동맥류를 미세 수술로 만드는 기술을 설명합니다.

혈관 내 장치 평가를 위한 토끼의 거대 분기 동맥류의 미세외과 생성

대동맥판막협착증(AVS)의 기저에 있는 병리학적 기전을 이해하고 치료적 개입의 효능을 평가하기 위해서는 적절한 동물 모델이 필요하다. 본 프로토콜은 생체 내에서 직접 풍선 손상을 통해 AVS 토끼 모델을 개발하기 위한 새로운 절차를 설명합니다.

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AD의 병리 학적 특징 중 하나는 아밀로이드 β 단백질의 긍정적인 neuritic plaques의 형성이다. immunohistochemical 감지 thioflavin S 얼룩 방법을 사용하여 ABC​​와 DAB 방법과 형광 검출을 사용하여이 프로토콜에서 우리는 유전자 변형 AD 모델 마우스에서 neuritic plaques를 감지하는 두 가지 방법을 설명합니다.

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토끼의 동맥 파우치 미세 외과 분기 동맥류 모델

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